miR-25a-5p促进乳腺癌蒽环类药物治疗所致的心肌损伤

目的:探讨蒽环类药物诱导心肌毒性的机制和新的治疗靶点。方法:106例乳腺癌患者根据超声心动图检查鉴别出肿瘤治疗相关心功能障碍,分为心功能障碍组及对照组。通过微阵列技术高通量筛选两组患者差异表达miRNA。体外构建蒽环类药物诱导H9C2心肌细胞损伤模型,通过调控miR-25a-5p的表达,观察miR-25a-5p在蒽环类药物诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用。结果:乳腺癌患者中9例发生肿瘤治疗相关心功能障碍,并从两组患者中鉴定出9个差异表达的miRNA。其中8个miRNA在体外模型中进一步得到验证,尤其是miR-25a-5p。通过上调miR-25a-5p,可进一步加重蒽环类药物诱导心肌细胞氧化损伤。结论:miR-25a-5p促进蒽环类药物诱导的心肌损伤,可能是新的生物标志物及治疗靶点。

糖肾地黄汤通过调控lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴延缓糖尿病肾病进展的机制研究

目的 探究糖肾地黄汤通过调控lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴延缓糖尿病肾病进展的机制。方法 用小鼠单侧肾切除+腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)诱导糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)模型,选择糖尿病肾病小鼠模型组共45只小鼠,雌性CBA/J 30只,雄性DBA/2 15只,另选正常健康小鼠10只作为正常对照组。将造模的糖尿病肾病小鼠分为模型组、糖肾地黄汤高剂量组(TSDHDHD组)、糖肾地黄汤中剂量组(TSDHDMD组)、糖肾地黄汤低剂量组(TSDHDLD组),每组10只。HE染色检测小鼠的病理学变化,应用全自动生化分析仪对所获得小鼠血清空腹血糖(Fasting blood glucose, FBG),甘油三酯(Triglyceride, TG),胆固醇(Cholesterol, TC)水平,RT-PCR法分析ARAP1、miR-25-3p、SGLT2、Bax/Bcl-2mRNA的表达,免疫印迹法(Westernblot, Wb)分析ARAP1、miR-25-3p、SGLT2、Bax/Bcl-2的蛋白表达。采用SPSS 23.0统计软件。结果 对照组中细胞排列致密整齐、完整,存在少量脂肪细胞(P>0.05);与对照组比较,模型组细胞结构较为散乱,且由稀疏变细,近端脂肪细胞数目增多,差异存在统计学意义(P<0.05);相比模型组,各剂量组糖肾地黄汤脂肪细胞数目下降,比较存在统计学差异(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达降低(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达降低(P<0.05)。治疗前与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组模型组FBG水平升高(P<0.05),模型组与不同剂量糖肾地黄汤组相比无统计学差异(P>0.05);与治疗前相比,治疗12周后不同剂量糖肾地黄汤组模型组FBG水平均降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平降低(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平明显升高,Bax/Bcl-2mRNA水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平降低,Bax/Bcl-2mRNA水平明显升高(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平降低,Bax/Bcl-2mRNA水平明显升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2蛋白表达明显升高,Bax/Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2水平降低,Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2蛋白表达降低,Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 糖肾地黄汤可能通过调节lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴,从而达到延缓糖尿病肾病进展的目的。

多层螺旋CT联合miR-527、miR-25检测对早期原发性肝癌诊断的临床价值

目的分析多层螺旋CT联合血清miR-527、miR-25检测对早期原发性肝癌诊断的临床价值。方法选取本院2022年1月至2023年5月收治的原发性肝癌患者78例,同期良性肝病患者50例,对患者进行多层螺旋CT扫描,qRT-PCR法检测血清miR-527、miR-25水平。ROC曲线分析血清miR-527、miR-25水平对原发性肝癌的诊断价值;四表格法分析多层螺旋CT联合血清miR-527、miR-25对原发性肝癌的诊断价值。结果原发性肝癌患者血清miR-527、miR-25水平显著高于良性肝病患者(P<0.05);ROC曲线结果表明,血清miR-527水平诊断原发性肝癌的AUC为0.753,敏感性为74.36%,特异性为70.00%;血清miR-25水平诊断发生原发性肝癌的AUC为0.722,敏感性为61.54%,特异性为72.00%。多层螺旋CT扫描诊断结果显示,原发性肝癌患者76例,其中弥漫型肝癌12例,结节型肝癌38例,巨块型肝癌26例;良性肝病患者52例。多层螺旋CT扫描诊断原发性肝癌的敏感性为78.21%(61/78),特异性为70.00%(35/50),准确度为75.00%(96/128);多层螺旋CT扫描对原发性肝癌的诊断结果与术后病理诊断结果具有一致性(Kappa值=0.479,P<0.05)。多层螺旋CT联合血清miR-527、miR-25水平诊断原发性肝癌的敏感性为96.15%(75/78)、特异性为68.00%(34/50),准确度为85.16%(109/128);三者联合对原发性肝癌的诊断结果与术后病理诊断结果具有较好一致性(Kappa值=0.673,P<0.05),且联合诊断的敏感性和准确度显著高于多层螺旋CT、miR-527、miR-25单独诊断(P<0.05)。结论多层螺旋CT联合血清miR-527、miR-25检测对早期原发性肝癌诊断准确度较高,具有重要的临床价值。

血清circCOL1A2和miR-25-3p水平与T2DM合并DR的相关性研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清环状Ⅰ型胶原α2(circCOL1A2)和微小RNA-25-3p(miR-25-3p)水平与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法纳入2020年5月—2022年6月在沧州市中心医院进行治疗的T2DM患者108例(216只眼),根据是否发生DR分为DR组56例(112只眼),非DR(NDR)组52例(104只眼),同时选取同期到本院进行体检的健康者45例(90只眼)作为对照组。分别采集对照组体检时、DR组和NDR组入院后的静脉血4~6 mL。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测3组circCOL1A2、miR-25-3p相对表达量,并检测血清生化指标。分析血清circCOL1A2、miR-25-3p水平的相关性,及二者与DR发生的相关性,并评估对DR发生的影响价值。结果(1)circCOL1A2、miR-25-3p水平:3组间血清circCOL1A2水平比较,差异有统计学意义(F=685.891,P=0.000)。NDR、DR组血清circCOL1A2水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=15.969、qDR=50.526,均P=0.000),DR组血清circCOL1A2水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=35.641,P=0.000)。3组间血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=583.834,P=0.000)。NDR、DR组血清miR-25-3p水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=10.101、qDR=45.157,均P=0.000)。DR组血清miR-25-3p水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=36.169,P=0.000)。(2)生化指标:DR组和NDR组生化指标比较,DR组患者血清C反应蛋白(CRP)、尿酸(UA)水平均高于NDR组,差异均有统计学意义(tUA=3.320,P=0.001;tCRP=8.705,P=0.000)。2组患者其余血清生化指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)不同分期DR患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平比较:Ⅰ期到Ⅴ期患者血清circCOL1A2水平比较,差异有统计学意义(F=32.900,P=0.000)。且Ⅰ期到Ⅴ期患者circCOL1A2水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=4.102,P=0.042;qⅡ-Ⅲ=4.674,P=0.014;qⅢ-Ⅳ=4.359,P=0.026;qⅣ-Ⅴ=4.347,P=0.027)。Ⅰ期到Ⅴ期患者血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=32.407,P=0.000)。且Ⅰ期到Ⅴ期患者miR-25-3p水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=5.206,P=0.005;qⅡ-Ⅲ=4.187,P=0.036;qⅢ-Ⅳ=4.165,P=0.037;qⅣ-Ⅴ=4.064,P=0.045)。(4)circCOL1A2、miR-25-3p水平与DR的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平均与DR发生呈正相关(rcircCOL1A2=0.382、rmiR-25-3p=0.479,均P=0.000)。(5)血清circCOL1A2与miR-25-3p的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2与miR-25-3p呈正相关(r=0.564,P=0.000)。(6)T2DM患者DR发生的相关因素分析:CRP、UA、circCOL1A2、miR-25-3p水平为T2DM患者发生DR的危险因素。结论T2DM患者发生DR时血清circCOL1A2、miR-25-3p表达上调,二者与DR发生呈正相关,联合检测对T2DM患者发生DR具有一定的预测价值。

血清miR-25-3p和IBSP表达在乙型肝炎肝硬化患者病情分期及肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中的应用价值

目的探讨乙型肝炎肝硬化患者病情分期及肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中血清微小RNA(miR)-25-3p和整合素结合唾液酸蛋白(IBSP)表达的应用价值。方法回顾性选取2021年11月至2023年12月大庆龙南医院收治的乙型肝炎肝硬化患者150例、慢性乙型肝炎患者50例、健康体检人员50名分别作为肝硬化组、肝炎组、健康组。统计分析3组研究对象的血清miR-25-3p和IBSP表达水平;分析不同临床参数与血清miR-25-3p和IBSP表达水平关系;分析肝硬化患者肝功能评分与血清miR-25-3p和IBSP表达水平的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响肝硬化失代偿并发腹腔积液的因素;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-25-3p和IBSP表达水平单独与联合检测在肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中的价值。结果肝硬化组患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平分别为5.21±0.40、(9.33±1.27)ng/mL,均明显高于肝炎组[1.15±0.33、(3.14±0.36)ng/mL]、健康组[0.91±0.11、(1.01±0.30)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05);肝炎组患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平均明显高于健康组,差异均有统计学意义(P<0.05)。中、重度肝纤维化、有消化道出血、有腹腔积液患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平均分别高于轻度肝纤维化、无消化道出血、无腹腔积液患者,差异均有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平之间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。肝硬化组患者的Child-Pugh评分、血清蛋白胆红素评分(ALBI)、终末期肝病模型评分(MELD)与血清miR-25-3p和IBSP表达水平均呈显著正相关(P<0.05)。肝硬化失代偿并发腹腔积液影响因素包括miR-25-3p、IBSP(P<0.05)。肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中血清miR-25-3p和IBSP表达水平联合检测的曲线下面积、敏感度、特异度和约登指数均明显高于单独检测(P<0.05)。结论乙型肝炎肝硬化患者病情越重,血清miR-25-3p和IBSP表达水平越高。检测血清miR-25-3p和IBSP表达水平能够为乙型肝炎肝硬化病情的判断及肝硬化失代偿并发腹腔积液的诊断提供有效依据。

血清miR-25-3p、CXCL12水平与非小细胞肺癌患者胸腔镜肺叶切除术后预后的关系分析

目的:分析血清miR-25-3p、脊髓趋化因子CXC配体12(CXCL12)与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者胸腔镜肺叶切除术后预后的关系。方法:选择2017年02月至2020年07月医院收治的175例NSCLC患者,所有患者均接受胸腔镜肺叶切除术治疗。术前检测患者血清miR-25-3p、CXCL12水平,术后随访3年,根据患者预后情况分为预后不良组(复发转移)与预后良好组(非复发转移)。对比预后不良组与预后良好组血清miR-25-3p、CXCL12水平,对比预后不良组与预后良好组的临床资料,分析NSCLC患者术后预后不良的影响因素,分析血清miR-25-3p、CXCL12水平及二者联合对NSCLC患者术后预后不良的预测价值。结果:随访3年,175例患者失访6例,随访率为96.57%,其中复发转移31例,复发转移率为18.34%,剩余138例均未发生复发转移,中位复发转移时间为24.75个月(95%CI:18.32~28.47)。预后不良组血清miR-25-3p、CXCL12水平高于预后良好组(P<0.05)。预后不良组Ⅱ期、低分化例数占比高于预后良好组(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,Ⅱ期(HR=3.827,95%CI:1.682~8.705)、低分化(HR=3.466,95%CI:1.524~7.884)、血清miR-25-3p(HR=2.732,95%CI:1.201~6.215)、血清CXCL12(HR=3.152,95%CI:1.386~7.170)为NSCLC患者术后预后不良的影响因素(P<0.05)。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线结果显示,血清miR-25-3p、CXCL12水平及二者联合预测NSCLC患者术后预后不良的灵敏度分别为80.65%(95%CI:0.627~0.853)、83.87%(95%CI:0.641~0.869)、93.55%(95%CI:0.782~0.973),特异度分别为78.26%(95%CI:0.602~0.835)、76.09%(95%CI:0.584~0.791)、91.30%(95%CI:0.769~0.934),曲线下面积(area under curve,AUC)值分别为0.767、0.755、0.908(P<0.05),且二者联合的AUC值更高(P<0.05)。结论:术前检测血清miR-25-3p、CXCL12水平可用于预测NSCLC患者胸腔镜肺叶切除术后预后,且二者联合的预测价值更高。

IL-18 sTLT-1及miR-25对脑梗死复发风险的预测价值

目的探讨miR-25、白细胞介素18(IL-18)、可溶性髓样细胞触发受体样转录因子-1(sTLT-1)在脑梗死患者复发中的预测价值。方法 选取三二〇一医院收治的154例脑梗死患者为脑梗死组,对脑梗死组患者随访1 a,根据是否复发分为复发组和非复发组,比较2组临床资料及血清miR-25、IL-18及s TLT-1表达情况。单因素和Logistic回归分析影响患者复发的独立危险因素。采用ROC曲线分析miR-25、IL-18、sTLT-1在预测患者复发中的临床价值。结果 脑梗死组共46例患者出现复发,相较于未复发组,复发组miR-25[32.00(23.31,34.68)比11.89(7.67,19.39)]、IL-18[(44.75±12.38)ng/L比(23.36±10.49)ng/L]及sTLT-1[(484.61±83.90)ng/L比(325.72±99.17)ng/L]水平更高(P<0.05)。单因素及多因素Logistic回归分析显示,吸烟史、高血压史、miR-25≥11.89、IL-18≥23.36 ng/L、sTLT-1≥325.72 ng/L是影响患者复发的独立危险因素。ROC曲线显示,当miR-25截断值为20.97、IL-18截断值为28.92 ng/L、sTLT-1截断值为388.03 ng/L时预测患者复发的AUC均>0.700。结论 脑梗死复发患者血清miR-25、IL-18及sTLT-1水平显著上升,且miR-25、IL-18及sTLT-1水平在预测脑梗死患者复发中具有一定临床价值。

急性脑梗死病人血清miR-25表达水平及其对近期预后的预测价值

目的:探讨急性脑梗死病人血清miR-25表达及其对近期预后不良的预测价值。方法:将2020年5月—2022年1月本院收治的179例急性脑梗死病人设为研究组,另将同期在本院体检的163例健康体检者设为对照组,均行血清miR-25表达水平检测并对比。随访3个月,根据改良Rankin量表(mRS)评分将研究组分为预后良好组(mRS评分≤2分)和预后不良组(mRS评分>2分),对比预后良好组与预后不良组血清miR-25表达水平。采用Logistic回归分析法分析急性脑梗死病人近期预后不良的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-25表达水平对急性脑梗死病人近期预后不良的预测价值。结果:研究组血清miR-25表达水平低于对照组(P<0.05)。急性脑梗死病人近期预后不良的发生率为42.46%,预后不良组年龄、心房颤动比例、入院美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分、梗死体积、发病至治疗时间、血清胱抑素C(CysC)水平均高于预后良好组,血清miR-25表达水平低于预后良好组(P<0.05)。年龄、心房颤动、入院NIHSS评分、梗死体积、发病至治疗时间、血清CysC水平、血清miR-25表达水平均是急性脑梗死病人近期预后不良的影响因素(P<0.05)。血清miR-25表达水平预测急性脑梗死病人近期预后不良的最佳截断值、敏感度、特异度、ROC曲线下面积(AUC)分别是0.640、72.37%、65.05%、0.731。结论:急性脑梗死病人血清miR-25表达水平降低,且为急性脑梗死病人近期预后不良的影响因素,对近期预后不良有一定的预测价值。

miR-25靶向DKK3基因对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:探讨miR-25靶向调控Dickkopf相关蛋白3(DKK3)基因对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其作用机制。方法:选取确诊并进行前列腺癌根治手术治疗的前列腺癌病人组织标本24例为研究对象,选择同期因良性前列腺增生行电切手术病人组织标本24例为对照组,采用HE染色观察2组前列腺组织形态学变化,实时定量PCR检测组织中miR-25的相对表达水平,免疫组织化学法检测组织中DKK3表达情况。体外培养人前列腺癌PC-3细胞,通过Lipofectamine 2000法将miR-25 NC(NC组)、miR-25 inhibitors(miR-25 inhibitors组)转染入PC-3细胞中,通过MTT实验检测miR-25对细胞增殖的影响,通过Transwell实验检测miR-25对PC-3细胞迁移能力的影响,通过流式细胞术检测miR-25对PC-3细胞凋亡的影响,Western blotting法检测转染后PC-3细胞中DKK3的蛋白表达水平。结果:前列腺癌组织较前列腺增生组织中miR-25表达水平显著升高(P<0.05),DKK3基因表达明显降低(P<0.05)。与NC组相比,miR-25 inhibitors组细胞增殖率显著降低(P<0.05),细胞迁移能力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),DKK3的蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。结论:miR-25通过靶向调控DKK3基因促进前列腺癌PC-3细胞的增殖和迁移,抑制细胞凋亡。

血清miR-25和miR-100作为食管鳞状细胞癌诊断和预后标志物研究

目的 探讨血清miR-25和miR-100对食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）的诊断和预后价值.方法 收集2011年6月～2014年5月南京军区南京总医院及徐州市肿瘤医院63例ESCC患者术前、术后及随访血清,并收集63例年龄、性别匹配的非癌健康人血清作为对照;实时荧光定量PCR法检测血清miR-25和miR-100含量.用非参数Mann-Whitney U检验ESCC患者组和对照组血清miR-25和miR-100表达水平的差异,配对t检验分析ESCC患者术前术后血清中miR-25和miR-100的表达量变化,受试者工作特征曲线（ROC）评估血清miR-25和miR-100对ES-CC的诊断价值,单因素Kaplan-Meier法分析对ESCC患者生存的影响.结果 与健康对照相比,ESCC患者血清miR-25（0.40±0.20 vs 0.02±0.01）和miR-100的相对含量（0.10±0.02 vs 0.04±0.00）显著升高,差异具有统计学意义（U值分别为885.0和1 006.0,P值均＜0.01）;血清miR-25和miR-100的ROC曲线下面积AUC均明显大于癌胚抗原;ESCC患者术后血清miR-100含量较术前明显降低（0.07±0.01 vs 0.10±0.02）,差异具有统计学意义（t=2.367,P=0.021）;单因素Kaplan-Meier法分析显示血清miR-25和miR-100表达阴性的ESCC患者的生存期明显高于阳性患者（P＜0.05）.结论 血清miR-25和miR-100可作为ESCC诊断及预后评估的潜在标志物.

外周血miR-25表达与急性脑梗死患者凋亡分子含量及90天预后的相关性

目的探讨急性脑梗死患者外周血miR-25表达与凋亡分子含量及90天预后的相关性。方法选取急性脑梗死患者162例为急性脑梗死组,体检健康者150例为正常对照组。测定两组外周血miR-25及凋亡分子含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)的水平。根据改良Rankin量表(mRS)评分将随访90天的预后情况分为预后良好(mRS评分≤2分)和预后不良(mRS评分>2分)。比较不同预后急性脑梗死患者的临床资料,并进一步行Logistic回归分析,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估急性脑梗死患者外周血miR-25表达水平对90天不良预后的预测价值。结果急性脑梗死组患者外周血miR-25、Bcl-2表达水平低于正常对照组,Caspase-3水平高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析发现,急性脑梗死患者外周血miR-25表达水平与Bcl-2表达水平呈正相关,与Caspase-3表达水平呈负相关(P<0.05)。急性脑梗死患者随访90天预后良好119例、预后不良43例。不同预后急性脑梗死患者的年龄、发病至治疗时间、入院当天NIHSS评分的差异有统计学意义(P<0.05),其余临床资料差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析发现,年龄较大、入院当天NIHSS评分较高、外周血miR-25表达水平较低是急性脑梗死患者90天预后不良的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线发现,外周血miR-25表达水平预测急性脑梗死患者90天预后不良的截断值为0.635,AUC为0.699(95%CI 0.609~0.789),对应的敏感度、特异度分别为72.09%、65.55%。结论急性脑梗死患者外周血miR-25表达水平降低,可能参与凋亡分子的表达调控。低水平miR-25是急性脑梗死患者预后不良的危险因素,且具有一定早期预测价值。

miR-25靶向RECK促进宫颈癌HeLa细胞的增殖

目的探讨微小RNA-25(miR-25)对宫颈癌He La细胞增殖活性的影响及其与逆向诱导的带Kazal基序的富含半胱氨酸蛋白(RECK)的靶向关系。方法构建pc DNATM6.2-GW-pre-miR-25、pmir GLO-野生型RECK(RECK-WT)和突变型RECK(RECK-MT)真核表达载体及miR-25抑制剂(anti-miR-25),采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测pre-miR-25和anti-miR-25在He La细胞中的转染效率,并采用MTT法分析miR-25对He La细胞增殖活性的影响,双萤光素酶报告基因、qRT-PCR和Western blot法检测miR-25与RECK靶向关系。结果测序结果显示pc DNATM6.2-GW-pre-miR-25、pmir GLO-RECK-WT和pmir GLO-RECK-MT重组载体构建成功,qRT-PCR提示pre-miR-25与anti-miR-25在He La细胞中具有良好的转染效率。MTT结果显示miR-25能够明显促进He La细胞的增殖。双萤光素酶报告基因检测显示共转染pre-miR-25与RECK-WT的He La细胞其萤光活性显著下降,同时qRT-PCR及Western blot也显示anti-miR-25在转录和转录后水平均能够显著增加He La细胞中RECK的表达。结论miR-25能够靶向RECK,促进宫颈癌He La细胞的增殖。

miR-25靶向抑制KLF4促进胃癌细胞增殖

目的:探讨micro RNA-25(mi R-25)是否靶向抑制KLF4基因调控胃癌细胞生长,阐明mi R-25在胃癌细胞中的作用及其机制。方法:q RT-PCR技术检测35对胃癌及癌旁组织中mi R-25及KLF4的表达。运用生物信息学分析软件Targetscan预测mi R-25的靶基因。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证mi R-25是否靶向抑制KLF4。分别下调mi R-25及干扰和过表达KLF4后采用MTT及克隆形成实验检测细胞增殖。挽救实验验证KLF4是否能减弱mi R-25的生物学功能。结果:mi R-25在胃癌组织中高表达,KLF4呈低表达。抑制mi R-25能显著降低胃癌细胞的增殖,上调mi R-25的表达结果则相反。mi R-25负调控KLF4促进胃癌细胞增殖,而过表达KLF4能明显减弱mi R-25的促增殖效应。结论:mi R-25靶向抑制KLF4促进胃癌细胞增殖。

胃癌患者血清miR-101与miR-25的动态变化及其诊断价值

目的:探讨miR-101与miR-25在胃癌术前术后血清中的表达及其与病理因素间的关系,探讨其是否能作为胃癌早期诊断的新型生物标志物.方法:应用实时荧光定量(PCR)检测58例胃癌(其中31例配对胃癌术前术后),30例胃癌癌前病变,30例正常对照血清miR-101与miR-25的相对表达量,比较miR-101与miR-25在胃癌术前术后表达差异,及其与病理参数的关系,绘制研究对象工作特征曲线(ROC),评估血清miR-101与miR-25对胃癌的临床诊断价值.结果:胃癌血清miR-101表达水平显著性低于正常对照组(P<0.01)及胃癌癌前病变组(P<0.01),而胃癌血清miR-25(P<0.01)表达水平显著升高.胃癌术后血清miR-101表达水平明显高于术前(P=0.007),而血清miR-25在胃癌术后显著性降低(P=0.011).ROC曲线分析显示血清miR-101与miR-25对胃癌诊断价值较高[miR-101:ROC曲线下面积(Area Under roc Curve,AUC)=0.857,敏感度=0.710,特异度=0.881;miR-25:AUC=0.821,敏感度=0.702,特异度=0.800],而血清miR-101与miR-25联合诊断胃癌的AUC为0.905,其敏感性和特异性分别为75.9%和86.7%.进一步分析发现胃癌血清miR-101低表达与幽门螺旋杆菌(helicobacter pylori,Hp)感染有关,miR-101表达水平在感染HP的胃癌血清中显著低于未感染HP的胃癌血清(P=0.012);胃癌血清miR-101低表达与胃癌淋巴结转移(P=0.033)和临床分期(P=0.015)显著相关;胃癌血清miR-25在高临床分期(P=0.018)和淋巴结转移(P<0.001)表达水平升高.结论:血清miR-101与miR-25可能作为胃癌术前术后动态监测和胃癌诊断的新型潜在标志物.

MiR-25-3p靶向NOTCH1对食管鳞癌细胞ECA109侵袭、迁移、增殖的影响

目的探讨miR-25-3p靶向NOTCH1基因对食管鳞癌细胞侵袭、迁移和增殖的影响,阐明miR-25-3p和NOTCH1基因在食管鳞癌中的作用机制。方法将ECA109细胞以1×10~6/ml均匀接种于培养皿,每组设3个复孔,实验分为两组。第1组:miR-25-3p上调组(转染miR-25-3p模拟物)、miR-25-3p下调组(转染miR-25-3p抑制剂)和NC组;第2组:NOTCH1上调组(转染NOTCH1模拟物)、NOTCH1下调组(转染NOTCH1抑制剂)和NC组。实时荧光定量PCR法分别检测各组miR-25-3p、NOTCH1表达水平,Transwell小室检测转染miR-25-3p、NOTCH1后ESCC细胞侵袭能力,CCK-8检测细胞增殖能力,生物信息学分析和荧光素酶活性测定以确定NOTCH1是否为miR-25-3p的靶基因。结果①NOTCH1是miR-25-3p的靶基因;②细胞实验结果显示,与NC组相比,miR-25-3p上调组促进ECA109细胞的侵袭(P<0.05),CCK-8增殖试验显示在ECA109细胞中miR-25-3p上调组促进细胞增殖(P<0.05);③下调NOTCH1促进细胞生长(P<0.05),下调NOTCH1可增强ECA109细胞的侵袭能力(P<0.005),上调NOTCH1可抑制ECA109细胞的侵袭能力(P<0.005)。结论 miR-25-3p通过靶向调节NOTCH1促进人ESCC细胞的侵袭、迁移和增殖,miR-25-3p有望成为ESCC治疗的新靶点。

miR-25通过TGF-β1途径降低缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡

目的 探讨miR-25在缺氧/复氧诱导H9C2心肌细胞凋亡过程中的作用及机制。方法 H9C2细胞培养24 h后进行慢病毒感染,空白对照(control)组未进行转染;阴性对照(Lv-control)组转染Lv-control-miRNA模拟物(mimic);Lv-anti-control组转染Lv-control-miRNA-抑制剂(inhibitor);Lv-miR-25组转染Lv-miR-25 mimic;Lv-anti-miR-25组转染Lv-miR-25 inhibitor。按照脂质体转染试剂Lipofectamine2000试剂盒说明,Contol-shRNA组转染control-shRNA;HMGB1-shRNA组转染HMGB1-shRNA,经培养后筛出稳定细胞系。选取高表达miR-25 H9C2心肌细胞,Lv-miR-25组转染Lv-miR-25 mimic, Lv-miR-25+SB431542组转染Lv-miR-25 mimic后加入TGF-β1/Smads抑制剂SB431542共培养。稳定转染后给予缺氧/复养处理。Western印迹检测高迁移率族蛋白(HMG)B1、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved caspase)-3、转化生长因子(TGF)-β1、Smad3、磷酸化(p)-Samd3、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、p-ERK1/2蛋白表达。流式细胞术检测细胞凋亡。结果 Lv-miR-25组HMGB1、Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著低于control组、Lv-control组、Lv-anti-control组、Lv-anti-miR-25组(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著高于control组、Lv-control组、Lv-anti-control组、Lv-anti-miR-25组(P<0.05)。与Contol-shRNA组比较,HMGB1-shRNA组HMGB1、TGF-β1、p-Samd3、Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著下降(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。与Lv-miR-25组比较,Lv-miR-25+SB431542组Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著增加(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平及细胞凋亡率显著下降(P<0.05)。结论 miR-25抑制缺氧/复氧诱导的H9C2细胞凋亡,其作用机制通过靶向调控HMGB1,降低TGF-β1导致的心肌凋亡。

miR-25对食管癌EC109细胞侵袭和迁移能力的影响及临床意义

目的探索miR-25对食管癌侵袭和迁移能力的影响以及作为食管癌诊断生物标志物的潜力。方法(1)荧光定量PCR(qPCR)检测54例早期食管癌患者癌组织和癌旁组织中miR-25表达水平。(2)人食管癌细胞EC109分为miR-25 mimic组、NC mimic组、miR-25 inhibitor组和NC inhibitor组。转染相应序列后,qPCR检测miR-25转染效率。Transwell实验检测过表达或敲低miR-25对EC109细胞侵袭和迁移的影响。Targetscan数据库预测miR-25的靶基因,选定靶基因盐诱导激酶1(SIK1)基因。Western blot和双荧光素酶报告实验鉴定miR-25与SIK1的靶向关系。(3)EC109细胞分为pcDNA 3.1组、SIK1过表达组和miR-25+SIK1过表达组。Transwell实验检测miR-25靶向SIK1对EC109细胞侵袭和迁移能力的影响。(4)提取食管癌患者(54例)和健康对照者(54例)的血浆外泌体,比较2组血浆外泌体中miR-25的相对表达量,分析食管癌患者癌组织和血浆外泌体中miR-25的相关性。结果(1)食管癌组织中miR-25相对表达水平高于癌旁组织。(2)过表达miR-25后,EC109细胞侵袭和迁移能力增强,而敲低miR-25表达后,细胞侵袭和迁移能力下降。Western blot结果显示,过表达miR-25后,SIK1蛋白表达下降;反之,敲低miR-25后SIK1蛋白表达升高。(3)Transwell实验显示,与pcDNA 3.1组相比,SIK1过表达组EC109细胞侵袭和迁移的细胞数量减少,而miR-25和SIK1联合作用后,EC109侵袭和迁移的细胞数量较SIK1过表达组增多。(4)食管癌血浆外泌体样本中miR-25的表达量高于健康对照,且miR-25在食管癌组织中的表达与血浆外泌体中的相对表达量呈正相关。结论miR-25可能通过靶向调控SIK1来促进食管癌细胞的侵袭和迁移,且miR-25有作为食管癌早期诊断生物标志物的潜力。

miR-25靶向作用FBXO33在肾透明细胞癌凋亡及预后的相关实验研究

目的探索miR-25与FBXO33在肾透明细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)中的相关性,并分析其与肾癌细胞凋亡及预后的关系。方法从肿瘤基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中获取1998~2013年511例RCC芯片数据,Pearson检验分析miR-25和FBXO33表达的相关性;检测miR-25对构建的FBXO33 3'UTR野生型、突变型及空白对照荧光素酶报告基因中荧光素表达的影响;CCK8法检测瞬转miR-25 mimic,siRNA及对照序列对RCC细胞活力的影响;流式细胞术检测瞬转miR-25 mimic,siRNA及对照序列对RCC细胞凋亡的影响;TCGA数据库中筛选出miR-25与FBXO33表达负相关且具有随访的58例患者,分为miR-25低表达联合FBXO33高表达组(n=34)和miR-25高表达联合FBXO33低表达组(n=24)进行生存分析,采用Log-rank检验和Gehan-Breslow-Wilcoxon检验。结果 RCC组织中FBXO33与miR-25表达负相关(r=-0.161 1,Pearson检验)。与空白对照组相比,miR25可降低野生型组RLU至80.2%±2.6%,差异具有统计学意义(t=6.539,P=0.006);而突变序列组RLU为空白对照组的103.5%±8.4%,差异不具有统计学意义(t=0.041 3,P=0.968 4)。72 h细胞活力与空白对照组相比,miR-2 siRNA组提高32.7%±3.5%,差异具有统计学意义(P<0.05);而miR-25 mimic组降低23.3%±1.7%,差异具有统计学意义(P<0.05)。mimic-miR-25-3P与其对照组比较,早期凋亡率降低(8.83±0.09 vs 12.83±0.14),差异具有统计学意义(t=42.17,P=0.005);晚期凋亡率轻度升高(0.41±0.10 vs 0.33±0.15),差异无统计学意义(t=0.75,P=0.639);siRNA-miR-25-3p与其对照组比较,早期凋亡率升高(19.05±1.64 vs 13.68±0.78),差异具有统计学意义(t=5.12,P=0.006);晚期凋亡率轻度降低(0.56±0.10 vs 0.62±0.08),差异无统计学意义(t=0.83,P=0.376)。miR-25低表达同时FBXO33高表达患者(n=34)与miR-25高表达而FBXO33低表达者(n=24)相比生存率更高,差异具有统计学意义(采用Log-rank检验P=0.025 2,采用Gehan-Breslow-Wilcoxon检验P=0.004 9)。结论 miR-25可抑制肾癌FBXO33,提高细胞活性,抑制凋亡而降低患者预后。

miR-25对三阴性乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制

目的:研究miR-25对人三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能机制。方法:在人TNBC细胞株MDA-MB-231中转染miR-25抑制性核苷酸(AS-miR-25)或对照核苷酸(NC oligo),通过MTT法和流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡;采用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot测量凋亡调节因子1(modulator of apoptosis 1,MOAP1)蛋白质和mRNA表达水平变化,采用双荧光素报告系统检测miR-25对MOAP1的直接调节。采用AS-miR-25和MOAP1 siRNA共转染MDA-MB-231细胞,MTT和流式细胞术检测细胞增殖、凋亡的变化。结果:下调miR-25后,MDAMB-231细胞的增殖能力较对照明显降低(P<0.05),凋亡显著增加(P<0.05),MOAP1 mRNA和蛋白质表达水平显著增高(P<0.05)。双荧光素报告实验显示MOAP1受miR-25的直接调节。共转染AS-miR-25和MOAP1 siRNA可显著缓解下调miR-25引起的增殖抑制和诱导凋亡。结论:miR-25可通过下调MOAP1表达水平调节TNBC细胞增殖和凋亡,提示miR-25在TNBC恶性生物学进程中可能发挥重要促进作用。

白藜芦醇调控miR-25对高糖诱导成骨细胞增殖和凋亡的作用机制

目的探讨白藜芦醇调控miR-25对高糖诱导的成骨细胞增殖和凋亡的影响和机制。方法采用25 mmol/L的葡萄糖处理MC3T3-E1,在此基础上用不同浓度的白藜芦醇(0、20、40、80μmol/L)干预体外培养的MC3T3-E1细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,确定用药浓度。流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)-3蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-25的表达水平。将miR-25模拟物转染MC3T3-E1细胞,经高糖刺激后,采用上述方法检测细胞增殖和凋亡的变化。将miR-25抑制物转染MC3T3-E1细胞,经高糖刺激和白藜芦醇干预后,采用上述方法检测细胞增殖和凋亡的变化。Western印迹检测核因子(NF)-κB信号通路蛋白相关蛋白表达水平。结果高糖诱导后MC3T3-E1细胞存活率显著降低,白藜芦醇干预可显著减轻高糖刺激对MC3T3-E1细胞存活的抑制作用,并呈一定的剂量依赖性(P<0.05)。高糖诱导后MC3T3-E1细胞凋亡率显著升高,Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,miR-25表达显著降低,白藜芦醇(40μmol/L)干预可显著减轻高糖刺激对MC3T3-E1细胞凋亡及miR-25表达的影响(P<0.05)。高表达miR-25可显著减轻高糖刺激对MC3T3-E1细胞增殖和凋亡的影响(P<0.05)。低表达miR-25可逆转白藜芦醇对高糖诱导的MC3T3-E1细胞增殖和凋亡的影响(P<0.05)。白藜芦醇干预可显著减轻高糖刺激对MC3T3-E1细胞NF-κB信号通路的影响,低表达miR-25可逆转白藜芦醇对高糖诱导的MC3T3-E1细胞NF-κB信号通路的影响(P<0.05)。结论白藜芦醇通过上调miR-25抑制NF-κB信号通路促进成骨细胞存活,减轻高糖诱导的成骨细胞凋亡,进而发挥保护作用。