基于miRNA-132信号通路探究胡椒碱对肝癌血管形成及肿瘤抑制作用

目的:基于miRNA-132信号通路探究胡椒碱对肝癌血管形成及肿瘤抑制作用。方法:制备肝癌细胞转移瘤,将裸鼠分为空白组(不制备肝癌裸鼠模型)、模型组(肝癌小鼠模型组)、胡椒碱组(肝癌小鼠模型给予胡椒碱干预组)、miR-132组(肝癌小鼠模型给予miR-132类似物组)、联合组(肝癌小鼠模型给予胡椒碱联合miR-132类似物组)。比较各组裸鼠的瘤体积和肿瘤抑制率;比较肿瘤组织病理学变化;用ELISA检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)含量;比较微血管密度(MVD)数量;用蛋白质印迹法检测肝组织中miR-132、GP73表达。结果:和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠的瘤体积均显著降低,且联合组瘤体积较胡椒碱组和miR-132组降低更明显(P<0.05)。和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠肿瘤生长抑制率显著增加(P<0.05);联合组裸鼠的肿瘤生长抑制率明显高于miR-132组和胡椒碱组(P<0.05)。模型组裸鼠血清中VEGF含量和MVD数量和空白组相比显著增加(P<0.05);和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠血清中VEGF含量和MVD数量均显著减少,且联合组血清中VEGF含量和MVD显著低于胡椒碱组(P<0.05)。和空白组相比,模型组裸鼠肝组织中miR-132表达显著降低,GP73蛋白表达显著增加(P<0.05);和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠肝组织中miR-132表达均明显增加,GP73蛋白表达均显著降低,且联合组中miR-132和GP73表达变化最大(P<0.05)。双荧光素酶检测报告结果显示,过表达miR-132可降低GP73活性(P<0.05)。结论:胡椒碱可通过调控miR-132负向调控GP73抑制肝癌血管形成,同时也能显著抑制肿瘤的生长。

miRNA-126调控Wnt/β-catenin信号通路对子宫平滑肌肉瘤生物学功能的影响

目的研究miRNA-126在子宫平滑肌肉瘤(ULMS)组织中的表达水平及临床意义,探讨其通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制ULMS细胞增殖和转移能力的作用机制。方法采用qRT-PCR检测miRNA-126在ULMS组织和子宫平滑肌瘤组织中的表达水平,并分析miRNA-126表达与ULMS患者临床病理参数、复发转移及生存率的关系。常规培养ULMS细胞SK-UT-1,随机分为NC对照组和miRNA-126 mimics实验组,分别转染NC mimics和miRNA-126 mimics,qRT-PCR检测各组细胞中miRNA-126的表达;CCK8实验检测各组细胞的增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的转移能力;TOP/FOP Flash实验检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路活性;western blotting检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin在细胞核中的表达水平,及其相关蛋白Slug、Snail和CyclinD1的表达。结果qRT-PCR检测结果显示,与子宫平滑肌瘤组织相比,miRNA-126在ULMS组织中的表达显著降低(P<0.05),且miRNA-126在肿瘤直径大和存在转移的ULMS患者中表达显著减少(P<0.05),miRNA-126表达对ULMS患者复发转移和生存率无明显影响(P>0.05)。与NC组相比,miRNA-126 mimics组SK-UT-1细胞中的miRNA-126表达水平显著增加(P<0.05),SK-UT-1细胞的增殖和转移能力显著降低(P<0.05),Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin及相关蛋白Slug、Snail和CyclinD1表达均显著降低(P<0.05)。结论miRNA-126在ULMS组织中表达降低,miRNA-126可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制ULMS细胞的增殖和转移。

miRNA-132通过Hedgehog信号通路对肝癌细胞凋亡的作用机制

目的:探究miRNA-132(miR-132)通过Hedgehog信号通路对肝细胞癌细胞凋亡的机制。方法:用miR-132类似物转染人肝癌HepG2细胞,将样本分为空白组(无转染HepG2)、NC组(HepG2转染miR-132-NC)、YJ组(HepG2转染miR-132 mimic)。通过qRT-PCR检测miR-132在HepG2细胞中的表达量,采用CCK-8法、流式细胞仪、Transwell小室、免疫印迹检测细胞增殖、凋亡、侵袭能力以及Shh蛋白表达。结果:PCR检测结果显示,3组对比,YJ组HepG2细胞中miR-132表达量最高,说明转染成功;CCK-8检测结果显示,YJ组HepG2细胞增殖数量最低,空白组HepG2细胞的增殖与NC组相似,皆高于YJ组;流式细胞检测结果显示,与NC组及空白组比较,YJ组HepG2细胞凋亡数量最多;Transwell小室检测结果显示,YJ组细胞侵袭数量与空白组和NC组相比明显降低,空白组细胞侵袭数量与NC组相比数据接近;免疫印迹检测结果显示,YJ组Shh蛋白相对表达量与空白组和NC组比明显降低。结论:过表达miR-132降低Hedgehog信号通路,可促进人肝癌HepG2细胞凋亡作用。

缺糖缺氧心肌细胞中miRNA-155对Notch信号通路及自噬和凋亡的影响

目的探讨miRNA-155在缺糖缺氧心肌细胞模型中对Notch信号通路及心肌细胞凋亡与自噬的影响。方法建立缺糖缺氧细胞(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型,细胞分为正常对照组,OGD组,OGD组+miRNA-155 inhibitor阴性对照组及OGD组+miRNA-155 inhibitor组。利用RT-qPCR检测模型组与正常对照组心肌细胞中miRNA-155的表达情况;利用Western blot检测正常对照组,OGD组,OGD组+miRNA-155抑制剂阴性对照组及OGD组+miRNA-155抑制剂组中Notch1,HES1,Beclin1及Caspase-3的表达情况;利用CCK-8实验检测各组心肌细胞的活性。结果 RT-qPCR结果显示,与正常对照组相比较,模型组心肌细胞中miRNA-155的表达显著升高;Western blot结果显示,抑制miRNA-155的表达后,可显著升高缺糖缺氧心肌细胞中Notch1,HES1,Beclin1的表达,降低细胞中Caspase-3的表达;CCK-8实验结果显示,抑制miRNA-155的表达后,可显著提高缺糖缺氧心肌细胞的活性。结论 MiRNA-155 inhibitor可通过提高Notch1及HES1的表达,促进Notch信号通路激活,促进细胞自噬,抑制细胞凋亡,提高心肌细胞的活性,从而发挥心肌保护作用。

miRNA-223-3p调控JAK2/STAT3信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:探讨miRNA-223-3p对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及JAK2/STAT3信号通路表达的影响。方法:RT-PCR检测40例胃癌组织及相应癌旁组织中miRNA-223-3p表达。培养人胃癌细胞株MKN-28,分别将miRNA-223-3p对照和miRNA-223-3p抑制物转染到细胞中,RT-PCR检测2组细胞中miRNA-223-3p的表达;CCK8法检测转染24、48、72 h后细胞的增殖情况;流式细胞仪检测转染48 h后细胞凋亡率;Transwell小室法检测转染48 h后细胞的迁移数;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达情况。结果:miRNA-223-3p在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P=0.001);转染miRNA-223-3p抑制物后miRNA-223-3p表达明显低于miRNA-223-3p对照组(P<0.001);miRNA-223-3p抑制组与miRNA-223-3p对照组比较,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率升高,细胞迁移数降低,Bax、Cleaved-Caspase3蛋白表达升高,JAK2、STAT3、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达降低(P <0. 05)。结论:miRNA-223-3p在胃癌组织中高表达,下调miRNA-223-3p表达能抑制细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其作用机制与JAK2/STAT3信号通路的调节有关。

运动心脏重塑过程中miRNA-350/JNK信号通路的动态变化

目的:通过递增负荷跑台运动建立运动性心肌肥大模型,观察miRNA-350及其靶基因在8周递增负荷运动诱导的心脏重塑中的动态变化,以探讨运动心脏重塑的可能机制。方法:96只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(C组)和递增负荷运动组(ILT组)。正式训练的第7周末,用超声心动图检测各组小鼠心脏结构和功能参数;用qRT-PCR检测运动心脏重塑过程中不同时相(0d、3d、7d、15d、29d和57d)miRNA-350的动态变化;分别用qRT-PCR和Western Blotting技术检测JNK mRNA和JNK蛋白的动态变化。结果:ILT组小鼠PWTS、PWTD、LVEDD、IVSTD和IVSTS等指标显著高于C组,EF无显著性差异;在运动心脏重塑过程中,ILT组小鼠心脏中miRNA-350的表达水平先快速增高再急剧下降,然后缓慢下降到与C组相当的水平;在递增负荷运动的0d、3d和7d,miRNA-350的靶基因JNK mRNA的表达水平没有显著变化,此后,JNK mRNA的表达水平呈上升趋势;在运动心脏重塑的初期,JNK蛋白的表达水平先显著下降再缓慢上升。结论:持续8周递增负荷跑台运动成功的诱导了小鼠心肌肥大;运动心脏重塑过程中miRNA-350、JNK mRNA和JNK蛋白呈动态变化,提示miRNA-350/JNK信号通路可能参与运动心脏重塑的调节。

Ras-MAPKs信号通路在类风湿关节炎miRNA-146a调控DNMTs中的作用及温化蠲痹方干预作用研究

目的研究ras-MAPKs信号通路在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)微小RNA-146a(miRNA-146a)对DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferase,DNMTs)调控中的作用,以及温化蠲痹方干预作用。方法提取RA患者、健康受试者PBMCs进行体外培养研究。将18例健康受试者随机分为6组,每组均为3例,分别为正常组,正常转染miRNA-146a组(转染组),正常转染miRNA-146a加中药组(中药1组),正常转染miRNA-146a加MAPKs特异性阻断剂PD98059组(阻断1组)、SB203580组(阻断2组)、SP600125组(阻断3组)。将符合中医辨证为寒热错杂、痰瘀痹阻型的活动期RA患者15例,随机分为5组,每组3例,分别为RA组,RA加中药组(中药2组),RA加MAPKs特异性阻断剂PD98059组(阻断4组)、SB203580组(阻断5组)、SP600125组(阻断6组)。对受试者PBMCs进行体外培养、转染、加通路阻断剂以及含药血清,运用实时定量PCR检测PBMC中miRNA-146a、DNMTs、RASGRP1的表达。结果阻断1~6组miRNA-146a表达降低,DNMTs表达升高,RASGRP1表达降低(均P<0.05)。中药1、2组RSAGRP1表达降低(均P<0.05)。结论ras-MAPKs信号通路可能参与了RA患者miRNA-146a对DNMTs的调控。中药温化蠲痹方可能通过下调RA患者RASGRP1表达作用于ras-MAPKs信号通路,影响miRNA-146a对DNMTs进行调控,达到治疗RA作用。

地塞米松对小鼠急性胰腺炎中miRNA-155及NF-κB信号通路的影响

目的探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)小鼠模型胰腺组织中miRNA-155及核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响.方法利用蛙皮素建立小鼠AP动物模型,实验分组为对照组、模型组、地塞米松组(DEX组),分别连续3次予生理盐水、蛙皮素(10μg/mL浓度按50μg/kg)、蛙皮素(剂量同模型组)+DEX(1 mL/kg)腹腔注射.利用ELISA法检测各组动物胰腺组织及血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的含量;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组动物胰腺组织中miRNA-155 mRNA的表达情况;利用Western blot检测各组胰腺组织中磷酸化p65及IκBα蛋白的表达情况.结果ELISA检测结果显示,与模型组比较,DEX组动物胰腺组织及血清中IL-1β、TNF-α与IL-6的含量显著降低,对照组最低.RT-qPCR结果显示,与模型组相比较,DEX组胰腺组织中miRNA-155 mRNA的表达显著降低,对照组最低.Western blot结果显示,与模型组相比较,DEX组胰腺组织中磷酸化p65及IκBα蛋白的表达均显著降低.结论DEX可能通过抑制miRNA-155的表达,进而抑制p65及IκBα蛋白的磷酸化,从而抑制NF-κB信号通路的活化,减少炎症因子如IL-1β、TNF-α与IL-6等的合成与释放,对胰腺腺泡细胞起到保护作用.

miRNA-146a调控STAT3信号通路在坏死性小肠结肠炎新生大鼠中的作用

目的探讨miRNA-146a调控STAT3信号通路在坏死性小肠结肠炎(NEC)新生大鼠中的作用。方法选择新生雄性大鼠40只,分4组,每组10只。分别是对照组(A组)、模型组(B组)、阴性对照组(C组)、miRNA-146a agomir组(D组)。采用HE染色,光镜下观察各组大鼠肠组织病理形态学改变;ELISA检测各组大鼠回盲部肠组织中TNF-α、IL-1β表达水平;qRT-PCR检测各组大鼠回盲部肠组织中miRNA-146a、STAT3、IL-6;Western blot检测各组大鼠回盲部肠组织中STAT3、p-STAT3、IL-6。结果光镜结果显示,A组肠组织结构清晰,上皮完整,腺体排列规则、黏膜层及黏膜下层无充血水肿且无炎症细胞浸润;B组和C组肠组织坏死严重,腺体排列紊乱,部分绒毛坏死、脱落,黏膜下层重度水肿,存在大量炎症细胞浸润;D组肠黏膜及黏膜下层可见轻度水肿,有少量炎症细胞浸润,肠组织结构坏死情况减轻,腺体排列稍紊乱。与A组相比,B组、C组大鼠肠组织miRNA-146a表达水平降低而D组miRNA-146a表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);B组、C组大鼠肠组织TNF-α、IL-1β含量、STAT3、IL-6 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05);过表达miRNA-146a agomir后,大鼠肠组织TNF-α、IL-1β含量、STAT3、IL-6 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05)。结论NEC大鼠IL-6/STAT3信号通路激活,炎症水平升高,肠组织损伤严重;过表达miRNA-146a可减轻NEC炎症水平,改善肠组织损伤情况,其机制可能与miRNA-146a抑制IL-6/STAT3信号通路活化有关。

miRNA-141通过调节TLR4信号通路抑制大鼠血栓形成

目的研究微小RNA(miR)-141对血栓模型大鼠血栓形成、血小板聚集及血浆中一氧化氮(NO)、环磷酸鸟苷(cGMP)和前列环素(PGI2)的影响。方法90只SD雄性大鼠随机进行分组,10只为正常对照组;模型组使用5 g/L的CMC-Na建立大鼠动静脉旁路血栓模型(20只);治疗组在CMC-Na基础上分别静脉注射100 mg/kg阿司匹林(Asp)作为阳性对照(10只)、miR-141的拟似物mimic(20只)、mimic阴性对照mimic-NC(10只)、mimic联合Toll样受体4(TLR4)过表达重组质粒pcDNA3.1-TLR4(mimic+pcDNA3.1-TLR4)(20只),连续4周。观察各组血栓形成的影响,比浊法观察ADP诱导的血小板聚集变化,试剂盒法检测各组血浆中NO,cGMP,PGI2的水平;蛋白免疫印迹法检测TLR4、NF-κB、Rac1、IL-1β的蛋白水平。结果miR-141-mimic可显著抑制血栓形成和血小板聚集率(P<0.05),升高血浆中NO(P<0.05)、cGMP(P<0.05)、PGI2(P<0.05)浓度,miR-141-mimic组效果优于阿司匹林组(P<0.05)。miR-141-mimic可显著抑制NF-κB(P<0.05),Rac1(P<0.05),IL-1β(P<0.05)的蛋白水平。mimic+pcDNA3.1-TLR4组的逆转miR-141-mimic组的效果(P<0.05)。结论miR-141通过抑制TLR4信号通路发挥抗血栓作用。

miR-132调节非小细胞肺癌hedgehog信号通路受体基因PTCH1及细胞增殖、迁移和侵袭（英文）

目的研究miR-132在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系H1299中的作用及相应的靶基因。方法real-time PCR检测7种细胞系中miR-132的表达量。用CCK-8检测稳定株细胞H1299-pEGP-miR-132与H1299-pEGP-miR-null的生长速率的变化。使用稳定株细胞H1299检测miR-132对于细胞克隆形成、细胞迁移和细胞侵袭的影响。用Transwell结合matrigel的方法检测H1299-pEGP-miR-132细胞与H1299-pEGP-miR-null细胞在72h时细胞迁移和侵袭的变化,同时在H1299-pEGP-miR-132细胞中使用anti-miR-132进行了相关的实验验证。运用生物信息学方法预测miR-132的靶基因,并运用双荧光实验、real-time PCR和Western blot验证。在H1299-pEGP-miR-132细胞中共同转染anti-miR-132和PTCH1siRNA检测其对细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果 miR-132在肺癌细胞系中呈现高表达,在NSCLC细胞H1299中miR-132通过靶向调节PTCH1基因的表达发挥作用。H1299-pEGP-miR-132细胞的增殖(P<0.01)、迁移(P<0.05)、侵袭(P<0.05)能力明显高于对照组。在H1299-pEGP-miR-132细胞中转入PTCH1siRNA后细胞增殖能力升高(P<0.05),迁移和侵袭能力降低(P<0.001)。H1299-pEGP-miR-132细胞15天形成的克隆数目是对照组细胞的1.41倍(P<0.05)。Western blot法检测显示miR-132使H1299中PTCH1蛋白表达量显著降低(0.68倍),anti-miR-132使PTCH1表达量显著升高(1.97倍)。结论 miR-132可能参与NSCLC的细胞增殖、迁移和侵袭。它的致癌性部分归因于对Hh信号通路关键的负调控蛋白PTCH1的调节。

芍药舒筋片通过miRNA-140对骨关节炎大鼠软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路的调控作用

目的:研究芍药舒筋片通过miRNA-140对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用,探讨芍药舒筋片对骨关节炎(OA)大鼠软骨细胞的保护作用。方法:取SD大鼠45只,随机分为假手术组、OA对照组、OA治疗组,每组各15只。OA对照组和OA治疗组采用改良Hulth造模法建模,假手术组和OA对照组在建模2周后开始生理盐水灌胃,OA治疗组等量芍药舒筋片灌胃。采用CCK-8溶液检测药物对细胞增殖的影响;软骨组织学采用Mankin评分;检测各组软骨细胞miRNA-140、Wnt-3a、β-catenin、GSK-3βmiRNA和蛋白表达。结果:OA对照组中软骨细胞的增殖速率、miRNA-140相对表达量均明显低于假手术组,而OA治疗组均明显高于OA对照组(P<0.05)。OA对照组中Mankin评分、细胞Wnt-3a、β-catenin、GSK-3βmiRNA和蛋白表达水平均明显高于假手术组,而OA治疗组均明显低于OA对照组(P<0.05)。结论:芍药舒筋片能够增加OA大鼠软骨细胞中miRNA-140的相对表达量和软骨细胞的增殖速率,降低Mankin评分,且能够通过调节Wnt/β-catenin信号通路活性来发挥其对关节软骨细胞的保护作用。

补肾益髓方对脂多糖诱导的BV2细胞神经炎症模型miRNA-155信号通路相关因子的影响

目的观察补肾益髓方药物血清对小鼠小胶质细胞BV2神经炎症的影响,探讨其可能的作用机制。方法1μg/mL脂多糖(LPS)诱导建立BV2细胞炎症模型,将BV2细胞随机分为正常组、LPS组、补肾益髓方药物血清(5%、10%、20%)组和空白血清(5%、10%、20%)组,CCK-8法检测细胞活力;在此基础上,将细胞分为正常组、LPS组和20%补肾益髓方药物血清组,免疫荧光法和Western blot检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arginase-1)蛋白表达,RT-q PCR检测细胞内miRNA-155-5p表达;采用慢病毒转染制备miRNA-155-5p过表达模型,另设20%补肾益髓方药物血清组、阴性对照组和miRNA-155-5p过表达组,免疫荧光法和Western blot检测细胞内i NOS、Arginase-1及CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)蛋白表达。结果与正常组比较,LPS组细胞活力显著降低(P<0.01),iNOS和miRNA-155-5p水平显著升高(P<0.01),Arginase-1表达显著降低(P<0.05);与LPS组比较,20%补肾益髓方药物血清组细胞活力显著升高(P<0.01),iNOS和miRNA-155-5p水平显著降低(P<0.01),Arginase-1表达显著升高(P<0.01)。与20%补肾益髓方药物血清组比较,miRNA-155-5p过表达组i NOS表达显著升高(P<0.01),Arginase-1和C/EBPβ表达显著降低(P<0.01)。结论补肾益髓方可抑制LPS诱导的BV2细胞炎症反应,其作用机制与提高细胞活力、上调Arginase-1表达、下调i NOS表达、抑制miRNA-155信号通路有关。

miRNA-24靶向调控MEK/ERK信号通路对乳腺癌转移的作用

目的探讨miRNA-24(miR-24)靶向调控MEK/ERK信号通路对乳腺癌转移的作用。方法体外培养乳腺癌(BC)细胞系MCF-7、MDA-MB-231细胞以及非肿瘤性人乳房上皮细胞系H184B5F5/M10细胞,采用qPCR方法检测各细胞中miR-24的表达水平。将MCF-7细胞分为正常组、miRNA阴性对照组(miR-24-NC组)和miR-24抑制剂组,采用CCK8、伤口愈合试验和TUNEL检测细胞活力、迁移和凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白和MEK/ERK通路相关蛋白的表达水平。结果miR-24在MCF-7和MDA-MB-231细胞中的表达水平显著高于H184B5F5/M10细胞(P<0.05)。与miR-24-NC组相比,miR-24抑制剂组抑制了细胞的活力和迁移(P<0.05),促进了细胞的凋亡(P<0.05);其凋亡蛋白Bcl-2显著降低(P<0.05),Bax、caspase-3和caspase-9显著升高(P<0.05);同时降低了MEK/ERK信号通路的表达(P<0.05)。结论乳腺癌细胞中miR-24表达升高,并且通过调控MEK/ERK信号通路促进乳腺癌的转移。

miRNA-15a通过靶向Wnt3a调控Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌的发展和转移

目的:研究在卵巢癌发展转移进程中miRNA-15a的作用,并探讨其作用机制。方法:收集锦州医科大学附属第一医院2012年5月至2015年6月32例卵巢癌患者的手术切除标本,采用RT-PCR检测miRNA-15a表达。将培养的卵巢癌SKOV-3细胞分为转染miRNA-15a模拟物的实验组和转染无义miRNA的对照组,采用CCK8、Transwell及流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡的变化,采用Western blot法检测相关蛋白表达。通过生物信息学方法预测miRNA-15a靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验结合Western blot法验证miRNA-15a对靶基因的调控。检测Wnt3a与miRNA-15a模拟物共转染SKOV-3细胞后对细胞增殖和侵袭的影响。结果:与癌旁组织中的miRNA-15a相对表达量0.692±0.228相比,显著低于卵巢癌组织中的0.911±0.209,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组细胞增殖能力相比,miRNA-15a过表达显著抑制实验组细胞增殖能力,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组189.667±14.742相比,miRNA-15a过表达显著抑制实验组的细胞侵袭能力96.667±13.614,差异具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-15a过表达实验组的细胞凋亡率27.400%±0.854%显著高于对照组细胞凋亡率6.933%±0.379%,差异具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-15a模拟物下调Wnt3a和β-catenin的表达,抑制细胞周期蛋白(Cyclin D1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,促进E-钙离子依赖的细胞黏附素(E-calcium-dependent adhesion,E-cad)的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果表明miRNA-15a靶向抑制Wnt3a表达。上调Wnt3a能显著降低miRNA-15a对卵巢癌细胞增殖、侵袭和对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用。结论:miRNA-15a通过靶向Wnt3a调控Wnt/β-catenin信号通路的激活以抑制卵巢癌的发展和转移。

miRNA-21过表达对乳鼠星形胶质细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨miRNA-21(miR-21)过表达对乳鼠星形胶质细胞(AS)凋亡及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。方法:AS分为3组,空白对照组、H_2O_2组(400μmol/L的H_2O_2处理AS 24 h)和miR-21+H_2O_2组(miR-21 mimics转染AS 24 h后用400μmol/L的H_2O_2处理细胞24 h)。采用qRT-PCR检测3组细胞miR-21的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测β-catenin、c-myc和Bax蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,H_2O_2组miR-21表达降低,细胞凋亡率升高,β-catenin和c-myc表达降低,Bax表达升高(P <0. 05);与H_2O_2组比较,miR-21+H_2O_2组miR-21表达升高,细胞凋亡率降低,β-catenin和c-myc蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低(P <0. 05)。结论:过表达miR-21可降低AS凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

miRNA-21调控JAK2/STAT3信号通路对IgA肾病模型大鼠肾纤维化的影响

目的:探讨miRNA-21调控JAK2/STAT3信号通路对IgA肾病模型大鼠肾纤维化的影响。方法:建立IgA肾病大鼠模型,清洁级SD雄性大鼠40只分为空白对照组(A组)、IgA肾病模型组(IgAN,B组)、模型组+NC antagomir组(C组)和模型组+miRNA-21 antagomir组(D组),每组10只。检测24 h尿蛋白、血清尿素氮及血肌酐,HE染色观察肾脏组织病理学改变,qRT-PCR法检测血清及肾组织miRNA-21和STAT3的mRNA表达水平,Western blot检测肾脏JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平,ELISA检测肾组织TGF-β1和MMP-9含量。结果:A组大鼠肾小球基质无明显增生,肾小管及间质未见明显异常;B组和C组大鼠肾小球系膜间质明显增生,间质明显纤维化伴炎性细胞浸润;D组大鼠肾小球系膜间质增生减少,肾间质内纤维化水平及炎性细胞浸润明显减少。与A组相比,B组、C组和D组大鼠24 h尿蛋白及BUM均显著升高,血清及肾组织miRNA-21及STAT3 mRNA表达水平显著升高,肾组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平及TGF-β1、MMP-9含量均显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);与C组相比,D组大鼠24 h尿蛋白及BUM均显著降低,血清及肾组织miRNA-21及STAT3的mRNA表达水平及肾组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3的蛋白表达水平、TGF-β1、MMP-9的含量均显著降低(P<0.05)。结论:抑制miRNA-21可改善IgA肾病大鼠肾组织损伤,可能与miRNA-21调控JAK2/STAT3信号通路及TGF-β1、MMP-9的蛋白表达有关。

miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控及其对非小细胞肺癌预后的影响

miRNA-21是miRNA家族中十分重要的一个基因,在多种恶性肿瘤中高表达。研究表明,miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控可影响相关靶点的表达情况,因此,miRNA-21可能为非小细胞肺癌临床诊断和疾病治疗提供新靶标。本文对miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控及其对非小细胞肺癌预后的影响作一综述。

四味土木香散通过调节miR-34a-5p/Notch1信号通路改善机械牵张诱导的H9c2心肌细胞肥大

目的探讨四味土木香散(siwei tumuxiang powder,STP)对机械牵张诱导的大鼠H9c2心肌细胞肥大模型的保护作用及作用机制。方法制备STP含药血清及细胞肥大模型,并筛选STP含药血清最适剂量与作用时间;检测H9c2心肌细胞中心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、miR-34a-5p及Notch1等因子的表达,验证STP是否通过调控miR-34a-5p/Notch1通路对H9c2心肌细胞起保护作用。结果STP含药血清干预模型细胞最适剂量为低剂量(0.972g/kg),作用时间为24h。STP降低了模型细胞中ANP、BNP、miR-34a-5p的表达(P<0.05)。转染miR-34a-5p mimic逆转了STP降低ANP、BNP表达的作用(P<0.05)。用siRNA法敲低Notch1逆转了STP降低ANP、BNP的表达(P<0.05)。Notch1为miR-34a-5p直接靶基因,miR-34a-5p降低了Notch1的表达(P<0.05)。STP干预后,Notch1、NICD1、Hes1蛋白表达降低(P<0.05);转染miR-34a-5p mimic逆转了STP降低Notch1、NICD1、Hes1蛋白表达的作用(P<0.05)。结论STP可能是通过影响miR-34a-5p表达负调控Notch1信号通路对机械牵张诱导的大鼠H9c2心肌细胞肥大发挥保护作用。

miRNA-34a通过调控SOX4/RAS/MAPK信号通路对中枢神经系统淋巴瘤进展的影响

目的:探讨微小RNA-34a(miR-34a)在原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)中的作用及其潜在的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测PCNSL组织中miR-34a的表达。体外培养Raji细胞,将miR-34a模拟物(miR-34a mimic)、模拟物对照(NC mimic)、miR-34a抑制剂(miR-34a inhibitor)、抑制剂对照(NC inhibitor)、miR-34a mimic+空白质粒(Vector)、miR-34a mimic+SOX4过表达质粒(pcDNA-SOX4)分别转染至细胞中。RT-qPCR实验检测细胞中miR-34a的表达;CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞中SOX4蛋白和RAS/MAPK通路蛋白Ras、p-Raf-1、p-MEK的表达;生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-34a与SOX4的靶向关系。结果:PCNSL组织中miR-34a的表达显著降低(P<0.05)。与NC mimic组比较,miR-34a mimic组细胞中miR-34a的表达升高,细胞增殖能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著降低(P<0.05)。与NC inhibitor组比较,miR-34a inhibitor组细胞中miR-34a的表达降低,细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著升高(P<0.05)。与NC mimic组比较,共转染miR-34a mimic和WT-SOX4的细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而共转染miR-34a mimic和MUT-SOX4的细胞荧光素酶活性无显著性变化(P>0.05)。与miR-34a mimic+Vector组比较,miR-34a mimic+pcDNA-SOX4组Raji细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:miR-34a通过靶向SOX4调控RAS/MAPK信号通路从而抑制PCNSL细胞增殖,促进细胞凋亡。