温阳复元方通过调控miRNA-137/线粒体铁死亡通路保护大鼠脑缺血再灌注损伤机制研究

目的探讨温阳复元方对miRNA-137/线粒体铁死亡通路的调控作用,阐明该方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)的神经保护作用机制。方法线栓法制备大鼠CIRI模型,将144只SD大鼠随机分为假手术(SO)组、模型(I/R)组、补阳还五汤对照(BYHW)组、温阳复元方(WYFY)组、温阳复元方+miRNA-137模拟物(WYFY+mimic)组、温阳复元方+miRNA-137抑制物(WYFY+Inhibitor)组,每组按再灌注时间点分为3个亚组。采用Zea-Longa评分法进行神经功能缺损评分(NFS);TTC染色测量脑梗死体积;qRT-PCR和Western blot法观察miRNA-137、膜铁转运蛋白(FPN)和二价金属离子转运体1(DMT1)的mRNA及其蛋白表达水平。结果(1)NFS结果:I/R组NFS较SO组显著增加(P<0.01),与I/R组相比,BYHW组NFS仅在12 h时评分降低(P<0.05),而WYFY组在24 h和3 d的NFS明显降低(P<0.05或P<0.01),WYFY+mimic组NFS显著下降(P<0.01),WYFY+Inhibitor组在3 d时NFS降低(P<0.05);与WYFY组相比,WYFY+mimic组NFS仅在12 h时明显降低(P<0.05)。(2)TTC染色结果:I/R组梗死体积较SO组显著增大(P<0.01),BYHW组和WYFY组较I/R组明显减小(P<0.05或P<0.01),WYFY组梗死体积较BYHW组进一步减小(P<0.01);相较于WYFY组,WYFY+mimic组能进一步减小其梗死体积(P<0.05),而WYFY+Inhibitor组梗死灶明显增大(P<0.05)。(3)miRNA-137 mRNA表达水平:I/R组miRNA-137mRNA的表达较SO组显著下降(P<0.01),WYFY治疗后其表达量显著增加(P<0.01),且WYFY组其表达水平较BYHW组进一步增高(P<0.01);与WYFY组同期比较,WYFY+mimic组miRNA-137 mRNA表达量均进一步升高(P<0.01),WYFY+Inhibitor组抑制该表达(P<0.01)。(4)FPN mRNA及蛋白表达水平:I/R组FPN mRNA和蛋白表达水平较SO组均降低(P<0.01),WYFY组能显著增加其表达(P<0.01),该组在12 h和3 d时的表达量较BYHW组进一步增加(P<0.05或P<0.01);与WYFY组同期对比,WYFY+mimic组其表达水平在24 h及3 d时增加(P<0.01),而WYFY+Inhibitor组其表达水平均降低(P<0.01)。(5)DMT1 mRNA及蛋白表达水平:I/R组DMT1mRNA和蛋白表达量较SO组均显著增加(P<0.01);与I/R组比较,WYFY能降低其表达水平(P<0.01),且WYFY组在3 d时其表达量较BYHW组进一步降低(P<0.05);与WYFY组同期相比,WYFY+mimic组其表达水平在24 h和3 d时均降低(P<0.01),而WYFY+Inhibitor组其表达水平均显著增加(P<0.01)。结论温阳复元方可能通过上调miRNA-137的表达,进而上调铁转运蛋白FPN的表达,下调DMT1的表达,调节铁代谢,最终抑制线粒体铁死亡,发挥其神经保护作用,其疗效优于补阳还五汤。

MiRNA-137在急性冠脉综合征患者中表达及其临床意义

目的探讨小核糖核酸(miRNA)-137在急性冠脉综合征(ACS)患者及冠状动脉无病变者血浆中含量的差异及其临床意义。方法采集ACS患者(68例)及冠状动脉无病变者(非冠心病组,32例)的血浆,提取总miRNA,运用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测miRNA-137含量及分析miRNA-137在各组中的差异表达。测定肌酸激酶同功酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白(c Tn) I、脑钠尿肽(BNP)、冠脉SYNTAX积分和左室射血分数(LVEF)值等,并分析miRNA-137与这些临床指标的相关性。结果与非冠心病组比较,ACS患者miRNA-137表达差异有统计学意义(P <0. 05),多因素Logistic回归分析表明miRNA-137是ACS的独立相关因素(P <0. 01);相关分析表明:ACS患者循环miRNA-137的表达量与BNP、c Tn I呈正相关。而在冠脉病变血管数目不同组间,miRNA-137表达并无明显统计学差异。另外,miRNA-137表达量在不同SYNTAX评分组之间不全相同,差异有统计学意义。结论 miRNA-137是ACS的独立相关因素,可部分反映ACS患者的严重程度,可能成为ACS潜在的诊断学标记物。

miRNA-137在膀胱癌中的表达情况及对膀胱癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨miRNA-137在膀胱癌中的相对表达量及其对膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法选取30例膀胱癌患者的膀胱癌组织和癌旁组织标本。实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测膀胱癌组织和癌旁组织中的miRNA-137的相对表达量,检测不同病理分级膀胱癌患者膀胱癌组织中miRNA-137的表达量及其与膀胱癌病理分级的相关性。将mimic-NC、miRNA-137 mimic、miRNA-137 inhibitor质粒转染至膀胱癌T24细胞,并分别作为空白组、过表达组和低表达组,RT-PCR法检测3组细胞miRNA-137的相对表达量,Transwell小室检测3组细胞的迁移和侵袭能力。结果浸润性膀胱癌组织中miRNA-137的相对表达量明显高于非浸润性膀胱癌组织和癌旁组织(P﹤0.01);病理分级为Ⅳ级的膀胱癌患者膀胱癌组织中miRNA-137的相对表达量明显高于病理分级为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级的患者(P﹤0.01)。过表达组迁移和侵袭细胞数目均高于空白组细胞(P﹤0.05);低表达组迁移和侵袭细胞数目均低于空白组细胞(P﹤0.05)。结论浸润性膀胱癌组织和病理分级为Ⅳ级的膀胱癌组织中miRNA-137的相对表达量较高,上调miRNA-137的表达可以促进膀胱癌细胞侵袭和迁移,抑制其表达可以抑制膀胱癌细胞的迁移和侵袭。

miRNA-137靶向SLC1A5调控铁死亡对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护机制

目的观察miRNA-137靶向溶质载体家族1成员(SLC1A)5对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠的神经功能影响及其调节铁死亡的可能机制。方法60只成年健康SD大鼠,随机分为6组:假手术(Sham)组、模型(Model)组、miR-137模拟剂(miR-137 mimic)组、miR-137抑制剂(miR-137 inhibitor)组,miR-137空载体病毒(miR-137 vector)组、Ferrostatin-1铁死亡抑制剂(Fer-1)组(5 mg/kg),于造模前1 w,各病毒组从侧脑室注入2μl病毒载体,连续7 d;在造模后第1、3、7天时采用Longa法评估大鼠神经功能,并在第7天神经功能评分后取材,生化试剂盒检测还原型谷胱甘肽(GSH)及二价铁离子(Fe^(2+))表达,qRT-聚合酶链反应(PCR)检测各组脑组织中miR-137、SLC1A5、溶质载体家族7成员(SLC7A)11及谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)4表达水平,Western印迹检测SLC1A5、SLC7A11及GPX4蛋白表达,并采用电镜观察各组脑组织中神经元线粒体铁死亡的变化。结果与Sham组比较,Model组神经功能缺损评分、Fe^(2+)含量、SLC1A5 mRNA及蛋白表达明显升高,GSH含量、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01),电镜下可见线粒体缩小、线粒体膜增厚、线粒体嵴溶解断裂;与Model组比较,miR-137 mimic组神经功能缺损评分、Fe^(2+)含量、SLC1A5 mRNA及蛋白表达显著下降,GSH含量、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01),线粒体形态学损伤明显改善,表现为线粒体膜完整、线粒体嵴数目多、结构清晰;与miR-137 mimic组比较,miR-137 inhibitor与miR-137 vector组神经功能缺损评分、Fe^(2+)含量、SLC1A5 mRNA及蛋白表达明显升高,GSH含量、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01),电镜下可见线粒体缩小、线粒体膜增厚、线粒体嵴溶解断裂;而miR-137 mimic组与Fer-1组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达miR-137对CIRI大鼠神经损伤具有保护作用,其机制可能与靶向抑制SLC1A5蛋白表达,上调抗氧化因子SLC7A11、GPX4及GSH的生成,进而抑制细胞铁死亡有关。

miRNA-137在骨肉瘤中的作用及机制研究

[目的]通过转染miRNA-137至人骨肉瘤细胞MG-63，观察细胞内TWIST蛋白含量变化及其对细胞增殖活性的影响以探讨miRNA-137在骨肉瘤中的作用及机制。[方法]Target Scan预测miRNA-137与TWIST结合靶位；PCR扩增TWIST基因3’UTR区并克隆至荧光素酶报告基因表达载体；化学法合成miRNA-137 mimics，miRNA-137 inhibitor及NC序列，与荧光素酶报告基因表达载体共转染293细胞，d8h后检测荧光素酶活性；转染miRNA-137至MG-63细胞，转染后48h，Real Time-PCR检测转染后细胞内miRNA-137含量，Western—blot检测细胞中TWIST蛋白含量变化；转染后0～72h，CCK-8检测肿瘤细胞增殖活性。[结果]证实了miRNA-137与其靶基因TwIsT的结合位点；miRNA-137mimics转染MG-63细胞，可明显抑制细胞内TWIST蛋白表达，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），而miRNA-137 inhibitor转染细胞后可明显增强胞内TWIST蛋白的表达，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05））；miRNA-137mimics可明显抑制MG-63细胞对数期增殖活性，而miRNA-137in．hibitor则使细胞增殖活性进一步增强，相同时间点与对照相比较，均有差异（P〈0．05）。[结论】miRNA-137可以通过抑制其靶基因TWIST表达来抑制MG-63细胞增殖活性。

miRNA-137对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响

目的观察过表达miRNA-137在脊髓缺血再灌注损伤(SCⅡ)后对大鼠后肢运动功能的影响并探索其可能的机制。方法 40只成年健康SD大鼠,随机分为4组(n=10):假手术组(S)、造模组(SCⅡ)、造模+病毒载体组(vector)、造模+过表达miRNA-137组(miR-137),于缺血再灌注12h后采用MDI评分观察大鼠后肢运动功能;HE染色观察脊髓组织的病理学改变;qRT-PCR检测miRNA-137的表达;Westernblot法检测抗凋亡蛋白bcl-2及自噬特异性蛋白LC3的表达。结果在脊髓缺血再灌注损伤后12h,与假手术组相比较,造模组大鼠的后肢运动功能评分明显增高,凋亡小体数量增加,健存细胞数量减少,LC3的表达水平明显增高, miRNA-137和bcl-2的表达水平明显降低。与造模组相比,过表达miRNA-137组大鼠后肢运动功能评分明显降低,凋亡小体数量减少,健存细胞数量增加,miRNA-137和bcl-2表达水平明显升高,LC3表达水平明显降低。结论过表达miRNA-137在SCⅡ中的神经保护作用可能与抑制自噬和凋亡有关。

膀胱癌组织微RNA-212、微RNA-137、微RNA-200表达与临床病理特征的相关性及预测经尿道膀胱肿瘤切除术后复发的效能研究

目的 探讨膀胱癌组织微RNA-212(miRNA-212)、微RNA-137(miRNA-137)、微RNA-200(miRNA-200)表达与临床病理特征的相关性及预测经尿道膀胱肿瘤切除(TURBT)术后复发的效能。方法 选取2017年6月至2021年6月河北燕达医院100例膀胱癌病人,比较癌组织和癌旁组织及不同病理特征病人miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达,并根据术后复发情况分为复发组、未复发组。比较两组miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200预测复发的价值,比较不同miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达水平病人复发率。结果 癌组织miRNA-212为2.03±0.56低于癌旁组织4.52±1.18(P<0.05),癌组织miRNA-137、miRNA-200表达分别为2.69±0.45、24.56±7.39,高于癌旁组织的1.28±0.30、7.33±2.21(P<0.05);随着组织学分级、TNM分期递增,miRNA-212表达逐渐降低,miRNA-137、miRNA-200表达逐渐升高(P<0.05);肌层浸润性膀胱癌病人miRNA-212低于非肌层浸润性膀胱癌,miRNA-137、miRNA-200高于非肌层浸润性膀胱癌(P<0.05);复发组miRNA-212(1.73±0.39)低于未复发组(2.28±0.44)(P<0.05),复发组miRNA-137、miRNA-200分别为3.06±0.72、37.96±12.18,高于未复发组2.35±0.40、22.86±7.50(P<0.05);miRNA-212高水平病人复发率低于低水平病人,miRNA-137、miRNA-200高水平病人复发率高于低水平病人(P<0.05)。结论 膀胱癌组织miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达与临床病理特征相关,联合检测对TURBT后复发具有良好的预测能力,可作为预测术后复发的一种方案。

MicroRNA-137与AngⅡ在自发性高血压大鼠心脏重构中的作用

目的探讨微小核糖核酸195(MicroRNA-137,miRNA-137)、TGF-β1/Smads信号转导通路及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在自发性高血压大鼠(SHR)心脏重构中的作用。方法取雄性SHR大鼠16只,随机分为SHR干预组(卡托普利10 mg/kg·d)和SHR对照组(蒸馏水)各8只,另取Wistar大鼠8只为正常对照组,分别给予SHR大鼠卡托普利10 mg/kg·d和蒸馏水灌服,共持续8周。造模前后测大鼠尾动脉血压,8周后股动脉放血处死大鼠,HE染色观察大鼠心脏形态学改变,实时荧光定量多聚酶链式反应(qRT-PCR)法检测大鼠心脏中miRNA-137的表达,Western-blot检测转化生长因子β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、Smad蛋白3(small mother against decapen-taplegic protein three,Smad3)、I型胶原(Col-Ⅰ)和Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)蛋白表达水平。结果 SHR大鼠心脏miRNA-137、AngⅡ、TGF-β1、Smad3、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ的表达量均高于Wistar大鼠(P<0.01或P<0.05),SHR干预组大鼠心肌细胞较SHR对照组明显变小,细胞排列较其紧密有序,miRNA-137、AngⅡ、TGF-β1、Smad3、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ表达量均明显降低(P<0.01或P<0.05)。结论 miRNA-137可能通过上调AngⅡ及TGF-β1/Smads信号转导通路促进SHR心脏重构;卡托普利干预可抑制miRNA-137表达。

DC-CIK细胞免疫治疗联合化疗对老年中晚期非小细胞肺癌的临床研究

目的探讨树突状细胞-细胞因子诱导的自然杀伤(DC-CIK)细胞免疫治疗联合化疗治疗老年中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效,以及对患者血清微小RNA-137(miR-137)和微小RNA-29a(miR-29a)的影响.方法选取2013年1月~2015年12月期间扎兰屯市中蒙医院和锦州医科大学附属第一医院收治的68例中晚期NSCLC老年患者,按照随机数字表法分为对照组和观察组,各34例.其中对照组患者单纯行紫杉醇+顺铂(TP方案)治疗,观察组在对照组化疗基础上采用DC-CIK细胞免疫治疗.采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测患者治疗前和治疗2个周期后血清miR-137和miR-29a表达水平变化.比较两组患者临床疗效和不良反应发生情况.结果观察组疾病控制率(DCR)和客观缓解率(ORR)均显著高于对照组(P<0.05).治疗后3个月两组卡氏体能状态评分(KPS)变化情况比较差异具有统计学意义(P<0.05);观察组KPS评分好转率显著高于对照组(P<0.05).两组患者治疗后miR-137和miR-29a表达水平较治疗前均显著下降(P<0.001);观察组治疗后miR-137和miR-29a表达水平下降程度显著大于对照组(P<0.001).两组不良反应比较差异无统计学意义(P>0.05).结论DC-CIK细胞免疫治疗联合化疗可提高老年中晚期NSCLC患者临床疗效和生活质量,下调miR-137和miR-29a表达可能是其重要机制.