血清人附睾蛋白4联合外泌体miRNA-200a/200b/200c用于糖链抗原125阴性卵巢上皮癌早期诊断的价值

目的研究血清人附睾蛋白4(human epididymal protein,HE4)联合外泌体中的微小RNA(miRNA)-200a/200b/200c用于糖链抗原125(sugar chain antigen,CA125)阴性卵巢上皮癌(epithelial ovarian carcinoma,EOC)早期诊断的价值。方法选取CA125阴性EOC患者120例作为研究对象,设为研究组;另选取同期收治的115例卵巢上皮良性肿瘤患者作为良性组,107例于武汉市第一医院体检的健康女性作为对照组。比较3组HE4、CA125、miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析各项血清指标鉴别CA125阴性EOC及卵巢上皮良性肿瘤的价值。结果研究组HE4及miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c水平显著高于良性组、对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。经ROC分析证实,血清HE4及miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c能够用于CA125阴性EOC的诊断,且HE4+miRNA-200a/b/c联合诊断相对于单独及两两诊断可获得更高的曲线下面积,均有P<0.05。经logistic逐步回归分析证实,HE4≥163.110 pmol/L、miRNA-200a≥2.7002^(-△△CT)、miRNA-200b≥1.6652^(-△△CT)、miRNA-200c≥1.3952^(-△△CT)为CA125阴性EOC发生的危险因素(P<0.05)。结论血清HE4及miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c可用于CA125阴性EOC的早期诊断中,且四项指标联合诊断具有更高的敏感度与特异性,值得临床医师关注。

miRNA-182、miRNA-200c和胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ单独及联合检测对胃癌的诊断价值

目的探讨miRNA-182、miRNA-200c和胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)/胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)单独及联合检测对胃癌的诊断价值。方法选取65例胃癌患者和61例健康体检者,分别作为观察组和对照组,酶联免疫吸附试验检测两组受试者血清PGⅠ和PGⅡ水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miRNA-182、miRNA-200c水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估miRNA-182、miRNA-200c、PGⅠ/PGⅡ单独及联合检测对胃癌的诊断价值。结果观察组患者血清miRNA-182、miRNA-200c水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。观察组患者血清PGⅠ水平和PGⅠ/Ⅱ均低于对照组,PGⅡ水平高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。ROC曲线显示,miRNA-182、miRNA-200c、PGⅠ/PGⅡ联合检测诊断胃癌的AUC为0.829(95%CI:0.633~0.859),高于各指标单独检测的0.650、0.722、0.818,此时的灵敏度为0.825,特异度为0.890。结论miRNA-182、miRNA-200c、PGⅠ/PGⅡ联合检测对胃癌的诊断价值更高,或可作为胃癌诊断的有效指标。

miRNA-200b在糖尿病小鼠海马体中的异常表达及靶基因预测

目的分析糖尿病小鼠海马体miRNA-200b表达情况,并预测miRNA-200b靶基因。方法采用链脲佐菌素或联合高糖高脂饮食分别诱导1型和2型糖尿病小鼠模型,建模后处死小鼠,分离海马体组织,利用荧光定量PCR测定miRNA-200b表达量。通过miRWalk、miRDB和miRPathDB三个基因数据库预测miRNA-200b靶基因,进行GO分析和KEGG分析。结果成功建立糖尿病小鼠模型。糖尿病小鼠海马体中miRNA-200b表达量比正常小鼠下降(P<0.05)。生物信息学预测显示,miRNA-200b筛选到3个靶基因,分别是GAB1、SLC5A3和GICCL1,靶基因功能富集于糖代谢、脑部神经营养等信号通路。结论miRNA-200b在糖尿病小鼠海马体中显著下降,有望成为糖尿病治疗的新靶点。

miRNA-200调控snail1诱导上皮间质转化改善糖尿病肾间质纤维化的研究

目的验证miRNA-200能否通过调控snail来诱导肾小管上皮向间充质转化,从而在糖尿病肾病间质纤维化中发挥作用。方法将来源北纳生物的NRK52E细胞分为六组:正常葡萄糖(5 mM)组;等渗对照(25 mM甘露醇+正常葡萄糖5 mM)组,高葡萄糖(30 mM)组,高葡萄糖(30 mM)+NC组,高葡萄糖(30 mM)+miRNA-200模拟物组,高葡萄糖(30 mM)+miRNA抑制剂组。给予高葡萄糖(30 mM)组,高葡萄糖(30 mM)+NC组,高葡萄糖(30 mM)+miRNA-200模拟物组,高葡萄糖(30 mM)+miRNA抑制剂组30mM葡萄糖处理,对高葡萄糖(30 mM)+miRNA-200模拟物组,高葡萄糖(30 mM)+miRNA抑制剂组进行过表达质粒转染。qRT-PCR及Western blot法检测各组中snail、Vimentin、Collagen IV、α-SMA、E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平;Transwell检测各组细胞的侵袭能力;划痕实验检测各组细胞的迁移能力;双荧光素酶报告基因实验验证靶定效果。结果与正常葡萄糖(5 mM)组相比,高葡萄糖(30 mM)组Vimentin、Collagen IV、α-SMA mRNA和蛋白的表达量增加,E-cadherin mRNA和蛋白的表达量下降(P<0.05);但与高葡萄糖(30 mM)组相比,高葡萄糖(30 mM)+miRNA-200模拟物组Vimentin、Collagen IV、α-SMA mRNA和蛋白的表达量降低,E-cadherin mRNA和蛋白的表达量增加(P<0.05);Transwell检测中,与正常葡萄糖(5 mM)组相比,高葡萄糖(30 mM)组侵袭能力降低,而高葡萄糖(30 mM)+miRNA-200模拟物组与其相比,细胞的迁移能力增强,microRNA-200抑制剂组细胞的迁移能力降低(P<0.01);划痕实验(48 h),与高葡萄糖(30 mM)组相比,高葡萄糖剂组(30 mM)+miRNA-200模拟物组使迁移能力明显增加,高葡萄糖(30 mM)+miRNA抑制剂组迁移能力明显减弱(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验验证microRNA-200和野生型snail1共转染细胞的荧光素酶活性显著降低,而突变型snail1的荧光无明显变化,证明snail1是miR-200b-3p的直接靶点(P<0.01)。结论miRNA-200可以通过snail1调控肾小管上皮上皮细胞间充质转化诱导糖尿病肾病间质纤维化。

miRNA-200c/SOX2轴在实验性牙周炎牙槽骨吸收中的作用研究

目的:探讨miRNA-200c/转录因子Y框蛋白2(SOX2)轴在实验性牙周炎牙槽骨吸收中的作用。方法:将C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、miRNA-200c组和联合组。模型组、miRNA-200c组和联合组小鼠分别给予慢病毒空载体、miRNA-200c慢病毒过表达载体及miRNA-200c和SOX2慢病毒过表达载体。以牙龈卟啉单胞菌涂抹模型组、miRNA-200c组和联合组小鼠口腔建立慢性牙周炎模型。检测各组牙周组织miRNA-200c和SOX2表达水平、牙龈指数、釉牙骨质界(CEJ)到牙槽嵴顶(ABC)距离。HE染色分析小鼠牙周组织病理形态学变化。qPCR检测小鼠牙周组织中miRNA-200c和SOX2表达水平。Western blotting检测小鼠牙周组织中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、核因子κB受体因子(RANK)蛋白表达水平。结果:与空白组相比,模型组小鼠牙周组织中miRNA-200c表达水平降低(P<0.05),SOX2表达水平升高(P<0.05);miRNA-200c组牙周组织中miRNA-200c表达水平高于空白组和模型组,SOX2表达水平低于模型组(P<0.05);联合组牙周组织中miRNA-200c及SOX2表达水平均高于空白组和模型组(P<0.05)。模型组、miRNA-200c组及联合组牙龈指数及CEJ至ABC距离高于空白组(P<0.05),miRNA-200c组牙龈指数及CEJ至ABC距离均低于模型组(P<0.05),联合组牙龈指数及CEJ至ABC距离均高于miRNA-200c组(P<0.05)。Western blotting结果显示,模型组、miRNA-200c组及联合组RANKL、RANK表达水平及RANK/OPG比值均高于空白组(P<0.05),miRNA-200c组RANKL、RANK表达水平及RANK/OPG比值均低于模型组(P<0.05),联合组RANKL、RANK表达水平及RANK/OPG比值均高于miRNA-200c组(P<0.05)。HE染色结果显示,模型组小鼠牙周组织出现明显大量炎症细胞浸润,胶原纤维排列紊乱、变性、断裂,而miRNA-200c组小鼠这些症状相比于模型组得到显著缓解,但是联合组小鼠相比于miRNA-200c组小鼠也出现了显著的炎症细胞浸润,胶原纤维排列紊乱、变性、断裂现象。荧光素酶活性检测显示,miRNA-200c mimic能明显降低SOX2野生型荧光素酶活性(P<0.01),而对SOX2突变型荧光素酶活性影响差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miRNA-200c能改善小鼠牙周炎炎症反应及牙槽骨吸收情况,可能与SOX2调控的RANKL/RANK/OPG轴有关。

肝纤维化指标与miRNA-200b、TAP联合检测与原发性肝癌预后的相关性研究

目的 探讨肝纤维化指标与miRNA-200b、肿瘤异常蛋白(TAP)表达水平与原发性肝癌预后的相关性。方法 选择2017年2月至2018年1月在该院接受治疗的73例原发性肝癌患者病例资料作为研究对象,根据预后状况分为预后良好组和预后不良组。对两组患者miRNA-200b、TAP表达水平及肝纤维化指标进行分析。结果 预后不良组患者肝组织miRNA-200bmRNA表达量均低于预后良好组,预后良好组患者血清TAP水平显著高于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良患者血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层粘连蛋白(LN)以及透明质酸(HA)水平均低于预后良好患者,差异有统计学意义(P<0.05)。血清血清TAP、癌组织miRNA-200bmRNA表达水平与肝纤维化指标联合检测对原发性肝癌预后评估的灵敏度、准确度和特异度分别为0.985、0.972和0.832。结论 血清TAP、癌组织miRNA-200bmRNA表达水平与肝纤维化指标联合检测可用于对原发性肝癌的预后进行评估的灵敏度、特异度及准确度均较高,具有较好的临床应用前景。

肝癌组织中miRNA-200b表达及其与患者生存时间的关系

目的探讨miRNA-200b（miR-200b）在肝癌组织中的表达及其与患者生存时间的关系。方法选择行手术治疗的原发性肝癌患者76例,术中留取肝癌组织以及癌旁正常组织,采用RT-PCR技术检测miR-200b表达,分析其表达与患者临床病理特征的关系。以miR-200b相对表达量的中位数为界值,将患者分为miR-200b高表达和低表达,采用Kaplan-Meier生存分析法比较其生存情况。结果肝癌组织中miR-200b相对表达量为0.61±0.12,癌旁正常组织为1.37±0.19,二者比较P〈0.05。miR-200b表达与肝癌患者淋巴结转移有关（P〈0.05）,与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、TNM分期、肝炎史和AFP均无关（P均〉0.05）。miR-200b相对表达量中位数为0.597,76例患者中miR-200b高表达32例、低表达39例。随访2~60个月,miR-200b高表达者生存22例（68.7%）、中位生存期47.5个月,低表达者生存16例（41.0%）、中位生存期31.0个月;miR-200b高表达者生存率及生存期均高于低表达者（P均〈0.05）。结论 miR-200b在肝癌组织中低表达,其低表达与肿瘤浸润、转移有关,可影响患者生存时间。

结直肠癌及缺氧的结直肠癌细胞中HIF-1α与miRNA-200b表达的相关性

目的探讨缺氧诱导因子HIF-1α与miRNA-200b在结直肠癌及缺氧的结直肠癌细胞中的表达以及两者的相关性。方法采用实时定量PCR检测50例结直肠癌患者的结直肠癌组织及其癌旁组织中HIF-1α与miRNA-200b的表达。利用Co Cl_2构建结肠癌细胞系的缺氧诱导模型,通过实时定量PCR和Western blot分别测定缺氧的Caco-2细胞中HIF-1α和miRNA-200b基因表达并确立两者相关性。结果 HIF-1α在癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P〈0.01）,miRNA-200b在癌组织中的表达显著低于癌旁组织（P〈0.01）,且HIF-1α和miRNA-200b在癌组织中的表达呈负相关（r=-0.324,P〈0.05）。缺氧处理2 h后,HIF-1α表达升高,miRNA-200b表达降低;随着缺氧时间延长（4~12 h）HIF-1α表达逐渐降低,miRNA-200b的表达缓慢上升;缺氧16 h,HIF-1α的表达回升且达到另一个高峰,miRNA-200b的表达降至最低。Real-time PCR和Western blot联合检测发现,HIF-1α和miRNA-200b表达呈相反的趋势。结论 HIF-1α可能通过抑制miRNA-200b的表达从而参与结直肠癌上皮细胞EMT的过程。

miRNA-200a靶向BRD4对非小细胞肺癌上皮间质转化的影响

目的:探讨miRNA-200a靶向BRD4对非小细胞肺癌(NSCLC)上皮间质转化(EMT)的影响及其可能的作用途径。方法:收集2017年1月至2018年12月我院手术切除的NSCLC组织和癌旁组织标本65例,采用RT-PCR检测miRNA-200a在NSCLC组织和癌旁组织中的表达水平;构建miRNA-NC和miRNA-200a稳定细胞系,采用生物信息学和荧光素酶报告基因分析miRNA-200a和BRD4的靶向关系;pcDNA空载和pcDNA-BRD4过表达载体分别转染miRNA-NC和miRNA-200a细胞,采用Western blot检测miRNA-200a靶向BRD4对E-cadherin和Vimentin蛋白表达的影响;采用Transwell分析miRNA-200a靶向BRD4对NSCLC细胞侵袭能力的影响。结果:miRNA-200a在NSCLC组织中的相对表达水平显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。生物信息学分析表明BRD4可能是miRNA-200a的一个作用靶点;双荧光素酶报告基因结果显示,在过表达BRD4-WT的细胞中,miRNA-200a组细胞的相对荧光素酶活性显著低于miRNA-NC组细胞(P<0.05);而在过表达BRD4-MUT的细胞中,miRNA-200a组和miRNA-NC组细胞的相对荧光素酶活性无显著性差异(P>0.05)。Western blot结果显示,与miRNA-NC组比较,miRNA-200a组细胞BRD4和Vimentin的蛋白表达水平显著下降,E-cadherin的蛋白表达显著增加(P<0.05);与miRNA-200a+pcDNA组比较,miRNA-200a+BRD4组细胞中Vimentin的蛋白表达水平明显回升,E-cadherin的蛋白表达显著回落,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验显示,与miRNA-NC组比较,miRNA-200a组细胞的侵袭个数显著下降[(83.66±9.25)个比(32.73±6.02)个,P<0.05];与miRNA-200a+pcDNA组比较,miRNA-200a+BRD4组个细胞的侵袭个数明显回升,差异有统计学意义[(35.06±5.84)个比(62.02±7.28)个,P<0.05]。结论:miRNA-200a在NSCLC组织中高表达,过表达miRNA-200a可靶向下调BRD4的表达,从而抑制NSCLC中BRD4诱导的EMT和侵袭迁移。

miRNA-200b与髓鞘碱性蛋白在新生未成熟大鼠缺氧缺血性脑损伤过程中的相互关系

目的通过了解miR-200b与髓鞘碱性蛋白(MBP)在未成熟大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)损伤过程中的相互关系,为早产儿HIBD康复治疗提供实验依据。方法建立新生大鼠HIBD模型。正常对照组:新生3日龄SD大鼠,不予特殊处理。单纯缺氧缺血组(HI组):永久结扎左侧颈总动脉后吸入8%氧浓度的氮氧混合气体。双侧侧脑室注射无菌PBS。HI激动剂组(HI+agomir组):缺氧缺血后,双侧侧脑室注射miR-200b agomir。HI拮抗剂组(HI+antagomir组):缺氧缺血后,双侧侧脑室注射miR-200b antagomir。qRT-PCR检测转染后12 h(生后3 d)、转染后1 d、转染后3 d、转染后7 d各组脑组织中MBP的相对表达量,比较各组MBP表达的变化。结果单纯HI组3 d时MBP的表达开始降低,7 d时更加明显(P<0.05)。转染后12 h时,各组之间MBP表达无显著差异(P>0.05)。HI转染miR-200b激动剂后MBP处于持续低表达状态,1 d和3 d时明显低于单纯HI组(P<0.05);7 d时,MBP表达回升,接近正常对照组(P>0.05)。HI转染miR-200b抑制剂后MBP表达与正常对照组基本一致(P>0.05),但1 d和3 d时明显高于激动剂组(P<0.05)。结论 miR-200b过表达反向抑制了MBP的表达,但作用时间有限。miR-200b低表达促进MBP表达恢复到正常水平。miR-200b有可能参与了新生大鼠HIBD后CNS髓鞘形成及其损伤修复过程。

miRNA-200c在胃癌中的表达及其靶基因RhoE的预测

目的研究miRNA-200c在胃癌和对应癌旁正常组织中的差异表达情况,探讨miRNA-200c与胃癌临床病理参数之间的相关性以及miRNA-200c在胃癌中可能调控的靶基因。方法应用荧光定量-聚合酶链反应技术检测miRNA-200c在胃癌和癌旁正常组织的表达情况,利用生物信息学技术预测miRNA-200c可能的靶基因。结果 miRNA-200c在癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P<0.05),miRNA-200c低表达与组织学分级呈显著相关,而与性别、年龄、肿瘤大小及TNM分期等无相关性。生物信息学预测RhoE可能是miRNA-200c的靶基因。结论 miRNA-200c在胃癌中低表达,与组织学分级呈相关性,miRNA-200c可能通过调控RhoE发挥生物学作用。

miRNA-200b通过靶向RhoA抑制宫颈癌细胞增殖、促进细胞凋亡

目的:探讨miRNA-200b通过靶向调控RhoA对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:将宫颈癌HeLa细胞分为5组:空白对照组、阴性对照组、miRNA-200b mimic组、RhoA阴性对照组、RhoA过表达组,转染后48 h收集细胞。RT-PCR检测miRNA-200b表达;双荧光素酶靶标实验验证miRNA-200b与RhoA的靶向关系;RT-PCR和Western blot检测RhoA mRNA和蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡,CCK8法检测细胞增殖。RT-PCR和Western blot检测Bax、CyclinD1 mRNA和蛋白表达。结果:双荧光素酶报告基因实验分析结果显示,RhoA是miRNA-200b的靶基因;与空白对照组和miRNA-200b mimic-NC组相比,miRNA-200b mimic组细胞凋亡比例显著升高,细胞增殖被抑制(P<0.05)。过表达RhoA,细胞凋亡比例降低,细胞增殖能力显著增强(P<0.05)。结论:miRNA-200b可通过靶向RhoA基因抑制宫颈癌细胞增殖并促进其凋亡。

不同类型肠易激综合征患者血清miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a水平的临床意义

目的探讨不同类型肠易激综合征(IBS)患者血清微小RNA(miRNA)-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平的相关性及临床意义,为IBS的病因学研究提供理论依据。方法采用病例抽样的方法选取2015年10月至2018年6月该院IBS患者110例,选取同期110例体检健康者为健康对照组。受试者采样前12 h低蛋白饮食,每位受试者取10 mL静脉血样本,静脉血3000 r/min离心后取上清。采用实时荧光定量反转录PCR测定受试者miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平。结果混合型IBS的miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平均显著高于其他3种亚型(P<0.05),不确定型IBS的miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平均显著高于便秘型IBS及腹泻型IBS(P<0.05)。混合型、不确定型IBS患者的miRNA-144、miRNA-29a、miRNA-200a的表达水平两两之间均存在相关性且有统计学意义(P<0.05),但对于单纯腹泻或者便秘型IBS患者来说,仅miRNA-29a与miRNA-200a的表达水平存在统计学相关性(P<0.05)。结论混合型、不确定型IBS患者血清miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达水平较其他2种亚型高,且血清miRNA-144、miRNA-29a和miRNA-200a表达两两之间具有显著相关性。

血浆miRNA-200b及miRNA-21在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的探讨血浆微小RNA-200b(miRNA-200b)与微小RNA-21(miRNA-21)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达及临床意义。方法选取80例EOC患者(EOC组)、46例上皮性卵巢良性肿瘤患者(良性组)及48例健康女性(对照组)作为研究对象,检测3组研究对象血浆miRNA-200b、miRNA-21水平;应用受试者工作特征(ROC)曲线评价血浆miRNA-200b、miRNA-21水平对EOC的诊断效能及对EOC患者预后的预测价值;分析miRNA-200b、miRNA-21水平与EOC临床特征的关系。结果EOC组血浆miRNA-200b、miRNA-21相对表达量均高于良性组和对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。血浆miRNA-200b、miRNA-21诊断EOC的最佳截断值分别为2.110、1.520,二者联合诊断的曲线下面积(AUC)分别大于miRNA-200b及miRNA-21单项诊断(P﹤0.05)。不同临床分期、糖类抗原125(CA125)水平及有无淋巴结转移的EOC患者血浆miRNA-200b、miRNA-21相对表达量比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。死亡组EOC患者血浆miRNA-200b、miRNA-21水平均明显高于生存组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。血浆miRNA-200b、miRNA-21预测EOC患者预后不良的最佳截断值分别为3.680、2.410,二者联合检测的AUC分别大于miRNA-200b及miRNA-21单独检测(P﹤0.05)。结论血浆miRNA-200b和miRNA-21可作为EOC早期诊断和预后预测的分子标志物,二者联合应用能提高诊断效能以及预后预测能力。

血清miRNA-200b在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探究血清miRNA-200b在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达水平。方法选择45例NSCLC患者为观察组,同时选取30例经诊断无肿瘤疾病的健康对照组。qRT-PCR检测各组血清miRNA-200b的表达水平。结果观察组患者miRNA-200b血清表达水平明显高于对照组(P<0.0001)。观察组患者血清miRNA-200b水平随着临床分期的升高而显著上升(P<0.05);另外,NSCLC患者中肺鳞癌患者血清miRNA-200b表达显著高于腺癌(P<0.0001)。此外,ROC分析miRNA-200b诊断NSCLC最佳cutoff值为0.276(敏感性46.7%,特异性93.3%,AUC值0.779)。结论NSCLC患者血清miRNA-200b水平显著升高,在NSCLC患者的疾病发展过程中起到重要的作用,可作为无创早期诊断NSCLC的指标之一。

miRNA-200a通过下调ZEB2抑制鼻咽癌细胞的迁移和侵袭行为

目的探讨miRNA-200a通过下调ZEB2抑制鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞的迁移和侵袭行为的作用及机制。方法 q PCR检测miRNA-200a在不同鼻咽癌细胞株中的表达情况;双荧光素酶报告基因检测miRNA-200a与ZEB2之间的相互作用;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测miRNA-200a对鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测miRNA-200a对ZEB2蛋白表达水平的影响。结果与其他鼻咽癌细胞株相比,CNE-1细胞中miRNA-200a的表达水平明显较高;双荧光素酶实验证实miRNA-200a可以调控ZEB2的表达及活性,抑制miRNA-200a的表达可以减弱鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力;抑制miRNA-200a的表达后ZEB2的表达水平受到相应的抑制。结论 miRNA-200a可以靶向调节ZEB2的表达影响鼻咽癌细胞的迁移和侵袭行为。

miRNA-200c在结直肠癌发展中作用机制的研究进展

结直肠癌(CRC)是中国第四大致死性疾病,其病因病机复杂。手术、化疗和放疗是目前CRC的主要治疗方法,尽管近年来开发了新的治疗和早期筛查方法,但CRC患者的预后并未得到明显改善。因此,找到合适的生物标志物用于及时发现和治疗CRC是非常有必要的。近年来研究发现微小RNA(miRNA)家族在恶性肿瘤的发生发展中具有重要作用,其中miRNA-200c可以通过靶向调控多种基因调节CRC的发展。本文主要介绍miRNA-200c的生物学作用,并对miRNA-200c在CRC中作用机制的研究进展进行综述。

miRNA-200c-3p在急性呼吸窘迫综合征中的表达及临床意义

目的探讨miRNA-200c-3p在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)中的表达水平及其临床意义。方法选择2017年7月至2020年7月延安大学附属医院东关分院重症监护室收治的118例ARDS患者作为病例组,选取同期在我院体检的118例健康者作为健康组,检测并比较两组受检者血液中miRNA-200c-3p的表达水平,通过单因素和多因素分析影响急性呼吸窘迫综合征预后的相关危险因素,运用χ^(2)检验分析miRNA-200c-3p与临床指标的关系,运用单因素和多因素COX回归以及ROC曲线,分析miRNA-200c-3p在判断急性呼吸窘迫综合征预后中的价值。运用Pearson相关分析研究miRNA-200c-3p和氧合指数(OI)水平之间的相关性。结果病例组患者血液中的miRNA-200c-3p相对表达量为8.17±1.17,明显高于健康组的3.22±0.89,差异有统计学意义(P<0.05);单因素和多因素COX回归分析结果显示,除年龄、ARDS分级和肺泡动脉氧分压差[P(A-a)O_(2)]外,miRNA-200c-3p也是影响ARDS预后的独立危险因素(P<0.05);miRNA-200c-3p表达与年龄、ARDS分型和P(A-a)O_(2)有关,其中年龄>60岁、ARDS分型越严重和P(A-a)O_(2)>183.5 mmHg显示miRNA-200c-3p的表达更高;根据ARDS患者预后情况,使用ROC曲线分析判断miRNA-200c-3p对预后的价值,结果显示,miRNA-200c-3p的ROC曲线下面积(AUC)为0.847(95%CI:0.769~0.907),特异性为86.29%,敏感性为83.63%;经Pearson相关分析结果显示,miRNA-200c-3p和OI水平存在明显负相关(r=-0.753,P<0.01)。结论miRNA-200c-3p是影响ARDS预后的独立危险因素,监测miRNA-200c-3p在一定程度上可以评估患者病情严重程度和预测患者预后,有助于临床对ARDS患者治疗方案制定。

miRNA-200c通过抑制Akt通路提高胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性

目的:研究miRNA-200c对人胃癌耐药SGC7901/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:Western blotting检测SGC7901/DDP及其亲代SGC7901细胞E-cadherin、PTEN、p-Akt及总Akt蛋白的表达;瞬时转染miRNA-200c前体(miR-NA-200c precursor,Pre-200c)提高SGC7901/DDP细胞miRNA-200c的表达,MTT法检测转染后SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性,并分析p-Akt表达的改变;应用Akt通路抑制剂LY94002处理SGC7901/DDP细胞抑制Akt磷酸化,检测处理后细胞对顺铂的敏感性。结果:与SGC7901细胞相比,SGC7901/DDP细胞中p-Akt蛋白的表达量显著增高(1.02±0.09 vs 0.17±0.02,P<0.05),E-cadherin、PTEN蛋白的表达量显著降低(0.10±0.03 vs 0.47±0.06,0.18±0.06 vs 0.87±0.06;均P<0.05)。转染Pre-200c后,顺铂对SGC7901/DDP细胞的IC50显著低于对照组[(7.52±0.19)vs(12.18±0.29)mg/L,P<0.05],细胞中p-Akt蛋白的表达量也显著低于对照组(0.22±0.04 vs 0.69±0.09,P<0.05);LY94002处理后,SGC7901/DDP细胞p-Akt蛋白的表达显著抑制(0.18±0.06 vs 0.66±0.10,P<0.05),顺铂对细胞的IC50显著低于对照组[(6.80±0.28)vs(11.94±1.73)mg/L,P<0.05]。结论:SGC7901/DDP细胞的耐药可能与E-cadherin和PTEN蛋白的表达缺失及Akt通路的异常激活有关,而miRNA-200c提高该细胞对顺铂的敏感性可能是通过抑制Akt通路而发挥作用。

老年原发性肝癌患者血清miRNA-200c水平及其与临床病理特征和预后的关系

目的探讨老年原发性肝癌患者血清miRNA-200c水平及其与临床病理特征和预后的关系。方法选择老年原发性肝癌患者90例作为肝癌组,90例同期体检的健康老年人作为对照组。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定血清miRNA-200c水平。结果肝癌组血清miRNA-200c水平明显低于对照组(P<0.05)。肝癌组血清miRNA-200c水平与原发性肝癌的分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05),其中低分化、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴结转移者血清miRNA-200c水平明显低于中-高分化、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移者;血清miRNA-200c水平与原发性肝癌患者的年龄、性别、乙型肝炎病毒(HBV)感染、肝硬化、肿瘤直径无关(P>0.05)。血清miRNA-200c水平诊断原发性肝癌的受试者工作特征(ROC)曲线下面积为(AUC)为0.811,95%CI为0.808~0.814,诊断界值为0.51,灵敏度为91.02%,特异度为69.53%。血清miRNA-200c水平以ROC曲线诊断临界值0.51为界,分为高表达组和低表达组,高表达组患者总生存率和无病生存率均明显高于低表达组(P<0.05)。结论老年原发性肝癌患者血清miRNA-200c水平降低,血清miRNA-200c水平与老年原发性肝癌的分化程度、临床分期和淋巴结转移关系密切,在老年原发性肝癌的诊断和预后预测中具有重要价值。