lncRNA KCNQ1OT1靶向调控miR-132-5p对帕金森病细胞损伤的保护机制

目的探究长链非编码RNA KCNQ1OT1(lncRNA KCNQ1OT1)靶向调控微小RNA-132-5p(miR-132-5p)对帕金森病细胞损伤的保护机制。方法SH-SY5Y细胞通过1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MMP+)诱导建立帕金森病细胞模型,检测SH-SY5Y细胞中lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白表达,验证lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p的调控关系。结果与Con组相比,MMP+组lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达量较高(P<0.05)。低表达lncRNA KCNQ1OT1、干扰miR-132-5p表达均可减轻MMP+诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激及炎性损伤,抑制细胞死亡,lncRNA KCNQ1OT1靶向正调控miR-132-5p表达,miR-132-5p过表达逆转了lncRNA KCNQ1OT1低表达对MMP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激、炎症损伤及凋亡。结论lncRNA KCNQ1OT1通过靶向抑制miR-132-5p表达减轻了MMP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激、炎症损伤,抑制了细胞凋亡。

血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平对慢性肾小球肾炎患者预后的预测价值

目的探讨血清微小RNA(miR)-181a-5p、miR-132-5p水平与慢性肾小球肾炎患者3年内预后的关系。方法选取2018年1月—2020年4月中国人民解放军联勤保障部队第九〇一医院肾内科收治的慢性肾小球肾炎患者128例作为慢性肾小球肾炎组(肾炎组)和体检健康者130例作为健康对照组(对照组)。检测2组肾功能指标、血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平;分析血清miR-181a-5p、miR-132-5p与肾功能指标的相关性,影响慢性肾小球肾炎患者3年内预后不良的因素,血清miR-181a-5p、miR-132-5p及二者联合预测慢性肾小球肾炎患者3年内预后不良的价值。结果与对照组比较,肾炎组血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平显著降低(t/P=47.860/<0.001、75.095/<0.001),血清尿酸(UA)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、胱抑素C(CysC)水平显著升高,肾小球滤过率(eGFR)水平显著降低(t=27.103、16.387、37.145、47.506、28.550,P均<0.001);血清miR-181a-5p与miR-132-5p水平呈正相关,血清miR-181a-5p和miR-132-5p均与UA、BUN、Scr、CysC水平呈负相关,与eGFR水平呈正相关(r=0.572、-0.506、-0.514、-0.493、-0.627、0.605、-0.498、-0.546、-0.481、-0.609、0.612,P均<0.001);与预后良好亚组比较,预后不良亚组血清UA、BUN、SCr、CysC水平显著升高,eGFR、血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平显著降低(t=6.730、3.596、10.629、7.760、12.657、8.881、13.932,P均<0.001);高水平UA、高水平BUN、高水平SCr、高水平CysC、低水平eGFR、低水平miR-181a-5p、低水平miR-132-5p是影响慢性肾小球肾炎患者3年内预后不良的危险因素[OR(95%CI)=2.239(1.256~3.992)、2.768(1.237~6.194)、2.173(1.195~3.950)、1.806(1.204~2.709)、3.022(1.620~5.637)、2.565(1.349~4.879)、3.350(1.226~9.157)];血清miR-181a-5p、miR-132-5p及二者联合预测慢性肾小球肾炎患者3年内预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.832、0.801、0.904,其中二者联合预测的AUC显著高于各自单独预测AUC(Z/P=1.714/0.043、2.050/0.020)。结论慢性肾小球肾炎患者血清miR-181a-5p、miR-132-5p水平较低,二者与肾功能关系密切,二者联合有助于评估患者3年内预后情况。

lncRNA SNHG5和miR-132-3p在子痫前期病人胎盘组织中的表达关系研究

目的:观察长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因5(lncRNA SNHG5)和miR-132-3p在子痫前期(PE)病人胎盘组织中的表达,分析二者的相关性及对PE的诊断价值。方法:选取112例PE病人作为研究对象,根据PE严重程度分为重度组58例和轻度组54例,另外选取同期健康妊娠孕妇60例作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测胎盘组织中lncRNA SNHG5和miR-132-3p表达;Pearson相关分析观察PE病人胎盘组织中lncRNA SNHG5与miR-132-3p的相关性,及lncRNA SNHG5、miR-132-3p与临床指标的相关性;ROC曲线分析lncRNA SNHG5和miR-132-3p水平对PE的诊断价值。结果:轻度组和重度组PE病人24 h尿蛋白、收缩压以及舒张压水平均高于对照组(P<0.05);重度组收缩压、舒张压均高于轻度组(P<0.05)。轻度组、重度组lncRNA SNHG5水平低于对照组(P<0.05),miR-132-3p水平高于对照组(P<0.05);重度组lncRNA SNHG5水平低于轻度组(P<0.05)。胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p表达与PE病人24 h尿蛋白、收缩压和舒张压均有相关关系(P<0.05~P<0.01),与年龄、孕周和体质量指数无明显相关关系(P>0.05)。PE病人胎盘组组织中lncRNA SNHG5与miR-132-3p表达呈负相关关系(r=-0.509,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p诊断PE的曲线下面积分别为0.865、0.883,截断值分别为0.93、1.44,敏感度分别为87.9%、79.3%,特异性分别为71.7%、83.3%;二者联合诊断PE的曲线下面积为0.921,敏感度和特异性分别为89.7%、81.7%。结论:PE病人胎盘组织中lncRNA SNHG5呈低表达,miR-132-3p呈高表达,且二者呈负相关关系,为PE的诊断和靶向治疗提供了新的思路。

精神分裂症患者血清miR-132-3p和miR-34a-5p表达水平与认知功能以及诊断的相关性研究

目的探讨血清微小核糖核酸(micro RNA,miR)-132-3p,miR-34a-5p表达与精神分裂症患者认知功能的关系,分析其诊断精神分裂症的价值。方法选择2019年2月~2021年10月武汉钢铁(集团)公司第二职工医院收治的208例精神分裂症患者(精神分裂症组)和同期71例健康体检者(对照组)。检测血清miR-132-3p和miR-34a-5p表达,Pearson相关性分析其与精神分裂症患者阳性和阴性症状量表(positive and negative symptom scale,PANSS)、精神分裂症认知功能成套测验(采用MATRICS consensus cognitive battery,MCCB)、Stroop色词测验评分相关性。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析miR-132-3p和miR-34a-5p诊断精神分裂症的价值。结果精神分裂症组血清miR-132-3p(3.26±0.84),miR-34a-5p(5.02±1.39)表达均高于对照组(1.05±0.33,1.62±0.5),差异有统计学意义(t=21.782,20.276,均P<0.05);精神分裂症组MCCB,Stroop色词测验评分均低于对照组(t=6.651~16.778,均P<0.05)。精神分裂症患者血清miR-132-3p,miR-34a-5p表达与PANSS总分呈正相关(r=0.502,0.477,均P<0.05),与连线测验、持续操作测验、语言记忆、Stroop单词测验评分呈负相关(r_(miR-132-3p)=-0.501~-0.368,r_(miR-34a-5p)=-0.483~-0.317,均P<0.05)。miR-132-3p,miR-34a-5p诊断精神分裂症的最佳截断值为2.16,3.35,曲线下面积为0.694,0.712,联合miR-132-3p和miR-34a-5p诊断精神分裂症的曲线下面积为0.895,大于单独miR-132-3p,miR-34a-5p诊断(Z=5.747,5.665,均P<0.05)。结论miR-132-3p和miR-34a-5p表达上调,与精神分裂症症状加重以及认知功能受损有关,miR-132-3p和miR-34a-5p联合检测在精神分裂症诊断中具有较高价值。

益气活血中药对急性心肌梗死病人血浆miR-223-3p、miR-132-5p表达的影响

目的观察益气活血中药对急性心肌梗死(AMI)病人血浆miR-223-3p、miR-132-5p表达的影响。方法将AMI病人30例随机分为治疗组和对照组各15例,治疗组予常规西药联合益气活血中药治疗,对照组予常规西药治疗,疗程2周。健康志愿者10名为健康组。健康志愿者于入组时,AMI病人于入院后1 h、第3天、第7天、第14天分别抽取肘静脉血,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测miR-2 2 3-3 p、miR-1 3 2-5 p的表达情况。结果AMI病人入院早期miR-2 2 3-3 p出现高表达、miR-132-5p出现低表达,与健康志愿者比较差异有统计学意义(P<0.01);与miR-132-5p及肌钙蛋白I(c Tn I)比较,miR-223-3p显示出高表达、高敏感性的特点。与对照组比较,治疗组治疗后病人血浆miR-223-3p表达降低、miR-132-5p表达上调更显著,差异有统计学意义(P<0.01);c Tn I于24 h上升和第3天下降更为明显(P<0.05)。结论益气活血中药联合常规西药治疗AMI较单纯常规西药治疗临床疗效较好,可能与调节miR-223-3p、miR-132-5p的表达有关,miR-223-3p有望成为新的AMI早期诊断标志物。

miR-132-5p靶向S100A9介导高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡及炎症反应

目的:探讨微小RNA-132-5p(microRNA-132-5p,miR-132-5p)靶向S100钙结合蛋白A9(S100 calcium binding protein A9,S100A9)对高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡及炎症反应的影响。方法:人肾小球系膜细胞用DMEM正常糖培养基培养作为对照组,用DMEM高糖培养基培养作为高糖组;miR-NC、miR-132-5p、anti-miR-NC、anti-miR-132-5p转染至正常培养的肾小球系膜细胞中,记为miR-NC组、miR-132-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-132-5p组;将miR-NC、miR-132-5p、si-NC、si-S100A9转染至肾小球系膜细胞中再用高糖培养基培养,记为高糖+miR-NC组、高糖+miR-132-5p组、高糖+si-NC组、高糖+si-S100A9组;将miR-132-5p分别与pcDNA、pcDNA-S100A9转染至肾小球系膜细胞中再用高糖培养基培养,记为高糖+miR-132-5p+pcDNA组、高糖+miR-132-5p+pcDNA-S100A9组。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测miR-132-5p和S100A9 mRNA表达水平;Western blot检测S100A9、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X,Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)表达;双荧光素酶报告实验验证miR-132-5p和S100A9的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-8、IL-6水平。结果:高糖诱导的肾小球系膜细胞中miR-132-5p表达水平降低,S100A9表达水平升高(P<0.05)。miR-132-5p靶向调控S100A9,过表达miR-132-5p或抑制S100A9表达,高糖诱导的肾小球系膜细胞中细胞凋亡率降低,Bax表达水平降低,Bcl-2表达水平升高,TNF-α、IL-8、IL-6水平降低(P<0.05)。S100A9过表达逆转miR-132-5p过表达对高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡和炎症反应的抑制作用。结论:过表达miR-132-5p通过靶向下调S100A9抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡和炎症反应。

安石榴苷通过miR-132-5p/TRAF6途径调控oxLDL诱导的血管平滑肌细胞损伤的分子机制

目的:探讨安石榴苷(PUN)对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管平滑肌细胞凋亡、炎症反应的影响及分子机制。方法:oxLDL诱导人主动脉血管平滑肌细胞建立动脉粥样硬化模型,不同浓度(5、10、20μg/ml)的PUN处理oxLDL诱导的血管平滑肌细胞。ELISA检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。流式细胞术检测PUN对细胞凋亡能力的影响;qRT-PCR与Western blot分别检测PUN对微小RNA-132-5p(miR-132-5p)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)表达水平的影响。双荧光素酶报告实验与Western blot实验验证miR-132-5p与TRAF6的靶向关系。观察miR-132-5p过表达或抑制miR-132-5p表达对oxLDL诱导的血管平滑肌细胞损伤的影响。Western blot检测凋亡标记蛋白B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达情况。结果:与Con组相比,oxLDL组促炎因子IL-1β、TNF-α水平明显升高(P<0.05);与oxLDL组相比,PUN不同剂量组IL-1β、TNF-α水平明显降低(P<0.05);oxLDL组细胞凋亡率明显高于Con组(P<0.05),PUN不同剂量组细胞凋亡率明显低于oxLDL组(P<0.05);与Con组相比,oxLDL组Bax、TRAF6的表达水平显著升高(P<0.05),Bcl-2、miR-132-5p的表达水平显著降低(P<0.05);与oxLDL组相比,PUN不同剂量组Bax、TRAF6的表达水平显著降低(P<0.05),Bcl-2、miR-132-5p的表达水平显著升高(P<0.05);miR-132-5p可抑制野生型载体TRAF6细胞的荧光素酶活性,且miR-132-5p可负向调控TRAF6的表达(P<0.05);miR-132-5p过表达后IL-1β、TNF-α水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),Bax的表达水平显著降低(P<0.05),Bcl-2的表达水平显著升高(P<0.05);抑制miR-132-5p的表达可逆转PUN对oxLDL诱导的血管平滑肌细胞损伤的作用。结论:PUN可通过调控miR-132-5p/TRAF6分子轴发挥抗炎作用及抑制血管平滑肌细胞凋亡。

IDH1-R132H突变体通过miR-191-5p/p53轴调控U87MG胶质母细胞瘤干细胞增殖及凋亡

目的 探索IDH1-R132H突变抑制U87 MG胶质母细胞瘤干细胞增殖及诱导其凋亡的可能机制。方法 (1)以U87 MG细胞为研究对象,采用慢病毒转染构建IDH 1-R132H突变型及野生型细胞株,并诱导为胶质母细胞瘤干细胞,观察细胞球形成情况;流式细胞术检测肿瘤干细胞标志物CD133表达水平;CCK-8法检测细胞增殖情况和PI/Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡情况;qRCP和Western blot法分别检测IDH1、miR-191-5p及p53表达水平。(2)以NOD/SCID荷瘤小鼠作为研究对象,在体内水平考察miR-191-5p、p53表达及肿瘤生长情况。结果IDH1-R132H突变能够在体内外抑制U87 MG胶质母细胞瘤干细胞增殖(P<0.01)及分化(P<0.05),诱导其凋亡(P<0.01),下调miR-191-5p表达(体内P<0.05,体外P<0.001),上调p53(P<0.001)及其编码基因TP53(体内P<0.01,体外P<0.000 1)表达。结论 IDH1-R132H突变引起的U87 MG胶质瘤干细胞增殖及凋亡的调控可能与其作用于mi R-191-5p/p53轴,抑制胶质瘤细胞活性密切相关。

4种血清微RNAs联合检测在原发性肝癌临床筛查中的诊断价值

目的探究4种血清微RNAs(miRs)联合检测在原发性肝癌(HCC)临床筛查中的诊断价值。方法回顾性分析该中心2018年1月至2019年3月收治的120例HCC患者(肝癌组)的临床及病理资料,并与同期收治的75例肝炎患者(肝炎组)、70例肝硬化患者(肝硬化组)及90例健康者(健康组)进行比较。各组血清miR-122-5p、miR-486-5p、miR-212和miR-132表达水平采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)进行检测,绘制受试者工作特征(ROC)曲线并计算曲线下面积(AUC),分析4种血清miRs单独及联合检测对HCC的诊断效能,并与甲胎蛋白(AFP)诊断结果进行比较。结果单因素方差分析显示:各组血清miR-122-5p、miR-486-5p、miR-212和miR-132表达水平均有明显差异(P<0.05);其中,肝癌组患者4种血清miRs表达水平明显低于其他3组(P<0.01);TNM分期0~Ⅱ期HCC患者4种血清miRs表达水平明显高于Ⅲ~Ⅳ期患者(P<0.05)。ROC曲线分析显示:单项检测时,APF的AUC值(0.873)及灵敏度(74.09%)最高,miR-122-5p的特异度(91.36%)最高;联合检测的AUC值(0.925)及灵敏度(95.14%)均明显高于4种血清miRs、AFP单项诊断,但特异度较低。结论4种血清miRs单独诊断HCC时的灵敏度及AUC值均低于AFP,但联合诊断时AUC值及灵敏度明显提高,在HCC的诊断中具有良好的诊断效能。