miR-17-92基因簇microRNAs对哺乳动物器官发育及肿瘤发生的调控

microRNAs(miRNAs)是近年发现的一种高度保守的非编码小RNA,它们通过抑制靶基因mRNA的翻译或将其降解,在转录后水平调控基因的表达,参与调控哺乳动物多个器官的发育过程和人类疾病的发生。miR-17-92基因簇是一个高度保守的基因簇,编码miR-17-5p、miR-17-3p、miR-18a、miR-19a、miR-20a、miR-19b-1和miR-92-1等7个miRNAs。大量证据表明,miR-17-92基因簇miRNAs参与了心、肺、免疫系统的发育、血管生长及前脂肪细胞的分化等过程。此外,miR-17-92基因簇miRNAs在多种肿瘤中高表达,能作为致癌基因诱发淋巴瘤和血管化肿瘤的发生,但它也可以作为抑癌基因抑制乳腺癌细胞的增殖。文章对miR-17-92基因簇miRNAs在哺乳动物器官发育及肿瘤发生中的作用进行综述。

鸡mir-17-92基因簇的结构、功能及其调控

mir-17-92基因簇(mir-17-92cluster)是脊椎动物的一个保守miRNA基因簇,在哺乳动物细胞增殖、分化、凋亡及发育等多种生物学过程中起重要的调控作用。同时,mir-17-92基因簇又是一个癌基因,在多种肿瘤中表达。尽管对mir-17-92基因簇的研究非常广泛,但其作用机制还不完全清楚。鸡mir-17-92基因簇的结构组成特点、功能及其作用机制尚未见研究报道。该文根据同一miRNA基因簇的miRNAs在功能上相关的特点,以鸡mir-17-92基因簇序列为研究对象,采用生物信息学研究方法和手段,开展了鸡mir-17-92基因簇的基因组结构、miRNAs序列组成、靶生物学过程和信号通路以及miRNAs结合位点分布特点等分析研究。结果发现,鸡mir-17-92基因簇调控MAPK、Wnt和TGF-β等多个重要细胞信号通路;miRNA结合位点分布分析显示,该miRNA基因簇多个成员共同作用于同一个靶基因,提示该基因簇的miRNAs成员以组合和协同的方式调控靶基因。该研究为深入了解mir-17-92基因簇如何调控癌症和发育中的关键细胞过程奠定了基础。

鸡miR-17-92基因簇上游调控区功能分析

miR-17-92基因簇(miR-17-92 cluster)在细胞增殖、分化、凋亡、动物发育以及肿瘤发生等过程中发挥重要作用。目前,人和小鼠等哺乳动物miR-17-92基因簇的转录调控已有深入研究,但该基因簇在鸡等鸟类中的转录调控研究还未见报道,主要原因在于鸟类miR-17-92基因簇上游的基因组序列都存在一个gap,且该基因簇启动子的位置和序列也还不清楚。为此,本研究采用染色体步移的方法获得鸡miR-17-92基因簇上游gap区序列,并采用生物信息学分析和报告基因及截短突变技术开展该gap区的功能分析。染色体步移分析发现,鸡miR-17-92基因簇上游gap区全长1704 bp,GC含量达80.11%。生物信息学分析显示,鸡miR-17-92基因簇上游gap区内1段200 bp的序列与人、牛、小鼠等9种动物miR-17-92基因簇上游序列保守性较高,且该区域为人和小鼠等哺乳动物miR-17-92基因簇宿主基因的核心启动子区。将克隆的gap区序列插入pGL3 basic荧光素酶报告基因载体,构建成启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-cMIR17HG(-4228/-2506)。荧光素酶报告基因活性分析表明,p GL3-c MIR17HG(-4228/-2506)报告基因的活性是pGL3 basic空载体活性的417倍,证明所克隆的gap区片段是鸡miR-17-92基因簇宿主基因的启动子。为进一步分析该启动子的结构和功能,构建gap区片段的5'端缺失突变(缺失448 bp)和3'端缺失突变(缺失894 bp)的荧光素酶报告基因载体。与pGL3-cMIR17HG(-4228/-2506)相比,5'端和3'端缺失突变分别使启动子报告基因活性降低19.82%和60.14%。这些数据提示,鸡miR-17-92基因簇宿主基因启动子的重要调控区位于-3400/-2506。本研究结果为进一步开展鸡miR-17-92基因簇的转录调控奠定了基础。

miR-17-92基因簇在骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨人骨肉瘤组织和邻近正常骨组织中mi R-17-92基因簇的表达情况及其临床意义。方法:运用Q-PCR法检测63例骨肉瘤组织及邻近部位正常骨组织中mi R-17-92基因簇的表达水平,并分析mi R-17-92基因簇表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果:mi R-17-92在所有组织中均有表达,且在肿瘤组织中表达明显高于在正常组织中的表达(P<0.05),另外,mi R-17-92基因簇高表达患者预后更差,差异有统计学意义(P=0.027)。结论:mi R-17-92基因簇在骨肉瘤组织和邻近正常骨组织中表达存在差异性,可能在骨肉瘤发生、发展过程中起重要作用,有望成为骨肉瘤患者预后一种新的指标。

miR-17-92基因簇反义寡核苷酸对胃癌细胞增殖与侵袭的抑制作用

目的:探讨miR-17-92基因簇反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC-7901的增殖及侵袭的影响。方法:合成miR-17-92基因簇中miR-17、miR-18a、miR-20a的反义寡核苷酸,通过实时荧光定量PCR验证miR-17、miR-18a、miR-20a反义寡核苷酸对SGC-7901细胞的miR-17、miR-18a、miR-20a的抑制效果,然后利用MTT、Transwell检测抑制表达后对细胞增殖及侵袭的影响。结果:miR-17、miR-18a、miR-20a的反义寡核苷酸能够抑制对应miRNA的表达,同时抑制了胃癌细胞的增殖与侵袭。结论:miR-17-92基因簇可能在胃癌发生发展中起到了癌基因的作用。

广西人群miR-17-92基因簇启动子区rs1491033A/C和rs1813389A/G多态性研究

目的探讨广西正常人群中mi R-17-92基因簇启动子区的rs1491033A/C位点和rs1813389A/G位点多态性分布特点,比较其在不同人群间的分布差异。方法采取多重单碱基延伸法(SNa Pshot)和DNA测序结合的方法对275例广西人群rs1491033A/C和rs1813389A/G位点进行基因分型检测,并分析其基因型和等位基因频率在不同性别及组间分布差异。结果 rs1491033A/C存在AA、AC、CC 3种基因型,分布频率分别为21.1%、53.1%、25.8%,其基因型和等位基因与人类基因组计划项目公布的欧洲和非洲人群的差异有统计学意义(P<0.05);rs1813389A/G存在AA、AG、GG 3种基因型,分布频率分别为40.0%、50.2%、9.8%,其基因型和等位基因频率与欧洲、北京、日本和非洲人群的差异均有统计学意义(P<0.05);而两位点基因型及等位基因频率在广西人群的不同性别间均无统计学差异(P>0.05)。结论 mi R-17-92基因簇rs14911033A/C和rs1813389A/G位点多态性在不同种族和地区间存在着不同程度差异。

鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区启动子活性鉴定与分析

文章采用基因定点突变和报告基因技术作A/T富集区启动子鉴定和转录调控分析,研究鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区是否具有启动子活性。PromPredict预测分析提示miR-17-92基因簇上游-388^-444 bp处可能是启动子区域。转录因子结合位点分析发现,A/T富集区存在3个E2F1潜在结合位点,分别位于miR-17-92基因簇上游-1 273 bp(结合位点1)、-1 186 bp(结合位点2)和-753 bp(结合位点3)处。报告基因活性分析发现,鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区具有启动子活性,其中miR-17-92基因簇上游-440/-1区域启动子活性最强。共转染分析显示,转录因子E2F1极显著抑制该A/T富集区启动子活性(P<0.01);进一步定点突变分析表明E2F1通过E2F1结合位点1和2抑制A/T富集区启动子活性。报告基因分析发现,与对A/T富集区启动子作用不同,E2F1促进miR-17-92基因簇宿主基因(MIR17HG)启动子活性。文章首次发现鸡miR-17-92基因簇上游存在一个新的转录调控区,对揭示鸡miR-17-92基因簇转录调控具有重要意义。

鸡miR-17-92基因簇宿主基因启动子的甲基化及其功能分析

为研究鸡脂肪组织miR-17-92基因簇宿主基因(MIR17HG)启动子的甲基化情况,实验以东北农业大学高、低腹脂双向选择品系肉鸡为实验材料,采用Sequenom MassARRAY法检测鸡腹部脂肪组织MIR17HG启动子区CpG岛的甲基化;利用CpG甲基转移酶处理MIR17HG启动子片段,采用报告基因技术检测DNA甲基化对MIR17HG启动子活性的影响。结果表明:高、低脂鸡脂肪组织中MIR17HG启动子区都存在一定程度的甲基化,其中2周龄低脂鸡脂肪组织MIR17HG启动子区的整体甲基化程度显著高于高脂鸡(P<0.05),4个CpG位点(25、26、27、28)的甲基化在高、低脂鸡脂肪组织间差异均显著(P<0.05);3周龄高、低脂鸡脂肪组织中MIR17HG启动子区的甲基化程度无显著差异(P>0.05);7周龄低脂鸡脂肪组织MIR17HG启动子的2个CpG位点(41和42)的甲基化程度显著低于高脂鸡(P<0.05)。总体看,高、低脂鸡脂肪组织MIR17HG的启动子甲基化随年龄增长呈下降趋势;体外甲基化分析发现,DNA甲基化抑制MIR17HG启动子活性。

鸡miR-17-92基因簇靶基因ZFPM2的鉴定及功能分析

miR-17-92基因簇在哺乳动物的许多生理和病理过程中发挥重要作用。本实验室前期研究发现,miR-17-92基因簇促进鸡前脂肪细胞的增殖,但其作用机制尚不清楚。为了揭示miR-17-92基因簇促进鸡前脂肪细胞增殖的作用机制,本研究采用CCK-8细胞增殖检测方法分析干扰ZFPM2对前脂肪细胞的影响,结果发现,干扰ZFPM2能显著促进鸡前脂肪细胞的增殖(P<0.01);与CCK-8分析结果相一致,干扰ZFPM2可致使细胞增殖标志基因PCNA、Ki67、Cyclin D1的mRNA表达量明显升高(P<0.01或P<0.05)。进一步对鸡ZFPM2基因进行生物信息学分析,发现该基因mRNA的3′UTR有两个区域存在miR-17-92基因簇4个成员(miR-17-5p、miR-20a、miR-19a及miR-19b)的潜在结合位点。为验证miR-17-92基因簇是否靶作用于鸡ZFPM2基因,构建了鸡ZFPM2基因3′UTR区的荧光素酶报告基因载体(野生型)(psi-CHECK2-ZFPM2-3′UTR-WT)及其突变型的荧光素酶报告基因载体(psi-CHECK2-ZFPM2-3′UTR-MUT)。报告基因活性分析显示,过表达mi-17-92基因簇能极显著地抑制野生型ZFPM2的报告基因活性(P<0.01);转染miR-17-5p、miR-20a及miR-19a的抑制剂均能显著地提高野生型ZFPM2报告基因的活性(P<0.01或P<0.05),但这些抑制剂对突变型ZFPM2报告基因的活性无明显影响。q RT-PCR分析发现,miR-17-5p、miR-19a及miR-20a的抑制剂能显著提高内源性ZFPM2基因mRNA的表达水平(P<0.01或P<0.05)。共转染分析发现,尽管差异不显著,但miR-17-5p和miR-19a的抑制剂均倾向于降低ZFPM2干扰片段的促细胞增殖作用。本研究结果表明:miR-17-92基因簇成员miR-17-5p、miR-20a、miR-19a及miR-19b靶作用于ZFPM2;miR-17-92基因簇至少部分通过抑制ZFPM2基因表达从而促进鸡前脂肪细胞的增殖。

骨肉瘤中miR-17-92基因簇作用的研究进展

骨肉瘤是一种原发于骨的常见恶性肿瘤,好发于儿童和青少年,长期以来5年生存率不到70%。目前,骨肉瘤的治疗已到达一个平台期,进一步的预后改善可能依赖于新的生物学疗法。miRNA在肿瘤中的作用日益被重视,其中miR-17-92基因簇作为致癌基因,在骨肉瘤中的作用也被广泛研究。本文综述mi R-17-92基因簇在骨肉瘤中的功能和机制,以期为骨肉瘤带来新的治疗方案。

miR-17-92基因簇与肿瘤血管生成关系的研究进展

血管生成（angiogenesis）是指从已有的血管发展而形成新的血管的动态过程。在肿瘤的生长、侵袭、转移等过程中起着关键作用,针对肿瘤血管生成机制的研究可以为肿瘤治疗提供新的线索。肿瘤血管生成是一个复杂的多因素参与调节的过程,目前对肿瘤血管生成的机制了解的还不够全面,对于肿瘤血管生成机制的揭示是现阶段肿瘤研究中的热点之一。

miR-17-92基因簇与肿瘤

微小RNA(miRNA)是近年来新发现的与肿瘤的发生发展密切相关的一类RNA。它可通过调控其靶标基因参与的信号通路,影响肿瘤的发生和发展,发挥着类似于癌基因或抑癌基因的功能,因此miRNA失调在肿瘤中起重要作用。较多的研究发现,miR-17-92簇与肿瘤的发生密切相关,具有癌基因和抑癌基因双重功能。本文就miR-17-92簇在肿瘤中的作用机制及功能作一综述。

miR-17-92基因簇在肿瘤发生发展中作用的研究进展

肿瘤是威胁全世界人类健康和影响社会经济的重要因素.近年来,随着经济的发展,肿瘤的发病率呈明显上升趋势,但是其病因尚未完全阐明.越来越多的证据显示肿瘤的发生和遗传因素有关,随着病理生理学和遗传学的发展,许多学者认为生物标志物可以预测癌症甚至指导临床治疗.微小RNA(microRNA,miRNA)是非编码小分子RNA,在发育、生理、病理过程以及肿瘤发生等环节中起着重要的调节作用.miR-17-92基因簇是研究较为深入、最有特点的miRNA,被认为是原癌基因miRNA的代表,在多种肿瘤的发生发展中起着至关重要的作用.本文就miR-17-92基因簇在肿瘤发生发展中的作用及功能进行综述.

miR-17-92基因簇增强前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂的耐药性

背景与目的:mi R-17-92基因簇与多种疾病的发生密切相关,其在肺癌、肝癌、胃癌和前列腺癌等多种肿瘤细胞中均高表达。本研究利用慢病毒包装系统建立稳定高表达mi R-17-92基因簇的DU145细胞株,探讨mi R-17-92基因簇对前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的影响。方法:构建高表达mi R-17-92基因簇的表达载体,转染DU145细胞株,同时转染空载体作为对照,并用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)进行鉴定。用x CELLigence系统监测细胞的迁移、侵袭能力及顺铂处理后的生长情况;通过划痕实验观察细胞的迁移情况;采用蛋白[质]印迹法(Western blot)、凝胶酶谱实验和RTFQ-PCR检测相关蛋白质和基因的表达以探讨mi R-17-92增强DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的相关机制。结果:DU145-mi R-17-92细胞迁移速率和侵袭能力高于DU145-control细胞(P<0.01)。DU145-mi R-17-92细胞中整合素β1的蛋白质表达水平和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)的活性显著高于DU145-control细胞。顺铂处理后,DU145-mi R-17-92细胞的生长速度自12 h起快于DU145-control细胞并呈顺铂耐药性(P<0.01)。细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)在DU145-mi R-17-92细胞中呈现持续高水平磷酸化,顺铂处理后,其磷酸化水平无明显变化。DU145-mi R-17-92细胞中切除修复互补交叉基因1(excision repair cross complementing1,ERCC1)的m RNA和蛋白质表达水平显著高于DU145-control细胞。结论:高表达mi R-17-92增强了DU145细胞的迁移、侵袭能力,其机制与整合素β1的表达上调及MMP-9活性增强有关。此外,高表达mi R-17-92增强了DU145细胞对顺铂的耐药性,该过程与ERK1/2的磷酸化水平增加和ERCC1的表达水平上调相关。

通过CRISPR/Cas系统构建miR-17-92基因簇双切载体

通过CRISPR/Cas系统来构建miR-17-92基因簇的双切载体,研究结果表明:在miR-17-92基因簇的序列上找到了2个PAM(TGG和GGG)位点,从而得到了2个原间隔序列,设计合成基因簇双链crRNA;合成该片段并将其插入到p X260载体,使得在同一个载体上虽然只有一个g-RNA,但能够同时切割两个不同的靶位点;将该载体转染NIH3T3细胞验证切割效率,PCR结果和测序结果显示,所构建的CRISPR系统可以对基因片段进行有效切割。

椎管内神经鞘瘤中miR-17-92基因簇表达及意义

目的探讨椎管内神经鞘瘤中微小RNA(miR)-17-92基因簇的表达及意义。方法收集20例经术后病理证实的椎管内神经鞘瘤组织标本(实验组)和部分正常神经组织(对照组)。提取两组标本RNA后进行cDNA合成及实时荧光定量聚合酶链反应,采用相对定量法测定组织中miR-17-92基因簇的表达水平,用2^-ΔΔCt表示。比较分析实验组miR-17-92基因簇的表达水平与患者年龄、肿瘤大小的相关性。结果对照组miR-17-92基因簇表达水平(1.414±0.152)显著高于实验组(1.048±0.168,t=3.582,P<0.05)。miR-17-92基因簇表达水平与肿瘤直径、患者年龄并无明显相关性(P>0.05)。结论miR-17-92基因簇在椎管内神经鞘瘤中的表达高于正常神经,提示该基因簇可能参与了椎管内神经鞘瘤的发生、发展,但具体作用机制还需进一步探索。

套层细胞淋巴瘤细胞系中染色体13q31-q32上miR-17-92基因簇的DNA序列研究

为了研究B细胞淋巴瘤的染色体13q31-q32上miR-17-92基因簇的特点,观察B细胞淋巴瘤中miR-17-92基因簇在基因组DNA水平上是否存在改变,及其对miR-17-92基因簇的表达和与淋巴瘤发生关系的影响。应用PCR和DNA序列测定技术检测Rec1、G519和Z138三个套细胞淋巴瘤(mantel cell lymphoma,MCL)细胞系中染色体13q31-q32上miR-17-92基因簇。结果表明,3个MCL细胞系的miR-17-92基因簇DNA序列与正常人的序列比对完全一致。由此可以认为,MCL细胞系中miR-17-92基因簇在DNA序列上没有异常改变,不是miR-17-92基因簇的过度表达原因。

人miR-17-92基因簇载体构建及其在293T细胞中的表达验证

目的:研究人miR-17-92基因簇在肾癌等疾病发生过程中的功能。方法:采用基因重组技术,将miR-17-92基因簇亚克隆至pc DNA4真核细胞表达载体,构建miR-17-92基因簇真核表达载体;通过脂质体转染的方法将miR-17-92的过表达质粒和对照质粒分别转染293T细胞,并用实时定量PCR技术验证转染24和48 h后细胞内pri-miR-17-92和miR-17、miR-18a、miR-19a、miR-19b1、miR-20a、miR-92a1等分子的相对过表达比例。结果:miR-17-92基因簇真核表达载体构建成功,并在293T细胞中实现了显著性过表达效果。结论:为进一步研究人miR-17-92基因簇在肾脏发育过程中的功能及其与肾脏癌症发病相关性的研究提供了实验基础。

miR-17-92基因簇在食管鳞癌的表达及其临床意义

目的探讨miR-17-92基因簇在食管鳞癌中的表达,并分析其与肿瘤分化程度及预后的关系。方法半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR方法分别检测58例ESCC组织和来自同一患者的邻近正常食管组织中miR-17-92的表达。采用Mann Whitney-U非参数检验和卡方检验比较低表达组和高表达组的临床病理特征和预后指标,采用Kaplan-Meier法分析miR-17-92表达水平与食管鳞癌患者生存时间之间的关系。结果 miR-17-92在所有的组织中都有表达,且在食管鳞癌组织中miR-17-92的表达高于正常食管组织(P<0.001)。miR-17-92在TNM分期越高、分化程度越低的肿瘤组织中表达越高(分别是P=0.032,P=0.035)。另外,miR-17-92高表达的患者发生转移和死亡的风险明显增高,预后更差(P=0.038)。结论 miR-17-92基因簇在食管鳞癌组织和邻近正常食管组织中表达存在差异性,可能在食管鳞癌发生、发展过程中起重要作用,有望成为食管鳞癌患者预后一种新的指标。

血清miR-17-92基因簇对人乳头瘤病毒阳性宫颈癌的早期诊断效果研究

目的:探讨血清miR-17-92基因簇对人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)阳性宫颈癌的早期诊断价值。方法:选取我院2016-02~2017-02收治的HPV阳性宫颈癌患者60例为宫颈癌组,另选同期住院或门诊就诊的HPV阳性宫颈上皮内瘤变患者54例为宫颈上皮内瘤变组,选取HPV阳性子宫良性病变患者54例为对照组。所有研究对象均接受HPV检测、宫颈液基薄层细胞检测和血清miR-17-92基因簇水平检测。结果:所有研究对象均为HPV阳性,共检出21个亚型,HPV感染率最高的高危型为HPV 16,感染率最高的低危型为HPV 6。3组血清miR-17、miR-18a、miR-20和miR-92a水平比较,差异均有统计学差异(P<0.05),且血清miR-17、miR-18a、miR-20和miR-92a对HPV阳性宫颈癌的诊断效果均较好。结论:HPV阳性宫颈癌患者血清miR-17、miR-18a、miR-20和miR-92a表达上调,检测血清miR-17-92基因簇水平有助于宫颈癌的预防和早期诊断。