miR-92a-1-5p通过调控SOCS3和P53促进急性白血病细胞增殖的机制研究

目的探讨miR-92a-1-5p通过调控细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)、P53促进急性白血病(AL)细胞增殖的机制。方法收集20例初诊AL患者和15例正常人的骨髓标本,检测miR-92a-1-5p、SOCS3、P53 mRNA、蛋白质的表达水平,剖析其与临床特征和预后的关联性;利用基因工程手段,在急性淋巴细胞白血病细胞系HL-60和急性髓系白血病细胞系K562中分别提高和降低miR-92a-1-5p的表达水平,以评估其对SOCS3和P53蛋白表达水平的调控作用;研究miR-92a-1-5p对细胞周期、增殖和凋亡的影响。结果miR-92a-1-5p的表达水平与白细胞计数、骨髓增生程度、分化程度、髓外浸润和预后均呈负相关,与SOCS3和P53 mRNA表达水平均呈正相关。在HL-60和K562细胞中,上调miR-92a-1-5p表达水平能抑制SOCS3和P53 mRNA的表达,促进细胞周期进入S期,增加细胞增殖能力,抑制细胞凋亡;下调miR-92a-1-5p表达则产生相反的效果。结论miR-92a-1-5p通过调控SOCS3和P53促进AL细胞增殖,可能作为AL的潜在诊断标志物和治疗靶点。

MiR-92a-3p靶向KLF4促进肝细胞癌恶性进程

目的:探究微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)对肝细胞癌(HCC)的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR检测人肝细胞癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、Hep3B和人正常肝细胞系HL-7702中miR-92a-3p和Krüppel样因子4(KLF4)的表达。将SMMC-7721、Bel-7402细胞分组为Inhibitor NC组、miR-92a-3p Inhibitor组、mimic NC组、miR-92a-3p mimic组、mimic NC+oe-NC组、mimic NC+oe-KLF4组、miR-92a-3p mimic+oe-NC组、miR-92a-3p mimic+oe-KLF4组。qRT-PCR检测细胞中miR-92a-3p和KLF4的mRNA表达水平。Western blot检测KLF4蛋白表达水平。MTT增殖实验检测细胞活力。划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力。通过TargetScan分析miR-92a-3p与KLF4的靶向关系,并通过双荧光素酶实验验证。结果:相比于正常细胞,miR-92a-3p在HCC细胞中高表达,KLF4在HCC细胞中低表达(P<0.05)。与正常表达组相比,下调miR-92a-3p显著抑制了SMMC-7721和Bel-7402细胞的增殖、迁移、侵袭能力(P<0.05)。双荧光素酶实验验证了miR-92a-3p与KLF4存在靶向结合位点。过表达KLF4能够阻碍HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制过表达miR-92a-3p对HCC细胞生长的促进作用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-92a-3p能够通过靶向下调KLF4来促进HCC细胞的增殖、迁移、侵袭。

血清miR-92a联合miR-33a对膀胱癌患者预后的预测价值

目的探讨血清miR-29a联合miR-33a对膀胱癌患者预后的预测价值。方法回顾性分析2018年5月至2020年3月江苏省海安市人民医院收治的105例膀胱癌患者的临床资料。术后随访2年,根据预后情况分为预后不良组与预后良好组。分析膀胱癌患者预后不良的影响因素,分析血清miR-92a、miR-33a水平对膀胱癌患者预后不良的预测价值。结果105例膀胱癌患者预后不良的发生率为36.19%(38/105)。预后不良组肿瘤直径>3 cm、T_(2)~T_(4)期、淋巴结转移、低分化占比高于预后良好组,血清miR-92a、miR-33a水平低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度及血清miR-92a、miR-33a为膀胱癌患者预后不良的影响因素(P<0.05)。血清miR-92a、miR-33a联合预测膀胱癌患者预后不良的曲线下面积高于二者单独预测(P<0.05)。结论血清miR-92a、miR-33a水平可用于预测膀胱癌患者预后,且二者联合具有更高的预测价值。

创伤性骨折患者血清miR-92a-3p和miR-223-3p水平与临床预后的关系

目的探讨创伤性骨折患者血清miR-92a-3p和miR-223-3p水平与患者临床预后的关系。方法选择2021年8月至2022年8月收治的112例创伤性骨折患者作为创伤性骨折组,选取同期体检健康志愿者112例作为对照组。根据早期疾病预警评分(NEWS)将创伤性骨折患者分为轻中度组(n=73)和重度组(n=39);根据住院后转归情况,分为急诊手术组(n=48)、入住ICU组(n=39)、急诊死亡组(n=25)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清中miR-92a-3p和miR-223-3p相对表达水平;Spearman法分析血清miR-92a-3p和miR-223-3p表达水平与NEWS评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析创伤性骨折患者预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-92a-3p和miR-223-3p水平对创伤性骨折患者预后的预测价值。结果与对照组比较,创伤性骨折组血清miR-92a-3p表达水平降低,血清miR-223-3p表达水平升高(P<0.05)。创伤性骨折患者轻中度组血清miR-92a-3p表达水平较重度组显著升高,血清miR-223-3p表达水平较重度组明显降低(P<0.05)。血清miR-92a-3p表达水平与NEWS评分呈负相关(r=-0.692,P<0.05),血清miR-223-3p表达水平与NEWS评分呈正相关(r=0.603,P<0.05)。急诊手术组、入住ICU组、急诊死亡组创伤性骨折患者血清miR-92a-3p表达水平依次逐渐下降(P<0.05);miR-223-3p表达水平依次明显升高(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,miR-223-3p是影响创伤性骨折患者预后的危险因素(P<0.05),miR-92a-3p是影响创伤性骨折患者预后的保护因素(P<0.05)。血清miR-92a-3p和miR-223-3p联合预测创伤性骨折患者预后的ROC曲线下面积(AUC)为0.824,均优于其各自单独预测(Z_(二者联合-miR-92a-3P)=2.519,P=0.012;Z_(二者联合-miR-223-3P)=2.321,P=0.020)。结论创伤性骨折患者血清miR-92a-3p水平降低,血清miR-223-3p水平升高,与创伤性骨折患者预后密切相关,二者联合可以更好评估创伤性骨折患者预后情况。

高血压危象患者中医证型分布规律与视网膜病变程度、miR-92a水平相关性研究

目的 通过分析高血压危象患者中医证型分布规律、视网膜病变程度及miR-92a水平相关度研究,明确高血压与微循环受损关系,用以未病先防。方法 选取2022年1—12月本院心内科收治的73例高血压危象患者作为研究对象,依据证型的不同,将其分为实证组(45例),其中包括肝阳上亢证组(20例)、气滞血瘀证组(13例)、痰湿壅盛证组(12例),以及虚实夹杂证组,即阴虚阳亢证组(18例),虚证组,即肝肾阴虚证组(10例),入院次日清晨空腹测定相关检测指标,并行FFA检查。结果 高血压急症各证型组中实证患者ADT、VFT、CET、miR-92a高于虚实夹杂证及虚证患者,MD低于虚实夹杂证及虚证患者(P<0.05);采用多元回归分析,实证组与miR-92a 的表达量、视网膜病变呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 中医实证分布、视网膜病变程度、循环miR-92a水平在高血压危象中明显升高,有可能作为早期诊断高血压急症的客观指标,并为临床预防高血压急症发生提供未病先防依据。

miR-92a在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管生成的作用

目的:探讨miR-92a在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管新生功能的影响和作用机制。方法:采用qRT-PCR方法检测广东医学院附属深圳南山医院2014年6月至2015年12月经手术切除的25例结直肠癌组织和对应癌旁组织及4种结直肠癌细胞(HCT116、SW620、SW480、HT29)中miR-92a的表达;免疫组织化学法检测结直肠癌和癌旁组织中CD31阳性表达的微血管密度(microvessel density,MVD),Pearson相关性分析探讨miR-92a表达与肿瘤血管新生MVD的相关性。通过转染miR-92a-mimic、inhibitor上调或抑制结直肠癌细胞HCT116、SW620中miR-92a的表达水平,采用小管形成实验检测miR-92a不同表达对HUVEC小管形成的影响,免疫印迹法检测对其下游潜在靶点PTEN的蛋白表达的影响。结果:结直肠癌组织miR-92a的表达水平显著高于对应癌旁组织(P<0.01);4种人结肠癌细胞系miR-92a的表达水平均显著高于正常肠上皮组织(P<0.05);结直肠癌组织CD31阳性微血管密度显著高于癌旁组织(P<0.01),miR-92a表达水平与结直肠癌血管新生MVD呈显著正相关(r=0.580,P=0.01);上调miR-92a表达的HCT116细胞培养上清液可以显著促进HUVEC小管形成(P<0.05);上调miR-92a表达可以显著抑制HCT116细胞中PTEN蛋白表达水平(P<0.01)。结论:miR-92a在结直肠癌细胞和组织中高表达,与肿瘤血管新生增加密切相关;miR-92a可能通过抑制PTEN的表达发挥促进结直肠癌血管新生的生物学功能。

结直肠癌患者血清、粪便和癌组织中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1的检测及其临床意义

目的:探讨结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)患者血清、粪便和癌组织中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1的表达水平及其临床意义。方法:收集2016年7月至2017年5月在海南省中医院就诊的63例CRC患者,根据CRC有无远处转移将患者分为无转移组(n=35)和转移组(n=28);另选取同期体检的30例健康志愿者纳入对照组。采集所有受试者的血清、粪便及CRC组织,用RT-PCR检测标本中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1的表达水平,并进行比较分析。结果:CRC患者血清中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1表达水平显著高于对照组(均P<0.05),以转移组中表达水平最高(P<0.05)。CRC患者粪便中miR-21、miR-217和miR-92a-1表达水平显著高于对照组(均P<0.05),无转移组miR-217表达水平显著低于转移组(P<0.05),而miR-21、miR-29b和miR-92a-1在无转移组和转移组的差异无统计学意义(P>0.05)。无转移组CRC组织中miR-21、miR-29b和miR-92a-1均明显低于转移组(均P<0.05),而miR-217表达水平显著高于转移组(P<0.05)。结论:miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1在CRC患者的血清、粪便和癌组织中异常表达,多种miRNAs的联合检测有利于对CRC的发生、诊治和预后的评估。

下调miR-92a对非小细胞肺癌细胞增殖及血管生成因子表达的影响

目的探讨miR-92a下调对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖及血管生成的影响。方法将NSCLC中A549细胞分为三组培养:A549组(未转染A549细胞)、sc-siRNA组(转染sc-siRNA的A549细胞)、miR-92a-siRNA组(转染miR-92a-siRNA的A549细胞)。分别采用RT-PCR和Western blot检测A549细胞和正常人支气管上皮(human bronchial epithelial,HBE)细胞中miR-92a相对表达量、PTEN、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白相对表达水平。采用活细胞计数法和结晶紫染色实验检测各组A549细胞的增殖能力。结果 miR-92a在A549组细胞中的相对表达量高于HBE细胞(P <0. 05); A549组细胞中PTEN蛋白表达水平低于HBE细胞(P <0. 05),VEGF蛋白表达水平高于HBE细胞(P <0. 05); miR-92a-siRNA组细胞中miR-92a相对表达量降低(P <0. 05),PTEN蛋白表达水平升高(P <0. 05),VEGF蛋白表达水平降低(P <0. 05); miR-92a-siRNA组细胞中PI3K和Akt蛋白表达水平均下降(P <0. 05); miR-92a-siRNA组细胞数目减少,细胞增殖能力减弱。结论 NSCLC中A549细胞的miR-92a表达明显上调,miR-92a基因沉默能明显抑制细胞增殖、血管生成,PTEN和VEGF相关PI3K/Akt信号通路可能在此过程中发挥重要作用。

心肌梗死急诊经皮冠状动脉介入治疗前后全血中miR-92a的表达

目的观察急性心肌梗死患者行急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI)前后静脉血中miR-92a的表达及其变化,探讨miR-92a在急性心肌梗死中的临床意义。方法采用实时定量荧光PCR(qRT-PCR)技术检测11例健康者静脉血及21例急性心肌梗死患者行PCI前后静脉血中miR-92a的表达。结果急性心肌梗死患者全血中的miR-92a水平高于健康人,PCI术后的miR-92a表达明显比术前下降。结论 miR-92a可能参与了急性心肌梗死的发生发展及转归的过程,抑制miR-92a的表达可能是未来治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的靶点。

内皮细胞缺氧后miR-210、miR-92a、miR-126表达及意义

目的进一步探讨缺氧后血管新生的调控机制。方法常规方法培养人微血管内皮细胞,低氧培养箱制备内皮细胞缺氧模型(观察组),正常细胞作为对照组。采用real time PCR法检测两组内皮特异性microRNA(miR-210、miR-92a、miR-126)表达变化。结果与对照组比较,miR-210、miR-92a、miR-126分别上调了(5.19±0.99)、(3.02±0.88)、(3.87±0.83)倍,P均<0.05。结论缺氧可促使内皮细胞特异性microRNA表达改变,此可能为缺氧后血管新生的主要调控机制。

miR-92a对奶山羊乳腺上皮细胞增殖及凋亡的调控分析

miRNAs是对哺乳动物乳腺组织发育及泌乳机能进行调控的重要因子。本研究依据已有的关中奶山羊乳腺组织miRNA表达谱,选择不同泌乳时期差异表达的miR-92a为研究对象,探究miR-92a对山羊乳腺上皮细胞(GMEC)增殖及凋亡的调控作用,并挖掘其潜在的调控基因。采用荧光定量PCR、MTT检测、EdU检测及流式细胞术,检测miR-92a在不同泌乳时期乳腺组织的表达情况,并在细胞水平检测miR-92a对乳腺上皮细胞增殖、凋亡及细胞周期的调控作用。利用RNA-seq技术,分析过表达miR-92a乳腺上皮细胞中的差异表达基因。qRT-PCR结果显示,miR-92a在奶山羊泌乳初期乳腺组织中表达量极显著高于泌乳中期(P<0.01),表明miR-92a可能对奶山羊泌乳性状有重要的调控作用。GMEC过表达miR-92a后,试验结果显示:与NC对照组比较,miR-92a过表达组的EdU阳性细胞数极显著减少(P<0.01),S期的细胞数显著下降、G1期的细胞数显著增加,同时miR-92a组的凋亡细胞数目显著增加(P<0.05)。采用RNA-seq,构建了miR-92a过表达mRNA文库,发现下调基因54个,上调基因160个。GO terms及KEGG通路分析显示差异表达基因调控乳腺上皮细胞多种生物学功能。以上结果表明miR-92a促进GMEC凋亡、抑制其增殖,测序结果进一步证明miR-92a对奶山羊乳腺发育及泌乳性能具有潜在的调控作用。

miR-92a对H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响

目的探讨miR-92a对过氧化氢(H2O2)诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响。方法通过Lipofectamine^(TM)2000将miR-92a抑制物(inhibitor)及阴性对照组转染大鼠心肌细胞H9C2,RT-PCR检测转染后细胞中miR-92a的表达;将后续实验分为空白对照组、H2O2组和miR-92a inhibitor+H2O2组,利用CCK8法、流式细胞仪及Western印迹分别检测3组细胞的增殖、凋亡、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)和c-Myc的蛋白表达。结果 miR-92a inhibitor组miR-92a mRNA表达显著低于空白对照组(P<0.05),阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,H2O2组细胞增殖显著降低,凋亡率显著增加,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著上调表达,Bcl-2蛋白显著下调表达(均P<0.05),与H_2O_2组比较,miR-92a inhibitor+H_2O_2组细胞增殖显著升高,凋亡率显著降低,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著下调表达,Bcl-2蛋白显著上调表达(均P<0.05)。结论抑制miR-92a的表达可促进H2O2诱导的H9C2心肌细胞增殖,抑制细胞的凋亡,其机制与调节Bax、Bcl-2蛋白及Wnt信号通路表达有关。

西妥昔单抗联合SOX方案治疗大肠癌患者的效果及对血清miR-29b和miR-92a-1水平的影响

目的探讨西妥昔单抗联合SOX方案治疗大肠癌的效果及其对血清miR-29b与miR-92a-1水平的影响。方法选择大连大学附属新华医院肛肠科2016年3月至2018年3月收治的84例大肠癌患者,随机分为SOX组和联合组,每组42例。SOX组采取SOX方案化疗,21 d为1个周期,共8个周期。联合组在SOX方案基础上联合西妥昔单抗,每2周1次。比较两组有效率、疾病控制率、化疗前后的血清miR-29b与miR-92a-1表达水平、不良反应、无进展生存期与总生存期。结果两组有效率接近,差异无统计学意义(P>0.05),联合组疾病控制率为85.71%,高于SOX组的66.67%(P<0.05)。化疗后,两组血清miR-29b和miR-92a-1表达水平均较化疗前降低(P<0.05)。联合组化疗后的血清miR-29b和miR-92a-1表达水平均低于SOX组(P<0.05)。两组不良反应发生率的差异无统计学意义(P>0.05)。截至2019年4月,两组随访时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组无进展生存期与总生存期长于SOX组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论西妥昔单抗联合SOX方案治疗大肠癌可提高疾病控制率,延长生存时间,并下调患者血清miR-29b和miR-92a-1表达,且不会增加不良反应,患者耐受性较好。

miR-92a和miR-362-3p调节TOB2参与亚低温对重型创伤性脑损伤保护作用

目的探讨miR-92a和miR-362-3p调节TOB2参与亚低温对重型创伤性脑损伤保护作用。方法前瞻性选择2015年3月至2017年4月就诊的重型颅脑损伤患者84例,采用随机数字发将其分为常规治疗组(42例)和亚低温+常规治疗组(42例)。常规治疗组患者给予脱水、止血、抗炎及神经营养药物等常规治疗;亚低温+常规治疗组患者常规治疗基础上外加亚低温治疗。于治疗前,治疗后第1天、第7天和第14天采集肘静脉血5 ml,用qRT-PCR法检测患者血清miR-92a和miR-362-3p表达水平,用western blotting法检测患者血清TOB2蛋白表达,用荧光素酶活性实验验证TOB2是否是miR-92a和miR-362-3p的靶基因,记录患者伤后6个月时的格拉斯哥预后分级(GOS)。结果在治疗前,两组患者血清miR-92a和miR-362-3p表达无统计学差异(P>0.05)。在治疗后第1天、第7天和第14天,相比于常规治疗组,亚低温+常规治疗组患者血清miR-92a和miR-362-3p表达水平均降低(P<0.01),此外,治疗期间TOB2表达水平逐渐增加。荧光素酶活性实验验证证实ARNTL是miR-92a和miR-362-3p靶基因。在伤后第6个月,相比于常规治疗组,亚低温+规治疗组患者预后良好率和中等残疾率均增加,而重度残疾率、植物生存率和死亡率均降低(P<0.05)。结论创伤性脑损伤后miR-92a和miR-362-3p调节TOB2参与亚低温对其保护作用。

血浆miR-92a与骨肉瘤预后相关性研究

背景与目的:骨肉瘤是儿童和年轻成人最常见的原发性恶性骨肿瘤,目前尚无高特异度、高灵敏度的预后预测指标。该研究旨在探讨血浆mi R-92a表达水平与骨肉瘤临床病理及预后的关系。方法:收集30例健康体检者和45例骨肉瘤患者术前及术后血浆,通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测血浆mi R-92a水平。以术前mi R-92a≥5为界限,将骨肉瘤患者分为高表达组和低表达组。结果:骨肉瘤患者血浆mi R-92a水平显著高于正常体检人群,患者术前mi R-92a水平远高于术后。患者术前mi R-92a表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小和组织学类型等无关,而与Enneking分期、肿瘤坏死率和肺转移相关。Kaplan-Meier分析高表达mi R-92a的骨肉瘤预后差(P=0.035)。结论:骨肉瘤患者血浆mi R-92a表达水平与生存率相关,可能是骨肉瘤一项有价值的预后指标。

miR-92a通过调控NF-κB信号通路及EMT过程对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响

目的探究miR-92a通过调控核因子-κB(NF-κB)信号通路及上皮间质转化(EMT)过程对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响。方法收集2021年6月—2022年6月于本院行手术切除的50例宫颈癌组织标本及其癌旁正常组织标本,体外培养的细胞株包括正常人宫颈上皮HCvEpC细胞及宫颈癌细胞系Me 180、Caski、C-33A、Hela。qRT-PCR检测宫颈癌组织和细胞中miR-92a、NF-κB mRNA的表达;分析miR-92a表达与患者临床病理参数的关系;靶基因预测、双荧光素酶验证miR-92a对NF-κB的靶向调控作用;Pearson检验分析宫颈癌组织中miR-92a与NF-κB mRNA的相关性;将Hela细胞分为对照组、miR-NC组、miR-92a组、miR-92a inhibitor组、miR-92a inhibitor+pcDNA-NC组和miR-92a inhibitor+NF-κB组,采用脂质体瞬时转染法分别转染相应的质粒;MTT法、CCK-8、Transwell小室实验、划痕实验、流式细胞术分别检测各组细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期分布情况;Western blot分析各组细胞中NF-κB及EMT相关蛋白的表达。结果宫颈癌组织和细胞中miR-92a和NF-κB mRNA的表达均显著上调(P<0.05);miR-92a表达与患者的肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移有明显的相关性(P<0.05);miR-92a靶向促进NF-κB表达;宫颈癌组织中miR-92a与NF-κB mRNA呈明显正相关(P<0.05);与对照组和miR-NC组相比,miR-92a组细胞OD值、单克隆形成数目、细胞侵袭数目、划痕愈合率、停留在S期的比例明显增加,NF-κB、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡率、停留在G0/G1期的比例、E-cadherin、α-catenin蛋白表达水平明显下降,miR-92a inhibitor组获得与上述相反的结果(P<0.05);与miR-92a inhibitor+pcDNA-NC组相比,miR-92a inhibitor+NF-κB组细胞OD值、单克隆形成数目、细胞侵袭数目、划痕愈合率、停留在S期的比例明显增加,NF-κB、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡率、停留在G0/G1期的比例、E-cadherin、α-catenin蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论miR-92a可靶向促进NF-κB表达,增强宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力和EMT,促进细胞周期进程,抑制细胞凋亡,从而降低宫颈癌细胞的放疗敏感性。

miR-92a对人胃癌细胞株生物特性的影响及机制研究

目的探讨miR-92a对人胃癌细胞株生物特性的影响及可能的分子机制。方法在人胃癌细胞(SGC-7901)中瞬时转染miR-92a inhibitor,采用CKK-8法检测细胞株增殖情况,采用TUNEL方法检测细胞凋亡情况,采用Transwell迁移和侵袭实验观察细胞转移情况,并采用Western blot方法检测Bcl-2、Survivin蛋白表达情况。结果人胃癌细胞株在瞬时转染miR-92a inhibitor后,细胞增殖能力明显降低(P<0.05),凋亡明显增加(P<0.05),迁移和侵袭的细胞数量明显较少(P<0.05),Western blot检测结果显示Bcl-2、Survivin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论 miR-92a可以促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,抑制细胞凋亡,其可能通过调控Bcl-2、Survivin来促进胃癌的发生。

mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药的关系

目的探讨mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药关系。方法以人非小细胞肺癌细胞系A549及其耐药株A549/DDP为研究对象,采用RT-PCR法检测mir-17-5p、mir-92a及let-7b在细胞中的表达水平,采用cck8检测其细胞存活情况,采用细胞克隆平台方法,检测转染前后细胞的增殖情况,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡情况。结果(1)A549/DDP细胞mir-17-5p的表达水平是A549细胞的2.11±0.25倍(P<0.05);A549/DDP细胞mir-92a的表达水平是A549细胞的7.40±1.05倍(P<0.05);而A549/DDP细胞let-7b的表达水平是A549细胞的(26.54±2.90)%(P<0.05);(2)A549转染mir-17-5pmimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor后对顺铂的敏感性下降(P<0.05);A549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后对顺铂的敏感性增加(P<0.05);(3)A549转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor后,细胞形成克隆集落数量数量多于对照组(P<0.05);而A549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后,细胞形成克隆集落数量数量少于对照组(P<0.05);(4)A549转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor后,细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05);而a549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后,细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。结论 Mir-17-5p、mir-92a表达水平升高,let-7b表达水平下降,可以促进肺癌细胞增殖,抑制其凋亡以及使肺癌细胞对顺铂敏感性下降。

miR-92a通过调控TGF-β1/Smads通路对心房颤动心肌纤维化的影响

目的探究miR-92a通过调控转化生长因子(TGF)-β1/Smad家族成员通路对心房颤动(AF)心肌纤维化(MF)的影响。方法将50只大鼠随机分为对照组、AF组、AAV-NC组、AAV-miR-92a组、AAV-inhibitor组,除对照组外,其他组大鼠构建AF模型。AAV-NC组、AAV-miR-92a组、AAV-inhibitor组分别在第1天尾静脉注射对应腺病毒载体,14 d后处死大鼠。采用超声心动图评估大鼠左心室重构及功能;生物信息学预测及双荧光素酶实验验证miR-92a对Smad7的调控作用;HE、Masson染色、免疫组化染色观察心肌组织病理学改变及心肌组织Ⅰ型胶原蛋白(Collagen-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Collagen-Ⅲ)的表达;免疫荧光检测大鼠心肌组织α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、成纤维细胞特异蛋白(FSP)-1表达;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测心肌组织miR-92a、Smad7 mRNA表达;Western印迹检测心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7蛋白表达。结果生物信息学预测和双荧光素酶实验验证了miR-92a对Smad7的靶向调控作用;与对照组相比,AF组、AAV-NC组、AAV-miR-92a组左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)水平、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA、FSP-1水平、miR-92a、TGF-β1、Smad2、Smad3水平显著升高,Smad7 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05);与AF组相比,AAV-miR-92a组LVEF、LVFS水平、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA、FSP-1水平、miR-92a、TGF-β1、Smad2、Smad3水平显著升高,Smad7 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05),AAV-inhibitor组LVEF、LVFS水平、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA、FSP-1水平、miR-92a、TGF-β1、Smad2、Smad3水平显著降低,Smad7 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论AF大鼠心肌组织中miR-92a表达量升高,其靶基因Smad7表达量降低;抑制miR-92a表达能提高大鼠LVEF和LVFS水平,改善大鼠心功能;同时减少Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA、FSP-1水平,降低心肌纤维化程度;其机制可能与调控TGF-β1/Smads通路有关。

miR-92a-3p对TNF-α,IL-6和DcR3的影响

目的探讨miR-92a-3p对肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)和诱导因子3(DcR3)的影响。方法用人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)设置阴性对照组(NC)。用1μg/mL LPS分别处理THP-1细胞6 h和24 h,实时荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)检测TNF-α,IL-6和DcR3的表达,作为Sepsis组(NC+LPS)。利用1μg/mL的LPS处理过表达miR-92a-3p的THP-1细胞,作为过表达miR-92a-3p的Sepsis组(miR-92a-3p+LPS)。利用q-PCR,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot分别检测各组TNF-α,IL-6和DcR3的表达情况。结果q-PCR,ELISA和Western blot检测结果显示,TNF-α和IL-6在LPS组、miR-92a-3p+LPS组和NC组的相对表达量均呈下调趋势,差异有统计学意义(P<0.05),DcR3表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-92a-3p可抑制TNF-α和IL-6的释放,具有抗炎作用,但是其对DcR3的作用不显著。