芽枝孢霉菌在0.50mol/L盐酸溶液中生存状况观察分析

为观察研究霉菌在不同生态环境下的生存状况,采用肉眼观察和显微镜下观察,并与其他霉菌鉴别比较。经约1 a时间的观察研究和鉴别鉴定,该菌符合芽枝孢霉菌特征。该菌具有较强的生命力,嗜酸,无需固形物支持,在液态环境中也能生存,说明芽枝孢霉菌在自然界环境条件下极易存活,至于是否对动植物和人类产生危害,还有待于深入研究。

8mol/L脲中rhIL-3含量的测定

为解决8mol／L脉中rhIL－3的定量问题，以卵清蛋白作内标，进行常规SDS－PAGE后，作激光灰度扫描，并计算rhIL－3和卵清蛋白的峰面积，发现两种蛋白峰面积的比值与rhIL－3浓度在0．2－1．0mg／ml间呈良好线性关系。查标准曲线可以计算出8mol／L脲中rhIL－3的含量。重复性测定表明该法具有较好的重现性。

血管紧张素转换酶抑制剂用于血清肌酐大于266μmol/L的慢性肾脏病患者的研究

目的探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)对血肌酐(Scr)>266 μmol/L者的肾脏是否具有保护作用及此类患者服用ACEI的安全性.方法慢性肾脏病患者168例,口服贝那普利10 mg/d,剔除21例咳嗽者,余147例按Scr水平分为A组(Scr 133～265 μmol/L组)和B组(Scr266～442 μmol/L组),B组再分为Ⅰ组和Ⅱ组.A组和Ⅰ组患者口服贝那普利10～20 mg/d,根据血压控制情况加服钙离子拮抗剂和(或)美托洛尔和(或)血管扩张剂.Ⅱ组患者不服贝那普利,服其他降压药物的情况同Ⅰ组.3组降压的靶目标为≤125/75 mm Hg.随访2年,以Scr水平较基线值增加1倍,或需要进入透析治疗作为主要研究终点.结果 (1)平均动脉压的降幅3组间差异无统计学意义 (P>0.05);原有高血压的患者血压达靶目标值的比率A组为59.61%,Ⅰ组为48.97%, Ⅱ组为56.25%(P>0.05).(2)尿蛋白平均降幅A组、Ⅰ组明显高于Ⅱ组;尿蛋白基础值>1.5 g/24 h者用药2年后尿蛋白降至1 g/24 h以下的百分率A组为55.55%,Ⅰ组为52.63%,Ⅱ组为16.66%.(3)A组、Ⅰ组、Ⅱ组2年后达主要终点事件的发生率分别为19.23%、40.90%、51.35%,左心室质量指数、左心室肥厚发生率均较基线值明显下降;3组间心血管事件发生率亦无显著差异.(5) Ⅰ组患者治疗后2个月内Scr增加超过30%的人数及咳嗽、高血钾等副作用的发生率与A组、Ⅱ组相比无明显增加.结论 ACEI对Scr在266～442 μmol/L的慢性肾脏病患者仍有明显的肾脏保护作用,这类患者应用ACEI后副作用的发生率无明显升高.

0．5mol／L次氯酸钠法测定桑蚕丝／氨纶混纺织物纤维含量

为了分析桑蚕丝／氨纶混纺织物中氨纶含量的不确定性，提出了利用桑蚕丝、氨纶在次氯酸钠中溶解性能不同的原理，用次氯酸钠溶解已知混纺织物中桑蚕丝的方法。为了分析该方法的验证过程，通过与现有方法的比较探讨该方法的可行性与可操作性；验证了次氯酸钠法可代替现有方法，使桑蚕丝／氨纶混纺织物中氨纶含量具有可确定性；试验结果表明，氨纶在0．5mol／L次氯酸钠溶液中的d=1．OO，数值的绝对误差为0～0．42%，绝对误差小于1％，在标准规定的允差范围内。该试验表明，次氯酸钠法可以代替二甲基甲酰胺法、二甲基乙酰胺法和拆分法；采用次氯酸钠法快捷、方便，试验结果完全符合GB／T29862对纤维含量偏差的要求。该方法可作为一种对桑蚕丝／氨纶混纺产品进行定量化学分析的新方法。

1mol/L HCl浸提植物中铜锌含量的测定

用1 mol/L HCl浸提植物中的铜、锌.测定结果与干灰化法的相关性极显著,并且较干灰化法重现性好,操作简便快速。

双酚A对人胚肝细胞L-02的毒性作用研究

[目的]探讨双酚A对肝细胞L- 0 2的毒性作用及可能损伤机制。[方法] 1、10、5 0、10 0 μmol/L浓度的双酚A作用肝细胞L 0 2后,检测双酚A对肝细胞L-0 2的存活率、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量变化、细胞凋亡及凋亡相关基因P5 3、caspase3mRNA表达的影响。[结果]双酚A处理后,肝细胞L 0 2的存活率随着双酚A浓度的增加而下降,在≥5 0 μmol/L浓度,细胞的存活率显著降低(P <0 .0 1)。双酚A诱导肝细胞L -0 2中的SOD含量降低(P <0 .0 1) ,GSH和MDA含量在1μmol/L明显降低(P <0 .0 5 ) ,而后随着剂量的增加升高明显(P <0 0 1)。CAT水平先随着剂量的增加而升高到10 μmol/L的(10 5 .68±9.63 )U/g蛋白,而后随着剂量的增加而显著降低(P<0 .0 1)。≥5 0 μmol/L浓度的双酚A能明显诱导肝细胞L 0 2凋亡和P5 3、caspase3mRNA的表达升高(P <0 .0 1)。凋亡率从对照组的(8.16±0 .0 7) %上升到10 0 μmol/L的(17.2 0±1.2 5 ) % ,5 0、10 0 μmol/L浓度P5 3和caspase3mRNA表达分别是对照组的(1.42±0 .2 5 )、(1.65±0 .13 )、(1.41±0 .12 )和(1.77±0 .0 6)倍。[结论]双酚A对肝细胞L 0 2具有细胞毒性和氧化损伤作用,并能诱导肝细胞L 0 2发生凋亡和P5 3。

人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)抑制小鼠肝癌的血管生成和肿瘤生长

【目的】体内、体外实验观察人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)对肝癌血管生成和肿瘤生长的影响。【方法】大肠杆菌中表达,组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5蛋白,SDS-PAGE和Westernblot方法鉴定K5蛋白的表达;MTT法分析K5对牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRCEC)和肝癌细胞株Bel-7402、HepG2增殖的影响;建立皮下种植肝癌鼠模型,瘤内注射K5,检测抑瘤率及肝癌组织微血管密度(MVD)。【结果】SDS-PAGE及Westernblot鉴定获得K5纯化蛋白;K5特异性地抑制BRCEC的增殖,IC50=160nmol/L,而对肝癌细胞株Bel-7402、HepG2的增殖无抑制作用;K5显著抑制小鼠肝癌生长,治疗组肝癌组织MVD明显低于对照组。【结论】K5抑制移植性小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长,特异性抑制血管内皮细胞的增殖可能是K5抑制肝癌血管生成的主要机制。K5具有治疗肝癌的潜在临床价值。

甲异靛联合imatinib对CML K562细胞的促凋亡作用

目的研究甲异靛联合imatinib促进K562细胞凋亡的作用。方法K562细胞经imatinib或/和甲异靛处理48h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡相关指标(线粒体跨膜电位和AnnexinV/PI)的改变,ELISA方法检测caspase3活性改变,Westernblot检测凋亡相关蛋白(cytC,cIAP1,procaspase3和PARP)的改变。结果与单用组相比,20μmol/L甲异靛与0.3μmol/Limatinib联合应用后,线粒体跨膜电位下降细胞比例明显升高,cytC释放入胞浆,caspase3酶原形式procaspase3减少,caspase3活性升高,其底物PARP被降解,AnnexinV水平升高。结论甲异靛与imatinib合用可协同促进K562细胞凋亡。

紫杉醇诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的 研究紫杉醇对人宫颈癌Hela细胞的作用。方法 将紫杉醇处理Hela细胞后,用MTT法测定宫颈癌Hela细胞的生长抑制率。光镜下观察细胞凋亡形态的改变。流式细胞仪和原位末端标记技术检测细胞周期及细胞凋亡率,流式细胞仪检测bcl- 2水平,TRAP法测定端粒酶活性的变化。结果 0 0 1～1μmol/L的紫杉醇能引起Hela细胞的凋亡。表现为Gz/M期阻滞,且呈时间依赖性及剂量依赖性。紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调和bcl- 2表达水平下降。结论 紫杉醇诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,并抑制端粒酶活性,bcl- 2参与了紫杉醇诱导的宫颈癌细胞凋亡过程中端粒酶活性的调控。这一机制将为临床治疗提供理论依据。

葡萄糖酸锌、MnCl_2对SiO_2致肺泡巨噬细胞NO、NOS水平变化的影响

[目的]观察葡萄糖酸锌(ZnG)、氯化锰(MnCl2 )及其联合作用对二氧化硅(SiO2 )致肺泡巨噬细胞(AM)一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)水平变化的影响,寻找两者的最佳剂量组合。[方法]采用大鼠肺灌洗法纯化获得1×10 6/mlAM后按设计分为:①生理盐水对照组;②SiO2 组:含SiO2 2 0 0 μg/ml;③SiO2 +ZnG组:内含SiO2 2 0 0 μg/ml外,ZnG分别为1.0、1.5、2 .2 5 μg/ml;④SiO2 +MnCl2 组:内含SiO2 2 0 0 μg/ml外,MnCl2 分别为0 .2 5、0 .5、1.0 μg/ml;⑤ZnG、MnCl2 联合作用组:每组内含SiO2 2 0 0 μg/ml外,ZnG和MnCl2 各按上述3种剂量,采用两因素三水平正交设计,共设9个剂量组。3 7℃,5 %CO2 培养箱培养18h后,检测细胞内NO含量、NOS活性。[结果]与SiO2 组比,ZnG、MnCl2 可以显著降低肺泡巨噬细胞NO水平及NOS的活性(P <0 .0 1) ;ZnG和MnCl2 的交互作用具有统计学意义,1.5 μg/ml的ZnG与0 .2 5 μg/ml的MnCl2 联合作用效果最好,NO、NOS水平分别降为(1.44 0±0 .0 70 ) μmol/L、(0 .761±0 .10 1)U/ml。[结论]Zn、Mn及两者联合作用在体外可有效降低SiO2 粉尘致AM的NO、NOS水平,为Zn、Mn应用于矽肺的防治提供了实验依据。

HPLC法测定rhNDPK-a酶活性

目的:研究不同反应体系对NDPK酶活性测定结果的影响。方法:分别以(UTP+ADP)和(ATP+UDP)作为反应底物,加入自制的rhNDPK-A蛋白,以100mmol/L磷酸二氢钾、20mmol/L乙酸、5mmol/L四丁基溴化铵,pH 5 0作为流动相A液, A液+25%乙腈作为B液,等梯度混合,C18柱,柱温25℃,流速1 0ml/min,检测波长254nm。结果:以(UTP+ADP)和(ATP+UDP)作为反应底物测定的酶比活分别为210U/mg、860U/mg。结论:不同反应体系对HPLC法测定NDPK酶活性有显著差异。

Isogoniotriol衍生物对肿瘤细胞DNA的损伤

目的:研究Isogoniotriol衍生物对肿瘤细胞DNA的损伤作用。方法:用Isogoniotriol衍生物处理体外培养白血病K562细胞,MTT法测定IC50,应用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞核DNA的损伤。结果:Isogoniotriol衍生物处理K562细胞IC50为4×10-5mol/L,不同浓度的Isogoniotriol衍生物处理细胞后可见彗星状拖尾。结论:Isogoniotriol衍生物可造成肿瘤细胞DNA损伤,抑制肿瘤细胞生长。

HPLC检测白血病细胞系CYP3A5活性方法的建立与应用

目的建立白血病(AL)细胞系CYP3A5活性检测方法,研究化疗药对其活性的调控。方法HPLC法检测药物干预后AL细胞系CYP3A5活性。结果以1×106细胞、氢化考的松终浓度100μmol/L、孵育24h为AL细胞体外培养条件下氢化考的松6β-羟化活性检测的孵育条件。K562细胞CYP3A5活性显著高于HL-60、NB4和Jurkat细胞。柔红霉素作用24h后K562细胞CYP3A5活性增高,48h后活性显著增高;而NB4与Jurkat细胞在其作用后活性无改变。地塞米松作用24h后Jurkat细胞CYP3A5活性显著增高,48h后活性又显著增高。全反式维甲酸作用24h后NB4细胞CYP3A5活性显著增高,72h后活性又显著增高。结论HPLC检测AL细胞体外培养条件下氢化考的松6β-羟化活性方法的建立可用于研究AL细胞CYP3A5活性。柔红霉素、地塞米松、全反式维甲酸的应用可诱导某些AL细胞株CYP3A5活性。

木犀草素对人白血病HL-60细胞内蛋白激酶C的抑制作用

目的 观察木犀草素对HL- 60细胞内蛋白激酶C活性的影响。方法 采用台盼蓝拒染法,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率。PKC活性通过测定转移到CK2 底物上的[γ 32P]ATP的32P的放射性活度来检测。结果 木犀草素能够显著地抑制HL- 60细胞内PKC的活性并呈剂量依赖性关系,其IC50为2.38μmol/L,作用效果强于阳性对照槲皮素(IC50=2.54μmol/L)。结论 木犀草素作为一种细胞内的PKC抑制剂具有潜在的抗肿瘤临床应用价值。

糖皮质激素对于活化RBL-2H3表达IL-5的影响

目的:探讨糖皮质激素对于活化RBL-2H3(简称RBL)表达白细胞介素5(IL-5)的影响。方法:利用抗原和钙离子载体A23187分别激活RBL表达IL-5,通过总RNA提取、逆转录和半定量PCR研究加入糖皮质激素后对于RBL活化表达IL-5的影响。结果:经A23187活化的RBL,加入10-7mol/L地塞米松后,其IL-5表达量降低到对照的9%,加入10-6mol/L氢化可的松后,其IL-5表达量降低到对照的8.5%。经抗原活化的RBL,加入10-6mol/L地塞米松后,其IL-5表达量降低到对照的12%,加入10-6mol/L氢化可的松后,其IL-5表达量降低到对照的9%。结论:糖皮质激素对于活化RBL表达IL-5具有极大的抑制作用,提示糖皮质激素在临床上治疗哮喘的作用与其抑制肥大细胞表达IL-5存在一定关系。

动脉粥样硬化候选基因屏氧酶1基因192位Gln-Arg多态性对血脂的影响

目的:探讨屏氧酶1基因192位Gln-Arg多态性与血脂水平的关系。方法:从社区正常人群、健康体检者和患者中抽取1019例受试者,其中680例脑卒中患者及339例正常对照组人群,男606例,女413例。采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法测定屏氧酶1基因多态性。结果:非心脑血管病、脑出血、脑梗死患者年龄、性别、体质量指数、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇比较,差异无显著性意义(P>0.05),三者血清空腹血糖、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇比较,差异有显著性意义(P<0.05)。屏氧酶13种基因型(QQ,QR,RR基因型)各血脂水平差异无显著性意义(P>0.05),其中QQ基因型的三酰甘油、胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平分别为(1.58±0.89),(4.82±1.01),(1.39±0.38)和(2.84±0.75)mmol/L;QR基因型分别为(1.59±0.99),(4.78±1.00),(1.36±0.38)和(2.82±0.80)mmol/L;RR基因型分别为(1.57±0.87),(4.84±1.05),(1.34±0.39)和(2.87±0.87)mmol/L。同一性别不同基因型之间各血脂水平差异无显著性意义(P>0.05)。男女两性屏氧酶1各基因型的比例相近(P>0.05)。男女不同性别之间屏氧酶1基因各基因型的血脂水平存在差异,尤其以高密度脂蛋白胆固醇明显(P<0.05)。结论:屏氧酶1基因192位Gln-Arg各基因型间血脂水?

用RP-HPLC法测定血浆中盐酸二甲双胍的血药浓度

目的建立用RP-HPLC法测定盐酸二甲双胍血药浓度的分析方法。方法用RP-HPLC法将二甲双胍同血浆杂质分离,以二甲双胍峰高对其浓度进行线性回归,计算血药浓度。结果建立了用RP-HPLC法测定盐酸二甲双胍血药浓度的色谱条件。色谱柱为Dikma公司的DiamonsilC18柱(150mm×4.6mm,5μm);柱温为室温;流动相为V(CH3CN):V[0.02mol/LKH2PO4(每100mL含18%SDS0.32mL,85%H3PO4调pH=4.0)]=71:29;流速为1mL/min;紫外检测波长为230nm。标准曲线回归方程为C=0.0498H-0.00002,r=0.9999,n=3,线性范围为0.030-4.000mg/L。方法回收率为98.2%-99.0%,日内RSD为0.7%-4.6%,日间RSD为1.2%-5.8%。结论样品处理简便快速,测定方法准确可靠,可用于盐酸二甲双胍的血药浓度分析。

全血储存期间K^+、Na^+、Cl^-离子浓度的变化

目的了解库存全血储存期间K+、Na+、Cl-离子浓度的变化,为临床输血提供理论参考。方法对库存全血20袋(100ml/袋,ACDP-1保养液)于采集后2小时及库存后1、3、7、10、14、21、28和33天9个时间点采血样测定K+、Na+、Cl-离子浓度。结果血液库存3天后其血浆钾离子浓度达(6.84±1.48)mmol/L,3周时达(19.70±3.27)mmol/L,储存期间Na+、Cl-离子浓度未见明显改变(P>0.05)。结论库存全血K+离子浓度随存放时间延长而升高,而Na+、Cl-离子浓度无明显改变,临床上对心肾肝功能不全及大剂量输血病人宜考虑输注成分血或新鲜血液。