薏苡附子败酱散通过抗三结构域蛋白21-Toll样受体4-t-核因子-κB信号通路对类风湿关节炎MH7A细胞的影响

目的观察不同浓度薏苡附子败酱散对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿关节炎成纤维细胞(MH7A)增殖、凋亡及炎症反应的影响,探究其作用机制。方法2022年2―8月,大鼠用不同浓度薏苡附子败酱散及蒸馏水灌胃制备含药血清;20μg/L的TNF-α处理的MH7A细胞记为TNF-α组,TNF-α+含药血清处理的MH7A细胞记为薏苡附子败酱散低浓度组、薏苡附子败酱散中浓度组、薏苡附子败酱散高浓度组,正常培养的MH7A细胞标记为对照组。细胞计数试剂盒(CCK8)、流式细胞术、酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞的存活、凋亡及白细胞介素(IL)-1β、干扰素(IFN)-γ;蛋白质印迹法(WB)检测基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9、抗三结构域蛋白21(TRIM21)、Toll样受体4(TLR4)、t-核因子(NF)-κB p65、磷酸化(p)-NF-κB p65、p-NF-κB抑制因子(IκB)-α和t-IκB-α蛋白表达。pcDNA 3.1组(转染空载体)、pcDNA+TRIM21组(转染pcDNA 3.1+TRIM21)、薏苡附子败酱散中浓度+si-con组(转染si-con+4.70 g/kg含药血清)、薏苡附子败酱散中浓度+si-TRIM21组(转染si-TRIM21+4.70 g/kg含药血清)。结果与对照组相比,TNF-α组细胞存活率(105.07±1.90比185.67±3.06)、TRIM21(0.56±0.02比0.68±0.04)、MMP-3(0.18±0.00比0.63±0.02)、MMP-9(0.39±0.01比0.82±0.01)、TLR4(0.25±0.02比0.68±0.07)、p-NF-κB p65(0.24±0.01比0.68±0.06)、p-IκB-α(0.22±0.01比0.55±0.04)蛋白表达和IL-1β(31.65±0.66比101.93±0.60)、IFN-γ(8.53±0.16比63.76±1.35)含量均显著升高,凋亡率(6.54±0.06比1.17±0.08)均显著降低;与TNF-α组相比,薏苡附子败酱散低浓度组(185.67±3.06比153.77±3.09;0.68±0.04比0.37±0.02;0.63±0.02比0.47±0.02;0.82±0.01比0.73±0.01;103.2±0.7比92.93±0.85;66.3±1.45比54.47±1.46;0.68±0.07比0.53±0.05;0.68±0.06比0.53±0.06;0.55±0.04比0.47±0.01;1.84±0.07比6.67±0.28)、薏苡附子败酱散中浓度组(185.67±3.06比136.23±1.57;0.68±0.04比0.57±0.02;0.63±0.02比0.37±0.02;0.82±0.01比0.57±0.00;103.2±0.7比86.4±0.75;66.3±1.45比38.1±0.92;0.68±0.07比0.43±0.07;0.68±0.06比0.59±0.01;0.55±0.04比0.40±0.03;1.84±0.07比9.59±0.29)、薏苡附子败酱散高浓度组(185.67±3.06比143.47±1.50;0.68±0.04比0.47±0.02;0.63±0.02比0.41±0.05;0.82±0.01比0.62±0.00;103.2±0.7比89.63±0.42;66.3±1.45比40.17±0.90;0.68±0.07比0.51±0.06;0.68±0.06比0.69±0.07;0.55±0.04比0.41±0.02;1.84±0.07比8.89±0.08)细胞存活率、TRIM21、MMP-3、MMP-9蛋白和IL-1β、IFN-γ含量及TLR4、p-NF-κB p65、p-IκB-α蛋白表达均显著降低,凋亡率均显著升高(P<0.05);与pcDNA组相比,pcDNA+TRIM21组细胞TRIM21蛋白表达(0.24±0.03比0.51±0.04)、细胞凋亡率(1.61±0.11比12.43±0.61)均显著升高,MMP-3(0.64±0.02比0.41±0.04)、MMP-9(0.82±0.03比0.45±0.02)、IL-1β(110.63±0.55比90.93±0.60)、IFN-γ(64.5±0.82比48.1±1.25)及细胞存活率(179.03±0.74比120.07±0.60)均显著降低;敲减TRIM21显著抑制薏苡附子败酱散中浓度对损伤细胞的治疗作用且显著升高TLR4(0.45±0.06比0.61±0.02)、p-NF-κB p65(0.49±0.02比0.56±0.02)、p-IκB-α(0.38±0.01比0.62±0.01)的蛋白表达。结论薏苡附子败酱散增强TNF-α诱导的MH7A细胞的生存能力,其作用机制与上调TRIM21抑制TLR4-NF-κB信号通路活性有关。

《伤寒杂病论》中芍药-附子药对配伍治疗探析

《伤寒杂病论》中以芍药-附子药对配伍的方剂有5首,分别治疗痹病及水液代谢障碍疾病,通过对痹病及水液代谢障碍疾病的病因病机、治法、用药特点进行分析,认为芍药-附子药对配伍在治痹三方中主要发挥温阳散寒止痛、调和阴阳的功效,在治水两方中起到温阳利水、敛阴生津的作用。

从象思维视角谈淫羊藿与附子的药性异同

象思维是中医认识药物、认识疾病、分析病机、遣方用药等过程中的特征性思维方式,淫羊藿和附子是中医临床常用的温阳药物。运用中药象思维,从淫羊藿和附子的生长环境、药用部位、药物形态等角度,对生炙淫羊藿和附子的药性和功效进行比较分析,得出生品淫羊藿为辛寒之品,炙品淫羊藿为辛甘温热之品,他们可以通过宣肺而打通金水相生之路,进而补肾壮精。另外,在“少火生气”方面,炙淫羊藿具有代替附子之能。

附子防治疫病的理论及应用探微

附子治疫最早见于《神农本草经》。感受疫气出现少阴病证候,可选麻黄附子细辛汤、麻黄附子甘草汤。疫病中霍乱、疟疾、痢疾、艾滋病等发病证候多属里证,可选真武汤、四逆汤、乌梅丸、肾气丸等。表里同病可考虑圣散子、霹雳散。附子防治寒疫应用广泛。

基于非靶向代谢组学的诃子解草乌心脏毒性机制分析

目的:采用代谢组学方法分析诃子解草乌心脏毒性机制。方法:以草乌、草乌诃子药对为示例药物,将50只SD大鼠按体质量随机分为正常组,草乌高剂量组、草乌低剂量组、草乌诃子药对高剂量组、草乌诃子药对低剂量组,每组10只。各给药组连续灌胃28 d相应药物溶液。最后一次给药后检测各组心率和心电图、血清生化指标及病理组织学变化,并取心脏组织,采用LC-MS非靶向代谢组学技术分析心脏内源性代谢产物变化。结果:与正常组相比较,草乌高剂量组心率出现明显降低(P<0.05)。各给药组大鼠的心电图结果主要表现为,草乌高剂量组呈现心律失常,室早,宽大畸形的QRS波;草乌低剂量组出现宽大畸形的QRS波;草乌诃子药对高剂量组大鼠表现为ST段压低;草乌诃子药对低剂量组大鼠的心电图偶见ST段抬高。血清生化指标结果显示,草乌高剂量组CK、CKMB显著降低(P<0.05);草乌低剂量组CK、CKMB呈升高趋势。病理学观察结果显示,草乌高剂量组心肌纤维排列略紊乱,胞质疏松淡染,部分细胞水肿;草乌低剂量组心肌纤维排列略紊乱;草乌诃子药对高剂量组个别心肌细胞水肿;草乌诃子药对低剂量组心肌纤维排列紊乱,胞质疏松淡染。草乌高剂量组从心脏样本中共筛出18个差异代谢物,其中上调4个、下调14个;草乌诃子药对高剂量组从心脏样本中共筛出25个差异代谢物,其中上调1个、下调24个,主要涉及ABC转运蛋白和多种氨基酸代谢。结论:诃子解草乌心脏毒性机制主要与心脏N、N-二甲基精氨酸和腺苷蛋氨酸及肌酸代谢有关。

基于PI3K/Akt信号通路探讨“赤芍-附片”对肝细胞炎症损伤的影响

目的基于磷脂酰激醇3激酶(phosphati-dylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB又称Akt)信号通路,探讨“赤芍-附片”对肝细胞炎症损伤的保护作用。方法体外培育L02细胞株,设立正常组、模型组、空白血浆组、“赤芍-附片”组、Copanlisib(PI3K抑制剂)组,采用D-半乳糖联合脂多糖干预构建肝细胞炎症损伤模型。通过CCK-8法筛选含药血浆最佳干预浓度及时间;透射电镜观察细胞超微结构;ELISA法检测白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达水平;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-q PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)测定PI3K/Akt通路m RNA及蛋白表达水平。结果较之正常组,模型组受损细胞器及自噬体数量增加,IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著升高(P<0.01),PI3K、Akt mRNA及磷酸化蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。较之模型组,“赤芍-附片”组细胞形态相对正常且自噬体数量减少,IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著下降(P<0.01),PI3K、Akt mRNA及磷酸化蛋白表达上调(P<0.01或P<0.05)。结论“赤芍-附片”药对可能通过调控PI3K/Akt信号通路,减少IL-1β、IL-6、TNF-α分泌,从而减轻D-半乳糖联合脂多糖诱导的肝细胞损伤。

川乌配伍白芍对炎症因子及自由基的影响

目的 :研究川乌与白芍配伍前后对炎症因子和自由基的作用。方法 :制备乌 芍配伍前后水煎液 ,采用大、小鼠炎症模型和SOD以及LPO检测方法进行观察比较。结果 :乌 芍配伍能增强各单味药尤其是川乌的抗炎作用 ,降低炎症过程中毛细血管通透性和炎症介质PGE2 的含量 ;减少川乌所致的血浆及肝组织LPO过量。结论 :本实验所显示的抑制炎症因子和清除自由基的结果 ,可能是二药配伍能增强单味药尤其是川乌抗炎祛风湿的重要机理之一。

川乌配伍白芍的抗炎作用特点研究

目的 :比较川乌与白芍配伍前后的抗炎作用 ,探讨配伍后的抗炎增效特点。方法 :采用大鼠甲醛、角叉菜胶、佐剂所致的关节炎模型 ,以及其他炎症模型 (如大鼠棉球肉芽炎症、小鼠二甲苯耳壳肿胀和腹腔毛细血管通透性等 )。结果 :川乌的抗炎作用较弱 ,而白芍和川乌配伍白芍均有明显的抗炎作用。药物配伍的抗炎作用特点 ,第一 ,对大鼠甲醛性和佐剂继发性关节炎模型 ,二药配伍后的抗炎作用明显优于各单味药 (P <0 .0 0 5 ,P <0 .0 5 ) ;而对角叉菜胶性关节炎以及其他炎症模型 ,二药配伍前后的抑制率无明显差异 (P >0 .0 5 )。第二 ,配伍组 1∶2低剂量组 ,在减少川乌剂量后其抗炎作用 (主要对大鼠佐剂继发性、甲醛性关节炎症模型 )仍明显强于川乌组 (P <0 .0 0 5 ) ,也明显强于白芍组 (P <0 .0 5 )。结论

川乌与白芍配伍的免疫调节作用初探

目的 :研究川乌配伍白芍的免疫调节作用。方法 :检测小鼠迟发性超敏反应 (DTH)、大鼠免疫变态反应性炎症、单核巨噬细胞 (MΦ)吞噬功能和特异性抗体生成等。结果与结论 :在本文实验条件下 ,乌芍配伍对细胞免疫有明显的双向调节作用 ,既可显著抑制正常和免疫增高小鼠DTH ,明显抑制大鼠佐剂继发性关节炎 ,又能明显提高免疫低下的小鼠MΦ吞噬功能。与之相比 ,各单味药的调节作用较弱。根据风湿痹证免疫调节紊乱的病理机理 ,本文结果可能是临床应用乌芍配伍治疗风湿痹证的重要机制之一。

附子水煎剂对家兔离体主动脉血管舒张作用的研究

目的 :研究附子水煎剂 (DCMR)对主动脉环的舒张作用及机制。方法 :采用家兔离体主动脉平滑肌标本 ,以去甲肾上腺素 (NA)预收缩主动脉后给予不同剂量的附子观察其张力变化 ,并探讨去除血管内皮、给予NO合酶抑制剂左旋硝基精氨酸 (L NNA)、甲烯蓝 (MB)、环氧酶抑制剂吲哚美辛和 β肾上腺素能受体阻断剂普萘洛尔对血管张力变化的影响。 结果 :附子对血管环静息张力无明显影响 ,但不同剂量的附子可使 10 6mol/LNA预收缩血管产生明显舒张 (r =0 .87,P <0 .0 5 )。去除血管内皮、10 4mol/LL NNA或 10 5mol/LMB可减弱附子的舒张作用 ,但吲哚美辛和普萘洛尔无影响。另外 ,4mg/mL附子水煎剂对无内皮细胞血管环NA(PD2 为 7.0 7± 0 .90和 6.93± 0 .87,P >0 .0 5 )和KCl(PD2 为 1.40± 0 .3 6和 1.2 5± 0 .2 1,P >0 .0 5 )的量效收缩反应无明显影响。结论 :附子水煎剂对主动脉的舒张作用是内皮依赖性的 ,且与内皮释放的NO有关 ;而与平滑肌细胞膜上的受体依赖性Ca2 + 通道和电压依赖性Ca2 +

荜澄茄、干姜、辛夷挥发油对雪上一枝蒿总碱体外经皮渗透的影响

目的:考察荜澄茄、干姜、辛夷挥发油对雪上一枝蒿总碱经皮渗透的影响。方法:采用改良Franz扩散池法,以小鼠皮肤为透皮屏障,用高效液相色谱法(HPLC)测定雪上一枝蒿总碱中甲素的累积渗透量,并以氮酮为对照,考察不同浓度的荜澄茄、干姜、辛夷3种挥发油对雪上一枝蒿总碱的促渗效果。结果:5%荜澄茄、7%干姜、7%辛夷挥发油与3%氮酮的促渗效果最好,渗透系数(×10-3cm.h-1)分别为55.81,38.28,35.23,34.46;与无促渗剂组相比,促渗倍数分别为1.73,1.18,1.09,1.06倍。结论:5%荜澄茄、7%干姜、7%辛夷挥发油均能促进雪上一枝蒿总碱的经皮渗透(P<0.05)。

兔急性草乌中毒血液灌流治疗实验方法的建立

目的探讨建立血液灌流（HP）治疗兔急性草乌中毒的实验方法。方法将24只实验兔随机分成中毒模型组、HP组和假HP组，每组8只。中毒模型组及HP组用草乌酒灌胃制作急性中毒模型；假HP组及HP组经颈内动脉、颈外静脉插管，建立HP装置后进行HP2h，假HP组吸附柱内无吸附剂。用液相-质谱联用仪检测中毒模型组与HP组灌流前后相同时间点血中乌头碱的浓度；检测假HP组灌流前后血液有形成分及电解质、血浆蛋白浓度的变化。结果HP组灌流2h后血中乌头碱浓度为（2．02±1．46）μg／L，明显低于中毒模型组（36．97±8．30）μg／L（P〈0．05）；假HP组灌流前、后血细胞计数和血红蛋白、血浆蛋白质及电解质数值变化差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论HP可明显降低血中乌头碱浓度，HP实验装置对兔血液系统无不良影响，是一项安全有效的实验方法与治疗技术。

草乌提取物外用对大鼠足跖肿胀的影响

目的:通过观察不同促透方法下外用草乌提取物对动物生理指标的影响,寻找促进药物透皮吸收的最佳条件和方法。方法:将大鼠随机分为5组,即模型组、单纯给药组、促透剂组、低频电磁复合脉冲组(仪器组)、促透剂+仪器组。以10%蛋清液对大鼠足跖皮下注射,制造急性炎症模型,用排水容积法测量大鼠足跖容积,以大鼠足跖肿胀率、足跖肿胀抑制率为指标,观察在不同促透方法下草乌提取液的抗炎作用。结果:仪器组在致炎后第9h的足跖肿胀率与模型组及单纯给药组相比,有显著差异(P<0.05)。仪器+促透剂组的足跖肿胀率与模型组相比,第1、3、6h有极显著差异(P<0.01),第9h有显著差异(P<0.05);与单纯给药组相比,致炎后第1、3h有极显著差异(P<0.01),第9、12h有显著差异(P<0.05);与促透剂组相比,致炎后第3h有极显著差异(P<0.01);与仪器组相比,致炎后第3h有极显著差异(P<0.01),第1h有显著差异(P<0.05)。结论:应用促透剂、低频电磁复合脉冲刺激,以及二者联合促进草乌提取物的透皮吸收,能对蛋清溶液所致的急性炎症有明显的抑制作用,促透剂与低频电磁复合脉冲刺激对促进药物的透皮吸收发挥药效有协同作用。

附子水煎剂对家兔离体肺动脉血管的舒张作用

目的:研究附子MonkshoodRoot(DMR)水煎剂对肺动脉环的舒张作用及机制。方法:采用家兔离体肺动脉平滑肌标本,以去甲肾上腺素(NA)预收缩肺动脉后,给予不同剂量的附子观察其张力变化,并探讨去除血管内皮、给予NO合酶抑制剂左旋硝基精氨酸(L-NNA)、甲烯蓝(MB)、环氧酶抑制剂吲哚美辛和β肾上腺素能受体阻断剂普萘洛尔对血管张力变化的影响。结果:附子对血管环静息张力无明显影响,但不同剂量的附子可使10-6mol·L-1NA预收缩血管产生明显舒张(r=0.71,P<0.001)。去除血管内皮、10-4mol·L-1L NNA或10-5mol·L-1MB可减弱附子的舒张作用。另外,1mg·mL-1DMR对无内皮血管环NA和KCl的量效曲线无明显影响,DMR温育前后NA的PD2值为7.56±0.95和7.30±0.83,P>0.05;KCl的PD2值为1.74±0.48和1.71±0.51,P>0.05。结论:附子水煎剂对肺动脉的舒张作用是内皮依赖性,与内皮细胞释放的NO有关,而与平滑肌细胞膜上的受体依赖性Ca2+通道和电压依赖性Ca2+无关。

石菖蒲、肉豆蔻、橘皮挥发油对雪上一枝蒿总碱经皮渗透的影响

目的考察石菖蒲、肉豆蔻、橘皮所含挥发油对雪上一枝蒿总碱经皮渗透的影响。方法采用改良Franz扩散池法,以小鼠皮肤为透皮屏障,用HPLC法测定模型药物雪上一枝蒿总碱中甲素的累积渗透量,并以氮酮为对照,考察不同浓度石菖蒲、肉豆蔻、橘皮所含3种挥发油对雪上一枝蒿甲素的促渗效果。结果7%石菖蒲、7%肉豆蔻挥发油与3%氮酮对雪上一枝蒿总碱的促渗效果最好,渗透系数分别为5.88、6.91、5.30、5.75;与无促渗剂组相比,促渗倍数分别为1.09、1.28、0.98、1.06倍。结论7%石菖蒲、7%肉豆蔻挥发油均能促进雪上一枝蒿甲素的经皮渗透,5%橘皮挥发油无明显促渗作用。

草乌不同药用部位的急性毒性实验研究

目的:评价草乌不同药用部位的急性毒性。方法:以草乌不同药用部位水煎醇提取液,经一次性灌胃予昆明种小鼠,并观察14d内小鼠的毒性反应及死亡情况。结果:生草乌LD50值为4.03g.kg-1,草乌叶LD50值为121.7g.kg-1,草乌花LD50值为125.3g.kg-1,草乌芽LD50值为136.2g.kg-1。结论:根据WHO急性毒性分级方法,初步认为生草乌煎煮后仍具有低毒,草乌芽、草乌花和草乌叶煎煮后均无明显毒性。

麻布七的生药学研究

目的:为麻布七的生药鉴定和开发利用提供科学依据。方法:采用性状鉴定、显微鉴定与理化鉴定。结果:麻布七根横切面中,后生皮层细胞木栓化,皮层中有一轮环状排列的异型维管束,射线细胞中夹杂有径向排列成行的小型棕色细胞;粉末中含有大量淀粉粒,后生皮层组织碎片呈棕褐色,细胞表面观呈类方形或多角形。结论:这些特征可作为麻布七鉴定的依据。

蜂针合中药熏蒸治疗类风湿关节炎的临床观察

目的观察蜂针合中药熏蒸治疗类风湿关节炎的疗效。方法将87例患者随机分为治疗组与对照组,两组均予西医常规治疗,治疗组加用中药熏洗和蜂针,8周后统计临床疗效。结果治疗组的有效率为97.7%,对照组的有效率为83.7%,两组相比差异有统计学意义(P<0.05);两组ESR、CRP治疗前后比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在西医常规治疗基础上加用蜂针合中药熏蒸治疗类风湿关节炎疗效更好。

川乌的临床应用及其用量探析

通过搜集古代医籍及现代医家临床应用,总结出川乌具有以下特点:临床应用范围为5~120 g,常用范围为5~15 g。临床根据疾病、证型、症状的不同而选择不同的川乌剂量,如祛风除湿、驱寒逐冷治疗风湿性疾病,其用量为5~30 g;通络散寒止痛治疗骨关节病、各种痛症,用量为5~40 g;温阳祛瘀通络治疗糖尿病周围神经病变,用量为9~120 g。根据疾病、证型及症状,配伍相应中药,如寒湿痹阻常配伍麻黄、薏苡仁;通络散寒止痛常配伍桂枝、桑枝、川芎等。

北乌头附子的发育解剖学

北乌头(Aconitum kusnezuffii)附子是一种特殊的结构,附生在植株的根旁,由一个顶芽、腋芽以及块根状的不定根组成。附子上的腋芽出现后的第二年3月,在腋芽第一节下方,远轴一侧的部分近似形成层细胞分化,形成了直接与芽端原形成层连接的不定根原基。同时,腋芽第一节间横向伸出成为连接母株的“桥”。随着不定根上部韧皮部薄壁组织细胞的增生,此根不断增粗,变成了新的附子,6月达到最大。这种附子的顶芽则是在7月后才迅速发育,直到10月后休眠,第三年春再发展成为新的植株。因此,附子实际上是一个具有膨大不定根的更新芽。而连接母株的“桥”则是腋芽第一节间所形成的一种特殊的地下茎。