小檗碱对3T3-L1胰岛素抵抗细胞模型PI-3K p85蛋白表达的影响

目的:研究小檗碱对3T3-L1胰岛素抵抗细胞模型PI-3K p85蛋白表达的影响,探讨小檗碱改善胰岛素抵抗的分子机制.方法:分别以0.5mmol/L软脂酸与25mmol/L葡萄糖加0.6nmmol/L胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,予以小檗碱进行干预,同时以阿司匹林作为阳性对照,以2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率,用Western blot检测PI-3K p85蛋白的表达.结果:0.5mmol/L软脂酸作用24h或25mmol/L葡萄糖加0.6nmmol/L胰岛素作用18h分别使3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖转运抑制67%和60%,Western blot显示PI-3K p85蛋白表达减少,与正常对照组比较有统计学意义(P<0.01);同时加入小檗碱则可逆转上述效应使PI-3K p85蛋白表达增加,与模型组比较有明显差异(P<0.01),并且PI-3K p85蛋白的表达与小檗碱的剂量和作用时间呈依赖关系.结论:小檗碱可明显改善游离脂肪酸和高糖诱导的胰岛素抵抗,其分子机制可能与小檗碱提高PI-3K p85蛋白的表达有关.

PI3K p85α在大肠癌癌变过程中的表达及意义

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶p85α亚单位(PI3K p85α)在大肠癌癌变过程中,即大肠正常组织、大肠腺瘤、大肠癌中的表达及意义。方法用免疫组织化学二步法检测试剂盒检测116例大肠病变组织标本中PI3K p85α的表达情况,用等级相关的秩和检验分析PI3K p85α在大肠病变组织中表达的意义及其与临床病理特征间的关系。结果PI3K p85α蛋白在大肠癌癌变过程中表达阳性率呈递增趋势,差异有明显统计学意义(P<0.05)。统计分析显示在大肠癌中PI3K p85α蛋白与患者的肿瘤分化程度无关,但是与临床分期相关(P<0.05)。结论在大肠癌的发生发展过程中存在PI3K p85α蛋白的异常表达并与临床分期密切相关,PI3K/AKT信号传导通路在大肠癌癌变过程中有重要作用。

普朗尼克P85与维拉帕米对苯妥英钠脑靶向分布的比较

【目的】比较表面活性剂普朗尼克P85和维拉帕米对传统抗癫痫药物苯妥英钠的脑靶向分布作用。【方法】健康雌性Sprague-Dawley大鼠,25只,周龄9~10周,体质量190~240 g,随机分为5组,每组5只。具体为PHT组、+VPM组、+0.1%P85组、+1%P85组、+10%P85组。PHT组静脉注射苯妥英钠;+VPM组静脉注射苯妥英钠前30 min腹腔注射维拉帕米;+0.1%P85组、+1%P85组和+10%P85组静脉注射的苯妥英钠用相应浓度的普朗尼克P85溶液配制。给予苯妥英钠后分别在不同时间点取大脑微透析液和血液,最后处死大鼠分离肝脏和肾脏组织。高效液相色谱法检测各样本中苯妥英钠的浓度,评估苯妥英钠的脑靶向分布情况。【结果】+10%P85组、+1%P85组、+0.1%P85组和+VPM组与PHT组比较,脑组织间液和血浆苯妥英钠的曲线下面积比值分别提高113.5%、50.4%、21.9%和7.2%,各组之间两两比较差异均有统计学意义。+VPM组苯妥英钠药物浓度肝血比明显升高,与其余各组之间差异有统计学意义。各组苯妥英钠药物浓度肾血比之间比较,差异无统计学意义。【结论】相对于维拉帕米,普朗尼克P85可明显的提高苯妥英钠进入大脑的剂量,而且不会提高苯妥英钠在肝脏和肾脏的累积分布,具有脑靶向输送作用。

RNAi调下AKT1、PI3K P85表达抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖

目的:探讨RNAi(RNA interference)技术抑制乳腺癌MCF-7细胞中AKT1和PI3KP85亚基的表达对MCF-7细胞增殖和侵袭等的影响。方法:将包含AKT1、PI3KP85两种siRNA开放阅读框的短发夹RNA(shRNA)重组腺病毒质粒表达载体rAd5-siAKT1-siPI3K转染至乳腺癌MCF-7细胞。应用real-timePCR和Western blotting检测转染后目的基因mRNA和蛋白的表达水平,并用Western blotting检测目的基因被沉默后PCNA、cyclinD1和P53的表达情况。应用MTT法、流式细胞术、2-D和3-DMatrigel实验检测MCF-7细胞转染前后的细胞增殖周期和侵袭能力。结果:重组腺病毒质粒表达载体rAd5-siAKT1-siPI3K介导的靶向AKT1,PI3KP85shRNA可以有效抑制目的基因AKT1和PI3Kp85的mRNA和蛋白表达;下游相关因子PCNA、cyclinD1的表达亦下调,P53表达则上调。MTT法结果显示rAd5-siAKT1-siPI3K组细胞生长抑制率>50%,与未转染组和rAd5-siCtrl转染组比较,出现明显的G1/G0细胞周期阻滞;2-D和3-DMatrigel实验显示,未转染组和rAd5-siCtrl转染组细胞呈正常形态,而rAd5-siAKT1-siPI3K转染组细胞贴壁生长能力明显减低,细胞团块明显缩小。结论:靶向AKT1、PI3KP85亚基的shRNA技术可以抑制MCF-7细胞中AKT1、PI3KP85亚基的表达,抑制MCF-7细胞的体外增殖。

针刺对胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌PI3K p85的影响

目的:观察针刺对胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)之亚基p85的影响。方法:将24只SD大鼠随机分为空白组、模型组和针刺组各8只,以高糖高脂高盐饮食复制胰岛素抵抗动物模型,采用葡萄糖氧化酶法、ELISA、实时荧光定量PCR、western-blotting等方法,检测比较各组大鼠空腹血糖(FBG)、血浆胰岛素(FINS)、胰岛素敏感性指数(ISI)、血清C-肽(C-P)和骨骼肌PI3K p85α mRNA及蛋白的表达。结果:模型组大鼠的FBG、FINS、C-P、PI3K p85α mRNA、PI3Kp85蛋白表达均较空白组显著升高(P<0.01),ISI显著降低(P<0.01);针刺组的FBG、FINS、C-P、PI3K p85α mRNA、PI3K p85蛋白表达均较模型组有不同程度的降低(P<0.05,P<0.01),ISI显著升高(P<0.01)。结论:针刺干预可以纠正胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌PI3K p85蛋白的过度表达,使PI3K的活性升高,这可能是针刺改善胰岛素抵抗的作用机理之一。

RNA干扰靶向抑制PI3K p85α表达对5-FU诱导大肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨应用RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α表达对5-FU诱导大肠癌LoVo细胞凋亡的影响。方法培养已成功沉默PI3Kp85α表达的大肠癌LoVo细胞(PI3Kp85α/RNAi-LoVo)及LoVo对照组细胞,MTT法计算两组细胞5-FU的半数抑制率(IC50),JC-1染色检测线粒体膜电位(Δψm)的变化,Western blotting检测凋亡蛋白Bcl-6和Bim的表达。结果 PI3Kp85α/RNAi-LoVo细胞组5-FU的IC50值(1.056±0.03562μmol/L)显著低于LoVo对照组(2.796±0.10947μmol/L)(P=0.000),JC-1染色显示5-FU刺激48h后,PI3Kp85α/RNAi-LoVo细胞线粒体膜电位较LoVo对照组细胞显著降低,表明PI3Kp85α/RNAi-LoVo细胞对5-FU更敏感。5-FU刺激48h后,PI3Kp85α/RNAi-LoVo细胞组凋亡蛋白Bcl-6和Bim的表达较LoVo对照组细胞显著增加(P=0.000)。结论应用RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α表达可促进5-FU诱导大肠癌细胞LoVo的凋亡。

PI3Kp85α在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的:探讨PI3Kp85α在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学法、Western blot和ELISA法检测116例甲状腺乳头状癌组织、90例甲状腺乳头状增生组织中PI3Kp85α蛋白的表达情况,并分析蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移等临床病理特征的相关性。利用ROC曲线评价PI3Kp85α在甲状腺乳头状癌诊断中的价值。结果:PI3Kp85α蛋白的阳性表达率在甲状腺乳头状癌组织中显著高于甲状腺乳头状增生组织(69.8%vs.31.1%),2组间差异有统计学意义(P<0.05)。甲状腺乳头状癌中,PI3Kp85α蛋白表达与淋巴结转移、TNM分期相关(P<0.05);PI3Kp85α诊断甲状腺乳头状癌的ROC曲线下面积为0.966,当cut-off值取2.100时,诊断灵敏度(为92.2%)和特异度(为91.1%)较高。结论:甲状腺乳头状癌组织中PI3Kp85α蛋白的阳性表达率明显升高,且其表达水平与淋巴结转移和肿瘤分期相关,可能作为评估甲状腺乳头状癌侵袭性及预后的指标。

2型糖尿病大鼠不同组织中p85mRNA及蛋白表达变化与中药干预作用

目的:观察2型糖尿病大鼠不同组织中p85基因表达的变化及复方黄连降糖片对其变化的影响。方法:对链脲佐菌素注射加高脂饮食诱导的2型糖尿病模型大鼠给予复方黄连降糖片治疗8周。测定血糖、血清胰岛素,大鼠肝脏、骨骼肌和脂肪组织p85mRNA的表达及其蛋白的表达。结果:复方黄连降糖片治疗组大鼠的血糖和血清胰岛素均有所下降,各组织p85的基因表达均显著提高。结论:不同组织p85的基因表达的提高可能是复方黄连降糖片治疗2型糖尿病的分子机理之一。

RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白对大肠癌细胞侵袭与转移的影响

目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α蛋白表达对大肠癌细胞侵袭与转移的影响。方法:设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染大肠癌LoVo细胞。用蛋白质印迹法筛选出一组抑制效率最高的细胞进行细胞划痕实验和Transwell实验。结果:转染shRNA/324干扰载体的LoVo细胞PI3Kp85α蛋白表达降低最明显,抑制率达77%,选择该组细胞作为有效干扰组进行后续实验。细胞划痕实验显示,干扰组细胞的划痕愈合能力明显低于对照组细胞(P<0.05)。Transwell实验显示,干扰组细胞的穿膜细胞数明显少于对照组细胞(P<0.05)。结论:PI3Kp85α蛋白表达缺失可明显降低大肠癌LoVo细胞的迁移运动能力,PI3Kp85α可能成为治疗大肠癌转移的新靶点。

小檗碱对2型糖尿病大鼠IRS-1/-2、p85基因表达的影响

目的:探讨小檗碱降血糖和治疗2型糖尿病的可能作用机制。方法:对链脲佐菌素注射加高脂饮食诱导的2型糖尿病模型大鼠,给予小檗碱治疗8周。氧化酶法测定血糖,RT-PCR法测定大鼠肝脏、骨骼肌和脂肪组织IRS-1/-2、p85mRNA的表达及Western blot法测定上述3个组织中IRS-1/-2、p85蛋白的表达。结果:治疗8周时,小檗碱治疗组大鼠的空腹血糖显著下降,各组织IRS-1/-2、p85基因表达均有不同程度的提高。结论:小檗碱治疗2型糖尿病可能与其提高外周组织IRS-1/-2、p85基因表达从而改善胰岛素的信号传导有关。

PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU对大肠癌细胞的促凋亡作用

探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白表达联合5-FU对大肠癌LoVo细胞的促凋亡作用。方法复苏培养PI3K p85α干扰组LoVo细胞(PI3Kp85ɑ/RNAi-LoVo)和LoVo对照组细胞,Western blot鉴定干扰效果,MTT法检测5-FU对两组细胞的半数抑制浓度(IC50),Annexin-FITC标记法检测细胞凋亡。结果 Western blot结果显示LoVo干扰组细胞PI3K p85α蛋白抑制率为59%,MTT结果显示干扰组细胞5-FU的IC50值(4.57±0.16)μmol/L明显低于对照组细胞5-FU的IC50值(8.07±0.30)μmol/L(P=0.000),细胞凋亡实验显示,干扰组细胞对5-FU诱导凋亡的敏感性增加(P=0.000)。结论 PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU可促进大肠癌LoVo细胞凋亡,为基因治疗和化学药物联合治疗大肠癌提供新的策略。

PI3K p85α蛋白表达缺失对SW480细胞侵袭及转移的影响

目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α的表达对人大肠癌SW480细胞侵袭及转移的影响。方法:构建慢病毒PI3K p85α干扰载体并转染SW480细胞,通过划痕实验、Transwell实验及黏附实验,明确PI3K p85α表达变化对大肠癌细胞侵袭及转移的影响。结果:划痕实验结果显示低表达PI3K p85α的大肠癌细胞愈合能力下降;Transwell实验显示低表达PI3K p85α的大肠癌细胞迁移及侵袭能力下降;黏附实验显示低表达PI3K p85α的大肠癌细胞黏附能力降低。结论:PI3K p85α蛋白表达缺失可明显抑制大肠癌细胞株SW480侵袭及转移能力,PI3K p85α可能成为大肠癌基因治疗的新靶点。

RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α蛋白对大肠癌细胞侵袭、转移的影响研究

目的分析RNA干扰靶向抑制PI3K p85α表达对大鼠大肠癌细胞的侵袭及转移的影响。方法设计1条阴性载体及4条shRNA干扰载体转染大肠癌细胞,检测shRNA干扰载体对减少PI3K p85α蛋白表达的作用。结果 shRNA/324转染组PI3K p85α蛋白表达量降低幅度最大;转染shRNA/324载体的干扰组LoVo细胞迁移能力显著减弱(P<0.05)。结论 RNA干扰靶向可有效抑制PI3K p85α表达并降低肿瘤细胞运动迁移能力。

RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α蛋白对大肠癌细胞增值的影响

目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白表达对大肠癌细胞增值的影响。方法:设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染大肠癌SW480细胞。用Western Blot筛选出一组抑制效率最高的细胞进行CCK-8细胞增值实验。结果:转染shRNA/324干扰载体的SW480细胞PI3K p85蛋白表达显著降低,抑制率约90%,选择该组细胞作为有效干扰组。CCK-8细胞增值实验显示,接种48h、72h及96h后,干扰组细胞生长速度明显低于对照组细胞(P<0.05)。结论:PI3K p85α蛋白表达缺失可降低大肠癌SW480细胞的增值速度,PI3K p85可能是大肠癌靶向治疗的新靶点。

体外siRNA靶向抑制PI3Kp85α基因对人胃癌AGS细胞株的作用

目的探讨小干扰RNA(siRNA)技术沉默PI3Kp85α基因表达对人胃癌细胞株AGS增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法设计3条靶向抑制PI3Kp85α基因的siRNA片段(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),分别转染人胃癌AGS细胞,并设阴性对照组及空白组。Western blotting检测siRNA序列对PI3Kp85α蛋白表达的影响。利用MTT实验、划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测下调PI3Kp85α水平对AGS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果转染siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3的AGS细胞中PI3Kp85α蛋白水平均低于阴性对照组及空白组(P<0.05)。转染siRNA-3的AGS细胞PI3Kp85α蛋白表达降低最明显,抑制率达80%,故选择siRNA-3进行后续实验。转染24h后,PI3Kp85αsiRNA转染组细胞增殖能力明显低于对照组细胞(P<0.05)。24h体外划痕实验显示,PI3Kp85αsiRNA转染组的划痕愈合能力明显低于对照组(P<0.05)。Transwell实验显示,PI3Kp85αsiRNA转染组细胞的细胞穿膜数明显低于对照组(P<0.05)。结论通过siRNA能明显下调PI3Kp85α蛋白在胃癌细胞AGS中的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。

p85α基因在卵巢癌中表达及临床意义研究

目的观察p85α基因在卵巢癌组织中的表达,探讨其与卵巢癌发生的关系及用于卵巢癌的早期诊断与治疗的临床意义。方法选取检测卵巢癌组织(66例)、癌旁组织(66例)及正常卵巢组织(17例)三个不同组织作为检测对象,采用免疫组化检测技术检测p85α基因表达产物及探讨p85α基因表达与卵巢癌临床特征的关系。结果 p85α基因在卵巢癌组织、癌旁组织、正常卵巢组织中的表达率分别为68.2%、59.1%、11.8%,即为该基因在卵巢癌组织中与癌旁组织、正常卵巢组织相比都较高,差异有统计学意义(P<0.05),p85α基因表达与卵巢癌的发病年龄关系差异无统计学意义(P>0.05),而与不同的临床分期、淋巴结的转移情况比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PI3K p85α基因的异常表达可以作为卵巢癌早期诊断和判断其生物学特性的指标。

PI3K-p85与Caspase-3在脂多糖/氨基半乳糖诱导小鼠急性肝损伤的实验研究

①目的观察凋亡标志蛋白在脂多糖/氨基半乳糖(LPS/GalN)诱导的小鼠急性肝损伤模型肝脏中表达、意义,探讨可能的信号转导通路。②方法小鼠急性肝损伤模型通过脂多糖(LPS)联合氨基半乳糖(GalN)腹腔注射诱导复制;实验分为损伤1、3、6小时组(腹腔联合注射LPS和GalN 0.2mL/只),对照组(只腹腔注射同等量的生理盐水);采用谷丙转氨酶/丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)试剂盒测血清ALT含量,苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏组织形态学变化,Western blot法检测肝脏组织PI3K-p85及Caspase-3蛋白表达水平。③结果与对照组比较,损伤1小时组ALT活性差异无统计学意义(P>0.05),3小时组ALT活性显著升高(P<0.05);损伤6小时组较损伤1小时组、损伤3小时组ALT活性均显著升高(P<0.05)。HE染色显示,损伤6小时组的肝脏结构紊乱,细胞核浓缩、深染明显增加。与损伤1、3小时组比较,损伤6小时组Caspase-3表达显著升高(P<0.05)而PI3K-p85表达明显降低(P<0.05)。与对照组比较,损伤1小时组PI3K-p85表达显著升高(P<0.05),而Caspase-3表达未明显升高(P>0.05)。④结论在肝损伤早期PI3K-p85表达增强而在肝损伤晚期PI3K-p85表达明显减弱,在肝损伤早期Caspase-3表达开始增强在肝损伤晚期Caspase-3表达最强,推测PI3K通路抑制、凋亡增强参与了晚期肝损伤过程。

PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU诱导大肠癌细胞凋亡的分子机制

目的:探讨PI3Kp85α蛋白表达缺失联合5-FU对大肠癌SW480细胞促凋亡作用的机制。方法:复苏培养PI3Kp85α干扰组SW480细胞(PI3Kp85ɑ/RNAi-SW480)和SW480对照组细胞,Western blot鉴定干扰效果,采用Western blot方法比较两组细胞中凋亡蛋白Bax、Bcl-6、Bim表达的差异。结果:Western blot结果显示SW480干扰组细胞PI3Kp85α蛋白抑制率为84%,5-FU刺激48h后,PI3Kp85ɑ/RNAi-SW480细胞组凋亡蛋白Bax、Bcl-6、Bim的表达较SW480对照组细胞显著增加(P=0.000)。结论:PI3Kp85α蛋白表达缺失联合5-FU可通过增加促凋亡蛋白的表达促进大肠癌SW480细胞凋亡,为进一步阐明大肠癌细胞恶性增值的分子机制打下基础。

纳米级PLA-P85-PLA两亲性共聚物的细胞相容性研究

检测新合成的用作口服胰岛素载体的纳米级PLA-P85-PLA两亲性共聚物的细胞相容性,为临床安全应用提供理论依据。根据所合成材料将来的应用领域,选用Caco-2细胞系为研究对象,采用快速评定细胞增殖率和细胞毒性的四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、中性红摄取(NRU)法和乳酸脱氢酶(LDH)释放法评价共聚物PLA-P85-PLA纳米粒的细胞毒性。结果表明,所合成的共聚物PLA-P85-PLA纳米粒在作用时间(12和24h)和浓度范围(5、10、20和50mg/L)内,对Caco-2细胞无毒性,且有一定的增殖促进作用。新合成的两亲性共聚物PLA-P85-PLA纳米粒无细胞毒性,具有良好的细胞相容性,可用作口服胰岛素载体,为进一步的动物实验提供基础数据。

PI3K p85α对大肠癌细胞侵袭及转移的影响

目的探讨PI3K p85α对人大肠癌细胞侵袭及转移的影响。方法将人大肠癌细胞株LoVo分为3组:空白对照组不给予任何干预措施,阴性转染组转染不含干扰载体的单纯慢病毒,干扰转染组转染包装有慢病毒干扰载体pLL-PI3K p85α-shRNA的质粒,对各组细胞进行伤口愈合实验、迁移实验及侵袭实验。结果转染pLL-PI3K p85α-shRNA之后,干扰转染组细胞PI3K p85α蛋白表达水平较阴性转染组明显下调;伤口愈合实验结果显示,干扰转染组大肠癌细胞愈合能力较空白对照组和阴性转染组下降;迁移实验、侵袭实验结果显示,干扰转染组大肠癌细胞迁移及侵袭能力较空白对照组和阴性转染组下降。结论 PI3K p85αsiRNA转染大肠癌细胞株LoVo,可抑制其侵袭及转移能力,PI3K p85α可能成为大肠癌基因治疗的靶点。