黑曲霉菌pyrG缺陷株的建立

运用紫外线照射致突变方法建立了黑曲霉菌ATCC 12 0 49,134 96和N40 2等 3种菌株的乳清酸核苷 5′ 磷酸脱羧酶基因 (pyrG)缺陷株。其中ATCC 134 96是一种蛋白酶缺陷株。含黑曲霉菌pyrG基因的重组质粒 pY 1.2可使它们发生转化 ,成为Pyr+ ,转化效率约为 8～ 40转化子 / μgDNA。这些

橙色红曲菌pyrG缺陷株的筛选及鉴定

[目的]筛选和鉴定橙色红曲菌pyrG缺陷株。[方法]以橙色红曲菌AS3.4384(Monascus aurantiacus)为出发菌株,运用紫外照射致基因突变,随后对尿嘧啶依赖型菌株的pyrG基因进行测序比对,筛选pyrG基因突变株,最后用含有米曲霉pyrG基因的pAOP互补质粒对其进行基因转化试验。[结果]经紫外诱变得到一株尿嘧啶依赖型的5-FOA抗性菌株UM28。扩增其pyrG基因并进行测序,发现UM28的pyrG基因在核苷酸序列+220bp的位置发生了突变,进而导致氨基酸水平上Pro→Ser的突变,造成了乳清苷-5'-磷酸脱羧酶的失活。UM28通过基因转化能够接受含有米曲霉pyrG基因的互补质粒恢复野生表型,且回复突变率低于10-8,能够用于红曲菌同源转化系统的构建。[结论]获得了一株红曲菌pyrG基因缺陷株UM28,它可被用作基因工程的受体菌。