运动性和高血压性心肌肥大肌浆网Ryanodine受体变化特征比较

目的：为进一步了解运动性和病理性心肌肥大重塑的不同特征，方法：采用３Ｈ－Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ配体结合方法，对游泳运动和压力负荷高血压心肌肥大大鼠心肌肌浆网Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ受体变化特性进行比较研究。结果：与对照组相比，大鼠行腹主动脉狭窄术后６周，血压和心系数分别升高６２％和４５％（Ｐ＜０．０１），心肌肌浆网每毫克蛋白高亲和最大结合（Ｂｍａｘ）降低４０％（Ｐ＜０．０１），低亲和／高亲和Ｂｍａｘ升高４２％（Ｐ＜０．０１），高亲和受体与配体的解离常数（Ｋｄ）值降低１１％（Ｐ＜０．０５），肌浆网Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性降低２７％。大鼠经１０周游泳训练，心系数增加３６％（Ｐ＜０．０１），肌浆网每毫克蛋白Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ受体高亲和Ｂｍａｘ增加２９％（Ｐ＜０．０１）；低亲和／高亲和Ｂｍａｘ值降低１５％（Ｐ＜０．０１），Ｋｄ值两组间变化无显著差异（Ｐ＞０．０５），肌浆网Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性提高１４％（Ｐ＜０．０１）。结论：运动性和高血压性心肌肥大时心肌肌浆网Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ受体变化特征相反，前者受体密度提高，亲和力不变，后者受体密度降低，高亲和位点亲和力降低。两者低亲和与高亲和位点间相互转化的规律可能不同。说明运?

Ryanodine受体Ser2815位点磷酸化状态的改变在心肌肥厚兔触发性室性心律失常中的作用

目的研究Ryanodine受体Ser2815位点磷酸化状态的改变在心肌肥厚兔触发性室性心律失常中的作用。方法将30只日本长耳兔随机分为3组:假手术组(Sham组)、心肌肥厚组(LVH组)、心肌肥厚+KN-93组(KN-93组),LVH组和KN-93组均通过缩窄腹主动脉建立兔心肌肥厚模型,Sham组仅游离腹主动脉不进行缩窄。8周后行超声心动图证实心肌肥厚形成,制备兔左室楔形心肌块的灌流模型,同步记录心内、外膜动作电位及跨壁心电图。KN-93组预先给予KN-93预灌,然后观察各组在异丙肾上腺素(1μmol/L)灌流和快频率程序刺激下触发活动和室性心动过速的发生率。灌流完毕后取左室心肌组织,应用Western blot检测各组心肌Ryanodine受体总量及其Ser2815位点磷酸化蛋白水平。结果 Sham组、LVH组和KN-93组触发活动的发生率分别为0/10、10/10、4/10,室性心动过速或室颤的发生率分别为0/10、9/10、3/10,KN-93组均较LVH组明显降低(均P<0.05);LVH组Ryanodine受体总量及Ser2815位点磷酸化蛋白水平较Sham组增加(均P<0.05),KN-93组Ser2815位点磷酸化蛋白水平较LVH组减少(P<0.05)。结论KN-93可通过降低Ryanodine受体Ser2815位点的磷酸化水平抑制肥厚心肌的室性心律失常,Ryanodine受体的过度磷酸化是触发性心律失常发生的重要机制之一。

自体骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后兔Ryanodine受体及其稳定蛋白表达的影响

目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对心肌梗死后兔ryanodine受体(RyR2)及其稳定蛋白(FKBP12.6)表达的影响,探讨MSCs移植治疗缺血性心力衰竭的机制。方法采用结扎冠状动脉前降支的方法制备新西兰白兔缺血性心力衰竭动物模型。利用密度梯度离心法和贴壁法获得MSCs,经5-氮胞苷诱导后,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)标记。移植后4 w,实时荧光定量RT-PCR法检测梗死边缘区RyR2和FKBP12.6 mRNA表达。采用超声观察术前及术后左心室射血分数(LVEF)的变化。结果与对照组比较,AMI组梗死边缘区心肌RyR2和FK-BP12.6 mRNA下降(P<0.05)。与AMI组比较,MSCs组梗死边缘区心肌RyR2和FKBP12.6 mRNA增加(P<0.05)。结论 MSCs移植使RyR2和FKBP12.6表达增加是治疗缺血性心力衰竭的机制之一。

不同频率慢性电刺激膈神经对兔膈肌骨骼肌型二氢吡啶受体_(α1)亚单位、ryanodine受体mRNA和蛋白表达的影响

测定不同频率慢性电刺激(chronic electrical stimulation,CES)膈神经5周后对兔膈肌钙释放单位中骨骼肌型二氢吡啶受体(DHPR)α1亚单位和ryanodine受体(RyrRs)的mRNA和蛋白表达水平的影响,探讨CES后兔膈肌钙释放单位结构组成的变化和可能的临床应用价值。封闭群日本大耳白兔30只,随机分为正常对照组、10、20、50和100 Hz,每组6只;以10和20 Hz为慢性低频电刺激组,50和100 Hz为慢性高频电刺激组。CES参数为波宽0.2 ms 3-6个波/次,45次/min,电压10-20 V。刺激时间2×2 h/日,每周刺激6 d,连续刺激5周。分别采用RT-PCR和免疫组织化学法测定兔膈肌骨骼肌型DHPRα1-亚单位和RyR1、RyR2和RyR3的mRNA和蛋白表达。结果显示:与对照组比较,慢性低频电刺激10和20 Hz组骨骼肌型DHPRα1-RyR2的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01),有低度的RyR2mRNA的表达出现;慢性高频电刺激50和100 Hz组骨骼肌型DHPRα1-RvR1的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01),未检测到RyR2mRNA的阳性表达。本实验提示慢性低频电刺激膈神经5周后,膈肌质膜上DHPR与RyRs之间的信号转导方式已从变构耦联为主转变为以Ca2+诱导Ca2+释放耦联为主。

Ryanodine受体2和肌集钙蛋白2基因突变与儿茶酚胺敏感性多形性室性心动过速

钙离子（Ca2＋）是人体内一种极其重要的信号分子,其主要功能是参与胞内及胞间信号转导、钙依赖蛋白酶活性的调节等[1]。在心肌细胞中,Ca2＋还参与心肌细胞兴奋-收缩偶联（excitation-contraction coupling,ECC）的调控并起重要作用[2]。

肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞Ryanodine受体亚型的变化

目的 查明大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)上Ryanodine受体 (RyR)的亚型并检测其在肺动脉高压 (PAH)时表达水平的变化。方法 采用大鼠一次性腹腔注射野百合碱 (monocrotaline ,MCT ,6 0mg·kg-1)复制PAH动物模型 ,RyR亚型的确定及其mRNA水平变化用RT PCR法测定 ,并应用Westernblot检测PAH大鼠RyR蛋白表达的变化。结果 大鼠PASMC只表达RyR 3个亚型中的Ⅱ亚型(RyR2 ) ,在PAH时RyR2的mRNA表达量 (以RyR2区带与β actin区带的密度百分比表示 )为 85 18%± 11 17% ,高于对照组 36 87%± 7 30 % (P <0 0 1) ,且RyR2蛋白水平亦升高 ,为对照组的 170 2 3 %± 45 34% ,(P <0 0 1)。结论 肺动脉平滑肌细胞存在RyR2亚型 ,其表达增强可能参与了PAH的发生。

兔骨骼肌ryanodine受体/钙释放通道的AFM研究

Ryanodine受体 (RyR)是位于细胞内质网膜上的钙释放通道 ,在肌细胞的兴奋 -收缩偶联中发挥重要作用。RyR难于结晶 ,以往主要是用电镜和计算机三维重组相结合的方法来获得其高级结构的信息。由于RyR结构庞大 ,易于水解 ,在提取的过程中需要加入外源性磷脂以保护其结构 ,而磷脂的存在对电镜的分辨率有影响 ,所以电镜研究的RyR在提纯过程中一般不添加外源性磷脂 ,这样得到的结构信息并没有反映RyR在生理状况下的真实情况。我们用原子力显微镜 (AFM)对RyR进行研究 ,经过了空气中RyR成像、液体中RyR成像、重组到脂双层中的RyR研究几个阶段 ,提供了RyR在接近生理条件下的结构信息 。

缺血再灌注对兔心肌肌浆网Ryanodine受体2功能的影响

目的 评价缺血再灌注 (I/ R)对心肌肌浆网 (SR)钙释放功能的影响 .方法 将 16只新西兰兔完全随机平分为对照组、缺血再灌注组 ;采用 langendorff离体心脏灌注模型 ;蔗糖密度梯度离心法制备心肌肌浆网 ;微孔滤膜过滤技术测定心肌肌浆网钙转运功能改变 ;半定量 RT- PCR检测相应蛋白质 m RNA表达水平改变 .结果 与对照组相比 ,缺血再灌组肌浆网摄钙增幅未见减少 ,而 Ryanodine受体 2 (RYR2 )m RNA表达水平明显减少 .结论 缺血再灌注后心肌肌浆网Ryanodine受体 2基因表达减少 ,然其总的释钙量未见减少 .

骨骼肌型ryanodine受体放射配基分析法的建立

目的 探讨骨骼肌型ryanodine受体 (RyR1)放射配基分析法的建立及适宜条件。方法蔗糖梯度离心提取骨骼肌肌浆网膜蛋白质组分 ,用3H ryanodine进行放射配基结合实验 ,观察RyR1与3H ryanodine结合的适宜条件。结果 ① 37℃恒温水浴下 ,0～ 6 0min内 ,3H ryanodine与骨骼肌肌浆网膜蛋白质的结合量迅速增加 ,90min时基本达平衡 ,90～ 12 0min内无明显变化 ;②3H ryanodine在1～ 30nmol·L- 1 ,匀浆蛋白质质量浓度为 0 .4～ 1.0g·L- 1 范围内 ,3H ryanodine与RyR1结合的效果最佳。结论 用3H ryanodine在适宜的条件下可建立RyR1放射配基分析法。

一种快速大量纯化骨骼肌Ryanodine受体的方法

Ryanodine受体1(RyR1)在骨骼肌细胞的兴奋收缩偶联过程中扮演重要角色,是肌质网快速释放Ca2+的通道.RyR1的结构研究需要大量的且纯度很高的蛋白.目前,文献中的方法不能一次性得到大量的纯化蛋白,因而不能满足结构研究的需要.通过运用肝素(heparin,HP)层析与羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)层析,可以在1d内纯化获得毫克级RyR1.SDSPAGE显示,RyR1纯度达95%以上.在透射电子显微镜下观察到RyR1是一个正方形的结构,形态类似儿童玩具风车.这些结果表明,该纯化方法获得的RyR1不仅纯度高而且结构完整.

Ryanodine受体在心力衰竭和心律失常中的作用

Ryanodine受体(ryanodine receptor,RyR)是肌浆网膜上的钙释放通道。钙释放失调在心力衰竭发展过程中具有关键作用。此外,RyR基因突变会导致肌浆网钙渗漏触发心律失常。因此,针对RyR已成为心力衰竭和心律失常治疗的一个新的策略。

检测重症肌无力患者血清Ryanodine受体抗体和干扰素-α抗体的临床意义——附89例报告

目的：探讨检测重症肌无力（myasthenia gravis，MG）患者血清Ryanodine受体抗体（Ryanodine receptor antibody，RyR-Ab）和干扰素-α抗体（interferon-dantibody，IFN-αAb）的临床意义。方法：采用ELISA法检测89例MG患者血清中的RyR—Ab和IFN-αAb的水平，比较MG患者伴有不同胸腺异常情况（胸腺瘤、胸腺增生、胸腺萎缩）或胸腺正常，不同年龄段（以40岁为界）的RyR—Ab和IFN-αAb阳性率。结果：MG伴有胸腺瘤患者中男性和年龄40岁以上者占绝对优势（分别占86％和82％），有别于其他患者；MG伴有胸腺瘤患者的血清RyR-Ab及IFN-αAb的阳性率分别为77％、64％，明显高于MG伴有胸腺增生患者（5％、5％）、MG伴有胸腺萎缩患者（1／6、1／6）、胸腺正常的MG患者（0.2％）（均为P〈0．01）；年龄41-72岁MG患者RyR．Ab的阳性率（32％）、IFN-αAb的阳性率（35％），均高于年龄17—40岁MG患者（13％、8％）（P〈0．01，P〈0．01，P〈0．05）。结论：检测MG患者的血清RyR—Ab和IFN-αAb有助于在MG患者中甄别出伴有胸腺瘤的患者。

Ryanodine受体和内源性调节蛋白的相互作用

Ryanodine受体(RyR)是细胞内分子量最大的离子通道,在调节各种细胞内钙信号转导方面扮演着重要的角色。在骨骼肌中,RyR和双氢吡啶受体共同参与肌细胞的兴奋-收缩偶联。同时,一些内源性蛋白(包括FK结合蛋白、钙调素、钙结合蛋白、junctin和triadin等)通过不同的方式,在不同的阶段与RyR结合,形成一个复杂的调控网络,协助RyR发挥正常生理功能,实现结构与功能的统一。

基于In-Cell Western对Ryanodine受体2检测方法的建立

In-Cell Western技术是基于近红外激光成像系统而开发的检测技术,可应用于大分子ryanodine受体2(Ry R2)蛋白的检测。本研究通过对In-Cell Western固定剂的选择、细胞通透化、封闭液的选择、抗体工作浓度和心肌细胞密度等方面进行优化,建立心肌细胞Ry R2蛋白检测的InCell Western方法,并分别用SGF和Verapamil以及免疫细胞化学技术对研究结果及方法进行了验证。优化后的In-Cell Western参数:H9C2细胞的种板密度选择1×104个/孔,选择甲醛作为固定剂,细胞经过Triton X-100洗脱液通透化处理,选择酪蛋白作为封闭液,选择1∶500稀释的Ry R2一抗工作浓度。应用优化的参数检测心肌细胞Ry R2蛋白,并用前期已被证明能显著提高心肌细胞Ry R2蛋白荧光值的土茯苓黄酮和Verapamil进行验证,同时与免疫组化方法检测心肌细胞Ry R2蛋白相比,检测结果一致。表明本文建立的In-Cell Western方法检测大分子功能蛋白Ry R2是可行的。

应用PCS和AFM研究单价阳离子和通道功能状态对兔骨骼肌ryanodine受体(钙释放通道)相互作用的影响

Ryanodine受体 (RyR)是位于细胞内钙库膜上的一种钙释放通道。对骨骼肌和心肌的肌浆网的电镜研究表明RyR在膜上相互连接在一起 ,形成大片规则的二维晶格排列。近年来理论模型和试验证据表明 ,排列在一起的RyR在通道打开和关闭时存在协同效应 ,即具有“门控偶联”的调控机制。研究RyR之间相互作用的基本规律及其调控因素对于深入了解这种机制具有重要意义。在我们的工作中 ,主要采用两种互补的手段 :光子相关光谱法(PCS)和原子力显微镜 (AFM)来研究溶液中RyR的相互作用。初步的研究主要集中在细胞内两种主要的单价阳离子Na+ 和K+ 。

Ryanodine受体结构和药理学性质

Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ受体（ＲｙＲ）是存在于细胞内钙库膜上的一种钙释放通道。在哺乳类动物中，ＲｙＲ存在三种亚型，即骨骼肌型（ＲｙＲ１）、心肌型（ＲｙＲ２）和脑型（ＲｙＲ３），它们分别由ｒｙｒ１、ｒｙｒ２和ｒｙｒ３基因编码。非哺乳类脊椎动物的ＲｙＲ有另外三种亚型，即同时存在于骨骼肌中的αＲｙＲ和βＲｙＲ，以及存在于心肌中的另一亚型。前两者在氨基酸序列上分别与ＲｙＲ１和ＲｙＲ３有较高的同源性。哺乳类和非哺乳类脊椎动物的许多细胞同时表达其中三类或两类ＲｙＲ亚型。本综述介绍ＲｙＲ各类亚型的分子结构及其药理学性质。

Ryanodine受体间相互作用及其与钙释放功能的关系(英文)

在真核生物和原核生物的生物膜上都存在由同种受体蛋白相互连接在一起形成的紧密二维排列。最近的模型计算表明这种排列方式可能是一种新型信号转导机制的结构基础,相邻受体可通过功能上的耦联优化信号处理性能。Ryanodine受体(ryanodine receptor,RyR)/钙释放通道通常在肌肉的肌浆网膜上形成二维晶格排列,该蛋白成为研究受体二维排列及其生理功能的一个很好的模型。本文综述了近几年在RyR相互作用及其二维排列工作模式和生理功能研究方面的进展,着重介绍了我们实验室利用新方法对RyR相互作用及其调控进行的研究工作。我们研究中发现了RyR功能状态对其相互作用的调控,本文对据此提出的RyR二维排列的“动态耦联模型”及其可能的生理功能进行了详细讨论。

阻断Ryanodine受体对兔儿茶酚胺敏感性室速模型心律失常发生的抑制作用

目的:观察阻断Ryanodine受体对兔儿茶酚胺敏感性室速(CPVT)模型心律失常发生的抑制作用。方法:将40只日本长耳兔随机分为4组:正常对照组、模型组、钙调蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-93组、Ryanodine受体阻滞剂兰尼碱组,每组10只。制备兔左室楔形心肌块的灌流模型,同步记录心内、外膜动作电位及跨壁心电图。正常组灌流台氏液,模型组灌流咖啡因和异丙肾上腺素建立CPVT模型,KN-93组和兰尼碱组预先给予各自药物预灌,然后灌流咖啡因和异丙肾上腺素,观察在快频率程序刺激下各组触发活动和室性心动过速的发生率。结果:对照组、模型组、KN-93(1μmol/L)和兰尼碱组(10μmol/L)触发活动的发生率分别为0/10、10/10、4/10和2/10,多形性室速或室颤的发生率分别为0/10、9/10、3/10、1/10;提示KN-93和兰尼碱均可减少CPVT模型的触发活动和室性心律失常的发生(均P<0.05)。结论:阻断Ryanodine受体能够有效抑制CPVT模型的触发性室性心律失常,Ryanodine受体有望成为防治该类心律失常新的重要靶点。

Ca^(2+)与Ryanodine受体在心肌收缩中作用的研究现状

Ca2 +与Ryanodine受体在心肌兴奋 收缩偶联过程中都起着重要的作用 ,本文就Ryanodine受体的结构、功能与其调节以及Ca2

骨骼肌肌浆网ryanodine受体/钙释放通道研究的新进展

着重介绍了骨骼肌内质网上ryanodine受体 /钙释放通道研究的新进展 ,即用原子力显微镜 (AFM)对RyR进行研究 ,经过空气中RyR成像、液体中RyR成像、重组到脂双层中的RyR研究几个阶段 ,提供了RyR在接近生理条件下的结构信息 ,并为进一步研究其结构和功能的关系打下了基础。上述先进的研究方法对运动人体科学的研究有相当的参考和应用价值。