黄瓜抗病基因类似序列(RGA)的同源性分析和Southern鉴定

使用ClustalW和DNAMAN3.0分析了本实验室克隆的15个黄瓜抗病基因类似序列(RGA)之间以及与烟草的N基因、亚麻的L6基因和拟南芥的RPS2基因之间的同源性,并对这些RGA进行了PCR和Southern验证与分析。结果表明:15个黄瓜RGA中,核苷酸序列同源性最高的是CsRGA2、CsR-GA4和CsRGA5,其次是CsRGA6、CsRGA7、CsRGA8和CsRGA9,CsRGA1和CsRGA3也存在较高的同源性;其余的RGA同源性较低。在氨基酸序列上也表现了相同的特征。与N、L6和RPS2等抗病基因的产物之间同源性最高46%,最低22%。根据核苷酸序列设计了15对特异引物,用PCR方法验证了所有黄瓜RGA的存在,其中CsRGA3在黄瓜品种间表现出多态性。利用特异引物PCR方法合成了15个黄瓜RGA的地高辛探针,与EcoRⅤ酶解的黄瓜‘215’、‘129’和‘L18’的基因组DNA进行Southern杂交,证实了各个RGA在基因组上的存在,同时发现,CsRGA9、CsRGA11～CsRGA15都是多拷贝,CsRGA3是单拷贝,其余为双拷贝。

多重实时PCR对宫颈癌组织及SiHa细胞株HPV-16病毒存在状态的检测

背景与目的:人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染与宫颈癌发生发展密切相关,高危型HPV病毒整合入宿主细胞是细胞转化及癌变的关键。病毒整合状态的检测对深入探讨宫颈癌发生发展机制及预测宫颈病变的转归有一定的临床意义。然而目前尚没有一种理想的能够用于各种临床标本的HPV存在状态的检测方法。本研究旨在探讨HPV-16存在状态的理想检测方法。方法:以HPV-16质粒为标准品,利用两种不同的荧光报告基团,采用多重实时PCR同管定量检测HPV-16E2和E6基因,根据E2和E6基因拷贝数的比值(E2/E6)来判定HPV-16的存在状态;对HPV-16阳性的宫颈癌SiHa细胞和27例宫颈鳞癌新鲜标本进行多重实时PCR与Southern杂交检测,将两种检测方法的结果进行比较。结果:(1)多重实时PCR所得到的HPV-16E2、E6标准曲线相关性好,相关系数均为1.00,扩增效率均在95%以上。(2)对系列稀释的HPV-16质粒进行重复检测,确定了E2/E6比值为1时该多重实时PCR检测系统的95%参考值范围为0.81～1.29,以0.81作为区分游离型和混合型HPV-16的界值。(3)多重实时PCR与Southern杂交检测均发现SiHa细胞中HPV-16呈整合型,27例鳞癌中22例获得了一致的检测结果,符合率为81.5%,Kappa值为0.844,P<0.001。结论:多重实时定量PCR是一种可靠的、便于临床应用的检测HPV-16病毒存在状态的方法,具有省时、简便快速、高通量的优点,并且能用于石蜡切片以及病灶较小、DNA含量少的宫颈癌前病变组织或宫颈细胞学标本。

ERIC-PCR鉴别苏云金芽胞杆菌与蜡状芽胞杆菌的研究

利用ERIC-PCR技术对苏云金芽孢杆菌(Bt)、蜡状芽孢杆菌(Bc)和对照菌基因组DNA进行扩增,回收、标记BtPCR扩增片段,分别与各菌株的基因组DNA进行斑点杂交和Southern杂交,筛选Bt标识序列。结果显示:Bt各菌株均可扩增得到250bp的特异片段;Bt和Bc均可得到600bp的共有扩增片段;以筛选得到的569bp片段为探针,可特异性地与Bt基因组DNA杂交;ERIC-PCR技术可以在DNA指纹图谱水平区分鉴别Bt与Bc菌,正确反映出两者的亲缘关系。结果表明ERIC-PCR技术在Bt的检测及在Bt与Bc的鉴定中具有较强的实用性。

外周血甲胎蛋白mRNA和白蛋白mRNA在评估肝癌微小转移中的比较研究

目的 探讨肝病患者外周血甲胎蛋白mRNA(AFPmRNA)和白蛋白mRNA(ALBmRNA) ,作为肝癌微小转移标志物的特异性。方法 提取患者和健康志愿者的外周血单个核细胞总RNA ,进行RT PCR ,扩增产物再进行Southern杂交。结果 原发性肝癌 (HCC)组外周血AFPmRNA的检出率为 4 1.4 % ,对照组为 0 % ,差异显著 (P <0 .0 5 ) ;HCC组外周血ALBmRNA的检出率为4 4 .8% ,对照组为 2 9.2 % ,二者差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 作为肝癌微小转移的标志物 。

重组质粒pcDNKCpG在动物体内分布、残留及水平传播检测

通过肌肉注射的途径将重组质粒pcDNKCpG导入到鸡和猪体内，提取不同时间段的动物组织DNA，特异性的PCR扩增结果提示重组质粒pcDNKCpG主要分布在鸡和猪的血液和注射部位肌肉中，残留时间分别不超过16天和8天；凝胶电泳回收的组织DNA经过酶切、电泳和转膜后的Southem检测表明，重组质粒pcDNKCpG没有整合到鸡和猪的任何组织DNA中去；地高辛标记的CpG核酸探针的Southem检测结果显示重组质粒pcDNKCpG没有整合入宿主的基因组中；特异性的PCR扩增结果证实重组质粒pcDNKCpG没有转移到其他的环境微生物中去。因此，重组质粒pcDNKCpG具有良好的生物安全性。

玉米基因枪转化Bt基因的研究

以玉米自交系A188为试材,将含有Bar基因和Bt基因的质粒pBW3导入玉米幼胚内,获得了转基因抗性苗。抗性植株点杂交及Southern杂交结果显示,该基因已整合到抗性玉米植株体内,外源基因在玉米基因组内有4个拷贝。

羊驼核糖体蛋白S5(RPS5)基因与绒毛生长发育的研究

利用southern blotting技术从羊驼皮肤cDNA文库中筛选出核糖体蛋白S5(RPS5)基因,对该基因进行测序,通过对羊驼RPS5基因的序列结构特点及编码氨基酸与其它哺乳动物的进行比较分析,从而发现羊驼RPS5基因的特性;并对序列进行生物信息学分析,确定基因发挥功能的特殊结构域,进而对羊驼RPS5基因的功能进行分析研究,为以后的相关研究奠定基础。

水牛SRY基因的克隆及序列分析

根据荷斯坦牛SRY基因设计一对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)技术,以中国沼泽型水牛(Swamp Buffalo)基因组DNA为模板,扩增得到SRY(Sex deterimation region of Y chromosome)全序列约2005bp,其中1-504bp为5’启动子区,1196-2005bp为3’侧翼序列,在505-1195bp为SRY的外显子,编码229个氨基酸。在SRY HMG-box区域设计探针,用地高辛标记后分别与雄性、雌性水牛基因组DNA进行Southern杂交,结果显示该段序列只在雄性DNA样本中有杂交信号,证明SRY基因为雄性特异。BLAST比对结果显示与牛属动物SRY基因的同源性为96％,其中SRY基因HMG box区域同源性高达99％,说明SRY基因具有高度的进化保守性。

Overview of Southern Blight in Chinese Medicinal Plants

The pathogen of southern blight, distribution and host species, damage symptoms and infection cycle, and the pathogenic mechanisms are introduced. Based on the introduction, the major factors affected the incidence of medicinal plants such as climatic conditions, soil conditions and cultivation conditions, etc. are further summarized, and the studies on the control of southern blight in Chinese medicinal plants are summarized from the aspects of agricultural control, biological control and chemical control, etc.

人乳头瘤病毒核酸检测技术进展及其应用

当今,随着分子学生物技术的不断发展,人们用于人乳头瘤病毒检测的手段也越来越多,其中核酸检测主要包括第2代杂交捕获、聚合酶链反应、原位杂交、Southern杂交和斑点杂交等方法.临床应用的有第2代杂交捕获和荧光定量聚合酶链反应.第2代杂交捕获法为一种半定量方法,是目前美国食品与药物管理局唯一批准能够在临床使用的人乳头瘤病毒DNA检测技术.该法具检测效能高,并可对人乳头瘤病毒进行高危型和低危型分析,为临床人乳头瘤病毒(特别是高危型人乳头瘤病毒)感染的早期诊断和监测提供了新的手段.

2株霍乱毒素（CT）阴性霍乱弧菌的分子生物学检验

近年来，分子生物学技术越来越多地应用到霍乱弧菌的研究中，用于从分子水平上区分菌株的类型，研究菌株的变异以及菌株之间的关系，追踪传染源，进行快速鉴定和监测等方面。本文采用分子杂交方法，对两株不同来源的霍乱弧菌进行了研究，用ctxA基因探针分别进行原位杂交和Southem杂交，确定为CT基因阴性株；采用16s rRNA基因探针检测限制性图谱(GRP)，

动态突变的研究进展

本文就一种新的突变方式——动态突变的类型和分子生物学检测方法等的研究进展作一综述,旨在进一步研究某些遗传病症提供理论依据。

煤层气解吸阶段划分方法及其意义

为了定量分析煤层气解吸特征对产能的影响,基于兰格缪尔等温吸附理论,建立了煤层气解吸阶段划分方法,并通过煤层气开发实例分析了方法的指示意义。引入解吸效率定量表征不同压力下的煤层气解吸速率。根据数学曲线上的关键节点,定义了启动压力、转折压力与敏感压力;不同煤样3个关键压力点的解吸效率为定值,据此将煤层气解吸过程划分为低效解吸、缓慢解吸、快速解吸与敏感解吸4个阶段。研究表明:快速与敏感解吸阶段对煤层气井产能贡献很大,低效与缓慢解吸阶段则很小;煤层吸附能力、含气性和储集层压力是影响煤层气解吸特征的关键因素。沁南和柳林地区煤层气开发现状表明建立的解吸阶段划分方法可以有效指导煤层气开发。

杭州湾南岸大桥建设区域潮间带大型底栖动物功能群及营养等级的季节动态

2006年5月至2007年1月在杭州湾南岸跨海大桥附近潮滩共采集到32种大型底栖动物,根据其食性类型划分为5种功能群。用功能群方法对这些物种生境变化的关系进行了分析,结果表明:大型底栖动物各多样性指数在潮带间差异显著,季节间则只有Margalef种类丰度(S)和Shannon-Wiener指数(H′)存在显著性差异;各功能群密度在季节间均不存在显著性差异,而在潮带间除了浮游生物食者外,其它类群均存在显著性差异;肉食者的种类数在潮带间不存在显著性差异,而在季节间存在显著性差异,其它功能群刚好相反。滩涂大型底栖动物群落主要包括4个营养级别,各营养级的构成密度在季节间差异不显著,在潮带间则差异显著;各营养级种类数是处于第四级的肉食者季节间差异显著,潮带间变化不显著,处于第二、三营养等级的功能群则正好相反。底栖动物功能群多样性综合反映了杭州湾南岸大桥建设区域潮间带大型底栖动物群落变化情况。

基于物质量评估的贵州南部地区生态系统服务及其县域差异比较

以贵州南部地区为例,对涵养水源、固碳释氧、净化大气环境、保育土壤和生物多样性保护5个功能类别共14项指标的生态系统服务物质量进行了区域尺度和县域尺度上的估算。结果表明：（1）贵州南部地区林草生态系统年调节水量145.41×10~8m^3,年固碳量和年释氧量分别为819.96×10~4t和1 538.48×10~4t,年提供负离子达2.32×10^（25）个,年吸收二氧化硫（SO_2）、氟化物（F）、氮氧化物（NO_X）分别达到58.07×10~4t、1.29×10~4t和7.76×10~4t,年滞尘量1.04×10~8t,年固土总量9.07×10~8t,年保育N、P、K以及有机质量分别为184.81×10~4t、59.26×10~4t、1 138.80×10~4t以及4 045.85×1~04t,平均生物多样性综合评价指数为54.87;（2）各类生态系统服务物质量均表现出明显的空间分布趋势,整体表现为东高西低,南高北低;（3）县域尺度上,黎平县、榕江县、从江县和望谟县提供的生态系统服务物质量最多,普定县、三穗县、长顺县和丹寨县则最少;就生态系统服务供给能力而言,雷山县、望谟县、榕江县和从江县最强,兴仁县、普定县、长顺县和贞丰县则最弱。

四川盆地南部深层五峰组—龙马溪组裂缝孔隙评价

根据川南坳陷中部和北部5口评价井资料,对四川盆地南部深层上奥陶统五峰组—下志留统龙马溪组海相页岩进行裂缝孔隙的多方法识别和定量评价,初步揭示了川南坳陷深层五峰组—龙马溪组页岩储集特征。形成4点认识:(1)在川南坳陷中部深层,无论是局部构造高点、翼部还是低部位,五峰组—龙马溪组产层储集空间均以基质孔隙为主,微裂缝总体不发育,与长宁、威远和涪陵气田的基质孔隙相近;(2)在川南坳陷北部深层,五峰组—龙马溪组黑色页岩段以基质孔隙为主,裂缝孔隙主要分布于局部不连续的深度点,总孔隙度为3.5%~6.7%,平均值为5.3%,裂缝孔隙度为0~2.1%,平均值为0.3%;(3)川南坳陷中部和北部五峰组—龙马溪组产层裂缝孔隙欠发育,并以大面积基质孔隙型为主,间接说明该地区构造活动相对较弱,对页岩储集层改造作用不及四川盆地东部涪陵地区;(4)寒武系膏盐岩的发育规模与分布特征是五峰组—龙马溪组裂缝孔隙发育的关键控制因素。研究认为,L7井区、Gs1井区、四川盆地东部、鄂西等地区寒武系膏盐层厚度大且分布稳定,五峰组—龙马溪组"甜点层"在燕山期以来的盐底滑脱构造中易形成裂缝孔隙发育段,是川南坳陷及其周边深层裂缝孔隙发育的潜在有利地区。

南方电网“十一五”城市供电可靠性规划

在分析南方电网各主要城市供电可靠性历史数据的基础上,结合各城市电网所处的发展阶段以及城市经济发展情况,综合应用基于历史数据的供电可靠性趋势预测方法和考虑相关影响因素的供电可靠性预测方法,对"十一五"期间南方电网各主要城市年度供电可靠性指标进行了预测,根据相关原则并结合电网的具体情况综合考虑确定合理的供电可靠性目标值。提出了实现供电可靠性目标的技术措施和管理措施,旨在引导城市供电企业的合理投资,提升南方电网各主要城市的供电可靠性水平。

长江口及南黄海水域春季生物摄食生态的稳定同位素研究

根据长江口及毗邻南黄海水域多种生物的碳稳定同位素比值,计算其摄食生态类型,结果表明,一些生物的摄食生态类型计算结果存在时空与计算方法差异,其原因是生物的食性存在季度或年际上的时间变化,并会随栖息环境的变化而相应发生改变;统一稳定同位素法与胃含物分析法计算生物摄食生态的判断类型后,2种方法计算的结果基本一致,24种共有生物有21种生物的判断结果一致,推断稳定同位素法计算生物摄食生态类型可行。