高等中医药院校附属医院科研实验室建设

高等中医药院校附属医院科研实验室建设是中医院建设的重要组成部分。本文结合我校附属医院科研实验室建设实践,就如何进行中医院科研实验室建设进行了探讨,提出了实验室规划先行,构建实验共享平台,开放实验室,以评促建、评建结合、重在建设等措施。

口腔给药系统研究进展及其在中医药中的应用

从口腔给药特点、药物在口腔的吸收、口腔给药的新剂型等方面,综述近年来口腔给药系统的研究进展及其在中医药中的应用,以期为中药新剂型的开发提供新思路。

细胞自噬研究的策略、方法及其在中医药干预非酒精性脂肪性肝病机制中的研究现状与前景

探讨细胞自噬研究的策略、误区、技术方法及优选方案,以及自噬在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的调控机制,并阐述中医药干预NAFLD的自噬机制研究现状。认为自噬在NAFLD发病(以初期为主)及治疗过程中可发挥肝细胞保护作用,并在一定程度上延缓病情的发展,自噬的这种保护效应也可能是中医“已病防变”治未病思想在中药微观效应机制中的体现。自噬目前在中医药干预疾病的机制研究领域方兴未艾,具有广阔的研究前景,但也存在有待突破的瓶颈。或可在中药标准化建设取得阶段性成果的基础上,通过开发新的中医药体外研究技术,结合高通量生物信息采集和前沿生物分析技术,取得自噬研究在中医药领域的新进展。

核磁共振成像在中医药领域中的应用研究进展

核磁共振成像(MRI)可以观察人体内部各生理病理器官组织,对于中医药传统"司外揣内"认识人体的方法是一个根本性的补充。近年应用MRI分型辨证研究发现,腰椎盘突出症、膝骨性关节炎、颈椎病、股骨头坏死、乳腺癌、乳腺炎、中风等疾病的各种证型之间体内局部形态结构变化不同,尤其是实证和虚证之间差异明显;中药复方疗效应用MRI可以更加直观地观察体内结构形态的变化;中医针刺危险穴位应用MRI弥补了为避免损伤重要脏器不能在活体试验的不足;应用功能性核磁共振成像(f MRI)发现,针刺不同经络上的穴位可以重叠激活相同的脑区域。功能性核磁共振成像可更广泛地观察机体各种组织结构的功能变化,可能是今后中医辨证和疗效判定的研究方向。

应用中医舌面一体检测系统对上海地区健康人群四季面色变化定量分析

目的:对上海地区健康人群四季面色变化进行量化客观化研究。方法:应用舌面一体检测系统,观察上海地区健康人群四季面色特征。结果:四季面色R、G、B值结果显示G-B值秋季稍高,秋季与冬季G-B值有统计学意义(P<0.05),说明秋天面色偏于黄色;L、a、b值结果显示夏季a值最高,夏季与春季a值存在显著性差异(P<0.001),夏季与秋季a值存在显著性差异(P<0.001),说明夏季面色以红色为特点;b值春季较高,春季与夏季b值存在显著性差异(P<0.001),春季与冬季b值存在显著性差异(P<0.01),提示春天面色偏青;冬季面色L值最低,冬季与秋季L值有统计学意义(P<0.05),提示冬季面色较暗,面色偏于灰黑色。结论:证实面色随季节更替是存在一定规律变化的,且以客观测量和定量分析方法验证了中医学认为"人体面部色泽四季之间有一定变化"的理论。

PBL教学法在大学生中药化学科创实验中的应用

"以问题为基础"的教学模式强调学习者必须从现实的环境中去学习和理解知识,并最终达到解决问题的目的。中药化学科创实验的指导过程与现实的解决问题的过程极为相似,因此,采用PBL教学法引导大学生开展科创实验具有较强的可行性和独特性。在此从大学生对科创项目内容的设计、方法的选择和问题的解决及教师对科创项目教学方法和目标的设计等方面对PBL教学法在中药化学科创实验中的应用进行分析,并对教师在PBL教学法中的角色定位作深刻思考。

虚拟现实在实验动物行为分析中的应用进展

虚拟现实(virtual reality,VR)是一种通过计算机进行场景模拟的新兴技术,近年来已经成为动物行为分析的可靠工具。动物行为对动物生存至关重要。动物行为分析为遗传学、生态学、神经科学、经济学以及机器人科学等领域的科技进步提供了有用信息。动物行为分析可分为刺激独立于动物对刺激的反应的开环研究,以及刺激根据动物的实时运动进行调整的闭环研究。本文首先梳理了动物行为分析的起源、概念和应用领域,回顾了传统技术条件下以视觉刺激为代表的动物行为开环研究的不足;然后以视觉、嗅觉、触觉、听觉刺激为例,分析了虚拟现实技术条件下的动物行为分析系统能够将精确的实验控制与复杂的实验动物行为相结合的可行性,完成了真实物理世界的实验方法无法实现的闭环研究;最后对虚拟现实发展为高级模拟及虚拟动物的前景进行了展望。

医药高等院校虚拟实验开展分析

通过对264所医药院校使用虚拟实验平台情况统计分析,从线上实验覆盖面、学生使用情况、高校组织教学、平台建设现状,总结现阶段高校和学生对信息化教学的不同需求,观察高校信息化教学开展现状,探索虚拟实验平台使用。发现医学院校虚拟实验普遍开展仿真中心建设和辅助教学应用,985、211和双一流院校的人均学习时长普遍高于其他院校,反映其良好的线上组织教学。目前开设的581个实验项目中,基础医学投入建设最多;临床医学、护理学、药学模块虽然建设内容较少,但使用率高,使用热度较高的项目包括分子生物学模块中的PCR和Western Blot,实验动物学中的家兔基本操作和实验室基本操作中移液枪的使用。目前实验项目建设内容存在不平衡,基础实验设计远多于综合性实验,各高校在推进信息化教学工作时,也应优化已有资源,关注组织教学管理及学习效果评价。

交泰丸对高脂饮食诱导肥胖小鼠血脑屏障损伤的影响及机制研究

目的研究交泰丸对高脂饮食诱导的肥胖小鼠大脑皮质血脑屏障的影响。方法将小鼠随机分为正常组(15只)和造模组(45只),高脂饮食喂养8周进行造模,以造模组体质量平均值高出正常组体质量的20%,视为小鼠肥胖模型建立成功。将造模成功的小鼠随机分为模型组、交泰丸组和阳性药组(二甲双胍),每组15只。给药4周后检测体质量及空腹血糖(FBG)水平,免疫荧光检测大脑皮质中紧密连接蛋白Claudin-5、ZO-1以及血管外渗IgG的表达;分离大脑皮质血管后采用Western blot法检测RhoA、ROCK2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠体质量和FBG水平升高(P<0.01),大脑皮质血脑屏障紧密连接受损,Claudin-5、ZO-1表达降低(P<0.01),血管外渗IgG表达升高(P<0.01),RhoA、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,二甲双胍组和交泰丸组小鼠体质量和FBG水平降低(P<0.05),大脑皮质血脑屏障紧密连接形态改善,且Claudin-5和ZO-1表达升高(P<0.05),血管外渗IgG表达降低(P<0.01),RhoA、ROCK2蛋白表达降低(P<0.05)。结论交泰丸能够改善高脂饮食诱导肥胖小鼠大脑皮质中紧密连接结构和血脑屏障功能,其机制与抑制RhoA/ROCK2信号通路有关。

橘皮竹茹汤对化疗性异食癖大鼠模型5-羟色胺3受体蛋白和mRNA表达的影响

目的观察橘皮竹茹汤对化疗性异食癖大鼠模型止呕作用及对5-羟色胺3受体(5-HT3R)蛋白和mRNA的影响。方法将36只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、中药对照组(橘皮竹茹汤10.6 g/kg,不造模)、模型组、昂丹司琼组(2.6 mg/kg)、橘皮竹茹汤低剂量组(5.3 g/kg)和橘皮竹茹汤高剂量组(10.6 g/kg),每组6只。各组大鼠给予相应干预措施6 d(每日2次)后,采用腹腔注射顺铂(6 mg/kg)的方式诱导建立化疗性异食癖大鼠模型,观察并记录造模后24 h内大鼠体质量、摄食量和高岭土摄入量的变化。继续干预1 d后,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠胃窦、回肠组织形态学变化;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测延髓、回肠组织中5-HT3R、色氨酸羟化酶(TPH)、单胺氧化酶A(MAOA)mRNA表达;Western blot法检测延髓组织中5-HT3R蛋白的表达。结果①与正常对照组比较,模型组大鼠体质量、摄食量降低(P<0.05),高岭土摄入量显著增加(P<0.05);与模型组比较,昂丹司琼组和橘皮竹茹汤低、高剂量组大鼠高岭土摄入量显著降低(P<0.05)。②HE染色显示,与正常对照组比较,模型组胃窦组织上皮细胞受损,固有层腺体排列疏松、紊乱,回肠上皮部分缺失,腺体排列紊乱;与模型组比较,昂丹司琼组和橘皮竹茹汤低、高剂组胃窦和回肠组织病理改变减轻。③RT-qPCR结果显示,与正常对照组比较,模型组大鼠延髓、回肠5-HT3R mRNA表达水平显著升高(P<0.05),回肠MAOA mRNA表达水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,橘皮竹茹汤高剂量组大鼠延髓5-HT3R mRNA表达水平明显降低(P<0.05),橘皮竹茹汤低剂量组回肠TPH1 mRNA、橘皮竹茹汤高剂量组延髓TPH2 mRNA表达水平明显降低(P<0.05),昂丹司琼组、橘皮竹茹汤低剂量组、橘皮竹茹汤高剂量组回肠MAOA mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。④Western blot结果显示,与正常对照组比较,模型组大鼠延髓5⁃HT3R蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,橘皮竹茹汤高剂量组大鼠延髓5-HT3R蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论橘皮竹茹汤可以通过抑制延髓5-HT3R蛋白和mRNA的表达,调控5-羟色胺合成与代谢相关酶,进而改善化疗导致的恶心呕吐。

栀子金花汤对脓毒症大鼠肠黏膜屏障及相关炎症因子的影响

目的 探究栀子金花汤对CLP致脓毒症大鼠模型肠黏膜屏障损伤和炎症因子的影响。方法 大鼠随机分为假手术组、模型组和栀子金花汤低、中、高剂量组(6、18、36 g/kg),采用CLP盲肠结扎穿孔技术建立脓毒症大鼠模型,造模后给予相应剂量药物干预3 d。给药结束后,HE染色观察回肠组织病理结构变化,透射电子显微镜下观察回肠上皮细胞和相关连接结构,ELISA法检测血清和局部回肠段相关炎症因子水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠脓毒症评分升高(P<0.01),肠绒毛排列紊乱,黏膜层出现炎症细胞浸润灶,肠上皮细胞结构破坏,微绒毛大量脱落,连接结构疏松不明;血清和回肠组织DAO水平和促炎因子TNF-α、IL-1β水平升高(P<0.01),血清抗炎因子IL-10水平降低(P<0.05)。与模型组比较,栀子金花汤中、高剂量组大鼠脓毒症评分降低(P<0.01),肠绒毛相对整齐,炎症浸润灶面积减少,肠上皮细胞结构相对完整,连接结构相对正常,血清IL-1β水平降低(P<0.01),血清和回肠组织DAO、TNF-α水平降低(P<0.05,P<0.01),IL-10水平升高(P<0.05,P<0.01);栀子金花汤低剂量组血清DAO、IL-1β水平降低(P<0.01),IL-10水平升高(P<0.01)。结论 栀子金花汤可以通过维持肠黏膜屏障结构的完整性,调节血清和局部回肠组织的炎症反应,发挥对CLP致脓毒症大鼠的改善作用。

中药挥发油治疗炎症性肠病的药理研究进展

炎症性肠病以慢性复发性肠道炎症为特征,其发病机制复杂,临床用药副作用较大,治疗效果不持久。中药治疗疾病具有多靶点、多途径的特色,中药挥发油以萜类为主要活性成分,报道表明其在治疗炎症性肠病方面显示出抗炎及上皮屏障修复的多种治疗优势,但其药效成分及具体作用机制还需深入研究。因此,本文从临床治疗药物不足出发,基于中医主要的病机及治则,对理气类、温里类、芳香化湿类、清热凉血类中代表性挥发油的药理作用进行归纳分析,旨在为中药挥发油深入机制探索及合理联合应用提供思考。

UPLC-MS/MS法同时测定养血软坚胶囊中17种成分的含量

目的建立UPLC-MS/MS法同时测定养血软坚胶囊中芹糖甘草苷、芍药内酯苷、獐牙菜苦苷、没食子酸甲酯、苯甲酰芍药苷、獐牙菜苷、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、异甘草素、马钱苷酸、甘草素、没食子酸、芍药苷、氧化芍药苷、龙胆苦苷、甘草酸、异甘草苷、甘草苷的含量。方法分析采用Waters BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相2 mmol/L乙酸铵(含0.1%甲酸)-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;负离子扫描;多反应监测模式。结果17种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9996),平均加样回收率91.33%~104.03%,RSD 1.58%~3.50%。结论该方法快速、准确、稳定,可用于养血软坚胶囊的质量控制。

中医舌诊的客观化研究

千百年来,中医舌诊只能凭医生肉眼观察,靠经验辨证,这不仅影响中医的继承,而且影响中医的提高和发展,因此迫切需要实现中医舌诊的标准化、客观化。随着中医现代化研究的进一步开展,以现代科学技术手段研究舌诊,使其定量化、客观化、标准化,已成为舌诊研究的主要方向。本研究以舌诊的计算机自动识别过程为主线,对舌诊客观化中涉及的舌象采集、舌象分割及舌象特征分析等技术进行了探讨。

CCl_4大鼠肝硬化成型阶段中医方证病机的研究

目的基于肝硬化中医基本证候病机的认识及中医“以方测证”的思维方法,探讨下瘀血汤、茵陈蒿汤、一贯煎、黄芪汤对CCl4大鼠肝硬化成型阶段的干预作用及方证病理基础。方法首次以CCl43ml/kg皮下注射,以后以50%CCl4橄榄油溶液2ml/kg皮下注射,每周2次;第9周开始随机分为模型对照组及下瘀血汤、茵陈蒿汤、一贯煎、黄芪汤与小柴胡汤等5个干预治疗组;干预治疗的同时继续造模至12周末取材。观测肝功能、肝组织病理学、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量变化。结果(1)模型大鼠8周时呈典型的慢性肝损伤肝纤维化的病理改变,12周时已形成肝硬化。(2)与模型对照组大鼠比较,下瘀血汤组和一贯煎组肝组织病理改变明显减轻,肝组织Hyp含量显著下降,肝功能显著改善,其中尤以下瘀血汤的改善作用为著;一贯煎的特点是提高血清白蛋白(Alb)含量。结论CCl4大鼠肝硬化成型阶段病理变化的主要矛盾———肝内纤维结缔组织的快速增生以及由此引起的组织结构改建是下瘀血汤发挥作用、血瘀阻络方证病机的病理基础;而此阶段的肝实质严重受损,是一贯煎发挥效应、肝阴虚损方证病机的又一病态表现。

丹参酚酸B对实验性肾间质纤维化大鼠的保护作用及其机制

目的:探讨丹参酚酸B(Salvianolic-acid B,SA-B)对单侧输尿管结扎(Unilateral Ureteral Obstruction,UUO)所致的肾纤维化大鼠的作用和机制。方法:雄性SD大鼠18只,随机分成3组,每组6只。单侧输尿管结扎建立肾间质纤维化动物模型。SA-B治疗2 w后,光镜、电镜下观察肾组织病理改变;Western blot和免疫组化法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和E-钙依赖性黏附素(E-cadherin,E-cad)的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠光镜下观察肾间质中大量细胞浸润,部分小管扩张,同时部分小管萎缩;电镜下观察肾小管上皮细胞结构松散,混浊,肾间质显著增宽,间质细胞增多;α-SMA蛋白表达显著增加(P<0.01),E-cad蛋白表达显著下降(P<0.01)。SA-B干预后,上述病理改变显著轻于模型组,α-SMA蛋白表达显著下降(P<0.05),E-cad蛋白表达略有上升(P>0.05)。结论:SA-B通过抑制α-SMA蛋白表达,维持上皮细胞的表型,延缓肾纤维化的发生。

慢性胃炎中医湿证血清蛋白组学研究

目的:对慢性胃炎湿证患者血清蛋白组学进行分析,并探讨慢性胃炎湿证的微观信息。方法:采用表面增强激光解吸离子化蛋白质芯片分析仪对18例慢性胃炎湿证、17例非湿证患者及8例正常人血清蛋白质表达谱进行研究。结果:慢性胃炎湿证患者蛋白质表达谱质荷比为3.2 kD、6.4 kD、8.1 kD,出现高表达趋势,其波峰基本在10个单位以上;非湿证患者与正常人上述波谱峰呈低表达趋势,非湿证患者波峰基本在10个单位左右或以下;正常人波峰基本在5个单位以下。结论:血清蛋白组学分析对探索慢性胃炎湿证的生物学理论基础有一定意义。

祛瘀和养阴不同功效中医经典方剂抑制CCl_4诱导大鼠肝硬化的作用机制

探讨了祛瘀的下瘀血汤和养阴的一贯煎抑制CCl_4诱导的大鼠肝硬化形成的不同作用机制．采用方法为给大鼠先皮下注射CCl_4 3 mL/kg,然后注射50%CCl_4橄榄油溶液2 mL/kg,每周2次,第9周开始随机将大鼠分为模型对照组、下瘀血汤组及一贯煎组,药物干预的同时继续CCl_4诱导建立大鼠肝硬化模型,至12周末取材．检测指标为：肝组织病理学；肝组织羟脯氨酸含量；肝组织α-SMA,CD68,MMP-13,TIMP-1,TIMP-2蛋白表达；MMP-2,MMP-9的活性；肝细胞凋亡指数及Caspase-12,HGF_α蛋白表达．结果显示：(1)与正常大鼠比较,模型大鼠8周时α-SMA,CD68,TIMP-1蛋白表达显著增加,12周时显著高于8周模型对照组；MMP-13,HGF_α,TIMP-2蛋白表达逐渐降低,各时间点相互比较具有显著性差异；MMP-2,MMP-9活性4周时显著升高,8周时较4周略有升高,12周时显著高于8周模型对照组；肝细胞凋亡指数,Caspase-12蛋白表达量逐渐增加,且各时间点比较均具有显著性差异．(2)与同期模型对照组比较,干预组MMP-9活性及MMP-13,TIMP-2,HGF_α蛋白表达量均显著增加,其中下瘀血汤组MMP-9,MMP-13显著高于一贯煎组,一贯煎组TIMP-2,HGF_α显著高于下瘀血汤组；干预组MMP-2活性,TIMP-1蛋白表达显著降低,且一贯煎组显著低于下瘀血汤组；一贯煎组肝细胞凋亡指数,Caspase-12蛋白表达量显著减少．由此得出结论：祛瘀的下瘀血汤和养阴的一贯煎均可有效地抑制CCl_4诱导的大鼠向肝硬化发展,下瘀血汤的主要作用在于提高MMP-9的活性及MMP-13的蛋白表达,其祛瘀作用的主要机制是促进胶原纤维的降解；而抑制肝细胞凋亡和肝星状细胞的活化是一贯煎养阴的主要作用途径．

基于血清蛋白组学的慢性肾衰中医不同证型的研究

目的:探讨慢性肾功能衰竭中医不同证型的血清蛋白质谱的变化及生物学基础。方法:收集慢性肾功能衰竭患者83例及正常人36例并辨证分型,采用SELDI-TOF蛋白芯片技术对不同证型的血清蛋白质表达谱进行研究。结果:在慢性肾衰中医各证型的整体研究中,17个蛋白峰有显著差异(P<0.001),通过层次聚类分析显示中医各证型之间聚类性质差异较小;通过对中医不同证型作两两比较发现,脾肾气虚组与脾肾阳虚组之间得到2个差异蛋白峰(P<0.01),脾肾气虚组与阴阳两虚组得到4个差异蛋白峰(P<0.01),脾肾气虚组与脾肾气阴两虚组之间得到5个差异蛋白峰(P<0.01),脾肾阳虚组与阴阳两虚组之间得到4个差异蛋白峰(P<0.01),脾肾阳虚组与脾肾气阴两虚组之间得到4个差异蛋白峰(P<0.01),阴阳两虚组与脾肾气阴两虚组之间得到2个差异蛋白峰(P<0.01);运用PCA分析显示,各证型组之间的差异蛋白峰能较好把各组相区分。结论:采用SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术分析慢性肾功能衰竭中医不同证型血清蛋白质谱变化对探讨中医证型的生物学基础具有一定的意义。

中医心系问诊量表的研制及评价

目的:研制中医心系问诊量表,初步探讨中医问诊的规范化研究方法。方法:运用量表制作方法,以中医理论为指导,在文献梳理的基础上,研制中医心系问诊量表。借助频次、Delphi法和卡方检验等多元统计学方法筛选症状,反复修改心系问诊量表,并进行重测信度、内部一致性信度和内容效度等评价。结果:中医心系问诊量表主要包括基本信息、主诉、现病史(伴随症状)和既往史,并附望、切诊信息及中西医诊断结论。其中一般问诊包括寒热、汗、头身胸腹、饮食口味、二便、睡眠、情绪、妇女等8个维度,最终筛选出66个症状变量。经专家讨论,量表具有较好的内容效度;整个量表一致性检验的克朗巴赫系数α为0.82。同一专家前后两次诊断的一致性结果显示心气虚、心阳虚、痰浊和寒凝的辨证诊断一致性较高,同一医生前后两次测量的Kappa值均在0.74～1之间;评分者信度评价中心气虚、心阳虚、心血虚和心阴虚的诊断一致性较高,Kappa值分别为0.63、0.72、1和0.48,其余的诊断一致性较低或不能说具有一致性。结论:运用量表制作方法对中医问诊进行规范化研究具有一定的可行性,心系问诊量表的研制,还可为其他脏腑问诊量表的研制提供参考。