Micro PET/CT在大鼠口腔黏膜癌前病变及口腔癌中的应用

目的:研究Micro PET/CT在大鼠口腔黏膜癌前病变及口腔癌中的应用价值。方法:采用4NQO饮水法诱导大鼠舌癌模型,将39只大鼠随机分为实验组及空白对照组。实验25～30周,进行Micro PET/CT扫描。扫描后行组织病理学检查。应用SAS6.0软件包,对正常组、癌前病变组及癌变组大鼠的SUVmax、T/NT(肌肉)、T/NT(脑组织)及T/NT(甲状腺)分别进行方差分析,并对T/NT值和病理学分级进行Spearman相关分析。结果:正常组、癌前病变组、癌变组大鼠舌根SUVmax无显著差异(P>0.05)。正常组与癌变组相比,T/NT(肌肉)及T/NT(脑组织)有显著差异(P<0.05),正常组与癌前病变组以及癌前病变组与癌变组,T/NT(肌肉)及T/NT(脑组织)无显著差异(P>0.05);T/NT(肌肉、脑组织)均与病理学分级呈正相关(P<0.05)。各组之间T/NT(甲状腺)差异无显著性(P>0.05),T/NT(甲状腺)与病理学分级无相关性(P>0.05)。结论:Mirco PET/CT作为一种无创检测技术,有助于对大鼠舌体组织癌变过程进行动态研究。T/NT(肌肉组织)、T/NT(脑组织)可作为大鼠舌体癌变过程中反映病损进展程度的有效指标。

脂质体介导端粒酶基因转染人口腔黏膜角化细胞的实验研究

目的:将端粒酶基因转染入人正常口腔黏膜角化细胞,观察人端粒酶反转录酶(hTRT)的表达情况。方法:采用脂质体LipofectAMINE 2000与转铁蛋白共同将含有hTRT基因的pEGFP-hTRT质粒转染人正常口腔黏膜角化细胞,经荧光显微镜、激光共聚焦显微镜观察荧光,并进行流式细胞仪检测转染效率,采用RT-PCR检测转染细胞中外源性hTRT的表达,并经G418筛选观察其稳定表达情况。结果:LipofectAMINE 2000与转铁蛋白共同将pEGFP-hTRT转染入人正常口腔黏膜角化细胞,转染率为15.34%,转染细胞表达外源性hTRT。结论:脂质体LipofectAMINE 2000与转铁蛋白成功介导含有端粒酶基因的pEGFP-hTRT质粒转染人口腔黏膜角化细胞。

长三角地区口腔黏膜癌前病变组织库和数据库的建立及应用

目的:建立长三角地区口腔黏膜癌前病变的临床病例组织库及数据库,并评估其应用价值。方法:采集口腔黏膜癌前病变患者临床病例资料及病变组织、唾液及血液标本建立组织库,以Microsoft Access平台,Brower/Server架构,ASP语言建立数据库管理病历资料和组织库。结果:建立起长三角地区口腔黏膜癌前病变组织库,规范了标本采集及保存方法。建立的口腔黏膜癌前病变数据库具有界面友好,运行稳定,录入查询快速准确,可实行网络资源共享等特点。结论:首次建立起的口腔黏膜癌前病变和数据库,不仅标准化保存我国口腔黏膜癌前病变生物学资源,而且数据库的建立为临床、科研和教学提供了便利,具有良好的开发运用前景。

Wistar大鼠自然衰老过程中口腔颊黏膜上皮厚度的改变

目的:研究鼠衰老过程中口腔颊黏膜上皮厚度的改变,为口腔黏膜衰老模型的后期建立提供自然衰老数据。方法:常规饲养雄性Wistar大鼠至3月龄、12月龄和24月龄,分别作为自然衰老青年、中年和老年组,对其进行口腔颊黏膜取材,石蜡包埋、切片、苏木精伊红染色,在显微镜下对其上皮厚度进行测量和分析。结果:Wistar大鼠的口腔颊黏膜上皮角化层的厚度和基底层至粒层的厚度在老年组中显著高于青年组或中年组,青年组和中年组相比无显著差异。结论:Wistar大鼠自然衰老过程中口腔颊黏膜上皮厚度增加,但因样本量小,该结论有待进一步实验证实。

反转录病毒介导端粒酶基因对人口腔黏膜角化细胞寿命的影响

目的：以pBABE-tert重组反转录病毒为载体,介导端粒酶反转录酶基因（hTRT）转染体外培养的人口腔角化细胞,探讨端粒酶对细胞寿命的影响。方法：将含有hTRT的pBABE-tert重组反转录病毒载体扩增后,转染体外培养的人口腔角化细胞,挑选阳性克隆进行传代培养,以PCR-ELISA和PCR-PAGE电泳检测端粒酶活性。结果：获得端粒酶活性稳定表达的口腔角化上皮细胞克隆,寿命可延长至8~9代。结论：转导端粒酶反转录酶基因的人口腔角化细胞寿命延长1倍,但不能永生化,说明人口腔上皮角化细胞的永生化是复杂和多点调控的过程,端粒酶活性增加是细胞永生化的关键但不是唯一原因。

口内超声成像在18例口腔非咀嚼黏膜白斑诊疗中的评价

目的:探讨口腔非咀嚼黏膜白斑的声像图表现,根据声像图特征将黏膜白斑分类,并为临床诊疗方案提供参考依据.方法:选取就诊于上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔黏膜科并最终病理确诊为口腔黏膜白斑的患者18例(24处病灶),病灶分别位于舌部、口底、颊黏膜、唇黏膜.在病灶切取活检前,于超声科行口腔内路径超声检查,观察病灶范围、连续性、有无角化形成、上皮各层厚度及病损处彩色多普勒血流信号.并应用定量分析软件Qontraxt,对白斑区黏膜表面随机取值测量相对回声强度,总结与之对应的病损角化类型.数据应用SPSS 25.0软件包进行统计分析.结果:口腔黏膜白斑声像图表现为出现角化层并增厚,回声增强,中间层表现为低回声增厚条带,部分病灶局部表层回声减低及血流信号增多.白斑区高回声条带明显增厚(P<0.001)、回声增强,其中舌部和颊黏膜差异最显著.低回声条带明显增厚(P<0.001),其中颊黏膜、唇黏膜差异最显著.通过Qontraxt定量分析软件测定表层及角化层回声强度值,判断是否存在角化及角化类型,其中非白斑区为43.28±9.33,白斑正角化为92.88±3.12,白斑不全角化为84.75±5.76.结论:超声成像可以有效观察黏膜白斑并测量上皮内各层厚度,此外可发现特殊伴随改变,如溃疡、感染及癌变等,可为临床诊断、治疗方案制定及治疗后随访提供影像学依据,有助于避免不必要的黏膜医源性损伤或治疗后疾病复发.

D-半乳糖诱导正常人口腔黏膜角质形成细胞衰老的研究

目的:明确D-半乳糖对正常人口腔黏膜细胞(normal human oral keratinocytes,NHOKs)促衰老作用,并探索潜在机制。方法:体外分离培养NHOKs,角形蛋白和波形蛋白免疫细胞化学染色法鉴定NHOKs。分别以10、20、40、80g/L D-半乳糖处理诱导细胞作为实验组,正常培养液组作为对照组。通过CCK-8法检测细胞增殖活力,采用衰老相关β半乳糖苷酶染色(senescence-associated-β-galactosidase,SA-β-gal)分析细胞衰老情况,Western blot检测衰老相关蛋白p53和p21表达水平。活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测细胞内氧化应激水平,Western blot检测氧化应激相关蛋白sirt1的表达。结果:D-半乳糖抑制NHOK细胞增殖,具有时间和浓度依赖性。D-半乳糖增加SA-β-gal染色阳性率,上调衰老相关基因p53和p21,显著升高细胞内ROS,降低氧化应激相关蛋白sirt1表达。结论:D-半乳糖可诱导NHOKs发生衰老,该过程可能与细胞氧化应激有关。

复方苦参含漱液治疗口腔扁平苔藓的临床及细菌学研究

目的:观察复方苦参含漱液治疗糜烂型扁平苔藓的临床疗效,以及治疗前、后患者口腔内细菌的检出量、检出率及构成比的变化。方法:采用复方苦参含漱液治疗糜烂型扁平苔藓患者30例,采用SAS6.12软件包中的配对t检验比较用药前、后患者疼痛指数的变化,实验室检查治疗前、后患者口腔唾液细菌检出量、检出率和构成比的变化。对细菌检出率、构成比进行χ2检验,处于非正态分布的细菌检出量,取其常用对数值进行非参数相关检验。结果:用药1周后,患者疼痛指数显著下降(P<0.01)。糜烂型扁平苔藓患者口腔内细菌总检出率、检出量减少。葡萄球菌的检出量显著减少(P<0.05);其他唾液细菌的检出率和检出量虽有减少,但无统计学意义。细菌构成比无显著性差异。结论:复方苦参含漱液对口腔糜烂型扁平苔藓患者唾液葡萄球菌有抑制作用,是一种局部治疗口腔扁平苔藓的有效药物,可作为全身用药的辅助治疗。

口腔扁平苔藓T细胞受体BV基因的优势取用初探

目的:研究口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)患者损害组织中浸润的T细胞受体(T cell receptor,TCR)BV基因的取用格局。方法:采用实时定量聚合酶链反应,分析OLP患者损害组织中浸润的T细胞和外周血中T细胞TCR BV基因的取用格局。采用GraphPad Prism version 5.00软件对数据进行Mann-Whitney U检验。结果:43例OLP患者的损害组织对BV4、BV14和BV18基因的取用显著高于39例OLP患者外周血对这些BV基因的取用。结论:OLP患者损害组织浸润的T细胞优势取用BV4、BV14和BV18基因,提示带有BV4、BV14和BV18基因的T细胞参与了OLP的发病。

口腔扁平苔藓相关细胞模型的建立

目的:建立相关角质形成细胞/T细胞共培养模型,以模拟口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)局部损害的免疫应答环境,为进一步体外研究OLP提供较可靠的细胞模型。方法:采用酶消化法培养正常口腔黏膜角质形成细胞,利用磁珠阴性分选法获取正常人外周血T淋巴细胞,共培养后,利用MTT法测定T细胞增殖,利用ELISA法测定细胞因子IFN-γ的表达。采用SAS.6.12软件包中的成组设计资料的t检验进行统计学分析。结果:表达PD-L1、PD-L2的角质形成细胞/T细胞共培养组T细胞的增殖程度比T细胞单独培养组高(P<0.05),共培养组较T细胞单独培养组IFN-γ分泌水平升高(P<0.01)。结论:表达PD-L1、PD-L2的角质形成细胞/T细胞共培养模型能在一定程度上模拟OLP局部损害的免疫应答环境。

309例口腔扁平苔藓患者药物依从性与饮食依从性调查分析

目的:探讨口腔扁平苔藓患者药物依从性和饮食依从性,分析其影响因素。方法 :采用横断面取样,使用自制问卷调查表以及Morisky量表收集309例口腔扁平苔藓(OLP)患者的数据信息,采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:口腔扁平苔藓患者饮食依从率为89%,药物依从率为55.02%。与患者的饮食依从性相关的因素为对疾病的认知水平和不良饮食习惯,未发现与药物依从相关的因素。阻碍患者遵医用药的3大原因分别是药物使用不便、忘记用药以及担心药物的副作用。结论:患者治疗依从性受多种因素的影响,需要政府、医务工作者及患者共同努力,建立有效的口腔扁平苔藓患者疾病管理机制。

口腔白斑病癌变相关缺氧应答基因和微小RNA的芯片检测及表达验证

目的探讨口腔白斑病癌变进程中的缺氧应答基因及相关微小RNA(miRNA)的表达。方法利用Affymetrix GeneChip人转录组芯片(HTA)2.0对正常口腔黏膜、低危白斑、高危白斑、口腔早期鳞癌进行转录组学检测,基因本体论(GO)功能分析筛选出生物学作用为缺氧应答的基因和相关miRNA,并采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测验证白斑缺氧应答基因和miRNA的表达。结果正常黏膜与低危白斑间有7个缺氧应答差异基因,低危白斑与高危白斑间有10个缺氧应答差异基因,高危白斑与早期鳞癌间有21个缺氧应答差异基因。缺氧应答关键基因低氧诱导因子1α、趋化因子配体2、基质金属蛋白酶3的mRNA和miR-21在正常黏膜、口腔白斑和早期鳞癌中的表达量均呈阶梯式升高,白斑与早期鳞癌之间的表达差异均具有统计学意义,这与转录组芯片结果基本一致。结论缺氧应答基因及相关miRNA参与白斑病癌变。

PD-L1mRNA与PD-L2mRNA在口腔扁平苔藓中的表达特点及可能作用

目的:研究PD-L1mRNA、PD-L2mRNA在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)患者外周血与损害组织,以及在不同临床类型与病理分型中的表达特点。方法:采用实时定量PCR方法检测60例OLP患者(斑纹型35例,充血糜烂型25例;不伴异常增生38例,伴轻度异常增生22例)PD-L1mRNA、PD-L2mRNA表达水平,并以10名正常人外周血与黏膜组织作为对照,比较不同临床类型和病理类型OLP患者间PD-L1mRNA、PD-L2mRNA表达水平差异,并分析PD-L1mRNA、PD-L2mRNA在OLP患者外周血与损害组织中表达的相关性。利用SAS6.12软件包中的非配对两样本均数比较的Wilcoxon秩和检验,比较不同组别间的差异。结果:PD-L2mRNA在OLP患者外周血中表达降低,损害组织中表达升高,且在不同临床类型OLP患者之间存在显著差异(P<0.05)。PD-L1mRNA在OLP组与正常对照组之间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PD-L2分子可能在OLP患者全身与损害局部对OLP的发生、发展产生不同的影响。

口腔白斑癌变DNA损伤修复相关基因的芯片检测及表达验证

目的·研究口腔白斑(oral leukoplakia,OL)患者病损发生发展中的DNA损伤修复基因表达谱,并验证关键基因共济失调毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)和组蛋白2A变异体家族成员X(histone variant H2A family member X,H2AX)的mRNA和蛋白表达。方法·利用Affymetrix HTA 2.0芯片对口腔正常黏膜(n=3)、低危白斑(n=4)、高危白斑(n=4)、早期鳞状细胞癌(鳞癌,n=6)进行转录组学的高通量检测,利用基因本体数据库(Gene Ontology,GO)富集分析筛选出生物学功能为DNA损伤修复的相关基因[差异倍数(fold change,FC)对数的绝对值(|log_(2)FC|)≥2.0且P<0.05],利用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)和蛋白质印迹法分别对人正常口腔黏膜角化细胞(HOK)、白斑细胞系(Leuk1)和鳞癌细胞系(HN13)中的关键基因ATM和H2AX进行mRNA和蛋白表达验证。结果·DNA损伤修复基因在白斑发生发展中存在异常表达,从正常黏膜发展到低危白斑有7个|log_(2)FC|≥2.0的基因,从低危白斑发展到高危白斑有7个|log_(2)FC|≥2.0的基因,从高危白斑发展到鳞癌有52个|log_(2)FC|≥2.0的基因。qPCR对关键基因验证结果显示,ATM和H2AX基因在HOK细胞、Leuk1细胞和HN13细胞中的表达量均呈阶梯式升高(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示,磷酸化H2AX(γ-H2AX)蛋白在HOK细胞、Leuk1细胞和HN13细胞中亦逐步上调(P<0.05)。ATM蛋白在Leuk1细胞中的表达比在HOK细胞中表达明显增强(P<0.05),但在HN13细胞中的表达明显降低(P<0.05)。结论·DNA损伤修复基因ATM和H2AX参与OL的发生发展。

CO2激光联合光动力疗法治疗口腔白斑病的临床研究

目的·探究CO2激光联合光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)治疗口腔白斑病的临床效果。方法·选择2018年6月—2019年6月于上海交通大学医学院附属第九人民医院就诊的21例口腔白斑病患者,随机分为试验组(11例)和对照组(10例),前者采用CO2激光联合PDT治疗,后者单一采用CO2激光治疗。记录2组患者术后第1周内出现的不良反应,第1个月的治疗效果及第3、6个月的复发情况,并对上述指标的组间差异进行统计分析。结果·术后第1个月试验组和对照组的显效率分别为100%和80%,有效率分别为100%和90%,组间差异无统计学意义。术后第1周内,2组患者均出现不同程度的烧灼样疼痛、水肿和(或)糜烂,组间差异亦无统计学意义。术后第3个月随访结果显示,试验组和对照组的复发率分别为0和10%,组间差异无统计学意义;而第6个月的结果显示,试验组的复发率显著低于对照组(P=0.038)。结论·CO2激光联合PDT和单一CO2激光治疗口腔白斑病均疗效显著,无严重不良反应,且联合疗法可明显降低疾病复发率。

DNA定量分析在口腔癌及癌前病变中的研究进展

人体正常的体细胞有23对染色体,DNA含量恒定,在细胞癌变过程中DNA含量增加或减少,即成为非整倍体细胞,是恶性肿瘤的特异性标志。DNA定量分析是通过对细胞核内DNA含量或倍体的检测来判断细胞的生理或病理状态,能客观地反映病损的情况,对肿瘤的早期诊断、筛查、预后判断及疗效评价有重要意义。本文主要就近年来DNA定量分析在口腔癌及癌前病变中的研究进展作一综述。

壳聚糖口腔贴膜治疗轻型复发性阿弗他溃疡随机对照临床研究

目的通过壳聚糖口腔贴膜对轻型复发性阿弗他溃疡的临床疗效观察,探讨其有效性和安全性。方法本研究共纳入72例患有轻型复发性阿弗他溃疡的受试者。在6日的试验期间,随机分配受试者至试验组或对照组并告知贴膜使用方法,试验组材料为壳聚糖口腔贴膜,对照组材料为聚乙烯醇膜;比较2组受试者溃疡疼痛值、溃疡面积及不良反应。结果在第4天至第6天,试验组溃疡面积缩小(2.91±3.66)mm^2,对照组溃疡面积缩小(1.10±2.26)mm^2,2组差异具有统计学意义(P<0.05),试验期间初诊及每次复查时,组间溃疡面积、溃疡疼痛值、溃疡疼痛缩小值比较差异均没有统计学意义(P>0.05)。试验过程中无不良反应发生。结论壳聚糖口腔贴膜具有一定的促进轻型复发性阿弗他溃疡愈合的作用。

microRNAs在口腔扁平苔藓中的作用及机制

口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)是一种口腔黏膜的慢性炎症性疾病,部分病例最终可发展为口腔鳞状细胞癌。然而,OLP的准确发病机制目前仍未被阐明,一些证据显示其发病可能与自身免疫系统紊乱相关。microRNAs(miRNAs)是一类小非编码RNA分子,其参与调控一系列正常生理过程以及众多疾病的发生。目前已有研究表明miRNAs与OLP发病和恶变的过程均可能相关,miR⁃146a、miR⁃26b、miR⁃155和miR⁃19a、miR⁃125a可能分别通过促进角化细胞增殖和凋亡、合成前列腺素及血栓素等途径使自身免疫紊乱,从而导致OLP的发生;而miR⁃137、miR⁃125b、miR⁃27b等则可能促进了OLP的癌变。并且认为这些miRNAs可能具有预判OLP活动度及风险度的潜力,也可能是OLP潜在的治疗靶点之一。后续的研究预计将集中于更全面地探索miRNAs在OLP中的作用(包括具体作用通路和其他OLP相关的miRNAs),以及研究miRNAs用于预测治疗OLP的潜力。本文就miRNAs在OLP发病中作用的最新进展进行综述,为OLP的研究提供新的思路和方法。

口腔白斑病组织中环状RNA的差异表达谱分析

目的探讨环状RNA(circRNA)在口腔白斑(oral leukoplakia,OLK)组织及正常口腔黏膜组织(nor⁃mal oral mucosal,NOM)中表达谱的差异及临床意义。方法采用高通量测序技术检测6对OLK和NOM组织中差异表达circRNA,利用qRT⁃PCR验证所筛选的10个circRNA在6对OLK与NOM组织中的表达情况。通过酶耐受实验和sanger测序验证目标circRNA成环情况,对20对OLK与NOM组织中目标circHLA⁃C进行qRT⁃PCR验证。分别使用UCSC基因组浏览器对circHLA⁃C进行可视化分析;利用GO和KEGG富集分析对差异表达circRNA进行功能分析;TargetScan、MiRanda预测目标circRNA下游miRNA、mRNA,并构建竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)网络。结果测序数据显示OLK组织中共有366个显著差异表达的cir⁃cRNA,包括65个上调和301个下调circRNA。经qRT⁃PCR验证,筛选的10个circRNA中有7个表达结果同测序一致。且经酶耐受和sanger测序验证,确定上调的circHLA⁃C是具有反式剪接位点的真正的circRNA。相关性分析显示circHLA⁃C与OLK的异常增生程度呈正相关。ROC曲线分析提示circHLA⁃C具有诊断OLK的潜在价值,且具有较高的准确性和特异性。结论circRNA在OLK组织中异常表达,上调的circHLA⁃C表达可能与OLK异常增生程度相关,对OLK诊断具有指导价值。

中西医结合口腔医学的理念、实践和思考

中西医结合口腔医学是中西医结合医学学科群中的一份子。而中西医结合口腔医学的学科概念、结合的必要性和可行性及其发展方向一直困扰着我国口腔医学界。本文将结合笔者经验,对中西医结合口腔医学的学科发展现状、存在的问题、实践和思考的方向做一述评。