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长链非编码RNA H 19调控小鼠睾丸间质细胞功能的机制
1
作者
陈勇
邓华
+1 位作者
李鑫
范丽玲
《福建医科大学学报》
2023年第4期242-251,257,共11页
目的探讨长链非编码RNA H 19对小鼠睾丸间质细胞(LCs)合成分泌睾酮功能的影响及其可能的机制。方法采用原代小鼠LCs和TM3细胞为研究对象,细胞分为二甲基亚砜(DMSO)组、2-硝基丙烷(2-NP)处理组、si control组、si H19组、si Creb1组、Mim...
目的探讨长链非编码RNA H 19对小鼠睾丸间质细胞(LCs)合成分泌睾酮功能的影响及其可能的机制。方法采用原代小鼠LCs和TM3细胞为研究对象,细胞分为二甲基亚砜(DMSO)组、2-硝基丙烷(2-NP)处理组、si control组、si H19组、si Creb1组、Mimic control组、miR-181c-5p mimic组、Inhibitor control组、miR-181c-5p inhibitor组、si H19+Inhibitor control组和si H19+miR-181c-5p inhibitor组共11组。干扰H 19表达后,ELISA法检测其睾酮分泌水平的变化,CCK8法检测LCs增殖变化;生物信息学分析预测各基因的结合位点。RT-qPCR法和Western-blot检测各组小鼠LCs转染后各相关基因及蛋白表达的变化。结果(1)与si control组比较,si H19组LCs培养液睾酮水平及细胞增殖水平均显著下降(72 h后,P<0.01)。(2)各相关基因之间存在结合位点。(3)与DMSO组比较,2-NP组LCs的p-STAT1表达增加、H 19表达明显升高,而miR-181c-5p表达明显降低(P<0.01)。(4)与si control组比较,si H19处理可显著下调LCs的H 19、Creb1、HSD3B1和HSD3B6 RNA表达水平并显著上调miR-181c-5p表达水平(P<0.01),si Creb1处理可显著下调Creb1、HSD3B1和HSD3B6 mRNA表达水平(P<0.01);si H19组和si Creb1组Creb1、3β-HSD蛋白表达均明显降低(P<0.01);与Mimic control组比较,miR-181c-5p mimic组H 19、Creb1、HSD3B1和HSD3B6 mRNA表达明显降低,miR-181c-5p表达水平明显升高且Creb1、3β-HSD蛋白表达显著降低(P<0.01);与Inhibitor control组比较,miR-181c-5p inhibitor组的各相关基因及蛋白表达呈现与miR-181c-5p mimic组作用相反的效应;与si H19+Inhibitor control组比较,si H19+miR-181c-5p inhibitor组H 19表达显著升高,miR-181c-5p表达水平明显降低,Creb1、HSD的mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.01)。结论H 19低表达可通过抑制细胞增殖、miR-181c-5p表达升高、Creb1蛋白表达降低和3β-HSD蛋白表达降低导致LCs合成分泌睾酮能力降低。STAT1/H 19/miR-181c-5p/Creb1/3β-HSD通路可能在LCs功能调控中发挥重要作用。
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关键词
H
19
睾丸间质细胞
睾酮
cAMP反应元素结合蛋白1
3β-羟基类固醇脱氢酶
信号转导和转录激活因子1
下载PDF
职称材料
X-盒结合蛋白1条件性基因敲除小鼠模型的建立
2
作者
刘天喜
宋琼
+1 位作者
许国双
刘永鑫
《中华肾病研究电子杂志》
2019年第1期13-18,共6页
目的建立可进行条件性敲除X-盒结合蛋白1(Xbp1)基因的flox杂合子小鼠。方法通过ET-clone的方法构建基于cre-loxp系统和FLP-frt系统的条件性基因打靶载体。载体线性化后电转JM8A3 ES细胞,经G418和Ganc筛选获得抗性ES细胞克隆。经长片段PC...
目的建立可进行条件性敲除X-盒结合蛋白1(Xbp1)基因的flox杂合子小鼠。方法通过ET-clone的方法构建基于cre-loxp系统和FLP-frt系统的条件性基因打靶载体。载体线性化后电转JM8A3 ES细胞,经G418和Ganc筛选获得抗性ES细胞克隆。经长片段PCR鉴定获得正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞经克隆扩增后,注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合鼠,筛选出高比例嵌合小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得阳性F1代小鼠,并分别进行PCR和测序鉴定。结果成功构建打靶载体,共获得144个抗性ES细胞,克隆经长片段PCR鉴定,共获得4个正确同源重组的阳性克隆。获得4只阳性F1代小鼠,经测序鉴定正确。Xbp1基因flox杂合子小鼠表型无明显异常。结论成功构建了条件性敲除Xbp1基因的flox杂合子小鼠,为未来研究器官或组织特异性的Xbp1生物学作用奠定了基础。
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关键词
X-盒结合蛋白1
非折叠蛋白反应
内质网应激
条件性基因敲除
CRE/LOXP系统
原文传递
XBP1s条件性过表达定点敲入小鼠模型的建立
3
作者
杨鸿泽
刘永鑫
+1 位作者
肖炎光
许国双
《中华肾病研究电子杂志》
2016年第6期254-259,共6页
目的获得可进行条件性过表达XBP1s基因的Rosa 26定点敲入杂合子小鼠。方法通过In-Fusion Cloning的方法构建胚胎干细胞(ES细胞)打靶载体,并进行线性化,电转染JM8A3 ES细胞。药物筛选获得抗性ES细胞克隆,经长片段PCR鉴定获得正确同源重...
目的获得可进行条件性过表达XBP1s基因的Rosa 26定点敲入杂合子小鼠。方法通过In-Fusion Cloning的方法构建胚胎干细胞(ES细胞)打靶载体,并进行线性化,电转染JM8A3 ES细胞。药物筛选获得抗性ES细胞克隆,经长片段PCR鉴定获得正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞经克隆扩增后,注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合鼠,筛选出高比例嵌合小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得阳性F1代小鼠,并分别进行PCR和测序鉴定。结果经酶切鉴定证明打靶质粒构建成功,经胚胎干细胞打靶共获得144个抗性ES细胞克隆,通过长片段PCR的方式对同源重组阳性克隆进行筛选和克隆经测序确认,共获得21个正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞克隆E3、C6经扩增后注射C57BL/6J小鼠囊胚96个,通过胚胎移植,共获得2只高嵌合雄鼠,与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得3只F1代杂合小鼠,经PCR及测序鉴定正确。结论成功建立了XBP1s基因的Rosa26定点敲入F1代杂合子小鼠,为未来获得免疫细胞、肾脏固有细胞及腹膜间皮细胞XBP1s条件性敲入小鼠奠定了基础。
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关键词
XBP1s
非折叠蛋白反应/内质网应激
同源重组
基因打靶
条件性基因敲入
原文传递
题名
长链非编码RNA H 19调控小鼠睾丸间质细胞功能的机制
1
作者
陈勇
邓华
李鑫
范丽玲
机构
福建医科大学基础医学院组织学与胚胎学系
上海南方模式生物有限公司
福建医科大学附属协和医院血液病研究所
出处
《福建医科大学学报》
2023年第4期242-251,257,共11页
基金
福建省自然科学基金项目(2019J01288)。
文摘
目的探讨长链非编码RNA H 19对小鼠睾丸间质细胞(LCs)合成分泌睾酮功能的影响及其可能的机制。方法采用原代小鼠LCs和TM3细胞为研究对象,细胞分为二甲基亚砜(DMSO)组、2-硝基丙烷(2-NP)处理组、si control组、si H19组、si Creb1组、Mimic control组、miR-181c-5p mimic组、Inhibitor control组、miR-181c-5p inhibitor组、si H19+Inhibitor control组和si H19+miR-181c-5p inhibitor组共11组。干扰H 19表达后,ELISA法检测其睾酮分泌水平的变化,CCK8法检测LCs增殖变化;生物信息学分析预测各基因的结合位点。RT-qPCR法和Western-blot检测各组小鼠LCs转染后各相关基因及蛋白表达的变化。结果(1)与si control组比较,si H19组LCs培养液睾酮水平及细胞增殖水平均显著下降(72 h后,P<0.01)。(2)各相关基因之间存在结合位点。(3)与DMSO组比较,2-NP组LCs的p-STAT1表达增加、H 19表达明显升高,而miR-181c-5p表达明显降低(P<0.01)。(4)与si control组比较,si H19处理可显著下调LCs的H 19、Creb1、HSD3B1和HSD3B6 RNA表达水平并显著上调miR-181c-5p表达水平(P<0.01),si Creb1处理可显著下调Creb1、HSD3B1和HSD3B6 mRNA表达水平(P<0.01);si H19组和si Creb1组Creb1、3β-HSD蛋白表达均明显降低(P<0.01);与Mimic control组比较,miR-181c-5p mimic组H 19、Creb1、HSD3B1和HSD3B6 mRNA表达明显降低,miR-181c-5p表达水平明显升高且Creb1、3β-HSD蛋白表达显著降低(P<0.01);与Inhibitor control组比较,miR-181c-5p inhibitor组的各相关基因及蛋白表达呈现与miR-181c-5p mimic组作用相反的效应;与si H19+Inhibitor control组比较,si H19+miR-181c-5p inhibitor组H 19表达显著升高,miR-181c-5p表达水平明显降低,Creb1、HSD的mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.01)。结论H 19低表达可通过抑制细胞增殖、miR-181c-5p表达升高、Creb1蛋白表达降低和3β-HSD蛋白表达降低导致LCs合成分泌睾酮能力降低。STAT1/H 19/miR-181c-5p/Creb1/3β-HSD通路可能在LCs功能调控中发挥重要作用。
关键词
H
19
睾丸间质细胞
睾酮
cAMP反应元素结合蛋白1
3β-羟基类固醇脱氢酶
信号转导和转录激活因子1
Keywords
H 19
Leydig cells
testosterone
cAMP response element binding protein 1
3β-hydroxysteroid dehydrogenase
signal transduction and activator of transcription 1
分类号
R698.2 [医药卫生—泌尿科学]
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职称材料
题名
X-盒结合蛋白1条件性基因敲除小鼠模型的建立
2
作者
刘天喜
宋琼
许国双
刘永鑫
机构
兰州大学第一医院肾脏内科
第四军医大学西京医院肾脏内科
上海
南方
模式
生物
发展
有限公司
出处
《中华肾病研究电子杂志》
2019年第1期13-18,共6页
基金
国家自然科学基金(81470993
81272621)
+1 种基金
百特公司腹膜透析专项课题(CHN-RENAL-IIS-2012-039)
西京医院新技术新业务(XJGX15Y45)
文摘
目的建立可进行条件性敲除X-盒结合蛋白1(Xbp1)基因的flox杂合子小鼠。方法通过ET-clone的方法构建基于cre-loxp系统和FLP-frt系统的条件性基因打靶载体。载体线性化后电转JM8A3 ES细胞,经G418和Ganc筛选获得抗性ES细胞克隆。经长片段PCR鉴定获得正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞经克隆扩增后,注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合鼠,筛选出高比例嵌合小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得阳性F1代小鼠,并分别进行PCR和测序鉴定。结果成功构建打靶载体,共获得144个抗性ES细胞,克隆经长片段PCR鉴定,共获得4个正确同源重组的阳性克隆。获得4只阳性F1代小鼠,经测序鉴定正确。Xbp1基因flox杂合子小鼠表型无明显异常。结论成功构建了条件性敲除Xbp1基因的flox杂合子小鼠,为未来研究器官或组织特异性的Xbp1生物学作用奠定了基础。
关键词
X-盒结合蛋白1
非折叠蛋白反应
内质网应激
条件性基因敲除
CRE/LOXP系统
Keywords
X-box-binding protein 1(Xbp1)
Unfolded protein response
Endoplasmic reticulum stress
Conditional gene knockout
Cre/loxp system
分类号
R-332 [医药卫生]
原文传递
题名
XBP1s条件性过表达定点敲入小鼠模型的建立
3
作者
杨鸿泽
刘永鑫
肖炎光
许国双
机构
第四军医大学西京医院肾脏内科
上海
南方
模式
生物
发展
有限公司
出处
《中华肾病研究电子杂志》
2016年第6期254-259,共6页
基金
国家自然科学基金(81470993
81272621)
+1 种基金
百特公司腹膜透析专项课题(CHN-RENAL-IIS-2012-039)
西京医院新技术新业务(XJGX15Y45)
文摘
目的获得可进行条件性过表达XBP1s基因的Rosa 26定点敲入杂合子小鼠。方法通过In-Fusion Cloning的方法构建胚胎干细胞(ES细胞)打靶载体,并进行线性化,电转染JM8A3 ES细胞。药物筛选获得抗性ES细胞克隆,经长片段PCR鉴定获得正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞经克隆扩增后,注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合鼠,筛选出高比例嵌合小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得阳性F1代小鼠,并分别进行PCR和测序鉴定。结果经酶切鉴定证明打靶质粒构建成功,经胚胎干细胞打靶共获得144个抗性ES细胞克隆,通过长片段PCR的方式对同源重组阳性克隆进行筛选和克隆经测序确认,共获得21个正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞克隆E3、C6经扩增后注射C57BL/6J小鼠囊胚96个,通过胚胎移植,共获得2只高嵌合雄鼠,与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得3只F1代杂合小鼠,经PCR及测序鉴定正确。结论成功建立了XBP1s基因的Rosa26定点敲入F1代杂合子小鼠,为未来获得免疫细胞、肾脏固有细胞及腹膜间皮细胞XBP1s条件性敲入小鼠奠定了基础。
关键词
XBP1s
非折叠蛋白反应/内质网应激
同源重组
基因打靶
条件性基因敲入
Keywords
Spliced X-box-binding protein 1(XBP1s)
Unfolded protein response/ER stress
Homologous recombination
Gene targeting
Conditional gene knock-in
分类号
R-332 [医药卫生]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
长链非编码RNA H 19调控小鼠睾丸间质细胞功能的机制
陈勇
邓华
李鑫
范丽玲
《福建医科大学学报》
2023
0
下载PDF
职称材料
2
X-盒结合蛋白1条件性基因敲除小鼠模型的建立
刘天喜
宋琼
许国双
刘永鑫
《中华肾病研究电子杂志》
2019
0
原文传递
3
XBP1s条件性过表达定点敲入小鼠模型的建立
杨鸿泽
刘永鑫
肖炎光
许国双
《中华肾病研究电子杂志》
2016
0
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