采用分子生物学技术诊断隐球菌脑膜脑炎的研究

目的采用分子检测技术对疑似隐球菌感染的脑膜炎病例进行诊断。方法收集患者的脑脊液样本,提取DNA,设计引物进行PCR扩增,采用DNA芯片技术对扩增产物进行分子检测。结果显示样本新生隐球菌阳性。结论通过ITS保守序列设计引物进行PCR扩增和DNA芯片技术对常规真菌学检查不能确定的疑似隐球菌脑膜炎患者脑脊液样本进行非培养检测,具有实验室诊断参考价值。

抗生物降解药渣中高效水解木质素的菌株筛选

目的从抗生物降解药渣中筛选对木质素水解能力强的真菌菌株。方法通过分离鉴定、纯培养及以木质素为唯一碳源液体发酵后测定木质素过氧化物酶(lignin peroxidase,LiP)与漆酶(laccase,Lac)酶活筛选堆放药渣中高效水解木质素的真菌。结果从药渣中分离出42株真菌,经过木质素碳源平板筛选进一步发现了8株水解效果较好的丝状真菌,其中ZYJHYZ246、ZYJHYZ257、ZYJHYZ280在平板上脱色效果最明显;将以上8株真菌进行分子鉴定及LiP及Lac酶活检测发现多数菌株在发酵第5~7天时达峰值,其中阳性对照NDM3-2在第7天时产LiP酶最高,为223.59 U/L,其次是ZYJHYZ268,生长第3天时达峰值(176.85 U/L);Lac酶活结果表明,ZYJHYZ268是产酶最高的一株菌,在第5天时达到250.83 U/L,是阳性对照最高产酶时期的1.8倍。结论筛选出的ZYJHYZ268经鉴定为Piloderma sp.,其能产较高水平LiP与Lac,具有良好的水解木质素的能力,为降解木质素菌株提供了更多选择。

上海某综合性医院秋季室内外环境空气中真菌种群分布的研究

目的监测目前上海地区某综合性医院室内外环境空气中真菌种群分布特征,为临床侵袭性真菌感染的防治提供科学依据。方法于2015年秋季以基于微生物气溶胶采集的空气采样器采样法与曝皿法随机对上海地区某综合性三甲医院的26处室内及7处室外环境进行同步空气采样,相关样本在含有氯霉素的沙氏培养基上经培养、分离、纯化及分子鉴定后,对不同采样地点真菌种群结构予以统计学分析。结果上海地区综合性三甲医院室内空气中青霉属(约24.14%)在真菌种群结构中占有明显优势,室外空气中则以分枝孢子菌属占有优势(约34.09%),青霉属在室内空气中所占比重(约24.14%)明显高于室外(11.09%)。结论虽然上海地区的医疗水平国内领先,且被调查医院已按相关规定进行了日常环境消毒工作,但被调查医院室内外空气中仍被发现存在高度多样性的真菌种群结构,且包含了常见的机会致病真菌如烟曲霉等,继续加强综合性医院室内外环境中真菌等病原微生物的监测和加强院内感染的控制是非常必要的。

医学真菌研究的前沿及热点

国际上医学真菌研究的热点是"超级真菌",即耳道念珠菌,也是国际上医学真菌研究领域的重大课题。该菌具有基因组多样性、多重耐药性和病死率高的特点,因而引起了医学界的高度关注。本文概述了目前医学真菌研究的主要前沿及热点问题:(1)浅部真菌病病原菌流行病学变迁,通过大样本动态流行病学研究分析,皮肤真菌病的发病率逐步上升;致病真菌菌种分布发生显著变化,皮肤癣菌所占比重下降、酵母菌有后来居上之势;病原真菌多样性较前更为显著、新的致病菌种报道日益增多。(2)医学真菌新兴诊断技术不断发展,早期、特异、快速的诊断是真菌病、尤其是深部真菌感染的难点和热点;分子诊断、实时荧光定量技术及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术为医学真菌的精准诊断及指导治疗提供依据。(3)病原真菌对抗真菌药物耐药机制研究及致病真菌与宿主相互作用的分子与细胞机制研究受到重视。

科学取向教学论在医学真菌学教学中的合理应用--以《头癣》为例

近年来,随着真菌感染发病率的不断提高,有关医学真菌学的教学显得尤为重要。该文以《头癣》为例,在科学取向教学论的指导下,就教学任务、教学目标、教学策略和教学评价等方面展开教学设计,对医学真菌学的教学具有重要的参考意义。

警惕“超级真菌”感染在中国的出现

近年来,已有多个国家报告发现耳道念珠菌导致严重感染病例,该菌通常对一种或多种主要的抗真菌药物具有耐药性。现对耳道念珠菌感染现状进行阐述,希望能够引起有关学者和相关部门的重视。

舍曲林抗新生隐球菌的体外及动物实验研究

目的评估舍曲林抗新生隐球菌的效果。方法实验分为6组,分别为空白对照组、10 mg/mL氟康唑、10 mg/mL舍曲林、20 mg/mL舍曲林、10 mg/mL氟康唑联用10 mg/mL舍曲林以及10 mg/mL氟康唑联用20 mg/mL舍曲林组。通过体外药敏试验及BALBc小鼠新生隐球菌动物探讨各组间抗隐球菌效果的差异。结果体外药敏试验发现舍曲林可有效降低新生隐球菌菌落数,当与氟康唑联用时抑菌效果更显著。动物实验发现2种浓度的舍曲林都可明显降低感染小鼠实验早期脑、肺组织的新生隐球菌菌落数,但在实验后期,低浓度的舍曲林对感染小鼠脑组织失去抑菌作用。脑、肺组织中,舍曲林治疗对新生隐球菌的抗菌效果均不如氟康唑。舍曲林与氟康唑联合用药对新生隐球菌模型小鼠肺组织的抗菌效果强于单用舍曲林或氟康唑。结论舍曲林具有抗新生隐球菌的作用,当与氟康唑联合用药时可起到协同作用。

重要深部真菌病研究进展

近20年来,由于接受肿瘤化学治疗、细胞毒药物治疗的患者不断增多,器官移植和骨髓移植术广泛开展,深部真菌病的发病率和病死率急剧上升。而生物技术的进步和人们对真菌研究的深入,为临床提供了早期、特异的诊断方法和新型抗真菌药物。本文归纳了深部真菌病流行病学调查、真菌与宿主相互作用、深部真菌病诊断和治疗等方面的最新内容,这些研究成果将有助于科研人员寻找新的研究路线,有助于临床医师预防和诊治深部真菌病;同时,尚需广大科研和临床工作者对深部真菌病进行更为深入的研究以满足临床和科研的需要。

一种基于环介导等温扩增技术原理的组织胞浆菌分子诊断技术

目的研发一种基于环介导等温扩增(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术原理的组织胞浆菌感染的分子诊断技术。方法以组织胞浆菌为研究对象,针对其种特异性的M抗原基因序列,设计并筛选数套基于LAMP技术的特异性引物,同时优化其反应条件,建立一种针对组织胞浆菌感染的快速分子鉴定技术。结果该LAMP技术在65℃、90min反应条件下,对组织胞浆菌基因组DNA的检测敏感度达到5.3pg/反应(即5.3×10-12 g,约160个基因组DNA拷贝),且与其相近种属真菌无交叉反应。结论我们研发的这种基于LAMP技术原理的组织胞浆菌分子诊断技术具有操作简便、特异性及敏感性高等优点,具有临床推广应用的潜力。

靶向金纳米棒对隐球菌活性影响的体外实验研究

目的设计对隐球菌荚膜特异性标记的靶向金纳米棒,研究靶向金纳米棒的体外光热作用对隐球菌活性的影响。方法晶种生长法制备金纳米棒,偶联隐球菌荚膜抗体,检测表征,与隐球菌体外孵育,近红外激光照射,检测隐球菌活性变化。结果成功制备与荚膜抗体偶联的金纳米棒,体外近红外照射后,隐球菌活性较未偶联抗体的金纳米棒组显著降低。结论靶向性金纳米棒显著增强了近红外激光对隐球菌的光热效应,可用于治疗隐球菌感染的新尝试。

利用微卫星标记研究新生隐球菌分子流行病学

目的研究国内隐球菌临床分离株的遗传多态性和分子流行病学。方法选择与新生隐球菌遗传相关的9个微卫星标记,分析这9个位点从1993～2009年国内分离到的新生隐球菌临床株遗传背景、来源及变异程度。结果 116株被研究的隐球菌临床分离株,主要归属于3个微卫星复合物(MC2,MC3和MC12),其中大部分为MC2(103株)。8株菌株属于目前为止未被国内外认识的新复合物(MC12)。结论利用微卫星DNA多态性研究新生隐球菌分子流行病学有较大的应用价值。

人类免疫缺陷病毒与深部真菌感染

人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的发病率与致死率很高,已成为人类健康的一大威胁,其中约50%的HIV感染者最终因侵袭性真菌病而死亡。高效抗反转录病毒治疗(HAART)的应用大大降低了HIV感染者深部真菌病的发生率。因此,深入研究HIV与深部真菌病的关系,对预防、诊断和治疗HIV感染者深部真菌病具有十分重要的意义。本文归纳了HIV感染者深部真菌病的流行病学调查、诊断与治疗进展,有助于临床医师预防和诊治HIV感染者深部真菌病,也为将来新型抗真菌药物的研发提供了思路和方向。

重要真菌病的临床诊治与防治策略

真菌是与细菌、病毒并列的人类三大致病微生物之一,主要感染免疫抑制人群。新中国成立以来我国医疗技术水平取得了很大进步,重要真菌病的预防及临床诊治工作也取得了一大批具有国际水平的成果,显著提高了人民群众的健康水平。但是我们也应该清醒地认识到,随着医疗水平的提高,使得HIV感染者、肿瘤放化疗后患者等免疫抑制人群存活率增高,加之全球交流及气候变化,导致高毒力、多药耐药病原真菌菌株如“超级真菌”-耳道念珠菌感染在我国多个城市散发并得到证实。因此,未来我国重要真菌病的预防及诊治之路仍任重道远,亟需加强临床各学科与医学真菌学、流行病学等基础学科及相关企业的协同合作,突出流行病学、致病机制及转化研究,加强产学研用合作,争取早日建成具有中国特色的重要真菌病预防与诊治关键技术体系,为世界提供具有我国特色的真菌病临床诊治标准,为提高我国重要真菌病预防与诊治水平贡献力量。

病原性真菌蛋白酶致病机制研究进展

蛋白酶在真菌的生存和生长过程中具有重要作用,同时也被认为是病原性真菌的重要毒力因子之一。病原性真菌蛋白酶可能参与真菌对宿主的黏附、定植和播散以及逃避宿主的免疫应答过程。部分蛋白酶还被认为是变应原,可诱发哮喘和过敏性疾病。在不同的病原性真菌中,蛋白酶作用也不同。研究蛋白酶的致病机制,可进一步了解真菌感染机制,为诊断及治疗真菌感染提供线索。

不同品系小鼠侵袭性真菌感染动物模型的构建

目的探讨不同品系小鼠侵袭性真菌感染动物模型的构建方法。方法取白念珠菌ATCC10231 T菌株(标准菌株)、GYWu27菌株[临床艾滋病(AIDS)病人来源]、GYF76菌株[临床外阴阴道念珠菌病(VVC)病人来源]、N110菌株(健康人来源)及新生隐球菌H99^(T)菌株(标准菌株)培养至对数生长期,离心重悬于无菌盐水中,采用分光光度法及细胞计数板调整菌液浓度至所需浓度;4~6周龄SPF级KM小鼠和Balb/c小鼠各30只,随机均分为5组,分别注射浓度1×10^(6)、1×10^(7)、1×10^(8)、1×10^(9)及1×10^(10) CFU/L白念珠菌ATCC10231 T菌株,观察14 d内小鼠的死亡速率筛选侵袭性真菌感染的最适浓度;取4~6周龄SPF级KM小鼠和Balb/c小鼠各50只,随机均分为GYWu27组、GYF76组、N110组、H99^(T)组及生理盐水(Saline)组,各菌株感染组小鼠经侧尾静脉注射最适浓度菌液感染、Saline组小鼠注射Saline,记录各组小鼠30 d内的一般状态、体质量及90 d内的生存情况;取GYWu27组、GYF76组及N110组死亡小鼠的肾脏、H99^(T)组小鼠脑组织及定期分批处死的Saline组小鼠肾脏和脑组织分别制作组织匀浆、稀释后接种于含0.05%氯霉素葡萄糖琼脂培养基(SDA)、检测肾脏和脑组织的真菌负荷量,接种于SDA、酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(YPD)鉴定分离后菌株;取GYWu27组、GYF76组、N110组两种系小鼠肾脏、肝脏及H99^(T)组两种系小鼠的肾脏、肝脏及脑组织,制作组织切片,观察组织学特征。结果侵袭性真菌感染动物模型Balb/c小鼠和KM小鼠的最适感染浓度分别为1×10^(8) CFU/L和1×10^(9) CFU/L;相同实验条件下,感染后KM小鼠一般状态较Balb/c小鼠好,白念珠菌及新生隐球菌感染的KM小鼠30 d内的体质量变化明显;白念珠菌和新生隐球菌体外培养菌株及感染小鼠体内分离菌株的培养特性无差异;白念珠菌感染的Balb/c小鼠靶器官真菌负荷量明显高于KM小鼠;新生隐球菌感染小鼠病变集中于脑组织,白念珠菌感染小鼠病变集中在肾脏。结论采用静脉感染方式、以1×10^(8) CFU/L白念珠菌和1×10^(9) CFU/L新生隐球菌分别感染Balb/c小鼠和KM小鼠,可构建稳定的侵袭性真菌感染动物研究模型。

外阴阴道念珠菌病病原菌对11种抗真菌药物体外敏感性分析

外阴阴道念珠菌病（vulvovaginalcandidiasis,VVC）是仅次于细菌性阴道炎的第二常见的阴道感染性疾病,影响了众多女性健康[1].本研究检测了VVC患者阴道分泌物分离的53株念珠菌对11种抗真菌药物的体外敏感性,为VVC临床用药提供信息.

从医学生角度谈本科第二课堂科研活动

第二课堂科研活动是探析医学本科生教育培养改革的重要平台,对于提高当代医学生的综合科研素养起着不可替代的积极作用。笔者在本科阶段处理好相对繁杂的第一课堂教学课程学习的同时,学有余力地参与以基础研究为主要活动的第二课堂之中。首先申请到第一课堂的授课老师的科研团队,通过阅读相关文献,明确指导老师课题组研究方向与内容。随后,协助课题组研究生进行部分课题的具体实验操作。在熟悉科研方向内容与实验技术方法以后,对指导老师所提示科研探究方向展开自己的思考与进一步实践。期间,遇到各种问题与研究生交流讨论,并定期与指导老师汇报实验阶段结果。最终较圆满完成学习活动。进入研究生阶段,作为曾经第二课堂活动的直接参与者,更能反思其在现阶段学习成效和思维方式的作用,发现不足之处,提出更好的建议。

密切关注新型冠状病毒肺炎并发、继发侵袭性真菌感染

新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)在中国武汉暴发波及全国,截至2月14日,死亡人数已经超过1300,严重威胁人类的生命。《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第五版)》中采用的抗病毒、抗细菌、激素、机械通气和循环支持等治疗手段,均为引发真菌感染的高危因素。当患者继发真菌感染时,病死率会大幅提升。因此,应制定科学、规范的预警技术,以便早期发现真菌感染;研发便捷、高效、低廉和覆盖面广的抗高发侵袭性真菌感染的诊断试剂盒以及新型抗菌材料防护物品,确保做到早期预警、明确诊断、精准治疗和有效防护,以应对可能出现的COVID-19继发严重真菌感染的状况。密切关注COVID-19并发、继发性真菌感染具有重要的现实意义。

皮肤癣菌的分子鉴定技术研究进展

皮肤癣菌是临床最常见的真菌之一,目前已报道的50余种皮肤癣菌中有20余种对人类有致病性。新兴的分子鉴定技术,具有快速、简便、特异的优点,能够克服传统的直接镜检和病原菌培养耗时费力的局限性,帮助皮肤癣菌病的快速精准诊断和合理用药。该文回顾近二十年来国内外文献,从皮肤癣菌标记基因和分类学进展、基于PCR的分子鉴定技术、恒温核酸扩增技术和MALDI-TOF MS技术这四个方面,介绍皮肤癣菌的分子鉴定技术的研究进展。

中国大陆地区Fonsecaea临床分离株的体外抗真菌药物敏感性特征

目的通过体外药敏试验研究分离自我国的着色霉属(Fonsecaea spp.)临床菌株对抗真菌药物敏感性特征,为制定精准抗真菌治疗方案提供依据。方法采用美国临床实验室标准化委员会推荐的丝状菌标准的肉汤微量稀释法(CLSI M38-A2法),利用11种临床抗真菌药物,对32株Fonsecaea spp.临床分离株进行的体外抗真菌敏感性测试,总结相关菌株的体外抗真菌药敏特征。同时,对迄今为止国内外83个已报道的Fonsecaea spp.病例的菌株药敏与临床特征进行系统性回顾分析。结果泊沙康唑(MIC_(50)=0.25μg/mL,MIC_(90)=0.5μg/mL)、艾沙康唑(MIC_(50)=0.25μg/mL,MIC_(90)=0.5μg/mL)、伏立康唑(MIC_(50)=0.125μg/mL,MIC_(90)=0.25μg/mL)等二代唑类抗真菌药对Fonsecaea spp.临床株的抗菌活性最高,而两性霉素B(MIC_(50)=4μg/mL;MIC_(90)=8μg/mL)、氟康唑(MIC_(50)=8μg/mL,MIC_(90)>8μg/mL)、棘白菌素类(MEC_(50)=8μg/mL,MEC_(90)>8μg/mL)的抗菌活性较低。结论Fonsecaea spp.3个常见的致病菌种对抗真菌药的敏感性和临床预后一致,优先推荐二代唑类药物(泊沙康唑、艾沙康唑、伏立康唑等)作为抗真菌治疗方案。有关Fonsecaea spp.临床分离菌株的体外联合药敏特征值得进一步研究。