东方田鼠实验动物化研究进展

东方田鼠在实验动物化方面的研究经过多年的努力,已取得了一系列的进展。作者就我国在东方田鼠的分类与分布、形态、生态、实验室饲养和繁育特性、实验室营养和环境、部分生物学特性、遗传学、微生物学和寄生虫学等方面的研究进展予以了阐述,同时提出了东方田鼠实验动物化尚需进一步研究的内容。

上海地区实验用免微卫星多态性分析

目的对上海地区的3个品系5个种群的家兔进行微卫星多态性分析。方法选择兔的13个微卫星位点，分析了上海地区3个品系家兔群体的遗传变异。结果新西兰兔、日本大耳兔、青紫兰兔3个品系（种）兔群体内的平均多态信息含量分别为0．3123、0．2012、0．1328；平均杂合度分别为0．4091、0．3472、0．2222；对三种群兔之间的遗传距离分析发现新西兰兔和日本大耳兔之间的遗传距离较低，青紫兰兔和其他两种兔的遗传距离较远。结论新西兰兔种群杂合度较高，青紫兰兔种群杂合度相对较低。

两种方法对上海及周边地区实验大小鼠螺杆菌携带情况的调查

目的了解上海及周边地区实验小鼠、大鼠螺杆菌携带情况,为我国实验动物等级及监测标准的制定提供参考和依据。方法 PCR法共检测了352只小鼠(清洁级101只,SPF级251只),101只大鼠(清洁级69只,SPF级32只);ELISA法共检测了88只小鼠(清洁级26只,SPF级62只),165只大鼠(清洁级84只,SPF级81只);并对其中88只小鼠、101只大鼠的PCR和ELISA法阳性检测率进行比较。结果 PCR法检测小鼠平均阳性率为35.8%(126/352),清洁级阳性率为51.5%(52/101),SPF级阳性率为29.5%(74/251);大鼠平均阳性率为70.3%(71/101),清洁级阳性率为69.6%(48/69),SPF级阳性率为71.9%(23/32);ELISA法检测小鼠平均阳性率为15.9%(14/88),清洁级阳性率为19.2%(5/26),SPF级阳性率为14.5%(9/62);大鼠平均阳性率为52.7%(87/165),清洁级53.6%(45/84),SPF级51.9%(42/81);88只小鼠PCR法阳性检测率为72.7%(64/88),ELISA法阳性检测率为15.9%(14/88);101只大鼠PCR法阳性检测率为70.3%(71/101),ELISA法阳性检测率为49.5%(50/101)。结论上海及周边地区实验大鼠、小鼠中皆存在着不同程度的螺杆菌感染,两种方法阳性检出率比较结果表明回盲部内容物PCR法较检测血清中抗螺杆菌抗体ELISA法更为敏感。

上海地区实验大小鼠肺支原体感染情况调查

目的了解上海地区清洁级和SPF级实验大、小鼠肺支原体（Mp）的感染情况。方法采集动物血清、气管中段，分别利用分离培养法、PCR法和ELISA法进行Mp检测。结果仅SPF级实验大鼠培养法呈阴性，其它级别大、小鼠三种方法检测结果皆有阳性。培养法检测实验小鼠和大鼠阳性率分别为2．9％和20％，PCR法的阳性率分别为21．4％和27．2％，ELISA法的阳性率分别为6．0％和21．5％。结论上海地区清洁级和SPF级大鼠和小鼠中存在着不同程度的肺支原体感染。

上海地区实验用羊的血清学调查初报

目的了解上海地区实验用羊的口蹄疫病毒、布鲁氏菌、蓝舌病病毒和弓形虫的感染情况。方法采集47份实验用羊全血，分离血清，用ELISA、间接血凝试验和试管凝集试验等方法检测口蹄疫病毒、布鲁氏菌、蓝舌病病毒和弓形虫的血清抗体。结果布鲁氏菌试管凝集试验未检出阳性血清；弓形虫间接血凝试验检出血清阳性率为2．1％，弓形虫的国产ELISA试剂盒与进口ELISA试剂盒检出血清阳性率分别为4．3％和36．2％；口蹄疫病毒、蓝舌病病毒和布鲁氏菌的ELISA方法检出抗体阳性率分别为2．1％、10．6％、和10．6％。结论上海地区实验用羊的质量状况不尽人意，需制定相应标准进行规范。

实验大鼠和小鼠多种细菌PCR检测与分析

目的调查上海市实验动物生产设施大鼠、小鼠细菌携带状况。方法比较国内外实验动物细菌监测方案,选取螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌作为检测项目,分别于2014年和2016年收集样品共计848份,采用PCR方法对上述6种病原体进行检测。结果 SPF级设施均无金黄色葡萄球菌污染,清洁级设施2014年无肺炎克雷伯杆菌污染,其它病原体在不同级别设施内均有不同程度的污染,所有清洁级设施均存在螺杆菌和牛棒状杆菌污染。螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌和牛棒状杆菌在不同级别动物上均检出阳性。螺杆菌、绿脓杆菌阳性率呈下降趋势,而啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、肺炎克雷伯杆菌阳性率则呈上升趋势。结论本研究全面、系统地分析了上海地区实验大鼠、小鼠细菌携带状况,为提高实验动物质量和饲养管理水平起促进作用,为我国实验动物国家标准的修订和完善提供依据和参考。

实验大鼠和小鼠绿脓杆菌分离株的鉴定和血清分型研究

目的了解上海、江苏实验大鼠和小鼠绿脓杆菌的感染状况及血清型分布情况。方法 2013年7月—2015年5月,从上海、江苏59个实验动物设施采集实验大鼠和小鼠的回盲部内容物进行绿脓杆菌分离、细菌形态、生化特性、16S rRNA基因序列和血清型分析。结果从20个设施分离到67株绿脓杆菌,生化鉴定和PCR试验结果均符合绿脓杆菌特征。血清型分析显示E型(17株,占25.4%)和B型(14株,占20.9%)为主要血清型。结论本地区实验大鼠和小鼠存在绿脓杆菌感染,血清型分布较分散,无明显的流行特征。

高通量测序技术分析无特定病原体级实验小鼠肠道的菌群组成

目的:应用高通量测序技术检测无特定病原体(specific pathogen free, SPF)级实验小鼠肠道的菌群组成,分析其细菌携带状况。方法:应用高通量测序技术,对14个品系共65只SPF级实验小鼠的回盲部肠道内容物样本中细菌16S r RNA V3~V4区进行深度测序,分析样本的菌群组成、丰度和Alpha多样性,并在属水平上筛选葡萄球菌属、假单胞菌属、支原体和棒状杆菌属。结果:65只SPF级健康成年小鼠的肠道内容物样本经数据过滤和质控后,共得到144 318条高质量序列用于后续分析,结果提示相同品系样品间菌群丰度表现出明显的差异。所有样本的序列主要集中在以下8个门,依次为厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、放线菌门(Actinobacteria)、Saccharibacteria、软壁菌门(Tenericutes)和螺旋菌门(Spirochaetae)。在属水平上检测到了葡萄球菌属、假单胞菌属、支原体和棒状杆菌属。结论:相同品系的SPF级实验小鼠肠道菌群在物种组成、丰度及Alpha多样性方面也会表现出显著差异,有必要致力于研究各种方法以使实验动物的肠道菌群在可控和可监测范围内,高通量测序技术提供了这一可能。

RT-PCR检测实验小鼠自然和实验感染鼠诺如病毒

为了解小鼠自然感染鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的情况,采集80只实验小鼠的粪便样本,应用RT-PCR方法扩增粪便样本的MNV ORF2特异性基因(187bp,MNV nt 5473-5659)片段。对PCR检测为阳性的粪便样本经10倍体积的PBS稀释后灌胃到4只ICR小鼠体内,1周后,将3只ICR小鼠与灌胃的小鼠同居饲养,观察小鼠是否出现异常症状,定期采集粪便做RT-PCR检测,研究小鼠实验感染MNV的情况。1个月后,处死小鼠,采集粪便、盲肠、十二指肠、脾、肝、大脑、肾、肺、心脏、胸腺、子宫、卵巢和唾液腺等器官做RT-PCR检测,研究MNV的主要感染部位。结果表明,自然感染的阳性率为13.75%(11/80);实验感染的小鼠外表健康、活泼、没有腹泻现象,阳性率为100%;主要的感染部位为小鼠的消化系统。本研究是首次在上海地区实验小鼠粪便中检测到MNV。

实验大鼠、实验小鼠肠道鞭毛虫种类和检索

我们对普通级SD大鼠和KM小鼠肠道内鞭毛虫分别作了观察,从大鼠检出10种肠道鞭毛虫:鼠唇鞭毛虫(Chilomastixbettencourti)、人肠滴虫(Enteromonashominis)、西蒙氏贾第虫(Giardiasimoni)、鼠六鞭虫(Hexamitamuris)、似单尾滴虫(Monocercomonoidiessp)、人五毛滴虫(Pentatrichomonashominis)、曲滴虫(Retortamonassp)、田鼠四毛滴虫(Tetratrichomonasmicroti)、微小三毛滴虫(Tritrichomonasminuta)和鼠三毛滴虫(Tritrichomonasmuris)。从小鼠检出8种肠道鞭毛虫:鼠唇鞭毛虫(Chilomastixbettencourti)、鼠贾第虫(Giardiamuris)、鼠六鞭毛虫(Hexamitamuris)、鼠八鞭毛虫(Octomituspulcher)、人五毛滴虫(Pentatrichomonashominis)、田鼠四毛滴虫(Tetratrichomonasmicroti)、微小三毛滴虫(Tritrichomonasminuta)、鼠三毛滴虫(Tritrichomonasmuris)。根据大鼠和小鼠肠道鞭毛虫的形态特征分别列出了检索表。

实验大鼠泰泽病原体三种检测方法的比较

目的 利用不同的检测方法调查了解我国实验大鼠中泰泽病原体的携带情况,并比较三种方法的检测结果,为合理选择实验室检测方法提供依据.方法 应用ELISA法,间接免疫荧光（IFA）法和套式PCR法三种检测方法对国内大型实验动物生产厂家送检的125只实验大鼠同时进行泰泽病原体检测,并对比分析检测结果,评估我国实验大鼠泰泽病原体的携带情况.结果 共检测125只实验大鼠,其中清洁级54只,SPF级71只,IFA法检出36只阳性,89只阴性,阳性检出率28.8%：ELISA法检出24只阳性,101只阴性,阳性检出率19.2%：PCR法检出6只阳性,119只阴性,阳性检出率4.8%;ELIsA法和IFA法阳性检出率要高于PCR法.结论 对于泰泽病原体的检测,可以采用IFA法或ELISA法进行抗体检测,对可疑的样品用PCR法验证.相比而言,IFA法具有简单,可靠、价格低廉的优点,可以用于实验大鼠泰泽病原体感染状况的初步调查和流行病学监测.

啮齿动物螺杆菌多重PCR检测方法的建立

目的建立一种可同时检测肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌的多重PCR方法。方法根据已公布的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌16SrRNA基因序列设计三对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果三对引物能分别扩增出特异性的417 bp、364 bp、324 bp目的条带。最佳退火温度为52℃,镁离子浓度为2.0mmol/L,dNTP浓度为200μmol/L,引物浓度为0.625μmol/L。在此条件下多重PCR同时检测的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌敏感度均为10 fg。结论本实验建立的多重PCR是一种敏感、特异、高效的方法,为同时检测啮齿动物中肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌奠定了良好的基础。

实验大鼠、实验小鼠肠道鞭毛虫种类和检索

对普通级 SD大鼠和 KM小鼠肠道内鞭毛虫分别作了观察 ,从大鼠检出 1 0种肠道鞭毛虫 :鼠唇鞭毛虫 ( Chilomastix bettencourti)、人肠滴虫 ( Enteromonas hominis)、西蒙氏贾第虫( Giardia simoni)、鼠六鞭虫 ( H examita muris)、似单尾滴虫 ( Monocercomonoidies sp)、人五毛滴虫( Pentatrichomonas hominis)、曲滴虫 ( Retortamonas sp)、田鼠四毛滴虫 ( Tetratrichomonas microti)、微小三毛滴虫 ( Tritrichomonasminuta)和鼠三毛滴虫 ( Tritrichomonasmuris)。从小鼠检出 8种肠道鞭毛虫 :鼠唇鞭毛虫 ( Chilomastix bettencourti)、鼠贾第虫 ( Giardia muris)、鼠六鞭毛虫 ( H examitamuris)、鼠八鞭毛虫 ( Octomitus pulcher)、人五毛滴虫 ( Pentatrichomonas hominis)、田鼠四毛滴虫( Tetratrichomonas microti)、微小三毛滴虫 ( Tritrichomonas minuta)、鼠三毛滴虫 ( Tritrichomonasmuris)。

培养法和 PCR法用于实验大、小鼠细菌检测的比较分析

目的比较培养法和PCR法对实验大、小鼠的细菌检测效果。方法分别采用传统细菌分离培养结合生化鉴定方法和PCR方法,对78只SPF级大鼠和422只SPF级小鼠进行检测,对两种方法的检测结果进行比较分析。结果 78只SPF级大鼠均未检测出阳性。422只SPF级小鼠,培养法检测阳性率7.11%(30/422),其中金黄色葡萄球菌10只,绿脓杆菌22只,肺炎克雷伯杆菌2只。PCR法检测阳性率7.58%(32/422),其中金黄色葡萄球菌10只,绿脓杆菌25只,肺炎克雷伯杆菌2只。结论 PCR法的敏感性高于培养法,操作简便、快捷,适用于实验动物细菌的快速诊断和大规模的质量筛查。

猪副粘病毒感染的初步诊断和病毒分离

在临床症状复杂的不同猪群中 ,分离出 4株副粘病毒。该病毒能凝集鸡红细胞 ,其血凝性能被鸡新城疫标准血清抑制。病毒能在鸡胚中生长繁殖。电镜观察不是冠状病毒而是副粘病毒。该病毒能引起猪的腹泻、呼吸急促、繁殖障碍、神经症状和体温升高等临床症状。

1株猪副粘病毒的分子鉴定

以1株从发病猪中分离到的副粘病毒(MP01株)为研究对象,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对它的F基因进行分段扩增、定向克隆到pUC119质粒载体,然后测定它们的核苷酸序列,并推导出相应的氨基酸序列。MP01株的F基因全长1662bp,编码553个氨基酸,它们的裂解位点的氨基酸序列为112G-K-Q-G-R-L117,是NDV弱毒株特有的序列结构。序列分析结果表明,它与国内标准毒株F48E9的核苷酸同源率为90%,氨基酸的同源率为93%;它与弱毒株LaSota的核苷酸同源率为91%,氨基酸同源率为94%。

东方田鼠的同工酶与异构蛋白生化基因位点

目的观察四类东方田鼠在10个同工酶与异构蛋白生化基因位点上的基因分布特征，以研究它们间的遗传关系。方法应用乙酸纤维素膜电泳对四类东方田鼠的同工酶与异构蛋白生化基因位点进行测定分析。结果与结论黑龙江小体型东方田鼠与其他三类东方田鼠的电泳结果差异较大，在6个位点上都存在其所特有的等位基因，并且在其中的3个位点上它的基因型与其他三类鼠完全不同；湖南、宁夏和黑龙江大体型东方田鼠三者间的遗传距离在0．0633-0．2107之间，而黑龙江小体型东方田鼠与其他三类鼠的遗传距离在0．7068～0．8953之间；UPGMA聚类分析显示，湖南、宁夏和黑龙江大体型东方田鼠聚为一类，亲缘关系较近，而黑龙江小体型东方田鼠单独为一类，与其他三种鼠的亲缘关系均相对较远。

肝螺杆菌LAMP快速检测方法的建立及初步应用

根据肝螺杆菌fla B基因保守区域设计一组特异性引物,经过条件优化、特异性和敏感性分析,成功建立了肝螺杆菌LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP扩增方法仅能检测出肝螺杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增。检出肝螺杆菌最低模板量为86.9fg/L,是普通PCR所需模板量的1/10。本研究建立的LAMP快速检测方法具备操作简单、特异性好、灵敏度高的优点,结果易于观察,对仪器设备要求低,适宜推广应用。