采用Percoll法分离、纯化鲫肝细胞

以Ⅳ型胶原酶消化法分离鲫(Carassius auratus)肝细胞,然后将其分成2组,一组不再经过进一步处理(即对照组);另一组再用Percoll液密度梯度离心纯化肝细胞(即实验组),然后将2组细胞接种于DMEM/F12培养基中培养10 d。在倒置显微镜下观察2组肝细胞的形态并绘制细胞生长曲线;采用台盼蓝染色法比较2组肝细胞的存活率;通过HE染色法在光镜下检测肝细胞的纯度;采用MTT比色法测定2组肝细胞的增殖率;收集肝细胞培养上清液检测白蛋白、尿素以及乳酸脱氢酶的水平以检测2组肝细胞功能。结果表明,对照组鲫肝细胞存活率为80.6%,纯度为83.2%;实验组肝细胞存活率和纯度明显高于对照组(P<0.05),分别为94.2%和95.1%。实验中发现,从开始接种到大部分肝细胞贴壁生长,实验组比对照组肝细胞的增殖明显加快(P<0.05)。白蛋白分泌功能、尿素合成能力及乳酸脱氢酶检测结果表明,实验组培养上清液中白蛋白分泌量、尿素合成能力明显高于对照组(P<0.05);而乳酸脱氢酶含量明显低于对照组(P<0.05)。结论认为,用Percoll梯度液分离纯化肝细胞,可提高肝实质细胞纯度和活力,适合体外原代培养。

一种新型肠粘膜保护剂——载铜蒙脱石对肠粘膜屏障功能影响的研究

以蒙脱石(MMT)为原料,通过阳离子交换反应合成载铜蒙脱石(MMT-Cu)。为探讨载铜蒙脱石对肠粘膜屏障功能的影响,采用体外培养的单层Caco-2细胞模型为研究对象,以细菌易位数量和肠绒毛损伤程度做为指标进行研究。结果表明:MMT-Cu可明显减少(P<0.01)E.coliK88、S.choleraesuis侵入到Caco-2细胞内的数量,与对照组相比,下降了2logCFU/mL～3logCFU/mL;并能显著降低(P<0.01)LDH的释放量。扫描电子显微镜下观察可见,加入MMT-Cu一段时间后,当E.coliK88和S.choleraesuis粘附Caco-2细胞时,微绒毛依旧排列整齐、致密,可见肠上皮细胞保持完好。结果表明,MMT-Cu对肠粘膜具有屏障作用,可作为一种消化道粘膜保护剂。