狼源产气荚膜梭菌的分离鉴定及分子分型

为探究黑龙江省某动物园狼急性死亡病例的病原菌及其生物学特性,本研究采集病死狼心血、肝、脾及颌下淋巴结样品,经细菌分离纯化,结果显示,上述样品接种鲜血琼脂培养基厌氧培养24 h后可见灰白色、双层溶血环的菌落,在强化梭菌培养基上形成黑色圆形菌落;革兰染色镜检可见单个或呈短链状排列的革兰阳性粗大杆菌。通过生化试验和16S rRNA基因的PCR扩增及序列分析对分离菌进行鉴定,并进一步经PCR扩增确定分离菌的毒素型。生化试验结果显示,分离菌能发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,且还原性硝酸盐试验、明胶液化和牛奶爆裂发酵均呈阳性,且无运动性;16S rRNA基因、毒素基因的PCR扩增和遗传进化分析结果表明分离菌为A型产气荚膜梭菌,命名为HLJ15-2。经多序列位点分型分析(MLST)确定分离菌的ST型,结果显示分离菌为ST 221型,属于鸡源菌。采用K-B纸片扩散法对分离菌进行药敏试验,结果显示该菌对氟苯尼考、头孢呋辛钠、头孢噻肟等磺胺类和喹诺酮类抗菌药敏感。小鼠分别经腹腔接种10倍倍比稀释(5.21×10^(5) cfu/mL~1.52×10^(9) cfu/mL)的HLJ15-2菌液,计算该菌对小鼠的半数致死量(LD_(50)),采集病死小鼠肝、脾、肠进行组织病理学观察分析分离菌对小鼠的致病性,结果显示分离菌LD_(50)为2.26×10^(7) cfu/mL,剖检小鼠可见肝脏、脾脏均有出血,肠道膨隆,肠黏膜充血,组织病理切片观察可见肝内各级血管淤血,肝细胞条锁状排列消失,胞浆内出现大小不等的空泡;脾脏红髓比例增加,白髓部分细胞坏死;肠绒毛断裂,黏膜固有层上皮细胞增生、黏膜下层红细胞增多、充血、炎性细胞浸润。本研究首次报道了致病性A型产气荚膜梭菌可感染狼,并导致其急性死亡,为野生动物梭菌性传染病的诊断与防控提供参考。

一株c基因型牛副流感病毒3型病毒的分离鉴定

从黑龙江省某牛场当中患有呼吸系统疾病的病牛鼻拭子中分离到一株病毒,该病毒在MDBK细胞上能够产生典型的病变。经免疫荧光鉴定表明成功分离到一株牛副流感病毒3型,命名为HLJ1。将病毒的M基因与GenBank中已发表BPIV3毒株的M基因进行同源性比较及系统进化分析,结果表明HLJ1与BPIV3c型参考毒株NX49的同源性最高为99.7%,因此HLJ1分离株属于c基因型BPIV3。我们的结果将为牛副流感病毒3型检测试剂盒及疫苗的研发工作奠定基础。