成人原发性肾病综合征激素疗效差异的相关因素

目的:通过分析经肾活检确诊的成人原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)的临床资料,以了解影响该病激素疗效的相关因素。方法:回顾性分析2013年1月至2014年1月间中南大学湘雅二医院肾脏科425例经肾活检确诊的PNS患者的一般资料、实验室检查及肾病理类型。结果:轻微病变、局灶节段肾小球硬化、Ig A肾病对激素治疗敏感(P<0.05);14~24岁患者较其他年龄组的患者对激素的敏感性要高(P<0.05)。激素抵抗组与非激素抵抗型肾病综合征组比较Ig A水平明显下降(P<0.05),激素抵抗型肾病综合征组治疗前后24 h尿蛋白定量的比较,差异无统计学意义(P>0.05),非激素抵抗型肾病综合征组治疗前后24 h尿蛋白定量的比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肾疾病的病理类型及患者的年龄与激素疗效存在一定的关系。Ig A水平的相对降低可能与PNS激素疗效有关。

成人原发性肾病综合征病理类型与激素疗效的关系

目的探讨成人原发性肾病综合征（PNS）的肾脏病理类型分布及与激素疗效的关系。方法回顾性分析982例成人PNS的病理类型及激素治疗效果。结果 982例PNS患者行肾活检时的平均年龄（36.0±15.9）岁,男女比例1.68∶1;PNS常见的病理类型主要为：轻微病变（MCD）、膜性肾病（MN）、局灶节段硬化症（FSGS）。其中激素敏感型患者病理类型依次为MCD、MN、系膜增生性肾病,激素抵抗型患者病理类型依次为FSGS、MN、MCD等。不同性别间激素疗效差异无统计学意义（P〉0.05）。MCD是14~23岁、24~33岁、34~43岁这3个年龄段是PNS患者最常见的病理类型;MN在〉34岁各年龄段所占比例较高。结论成人PNS多见于青壮年,男性多于女性。MCD多对激素敏感,而FSGS多对激素抵抗。

唾液尿素、肌酐、尿酸水平评估临床终末期肾病的透析效果

目的:探讨终末期肾病(ESRD)患者血液透析前后唾液尿素(Urea)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)水平的变化,评估透析后Urea,Cr,UA的清除效果及临床应用价值。方法:收集透析患者的唾液2 mL,同时抽取动脉血2 mL,在全自动生化分析仪上测定血清和唾液Urea,Cr,UA的含量。比较透析前后血清与唾液Urea,Cr,UA浓度,分析其相关性,计算透析前后唾液和血清Urea,Cr,UA的下降比率(RR)。结果:透析患者血清与唾液Urea,Cr,UA水平高度相关(相关系数分别为0.909,0.873,0.901)。透析后血清和唾液中Urea,Cr,UA浓度比透析前显著降低(均P<0.05)。血清与唾液Urea,Cr,UA的RR值比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:ESRD透析患者唾液Urea,Cr,UA的清除效果与血清高度一致,有望替代血清Urea,Cr,UA水平来评估血液透析效果和监测患者肾功能。

高效液相色谱法检测肾病综合征患者泼尼松血药浓度及其临床意义

目的:建立一种高效液相色谱(HPLC)法测定泼尼松(PS)血药浓度的方法,并探讨肾病综合征PS血药浓度与蛋白尿消减关系。方法:以乙酰苯胺为内标,采用HP1100系列高效液相色谱仪,分析柱HPLichrosphere Ca柱(250mm×4mm,5μm);流动相为:甲醇∶四氢呋喃∶水=25∶25∶50(V/V),流速为1.0ml/min;检测波长为240nm;室温25℃。血清标本以甲醇沉淀蛋白。结果:泼尼松浓度与峰面积比值之间的线性关系良好,回归方程为Y=6.84×10-4×-39.4×10-4,相关系数为0.99993,回收率为98.70%,批间CV3.76%,批内CV2.25%。线性范围:10～500μg/ml;检测限:5μg/ml。NS组与对照组比较血液平均SP浓度,差异有统计学意义(P<0.05);男女组别比较,差异无统计学意义(P>0.05);激素抵抗组与激素敏感组血药浓度比较,抵抗组患者SP血药低于敏感组血药浓度,浓度差异有统计学意义(P<0.05)。结论:高效液相色谱法检测SP血药浓度,色谱峰分离良好,无干扰,是一种可靠、便捷的检测血清PS浓度的方法,对监测长期应用泼尼松治疗类疾病和肾病综合征的血药浓度监测(TDM),了解用药个体化差异,规范用药方法,为临床治疗提供科学、合理用药理论依据和重要参考,对药效学研究具有重要临床意义。

腹膜透析腹膜纤维化防治的研究进展

腹膜透析作为肾脏替代治疗方法已经有20多年的历史,它的疗效已得到极大地提高,目前已证明腹膜透析与血液透析一样有效,而且在某些方面优于血液透析.然而,腹膜透析要进一步得到患者更广泛的接受,还有许多需克服的问题,腹膜纤维化就是近年来越来越重要的一个影响因素.研究表明,随着插管技术的改进,感染率的下降,腹膜纤维化导致的超滤功能丧失已是慢性腹膜透析患者退出的主要原因[1].因此研究腹膜透析并腹膜纤维化的分子机理,探索有效防治措施,对延长腹膜寿命,提高腹膜透析水平意义重大.

免疫抑制剂在肾病治疗中的新进展

免疫抑制剂是治疗肾脏疾病的重要手段。探索常用的免疫抑制剂的适用范围、合理配伍和用量 ,以提高疗效并减少毒副作用 ,是肾病治疗中共同关注的热点。本文概述免疫抑制剂在肾病治疗中应用的新进展。

诱变乳酸杆菌的生物学特性及功能研究

目的探讨诱变乳酸杆菌L.b-DUC-17和L.b-DUU-22在胃肠道中的存活能力、黏附力、抑菌能力以及尿毒素分解能力,为选育治疗慢性肾衰的益生菌寻找生物学依据。方法 1模拟人体胃肠道环境,在不同pH值、不同浓度胃蛋白酶、胆盐、胰蛋白酶的MRS培养基中培养诱变乳酸杆菌L.b-DUC-17和L.bDUU-22并测定其存活率;2用人结肠癌HT-29细胞研究诱变乳酸杆菌对肠上皮细胞的黏附力;3用平板抑菌实验法,观察诱变菌株对致病性大肠埃希菌(EPEC)、致病性粪肠球菌(E.faecalis)及金黄色葡萄球菌(SA)等致病菌的抑制作用。4复制肾衰动物模型研究诱变乳杆菌对尿毒素的清除作用。大鼠随机分为假手术组、模型组、野生乳酸杆菌治疗组(L.B组)和诱变乳酸杆菌治疗组(Mut-L.B组)。给药8周后,收集血和消化液,用HPLC法测定硫酸吲哚酚(IS);自动生化分析仪测定肌酐(Cr)、尿素(UN)浓度。结果1在培养液pH=1.5、胆盐浓度为0.4 g·d L^(-1)时,诱变菌株活菌数均达1×105 cfu·m L^(-1)以上。2在不同浓度胃蛋白酶pH值、胰蛋白酶及0.2%胆盐作用下,诱变菌株4 h活菌数均达1×10~6 cfu·m L^(-1)以上。3比较诱变与野生乳酸杆菌黏附HT-29细胞黏附指数,2组各时间点黏附指数差异无统计学意义。4抑菌实验结果显示:L.b-DUC-17对EPEC、E.faecalis及SA的抑菌圈直径分别为(16.5±0.38)、(15.3±0.42)、(13.27±0.40)mm;L.b-DUU-22对EPEC、E.faecalis及SA的抑菌圈直径分别为(15.13±0.31)、(13.63±0.12)、11.57±0.21)mm。5 Mut-L.B组血和消化液中IS、Cr、UN水平较模型组及L.B组均显著降低(P<0.01)。结论诱变菌株L.b-DUC-17和L.b-DUU-22对胃酸、胆盐、胃蛋白酶及胰蛋白酶的耐受性和肠上皮细胞黏附功能与野生乳酸杆菌无统计学差异;对致病菌的抑制作用和降低尿毒素的功能明显增强。

维持性血液透析患者血管钙化及相关因素分析

目的观察维持性血液透析(MHD)患者血管钙化情况及其影响因素,探讨矿物质与骨代谢指标在MHD患者血管钙化中的作用。方法选取MHD患者69例和健康体检者67例,检测血清白蛋白、血清总钙、血磷、血肌酐、碱性磷酸酶、钙磷乘积和全段甲状旁腺激素(i PTH)。同时行侧位腹平片(空腹)、髋关节正位片、双手及腕关节正位片X线检查以评价腹主动脉、股动脉、桡动脉及双手动脉钙化情况,并了解钙化与相关因素之间的关系。结果 MHD组血管钙化程度明显高于正常对照组(P<0.05);中重度钙化组年龄、透析时间、血糖、血磷和钙磷乘积均高于轻度钙化组(P<0.05);低i PTH(<150 ng/L)、高i PTH(>300 ng/L)患者i PTH与钙化相关(P<0.05),150~300 ng/L i PTH患者i PTH与钙化无相关性(P>0.05)。结论年龄、透析时间、血磷、血糖、钙磷乘积、i PTH水平可能与MHD患者血管钙化密切相关。

产尿酸氧化酶基因工程菌的构建

目的将尿酸氧化酶基因克隆到保加利亚乳酸杆菌中,使之能产生尿酸氧化酶,为开发能够分解尿酸、对高尿酸血症有治疗作用的可食用基因工程菌奠定基础。方法根据genbank上已知的产朊假丝酵母菌尿酸氧化酶基因序列(Uricase,E12709),PCR扩增尿酸氧化酶基因片段,将其插入质粒pMG36e,构建成重组质粒pMG36e-U,电转化保加利亚乳酸杆菌,SDS-PAGE鉴定基因工程菌体裂解液中的尿酸氧化酶,测定尿酸氧化酶活性。结果从产朊假丝酵母基因组中PCR扩增到尿酸氧化酶基因,并构建成含有尿酸氧化酶基因的重组质粒pMG36e-U,重组质粒pMG36e-U电转化保加利亚乳酸杆菌成功构建了含尿酸氧化酶的基因工程乳酸杆菌。SDS-PAGE测定基因工程菌合成的尿酸氧化酶亚基分子量约为34 kD,在体外测定菌酶液活性可达0.33 U.mL-1。结论尿酸氧化酶基因克隆入保加利亚乳酸杆菌中,并具有酶分解能力。

黄芪对人肾小管上皮细胞细胞外基质分泌的影响及其机制探讨

目的:探讨黄芪对人肾小管上皮细胞细胞外基质分泌的影响及其可能机制。方法:将体外培养的人肾小管上皮(HK-2)细胞株转板至细胞融合并同步后,分为空白对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激组(5ng/ml)、TGF-β1加黄芪100μg/ml组、TGF-β1加黄芪1mg/ml组。作用24h后半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测纤维连接蛋白(FN)及纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)mRNA;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清液中FN的含量;Western blot检测PAI-1的表达。结果:(1)HK-2细胞表达少量FN和PAI-1;(2)HK-2细胞在5ng/mlTGF-β1刺激下分泌FN、PAI-1 mRNA及FN、PAI-1蛋白表达明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);(3)HK-2细胞在TGF-β1和不同浓度的黄芪作用后,可使FN、PAI-1 mRNA及蛋白表达减少,与TGF-β1组比较差异有统计学意义(P<0.01),尤以黄芪1mg/ml组为甚。结论:TGF-β1可促进HK-2细胞分泌FN和PAI-1,黄芪可部分拮抗TGF-β1的上述效应。这可能是黄芪预防或改善肾小管间质病变的作用机制之一。

尿酸氧化酶与肌酐水解酶融合基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的构建含尿酸氧化酶与肌酐水解酶融合基因的质粒并转化大肠杆菌,使其能同时分泌该两种酶分解尿酸及肌酐。方法根据GenBank数据库已知的尿酸氧化酶基因设计引物,扩增到去掉终止密码子的尿酸氧化酶基因中,并使其连接到质粒pGM36e上构建成pGM36e-U,然后根据已知肌酐水解酶基因设计引物扩增肌酐水解酶基因,把其连接到质粒pGM36e-U中尿酸氧化酶基因后构建成重组质粒pGM36e-U/C,转化大肠杆菌,筛选鉴定重组大肠杆菌,并进行SDS-PAGE分析。将工程菌于特定浓度肌酐和尿酸的培养基中培养24 h,取培养液测定肌酐和尿酸浓度。结果重组质粒得到大小约1.68 kb基因片段。为尿酸氧化酶及肌酐水解酶之合。转化大肠杆菌后尿酸氧化酶及肌酐水解酶活性得到表达。肌酐分解率提高43.50%,尿酸分解率提高42.32%。结论构建的含复合基因的重组质粒转化大肠杆菌后能表达尿酸氧化酶及肌酐水解酶活性。分解尿酸和肌酐。

基因芯片技术筛选家蝇抗菌肽相关基因

用生物学软件对GenBank中部分昆虫抗菌肽基因编码区保守域设计探针,用直接点样法将探针点印在特制玻片上构建寡核苷酸(Oligonucleotide,oligo)探针微阵列;提取诱导后24h的家蝇三龄幼虫脂肪体总RNA,逆转录成cDNA并标记上荧光标记物Cy3,与构建的oligo探针微阵列杂交,经洗片、扫描处理后进行数据分析。结果在两次重复实验中均检测到有效杂交信号的基因点有15个(不包括阳性对照基因),为进一步发现其新基因提供了依据。

连续性血液净化对内皮细胞组织因子活性的影响及相关因素分析

目的探讨连续性血液净化(CBP)对体外培养内皮细胞组织因子(TF)活性的影响及其相关因素。方法采用脐静脉内皮细胞株培养、一期凝固法检测组织因子活性;酶联免疫吸附法测定血清TNF-α,IL-1β浓度。结果连续性血液净化能有效清除多器官功能障碍(MODS)患者血清TNF-α,IL-1β等细胞因子;体外培养内皮细胞经MODS患者血清刺激后组织因子活性较空白对照组明显升高(P<0.05)。经CBP治疗后,患者血清对内皮细胞TF活性的影响呈下降趋势,与治疗过程中血清TNF-α,IL-1β变化趋势一致,呈正相关(TNF-α:r=0.655,P<0.05;IL-1β:r=0.630,P<0.05)。肿瘤坏死因子呈剂量依赖性增加内皮细胞组织因子活性(r=0.899,P<0.01),而肝素对TF活性无明显影响。结论连续性血液净化可以部分改善MODS患者内皮细胞功能,降低内皮细胞组织因子活性,其机制可能通过清除TNF-α,IL-1β等细胞因子而实现。

P504S,34βE12,P63及前列腺特异性抗原在前列腺癌中的表达特点及诊断意义

目的:观察α-甲基-辅酶A-消旋酶(alpha-methylacyl-CoA racemase,P504S)、角蛋白-903(34βE12)、P63及前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)在不同性质前列腺穿刺标本中的表达特点,探讨它们在前列腺癌病理诊断及鉴别诊断中的意义。方法:收集中南大学湘雅二医院前列腺穿刺活检标本238例,其中前列腺癌140例,前列腺转移性癌10例,良性前列腺增生72例,前列腺高级别上皮内瘤16例。采用免疫组织化学方法检测P504S,34βE12,P63及PSA在前列腺病变中的表达情况。结果:P504S在前列腺癌中呈高表达(阳性率91.43%),在其他3种组织中均表达很低(P<0.05);34βE12与P63在前列腺癌中阳性率(1.42%)均低于高级别前列腺上皮内瘤及前列腺增生(分别为93.75%和97.22%,P<0.05);PSA除在前列腺转移癌中呈阴性表达外,在其他3种组织均为阳性。结论:联合检测P504S,34βE12,P63及PSA,并结合病理形态综合分析,才能有助于前列腺癌的确诊。

HPLC法测定强的松的血药浓度及其临床应用价值

【目的】建立一种可靠、快捷的高效液相色谱（HPLC）法测定强的松（PS）血药浓度的方法，并探讨体内PS血药浓的临床应用价值。【方法】以乙酰苯胺为内标，采用HP1100系列高效液相色谱仪，分析柱HP Lichrosphere Ca柱（250mm×4mm，5um）；流动相为：甲醇：四氢呋喃：水=25：25：50（V／V），流速为1．0ml／min；检测波长为240nm；室温25℃。血清标本以甲醇沉淀蛋白。【结果】用5％高氯酸溶液分别配制5个不同浓度的SP标准液，制备标准曲线，结果强的松浓度与峰面积比值之间的线性关系良好，回归方程为Y=6．84×10-4X-39．4×10-4，相关系数为0．99993，回收率为98．70％，批间CV3．76％，批内CV2．25％。线性范围：10～500μg／ml；检测限：5mg／ml。【结论】色谱峰分离良好，无干扰。本法是一种可靠、便捷的检测血清PS浓度的方法，适用于临床与治疗肾病的血药浓度监测（TDM）及研究工作。

维持性血液透析患者与乙型肝炎病毒感染

乙型肝炎病毒（HBV）感染是最严重危害人类健康公共卫生问题之一，全球约有3．5亿慢性HBV携带者，中国约占其中1／3左右，居世界第一位，其中15％～40％的慢性乙型病毒性肝炎（慢性乙型肝炎）患者将发展为肝硬化和肝细胞癌。血液透析是治疗慢性肾衰竭的有效替代方法之一，维持性血液透析患者HBV感染率明显高于健康人群和慢性肾脏病非透析患者。

产肌酐水解酶基因工程菌的构建

从恶臭假单胞菌基因组中PCR扩增到肌酐水解酶基因,并构建成含有肌酐水解酶基因的重组质粒PMG36e-C,重组质粒PMG36e-C电转化保加利亚乳酸成功构建了含肌酐水解酶的基因工程乳酸菌。SDS-PAGE测定基因工程菌合成的肌酐水解酶亚基分子量约为28 KD,在体外测定菌酶液活性可达0.19 u/mL,为开发具有分解肌酐的对尿毒症有治疗作用的可食用基因工程菌奠定基础。

普罗布考对甲基胍诱导纤维化相关因子在HK-2细胞表达的影响

目的研究降脂药普罗布考对小分子尿毒素甲基胍诱导纤维化相关因子在人肾小管上皮细胞表达的影响。方法 HK-2细胞分3组培养,A组(正常对照,不加干预因素);B组培养基中加入0.5mmol.L-1甲基胍;C组培养基中加入0.5mmol.L-1甲基胍和20μmol.L-1普罗布考。各组细胞培养48h后用免疫细胞化学、RT-PCR检测TGF-β1、CTGF和FN,并用流式细胞仪对以上因子作定量检测,以观察其在HK-2细胞中的表达。结果在甲基胍刺激后,细胞免疫化学染色,HK-2细胞质中着色,显示TGF-β1、CTGF和FN均有表达。正常对照组HK-2细胞质中无着色。测定结果显示甲基胍组TGF-β1、CTGF和FN显著高于正常对照组(P<0.01),加入普罗布考后,表达显著下降(P<0.01)。结论甲基胍能促进纤维化相关因子在肾小管上皮细胞中表达;普罗布考能抑制甲基胍诱导纤维化相关因子在肾小管上皮细胞的表达。

诱变乳酸杆菌对肾衰竭大鼠血肌酐、尿素浓度及肾脏病理的影响

目的利用大鼠5/6肾切除模型,探讨诱变乳酸杆菌经胃肠道清除肌酐(Cr)、尿素氮(UN)的能力及其对肾脏纤维化相关因子表达和肾脏病理的影响。方法雄性6周龄SD大鼠60只随机分为4组:假手术组,模型组,原始乳酸杆菌治疗组,诱变乳酸杆菌治疗组。给药8周后,收集24h尿液,留取血标本,处死大鼠,收集消化液及残肾组织,测定尿、血及消化液中Cr、UN浓度。HE和Masson染色观察肾脏病理变化,免疫组化检测肾组织TGF-β1及FN的表达。结果诱变乳酸杆菌治疗组与模型组及原始乳酸杆菌治疗组比较,尿Cr、UN水平与模型组比较无明显变化(P>0.05),血和消化液Cr、UN水平明显下降(P<0.01),肾小管损伤与肾间质纤维化明显减轻,TGF-β1和FN表达明显下降(P<0.05)。结论诱变乳酸杆菌可能通过降解胃肠道小分子物质,显著降低慢性肾衰竭大鼠血Cr、UN水平,降低TGF-β1及FN在肾脏的表达,减轻肾脏间质损伤及纤维化。