医学微生物学多媒体教学课件设计与制作的体会

本文首先介绍了教学多媒体制作软件的选择,然后从素材准备、版面设计、音频及动画素材的使用及课件的交互性设计方面对利用Powerpoint软件制作医学微生物学多媒体教学课件的一些技巧进行了简单的介绍。

开设医学微生物学探索性实验的设想

目前多数医学院校的医学微生物学实验教学,仍侧重于已知原理—验证的验证式的教学模式,学生的科学思维没有得到有效的锻炼。因此,有必要在现有的实验教学基础上开设探索性实验内容,其具体方法是将现有的实验课内容尽量采用探索性的实验方法、增设2-3个探索性较强的实验、组织课外兴趣小组等,使学生通过选题-探索-实践-迁移过程培养科学思维和实践能力。

一种鉴定常见分枝杆菌分离株的简单快速分子生物学方法

目的 :用分子生物学方法检测常见的分枝杆菌临床分离株 ,以适应临床分枝杆菌标本鉴定的需要。方法 :对 11株分枝杆菌参考株及 15 0株临床分离株用PCR RFLP的方法分析其hsp6 5基因。结果 :对结核分枝杆菌复合群和鸟分枝杆菌复合物鉴定的敏感性和特异性达 10 0 %。结论 :该方法简单、快速、经济 ,特别适用于标本量较大的临床实验室对分枝杆菌的鉴定。

ATP依赖性生物发光测定L型细菌对药物的敏感性

用生物发光BL技术检测 111株L型细菌对药物的敏感性 ;其中包括L型金黄色葡萄球菌、L型肠间链球菌、L型肺炎克雷伯氏菌、绿脓杆菌及L型沙门氏菌属。同时用BL法和K -B法对比检测对 5种抗生素的敏感性。结果示 :平均发光值 (CPM .S - 1)≤ 30 %为敏感 ,>35 %为耐药。本法与K -B法符合率为 95 .3% ,变异率为 10 %。提示B -L法直接测定L型菌的药敏性具有实用价值。

不育症患者沙眼衣原体和解脲脲原体检测

目的 :通过对不育症患者泌尿生殖道标本中支、衣原体检查 ,了解不育症患者支、衣原体感染状况。方法 :收集 2 0 0 0年 10月～ 2 0 0 1年 10月 197例不育症患者和 2 2 9例普通门诊患者泌尿生殖道标本 ,用双相一步法培养和细胞培养等方法进行解脲脲原体 (Ureaplasmaurealyticum ,Uu)和沙眼衣原体 (Chlamydiatrachomatis,CT)检测。结果 :不育症患者的支、衣原体阳性率分别为 4 8.2 %和 4 6 .2 % ,其中男性患者为 4 7.5 %和 4 4 .6 % ,女性患者为 4 9.0 %和 4 7.9% ,支、衣原体混合感染率男性为 2 5 .7% ,女性为 2 4 .0 % ;普通门诊患者支、衣原体阳性率分别为 11.4 %和 10 .0 % ,其中男性为 12 .4 %和 10 .6 % ,女性为 10 .3%和 9.5 % ,混合感染率男性为1.8% ,女性为 1.7%。结论 :不育症患者男女间和普通门诊患者男女间阳性率差异均无显著性 (P >0 .0 5 ) ;不育症患者支、衣原体感染率较高 ,与普通门诊患者相比差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ,提示支、衣原体感染多经性接触传播 ,为性传播疾病 。

HCMV感染对HEL细胞HOXB2,HOXB3,HOXB4及HOX8基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对HEL细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :HEL细胞表达HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8;HOXB2基因于HCMV感染后 15h表达增加 ,4 8h达高峰 ,随后回落 ,至 12 0h再达高峰。HEL细胞HOXB3和HOXB4基因的表达在HCMV感染后不同时间无明显变化。HOXB8基因于HCMV感染后 15～ 4 8h表达轻微下调 ,72h回升 ,96h表达增加 ,12 0h达高峰 ;ATRA能轻微上调HCMV感染晚期HEL细胞HOXB8基因的表达 ,但对HCMV感染后HOXB2和HOXB4基因的表达无明显调节作用。结论 :HCMV能诱导HOXB2及HOXB8基因表达异常 ,这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用。

中枢神经系统感染性疾病的病原学研究

目的 :探讨中枢神经系统感染性疾病的病原学特点。方法 :分别用双抗体夹心ELISA法和传统的细菌及真菌培养等方法检测患者血清IgM ,IgG抗体和脑脊髓液中病原体。结果 :82 3例中枢神经系统急症患者中有 12 6例 (15 .3%)单纯疱疹病毒IgM和 /或IgG阳性 ,其中 10岁以下年龄为高峰。 10 (1.2 %)例巨细胞病毒特异性IgM和 /或IgG阳性 ;8(0 .97%)例水痘 带状疱疹病毒特异性IgM和 /或IgG阳性 ;7(0 .85 %)例为结核性脑膜炎 ;6 (0 .72 %)例为新生隐球菌性脑膜炎 ;1(0 .12 %)例为脑膜炎球菌性脑膜炎。结论 :病毒 ,特别是单纯疱疹病毒 ,是中枢神经系统感染性疾病的常见病原 ;结核杆菌和新生隐球菌感染也占一定比例。

人类巨细胞病毒感染对人胚肺细胞HOXB1,HOXB5,HOXB6及HOXB9基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB1,HOXB5 ,HOXB6及HOXB9基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对上述基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :①HEL细胞表达HOXB5和HOXB6 ,但不表达HOXB1和HOXB9;②HCMV感染后 ,HEL细胞HOXB6基因的表达上调 ,且被HCMV诱导表达HOXB9T ,而HOXB5基因的表达无明显改变 ,HOXB1基因仍旧不表达 ;③全反式维甲酸 (ATRA)能上调HCMV感染后HOXB9基因的表达 ,但对HCMV感染晚期HOXB6基因的表达有抑制作用。结论 :HCMV能诱导HOXB6和HOXB9基因表达异常 。

人巨细胞病毒AD_(169)株引起小鼠脑部畸形的初步探讨

目的 :探讨人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus ,HCMV)感染昆明小鼠的敏感性 ,建立HCMV致畸的动物模型。方法 :昆明系小鼠 4 0只 ,随机分为两组 :对照组 (8只 )和接种病毒组 (32只 ) ,病毒感染途径为脑内注射。在接种病毒 7,1 5 ,30 ,6 0d后不同时期分别以病理学方法观察动物脑部发育特点 ,以免疫组织化学方法检查病毒抗原 ,PCR方法检测动物脑组织中HCMV基因。结果 :接种HCMVAD1 69株的小鼠脑组织在不同时期发生了病理改变和脑部发育畸形 ,用免疫组织化学方法和PCR方法在脑组织细胞内检获HCMV抗原和基因。结论 :HCMVAD1 69株可引起小鼠脑部发育畸形 。

人类巨细胞病毒感染对U251细胞HOXB1基因表达的影响

目的 :通过研究人神经胶质瘤U2 5 1细胞株的HOX基因表达状态及人类巨细胞病毒 (HCMV)感染对U2 5 1细胞HOXB1基因表达的影响 ,以探讨HCMV致畸的可能机制。方法 :应用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :U2 5 1细胞表达HOXB1基因 ;HCMV感染后 ,U2 5 1细胞HOXB1基因表达明显上调 ;ATRA能显著上调HCMV感染后U2 5 1细胞HOXB1基因的表达。结论 :HCMV感染能诱导U2 5 1细胞HOXB1基因表达上调 ,HCMV有可能通过调控HOXB基因表达异常引起胚胎发育畸形。

人类巨细胞病毒感染对神经胶质瘤细胞HOXB5,HOXB6,HOXB7及HOXB8基因表达的影响

以半定量RT -PCR技术检测经人类巨细胞病毒 (HCMV)感染和 /或全反式维甲酸 (ATRA)处理的神经胶质瘤细胞U2 5 1株的HOXB5 ,HOXB6 ,HOXB7和HOXB8的相对表达水平 ,以探讨HCMV致畸的可能机制。结果示 ,未经处理的U2 5 1细胞不表达HOXB5 ,HOXB6及HOXB8,但表达HOXB7;HCMV感染和 /或ATRA处理后 ,细胞仍不表达HOXB5及HOXB6 ,但在第二代时均表达HOXB8,尤以HCMV和ATRA共同处理后更明显 ;第三代后HOXB8的表达恢复正常。HCMV和 /或ATRA处理细胞后 ,HOXB7的表达在第一代即上调 ,第二代、第三代其表达稍下降 ,至第四代时表达又上调。表明HCMV致畸作用可能是通过诱导HOX基因的表达进而调节其它基因的异常表达而实现。

淋球菌不同耐药水平中mtrF基因的表达

目的探讨mtrF基因在多重耐药淋球菌中的表达及其与高水平多重耐药淋球菌的关系。方法①纸片扩散法检测58株淋球菌对5种抗生素的敏感性;②试管稀释法测定淋球菌对红霉素的最小抑菌浓度(MIC);③采用RT-PCR技术测定敏感组、低-中等水平多重耐药组及高水平多重耐药组中mtrD、mtrF基因的表达。结果①58株淋球菌中对2种或者2种以上抗生素耐药的有30株,占待测淋球菌的51.7%;②红霉素MIC为敏感、中介、耐药,分别为7株、21株和30株,有17株MIC值≥32.0μg/mL;③高水平多重耐药组mtrF基因表达量升高,与低-中等水平耐药组和敏感组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);但后两者之间无明显差异。耐药组mtrD基因表达量升高,与敏感组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);但两个耐药组之间无明显差异。结论mtrF基因在高水平多重耐药组中表达均高于敏感组和低-中等水平多重耐药组,表明其在介导淋球菌产生高水平多重耐药过程中可能发挥着十分重要的作用。

外排系统与膜通透性的改变对淋球菌高水平多重耐药的影响

目的探讨外排系统与膜通透性的改变对淋球菌多重耐药的影响。方法PCR扩增淋球菌mtrR启动子区域包含13 bp回文序列在内的157个碱基片段并进行DNA测序分析;提取外膜蛋白,利用SDS-PAGE进行组成型的分析。结果5株敏感株的mtrR启动子区域未发生突变,3株高水平多重耐药株的mtrR启动子区域13 bp回文序列均发生了单个A/T碱基的缺失,且均存在外膜孔蛋白表达的缺失。结论mtrR启动子区域13 bp回文序列单个A/T碱基的缺失引起的mtrCDE外排泵表达增加与外膜孔蛋白表达的缺失或下降导致的膜通透性降低,在介导淋球菌产生高水平多重耐药中起一定的作用。

HCMV感染对人神经胶质瘤细胞HOXB1～4及HOXB9基因表达影响的研究

目的 研究人神经胶质瘤U2 5 1细胞株的HOXB基因表达状态及人类巨细胞病毒 (HCMV)感染对U2 5 1细胞HOXB1,HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB9基因表达的影响 ,以探讨HCMV致畸的可能机制。方法 应用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术检测U2 5 1细胞感染HCMV和 /或全反式维甲酸 (ATRA)处理前后HOXB1,HOXB2 ,HOXB3,HOXB4和HOXB9基因的相对表达水平。结果 U2 5 1细胞表达HOXB1,HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB9基因 ;HCMV感染后 ,U2 5 1细胞HOXB1基因表达明显上调 ,HOXB2和HOXB4基因表达轻微上调 ,HOXB3基因于HCMV感染后表达被抑制 ,HOXB9基因的表达在HCMV感染后不同时间无明显变化 ;ATRA能显著上调HCMV感染后U2 5 1细胞HOXB1基因的表达。结论 HCMV感染能诱导U2 5 1细胞HOXB基因表达改变 ,HCMV有可能通过调控HOXB基因表达异常引起胚胎发育畸形。

80株大肠埃希菌靶位基因突变对喹诺酮耐药影响

目的 探讨大肠埃希菌靶位基因突变对喹诺酮类药物耐药的影响。方法 本研究分别用琼脂稀释法和K -B纸片扩散法药敏试验检测了 80株致泌尿系感染的大肠埃希菌环丙沙星MIC的分布和对四种喹诺酮类药物的敏感性 ;PCR扩增大肠埃希菌的gyrA和 parC基因的QRDR区 ,分别对其进行限制性内切酶酶切分析和SSCP分析 ,以检测药物靶位基因可能存在的突变。结果 80株致泌尿系感染的大肠埃希菌中有 4 7株对环丙沙星耐药 ,耐药率达 5 8.75 % ,2 0株对环丙沙星敏感的菌株 gyrA基因QRDR区未发生改变 ,而 13株敏感株和 4 7株耐药株gyrA 2 4 7bp位点处均存在突变 ,且这 13株对环丙沙星敏感的菌株均对萘啶酸耐药。 33株对环丙沙星敏感的菌株parCSSCP分析 ,均未存在突变。 结论 ① 80株致泌尿系感染的大肠埃希菌对环丙沙星的敏感性和对萘啶酸的敏感性存在明显差异 ;②gyrA基因是大肠埃希菌喹诺酮类药物的主要作用靶位。在某些菌株中 ,其 2 4 7位核苷酸位点的改变仅使细菌对环丙沙星的敏感性下降 ,parCQRDR区的突变使细菌的耐药程度增加。

一种简便的淋球菌保存方法的实验研究

目的 为了经济、简便地贮藏淋球菌以利于对淋球菌进行研究 ,我们研制了一种主要成份为鲜奶的保存淋球菌的简便方法—鲜奶法。方法 用鲜奶法、普通奶粉法和冷冻真空干燥法三种方法同时保存 86株淋球菌。结果 冷冻真空干燥法一年和二年内复苏 ,复活率均为 10 0 % ;鲜奶法一年内复苏 ,复活率为 10 0 % ,二年内复苏 ,复活率为 97.7% ,上述两种方法明显高于普通奶粉法组 (9.3% ,1.2 % ) ,差异均具有显著性 (P <0 .0 1)。结论 鲜奶法保存淋球菌具有经济、简便实用、存活率高等优点 。

沙眼衣原体感染对IFN-γ诱导的Hela细胞HLA-Ⅱ类分子表达的影响

目的 :为了探讨沙眼衣原体 (CT)感染对IFN -γ诱导的上皮细胞系Hela细胞HLA -Ⅱ分子表达的影响。方法 :用直接免疫荧光和流式细胞仪分析等方法 ,对感染CT的Hela细胞IFN -γ诱导的HLA -DR分子表达水平进行检测。结果 :CT感染的Hela细胞IFN -γ诱导的HLA -DR分子表达水平随感染剂量增加和感染时间延长而下降 ,IL - 10抗体不能明显抑制这种下降。结论 :CT感染能下调Hela细胞膜上IFN -γ诱导的HLA -Ⅱ分子表达水平 ,这可能是造成衣原体持续感染的一种重要原因。

丙型肝炎病毒5’端非编码区的5’端序列对其翻译启动活性的影响

目的分析丙型肝炎病毒(HCV)5’端非编码区(5’NCR)的5’端序列对其翻译启动活性的影响。方法用PCR技术扩增获得全长和5’端17个碱基缺失的HCV5’NCR片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2Control的SEAP基因上游,分别构建成全长和5’端截短的HCV5’NCR调控SEAP表达的重组质粒pNCRSEAP和pdNCRSEAP。用脂质体方法将重组质粒转染至肝细胞株QSG7701,并用化学发光法检测SEAP的表达。结果酶切和测序结果表明,重组质粒pNCRSEAP和pdNCRSEAP构建成功。表达的发光强度分别为390482±42856和635265±52285RLU,二者有差异显著性(P<0.01)。结论HCV5’NCR的5’端碱基缺失提高了它对SEAP基因的翻译启动活性,为进一步分析HCVIRES的结构提供了实验基础。