原始生殖细胞体外培养及应用研究

原始生殖细胞是来源于胚胎生殖嵴的一类具有多向分化潜能的干细胞,其形态、细胞表面标志、分化潜能均与来源于囊胚内细胞团的干细胞相似.在饲养细胞层和多种生长因子的共同作用下,可保持原生殖细胞在体外不断增殖而不分化,最终建立EG细胞系.本文就原始生殖细胞体外培养,建立EG细胞系及其应用前景作一综述.

人原始生殖细胞体外培养的初步研究

目的 :探讨人原始生殖细胞体外培养条件 ,初步建立人原始生殖细胞体外培养体系及鉴定其部分生物学特性。方法 :从受精后 4～ 12周的人胚中分离原始生殖嵴 /腺获得原始生殖细胞 ,以昆明种小白鼠胚胎成纤维细胞为饲养层 ,在多种细胞因子的共同作用下培养。结果 :获得大量的原始生殖细胞集落。传至 6代后 ,细胞集落呈典型的鸟巢状 ,碱性磷酸酶检测呈阳性 ,表达SSEA 1,SSEA 3,SSEA 4 ,TRA 1 6 0和TRA 1 81抗原 ,同时在体外能自发分化为多种细胞。结论 :初步建立人原始生殖细胞体外培养体系 ,成功的将人原始生殖细胞在体外传 6代 。

人类睾丸生殖细胞凋亡相关基因的分子遗传学研究进展

人类睾丸生殖细胞的凋亡是一个多基因参与的复杂的过程 ,Bcl- 2 / Bax基因族、p5 3基因、CREM基因、Fas/ Apo- 1基因、HSP基因族、线粒体相关基因、i NOS基因、TRAIL及其受体基因以及 c- m yc基因等都在人类睾丸生殖细胞的凋亡过程中起到一定的作用。研究人类睾丸生殖细胞凋亡相关基因对一些临床疾病和抗生育都具有十分重要的意义。

精子发生相关基因的分子遗传学研究进展

特发性无精、严重少精症的分子遗传学研究越来越广泛深入。近年来,控制精子发生的相关基因,主要包括位于Y染色体AZFa区的USP9Y和DBY、AZFb区的RBM基因、AZFc区的DAZ基因,和位于常染色体的DAZLA基因等在分子遗传学研究方面均取得了可喜的进展。对这方面的研究进展及其展望进行了综述。

巴氏染色法在精子顶体研究中的应用

目的应用巴氏染色方法对临床上精子顶体区是否正常进行区分。方法分别对该研究所门诊111例精子标本进行巴氏染色后,每例标本在显微镜油镜下记数200个精子,观察顶体区。结果111例标本中,5例为无顶体圆头精子,23例为小顶体区精子,83例顶体区正常精子。结论巴氏染色法在临床上可对精子顶体区是否正常作出准确的判断。

人类精子蛋白质组分析的双向蛋白电泳技术研究

目的 :利用人类精子蛋白质组分析的双向蛋白电泳技术 (2 DE)建立正常精子的蛋白质图谱。方法 :比较不同蛋白质提取方法和上样量、不同的第一向等点聚焦方法所得图谱的差别 ,并初步建立人类正常精子的蛋白质图谱。结果 :用蛋白质提取方法一制得的样本电泳后有 6 70～ 70 3个蛋白质斑点 ;方法二所得样本电泳后仅有 194～ 2 10个蛋白质斑点。蛋白质提取方法一所制样本进行载体两性电解质pH梯度 SDS电泳技术 (ISO DALT)得到约 2 80～ 30 0个蛋白质斑点 ,用固相pH梯度 SDS电泳技术 (IPG DALT)得到多达 70 0个蛋白质斑点。结论 :采用蛋白质提取方法一制备精子蛋白质进行IPG DALT电泳的方法适用于建立精子全细胞蛋白质谱。

FISH技术的临床应用研究

荧光原位杂交 (FISH)是染色体显带技术的补充和发展 .以人类精子、早期胚胎等间期核及中期染色体为材料 ,用FISH技术检测染色体的数目异常和微小的结构异常 .结果快速准确 ,显示它较之传统的细胞遗传学技术诊断具有明显的优越性 ,在临床应用中有广泛的前景 .

多色荧光原位杂交技术在精子染色体研究中的应用

随着胞质内精子显微注射 (ICSI)的应用 ,严重少、弱、畸精子症病人也能获得治疗。现有许多研究发现这部分病人精子染色体非整倍率增加。如非整倍体的精子受精 ,产生的子代将导致流产、畸胎、死胎 ,因此对精子染色体数目的研究已成为男性不育精子检测的一项重要内容。近年来 ,多色荧光原位杂交 (FISH)技术在检测精子染色体非整倍体方面取得了一些进展 。

用FISH技术研究人类体外未受精卵的21号染色体非整倍体

采用荧光原位杂交技术 ,选用人类 2 1号染色体端粒探针 ( 2 1 qter) ,检测人类体外未受精卵的 2 1号染色体非整倍体发生率 ,并比较非整倍体率与 2 5～ 30岁和 31～ 35岁这两个女性年龄组、IVF指征、超排方案之间的关系 .在 54个未受精卵中 ,正常 2 1号单体 30枚 ,二体 1 6枚 ,三体 4枚 ,缺体 4枚 ,非整倍体率为 4 4.4 %( 2 4 /54) ;2 5～ 30岁和 31～ 35岁这两个年龄组、IVF指征、超排方案的患者的 2 1号染色体非整倍体率之间的差异无显著性 .卵母细胞 2 1号染色体的非整倍性是造成体外受精失败的重要原因之一 .

小鼠胚胎紧密化现象分子基础的研究进展

就小鼠植入前胚胎紧密化过程中胚胎的形态变化、细胞极化、细胞间连接及紧密化的物质基础、时控机制等作了综述.对紧密化现象的分子基础研究大多数都集中在翻译后水平的调控,而在基因水平的研究较少.

类平衡易位综合征的发现及临床遗传学研究

目的 :探讨大Y ,inv( 9) ,S+及 qh± 特殊的染色体结构异常板块的临床遗传学特征和染色体平衡易位二者之间的内在遗传学规律。方法 :采用二项分布四格表方式 ,对 980例平衡易位 ,大Y ,inv( 9) ,S+及qh± 进行统计学处理 ,并将 10 0 9例的临床表现划分为四大主征 :自然流产、性发育异常、生育疾患及本人是病残者。结果 :10 0 9例平衡易位 ,大Y ,inv( 9) ,S+及 qh± 各自导致的主要临床特征具有高度的相似性 (P >0 .2～ 0 .5 0 )。结论 :该研究发现大Y ,inv( 9) ,S+及 qh± 导致的主要临床特征属“类平衡易位”综合征 ,表明了有性生殖过程中 ,配子之间分子水平的微小不等交换可能对后代产生遗传学效应 ,并可导致相应的临床特征 ,同时可能发生不同程度的性分化异常或影响个体表型和健康。这类携带者生育后代应做产前诊断。

Sry基因的研究进展

性别决定基因 ( Sex region of Y chromosome,人类以 SRY、小鼠以 Sry表示 )的研究进展是近几年来人类在性别决定、性别分化研究中获得的最大的突破性成果 .该文从 SRY( Sry)发现前关于性别决定因子的研究、SRY( Sry)的确定、小鼠 Sry结构的研究、小鼠 Sry的表达研究及 Sry下游基因的确定等 5个方面对小鼠 Sry的研究进展进行综述 ,对进一步深入研究 Sry下游基因存在的瓶颈问题作了一定的分析 ,并提出核移植技术可能为研究

人DDX36和小鼠Ddx36基因在成年睾丸组织中的表达研究(英文)

果蝇是结构基因组学和功能基因组学研究的最为理想的一种模式生物 ,采用同源克隆的策略 ,应用生物信息学分析和实验技术相结合的方法分别从人和小鼠中克隆了同源于果蝇MLE蛋白的新基因DDX36和Ddx36。为进一步研究DDX36和Ddx36基因与精子发生的关系 ,再应用Northernblotting、RT PCR和组织原位杂交技术探讨了DDX36和Ddx36基因的表达情况 ,结果发现人DDX36和小鼠Ddx36基因在成年睾丸组织中高表达。初步证明DDX36和Ddx36基因在精子发生中亦可能发挥重要作用。

单基因遗传病的植入前遗传学诊断研究进展

近十多年来 ,单基因遗传病的植入前遗传学诊断 (PGD)已取得了显著的成绩 ,其基本技术包括胚胎活检、PCR和FISH。本文就 PGD的研究概况、活检标本来源、以 PCR技术为基础的各类诊断技术的研究进展、影响

脊髓性肌萎缩症的分子遗传学研究新进展

脊髓性肌萎缩症是一种常染色体隐性遗传病 ,以脊髓运动神经元退化为特征 ,是由运动神经元存活基因突变引起功能性的运动神经元存活蛋白水平降低所致。该基因及其蛋白功能的阐明为临床基因诊断提供了依据。

CD117(c-kit)在人类精液生精细胞中表达研究

目的从精液中分离和鉴定各类生精细胞,探讨用c-kit从精液中分离生精细胞的可能性。方法对精液中圆细胞超过3×106的标本进行联苯胺兰染色,排除白细胞,再用改良非连续percoll梯度离心,对生精细胞进行分离纯化。结合细胞形态学、荧光原位杂交,鉴别各类生精细胞的组成,运用抗人CD117单克隆抗体对纯化的细胞进行免疫细胞化学检测。结果经Percoll分离,对分离的细胞用X/Y混合探针进行荧光原位杂交,可对除精原细胞和初级精母细胞外的各级生精细胞进行准确的分类,结合形态学分析,可确定分离细胞中生精相关细胞的组成比例。在分离纯化的圆细胞中,无核胞浆小体占整个细胞比例为28.5%,细胞免疫化学研究表明,有c-kit表达的细胞占整个总细胞的比例为66.3%,且精子也表达c-kit。结论c-kit在人类精液中各级生精细胞及精子上均表达,为从人类精液中分离各类生精细胞用于临床及科研提供了可能。

经阴道彩色多普勒监测子宫血流动力学变化评价IVF-ET中子宫内膜接受性

目的:探讨双侧子宫血流动力学参数变化在评价移植前子宫内膜接受性的价值。方法:在本中心就诊的104例不孕症妇女,根据hCG注射日子宫内膜厚度、妊娠与否将病人分组后,使用经阴道彩色多普勒超声测量子宫动脉血流的阻力指数、搏动指数,比较各参数在不同组间的差异。结果:hCG注射日子宫动脉PI和RI越高,子宫内膜越薄。妊娠组PI和RI显著低于非妊娠组。根据hCG注射日子宫动脉RI将病人分为0.61-0.80和0.81-0.93两组,比较两组妊娠率分别为48.08%和15.38%。结论:子宫动脉血流参数PI、RI对IVF璄T结局是有效的预测指标。

睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG1与Mtsarg1的分子克隆及Mtsarg1基因的表达谱分析

从已获得的在隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的EST片段 (GenBank登录号 :BE64 45 3 8)出发 ,利用生物信息学和实验技术 ,克隆了小鼠睾丸生精细胞凋亡相关新基因Mtsarg1及相应的人类新基因TSARG1,Gen Bank登录号分别为AF3 99971和AY0 3 2 92 5。小鼠Mtsarg1与人类TSARG1基因在氨基酸水平有 5 5 %的一致性和 61%相似性 ,与其他已知蛋白质无明显同源性。小鼠 10种组织的RT -PCR分析结果表明 ,Mtsarg1基因在睾丸中高表达 ,在附睾中呈微弱表达 ,在其他组织不表达 。

人类畸形精子与常染色体异常

目的 :探讨精子形态与精子常染色体异常的关系 ,为胞质内精子显微注射 (ICSI)时的精子选择原则提供实验依据。方法 :应用荧光原位杂交 (FISH)技术对 1例罕见的大头多尾畸形精子进行了 13和 2 1号染色体整倍体检查。结果 :发现精子 13和 2 1号染色体的非整倍体率远高于同类研究 ,分别达 5 1.5 9%和 6 5 .15 % ;多体的组成比相近 ,且与多尾有大致的平行关系 ;2 1和性染色体有较 13号更高的非整倍体率。结论 :尽管体细胞染色体正常 ,畸形精子仍可伴有严重的染色体数目异常。