高质量植物基因组DNA的分离

为了从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量基因组DNA ,本文通过改良几种已经存在的分离方法 ,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。使用该方法从人参、西洋参及三七的新鲜或干燥根组织分离DNA时 ,A2 60 /A2 80 为 1.8左右 ,分子量大小约为 2 1.2kb ,由此所得的DNA可直接用于AFLP分析 ,即用EcoRⅠ /MseⅠ消化DNA后 ,用DNA的限制酶切片段经T4DNA连接酶连接 ,再用巢式PCR扩增 ,构建出可重复的、多态性丰富的人参、西洋参、三七基因组DNAAFLP指纹图谱。结果表明 ,该技术可有效地从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量和高分子量DNA ,此法亦有望用于其它植物DNA的分离。

一种新型基因传输载体-磷酸钙纳米颗粒用于肿瘤基因治疗的研究

目的研究新型非病毒载体磷酸钙纳米颗粒的生物学特性,评估其在肿瘤基因治疗中应用的前景。方法化学方法制备,氯化钙修饰纳米颗粒,用琼脂糖凝胶电泳分析磷酸钙纳米颗粒与DNA的结合效率及对DNA的保护作用,用绿色荧光蛋白基因作报告基因,将磷酸钙纳米颗粒为基因载体转染鼻咽癌(CNE-2)细胞和在动物体内转染肿瘤细胞;以及将磷酸钙纳米与自杀基因yCDglyTK结合,并在体外对鼻咽癌进行基因治疗。结果电镜观察证实磷酸钙纳米颗粒进入细胞内,磷酸钙纳米颗粒与DNA结合后,能对DNA起保护作用;磷酸钙纳米颗粒作为基因转染的载体,将绿色荧光蛋白基因导入CNE-2细胞,用荧光显微镜观察到高水平的绿色荧光蛋白表达;体内转染结果显示,纳米介导的基因在肿瘤组织中有很好的表达;以磷酸钙纳米为载体介导自杀基因yCDglyTK在体外治疗鼻咽癌的实验中显示,在加入5-FC后大量的CNE-2细胞出现死亡。结论磷酸钙纳米颗粒具有优良的生物学特性,是有应用前景的基因转染和基因治疗载体之一。

鼻咽恶性淋巴瘤43例误诊分析

目的 分析鼻咽恶性淋巴瘤的误诊原因 ,探讨减少误诊的措施。方法 对我院 1990至 2 0 0 2年间住院治疗的 12 0例鼻咽恶性淋巴瘤病人进行回顾性分析。结果 12 0例鼻咽恶性淋巴瘤中有 4 3例误诊 ,误诊率高达 35 .8%。结论 鼻咽恶性淋巴瘤易发生临床误诊和病理误诊 ,全面掌握鼻咽恶性淋巴瘤的临床表现特点、重视鼻咽的检查和活检、注意影像学检查、结合实验室检查及免疫组化等是减少鼻咽恶性淋巴瘤误诊的有效措施。

成人视网膜假定蛋白基因ARHP的克隆及生物信息学分析

从UniGene库中选取编号为BG2 2 2 62 4来自人鼻咽组织的表达序列标签 (EST )序列 ,联网到NCBI调用Blast服务器分析 ,发现该EST序列是一个代表新基因的未知序列 .利用Blast检索GenBank的nr数据库和EST数据库 ,构建EST重叠群 ,联网到NCBI的ORFfinder服务器 ,分析发现该EST重叠群具有完整的阅读框架 .分别在cDNA序列阅读框架的起始密码子和终止密码子的两侧设计引物 ,以人胎脑cDNA文库为模板 ,进行PCR扩增 ,测序确定该基因的cDNA全长序列 .该基因cDNA序列全长为 1672bp ,阅读框架位于第 3 0 4～ 1557位之间 ,编码由 417个氨基酸组成 ,分子质量为 46 58ku的蛋白质 ,其理论 pI为 4 2 1.将蛋白质序列通过NCBI的Blast服务器进行序列相似性分析 ,发现该基因编码的蛋白质和成年小鼠视网膜未知蛋白 (BAB3 2 2 14 )同源 .经与国际人类基因组命名委员会协商定名为成人视网膜假定蛋白 (adultretinahypotheticalprotein ,ARHP) ,GenBank登录号为AY174896.生物信息学分析表明 ,该蛋白质可能为一参与转录调控的核蛋白 .ARHP基因定位在染色体 5q3 5,跨越 3 5163bp ,含 4个外显子和 3个内含子 .在基因的 5′非翻译区有

HRE1.Egr-1.yCDglyTK融合自杀基因前药系统对鼻咽癌放射增敏作用的体外实验

目的:构建缺氧/辐射双敏感性启动子HRE1.Egr-1,观察其在缺氧或放射诱导下调控yCDglyTK基因在鼻咽癌HNE-1细胞表达及yCDglyTK/5-FC对鼻咽癌HNE-1细胞杀伤效应,为探索新的鼻咽癌基因-放射治疗奠定实验基础。方法:利用基因重组技术构建嵌合启动子HRE1.Egr-1调控yCDg-lyTK基因表达的质粒载体;脂质体介导重组质粒转染鼻咽癌HNE-1细胞,建立稳定表达yCDglyTK基因的鼻咽癌HNE-1转染细胞;免疫印迹法检测在常氧、放射、乏氧、乏氧加放射等不同条件下HNE1细胞中yCDglyTK表达的强度;MTT法检测加入5-FC后对上述不同条件下稳定转染细胞的杀伤效应。结果:各组蛋白表达均有差别(P<0.01),以乏氧/放射处理最为明显;5-FC对各种条件干预下的细胞均有杀伤效应,其中以乏氧/放射处理最为明显(P<0.01)。结论:HRE1.Egr-1嵌合启动子具有放射和乏氧诱导的双重特性,可以显著增强yCDglyTK/5-FC系统在乏氧和放射干预下对鼻咽癌HNE-1细胞的杀伤效应,为鼻咽癌的基因-放射治疗开辟了新思路。

经鼻内镜鼻腔-鼻窦-翼腭窝-颞下窝手术入路的应用解剖学研究

目的通过对鼻腔-鼻窦-翼腭窝(pterygomaxillaryfossa,PMF)-颞下窝(infratemporalfossa,ITF)手术入路的相关结构进行解剖,为手术入路提供解剖学基础。方法对6例12侧成人尸头标本按中线锯开后进行解剖,并完全模拟该手术入路,对相关解剖标志进行了观察、拍摄和测量。结果翼腭窝-颞下窝区结构复杂,有重要的神经和血管经过。圆孔外口距正中矢状面距离为(19.18±1.48)mm,与后鼻孔上缘的距离为(19.81±1.52)mm,距鼻小柱根部为(77.31±5.13)mm。卵圆孔到鼻小柱根部为(86.40±3.76)mm。结论经鼻内镜鼻腔-鼻窦-翼腭窝-颞下窝手术入路能够简单和迅速地到达翼腭窝和颞下窝,可较好地显露翼腭窝及部分颞下窝区的结构。经鼻内镜入路进入PMF时术野的深度限制为70mm左右,注意保护位于蝶窦外侧壁的翼管神经、上颌神经及颈内动脉(internalcarotidartery,ICA),进入ITF时,术野的深度限制为80mm左右。

基于核心能力的护士专业技术职称晋升评价指标体系研究

目的构建三级综合医院护士专业技术职称晋升的评价指标体系。方法采用Delphi法,对27名来自某三级甲等医院和某护理学院的临床护理专家、护理教育专家、临床科室主任、护士长进行两轮函询。结果两轮函询中专家意见的肯德尔和谐系数为0.813,专家对指标评价的重要性变异系数为0.13和0.15;从德、能、勤、绩4个方面筛选出护士专业技术职称晋升的4个一级指标,13个二级指标,22个三级指标。结论该综合评价指标体系能体现护士知识、技能、态度和价值观,与工作实绩相结合,可作为护理人力资源管理的参考依据。

鼻内镜下经口腺样体切割术

目的探讨鼻内镜用于经口腺样体切割术的可行性和优点。方法在鼻内镜和电视监视下经口行腺样体切割术60例,治疗由腺样体肥大引起的鼻窦炎、分泌性中耳炎和阻塞性睡眠呼吸暂停综合征。结果术后腺样体切割干净,无残体残留,鼻咽部结构显示良好,患者症状消失或明显减轻。结论该手术能在直视下进行,增加了手术安全性和准确性,病变切除更加彻底,手术疗效明显,并发症少。

护理病历质量分级评价体系的研究

目的确立护理病历书写各类缺陷的分度及护理病历的分级标准,以建立护理病历分级评价指标体系。方法采用德尔菲(Delphi)法对60名资深专家进行3轮问卷调查,建立指标体系。结果选择的专家涉及护理、医疗、病案管理及医学统计专业领域,3轮调查问卷的有效回收率均高于85%,专家的权威系数均在0.8以上。筛选护理病历轻度缺陷44条,中度缺陷53条,重度缺陷13条以及10条单项否决项目,对不同程度缺陷进行赋值,根据缺陷对病人产生的负面影响及分值将病历分为5级。结论严格按照Delphi法进行标准体系的构建,具有科学性及客观性,为公正、客观及准确的对护理病历评价提供了统一标准。

鼻内镜下鼻腔泪囊造口术

目的观察鼻内镜下鼻腔泪囊造口术治疗慢性泪囊炎的疗效和特点。方法对34例慢性泪囊炎患者行鼻内镜下鼻腔泪囊造口术。术中采用枪状镊鼻内定位泪囊,用电钻磨除泪囊内侧壁骨质,切开泪囊,银夹固定翻开的泪囊黏膜,术后随访半年以上。结果全部病例中治愈31例(91%),好转4例(9%)。结论经鼻内镜鼻腔泪囊造口术较传统鼻外泪囊鼻腔造口术操作更加简便,可控。

Cyclin D1和Cyclin B1在鼻咽癌中表达的免疫组织化学研究

目的为探讨CyclinD1和CyclinB1在鼻咽癌中的表达、相关性及临床意义。方法用免疫组化SP法分别检测CyclinD1和CyclinB1在58例鼻咽癌组织标本中的表达。结果CyclinD1和CyclinB1在鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为58.6%(34/58)和60.3%(35/58);CyclinD1和CyclinB1阳性和阴性病例的平均生存期、五年生存率和中位生存期存在显著性差异(P<0.05);鼻咽癌组织中CyclinD1和CyclinB1的表达一致率为60.3%(35/58),无显著相关。结论CyclinD1和CyclinB1表达均可以反映鼻咽癌的生存情况,在鼻咽癌预后预测中有重要意义。

Nd:YAG激光在喉部病变治疗中的应用

目的 :探讨Nd :YAG激光治疗喉部病变的可行性及有效性。方法 :对 2 4 84例喉部病变患者采用纤维喉镜介入Nd :YAG激光治疗。其中声带息肉 16 77例 ,声带小结 6 93例 ,喉囊肿 4 7例 ,声带小血管瘤 16例 ,肥厚性声带炎 2 7例 ,声带白斑 3例 ,声带角化物 4例 ,声带粘连 2例 ,喉乳头状瘤 2例 ,喉部肉芽肿 5例 ,舌根淋巴滤泡增生 8例。结果 :上述病例临床症状均有明显的改善 ,总治愈率 95 .7% (2 376 / 2 4 84 )。结论 :Nd :YAG激光是治疗喉部病变的有效方法 ,并具有安全、微创及高效的优点。

非酒精性脂肪肝对药动学影响研究进展

非酒精性脂肪肝(NAFLD)是一种最常见的慢性肝病,严重威胁人类健康。在影响药物代谢的各种因素中,慢性肝病所起的作用最重要,可导致肝脏基因表达、mRNA及蛋白表达改变。非酒精性脂肪肝动物模型和非酒精性脂肪肝炎患者的研究结果显示,非酒精性脂肪肝时药物代谢酶及药物转运体发生显著改变。药物代谢酶和药物转运体在药物代谢过程中发挥重要作用,其改变可能影响药物在体内的清除,导致诸多临床药物的疗效、毒副作用甚至药物相互作用的发生。随着非酒精性脂肪肝的流行,越来越多的药物用于非酒精性脂肪肝患者。因此本文就非酒精性脂肪肝对药动学影响的研究进展作一综述。

后路固定颈前路鼻内镜辅助病灶清除治疗上颈椎结核

目的探讨后路固定颈前路鼻内镜辅助病灶清除治疗上颈椎结核的疗效。方法上颈椎结核12例,均先行后路上颈椎侧块螺钉及颅骨钉棒系统固定及植骨,其中4例寰椎并枢椎结核行枕颈融合者植骨于枕颈部,8例枢椎结核仅在寰枢椎间植骨再行前路鼻内镜辅助结核灶清除。结果患者术后颈椎稳定性均得到满意重建,经术中镜下及术后影像学检查证实结核病灶全部清除。手术时间160～250(198±27)min;术中出血量300～500(388±61)ml。手术过程顺利,未发生脊髓、神经根、椎动脉等重要解剖结构的损伤,无脑脊液漏发生。术后JOA评分由术前的8～14(10±2)分提高至10～16(14±2)分。结论后路融合可使颈椎获得较好稳定性,前路鼻内镜下能彻底清除病灶,术后患者症状改善,此术式治疗上颈椎结核效果满意。

遗传性聋基因诊断策略进展

听力损失可以由多种因素引起,其中遗传因素占语前感音神经性聋的60%左右[1]。根据是否伴有其他器官或系统症状,遗传性聋分为非综合征型聋(non-syndromic hearing loss,NSHL)和综合征型聋(syndromic hearing loss,SHL)。在语前聋中,大约70%为NSHL,30%为SHL。按照遗传模式区分,大约80%NSHL为常染色体隐性耳聋(autosomal recessive deafness,DFNB),20%为常染色体显性耳聋(autosomal dominant deafness,DFNA),1%为伴性染色体遗传性聋,不足1%为线粒体相关性聋[2]。SHL的临床表现除耳聋外,常伴有其他器官或系统的症状或体征,目前已发现400多种伴有耳聋的综合征[3]。SHL伴随的症状或体征可以帮助综合征型聋的诊断,但是,这些伴随症状可能出现在耳聋之后或者不被发现,从而影响SHL的正确诊断。

鼻腔恶性黑色素瘤19例临床分析

目的 :探讨鼻腔恶性黑色素瘤的病理、临床特点及治疗。方法 :我院自 1988年 9月～ 2 0 0 1年 7月共收治 19例鼻腔恶性黑色素瘤 ,均有病理学证实。主要症状多为鼻塞和涕血、鼻衄。 19例均手术治疗 ,手术加放疗 6例 ,手术加放疗加化疗 2例 ,手术加化疗 3例。结果 :19例中至今生存 7例 ,分别已生存 8月～ 13年。 1,3,5年生存率分别为 6 4.7%,42 .85 %,30 .76 %。结论 :鼻腔恶性黑色素瘤恶性程度高 ,易复发 ,手术加放疗是有效的治疗方法。

EB病毒感染情况结合间接鼻咽镜筛查长沙市健康人群鼻咽癌

目的检测EB病毒VCA-IgA在健康人群中的抗体水平,了解长沙市人群中的EB病毒感染情况,并结合间接鼻咽镜筛查鼻咽癌。方法使用酶联免疫吸附法,检测EB病毒VCA-IgA水平。对于EB病毒VCA-IgA阳性个体,应用间接鼻咽镜检查鼻咽部,发现异常即取组织送病理检查。结果长沙市1 808例健康人群EB病毒VCA-IgA检测:阳性者206例,检出阳性率为11.39%。其中男性阳性率为12.17%,女性阳性率为9.66%。男女无显著性差异(P=0.121)。阳性个体EB病毒VCA-IgA抗体滴度在1:10～1:20之间。共对198例阳性个体进行间接鼻咽镜检查,最后病理学检查确诊鼻咽癌3例。结论长沙市健康人群EB病毒感染率较高,存在相对较高的鼻咽癌患病风险;血清EB病毒VCA-IgA普查结合间接鼻咽镜是鼻咽癌人群筛查的有效手段。

口腔疣状癌和口腔鳞癌组织中E-cadherin表达的对比研究

目的:研究E-钙粘素(E-cadherin,E-cd)在口腔疣状癌和口腔鳞癌中的表达,探讨E-cd与口腔疣状癌,口腔鳞癌分化程度的关系。方法:采用免疫组织化学和免疫电镜方法检测18例口腔疣状癌、20例口腔鳞癌组织中的E-cd表达。结果:E-cd在正常口腔黏膜、口腔疣状癌、高分化鳞癌和低分化鳞癌中主要位于胞膜及胞浆上。电镜观察显示E-cd在胞膜主要定位于桥粒,胞浆主要定位于粗面内质网和线粒体上。定量检测显示:E-cd在正常口腔黏膜、口腔疣状癌、高分化鳞癌和低分化鳞癌中的阳性表达率分别100%(8/8)、61.1%(11/18)、50.0%(5/10)和30.0%(3/10)。口腔疣状癌E-cd蛋白的平均染色强度与高分化鳞癌间差异无显著性,但明显低于正常黏膜组(P<0.05)而高于低分化鳞癌(P<0.05)。结论:E-cd的表达水平随口腔肿瘤分化程度的降低而降低,且超微结构的表达部位与肿瘤的分化程度存在相关性。