油茶乙酰CoA酰基转移酶基因cDNA克隆及序列特征分析

在已知油茶乙酰COA酰基转移酶基因EST序列基础上,设计6条特异引物,以油茶优良无性系‘湘林1号’种仁总RNA为模板,通过反应体系和反应条件优化,最终扩增出一条700 bp左右的目的片段,将该片段回收、克隆、测序,获得718 bp的cDNA序列,将该序列与油茶乙酰COA酰基转移酶基因进行序列拼接,确定了油茶乙酰COA酰基转移酶基因的全长cDNA序列,将该序列提交至GeneBank,登录号为GU594059。油茶乙酰COA酰基转移酶基因全长cDNA序列为1 495 bp,含有一个1 227 bp的ORF,编码408个氨基酸残基。在氨基酸序列水平上,该基因与胡黄连(P.kurrooa)的乙酰COA酰基转移酶基因的相似性最高,为86%,与稻瘟病菌(M.grisea)的最低,为65%。通过在线预测,油茶乙酰COA酰基转移酶基因编码蛋白的等电点pI为6.19,分子量Mw为41 628.6 Da。本研究为揭示油茶油脂合成规律和油茶的分子育种提供了理论依据和科学基础。

一个油茶金属硫蛋白基因的克隆与序列分析

在油茶cDNA文库和EST文库构建的基础上，根据油茶金属硫蛋白的EST序列设计特异引物，以油茶近成熟种子为材料，利用3＇RACE技术，克隆到1个金属硫蛋白基因的cDNA全序列。该基因全长为675bp，其中5＇非编码区59bp，3＇非编码区379bp，开放阅读框长234bp，编码78个氨基酸；该蛋白含有14个半胱氨酸，分布在蛋白质的N端和C端，呈CC，CX，CXXC形式排列。预测该蛋白相对分子量为7864．9Da；等电点为4．86；37～48位氨基酸间有较强的疏水区。多序列比对发现油茶MT核苷酸序列与茶的相似性达到99％，推导的氨基酸序列与茶完全相同，因此将该基因命名co_mtl。