重庆市大足区中药资源现状调查研究

采用第四次全国中药资源普查调查方法,对重庆市大足区中药资源进行实地调查,结果发现药用植物369种,隶属113科;市级重点物种75种,其中野生药材53种,栽培药材15种,野生栽培皆有的药材7种。此次调查摸清了大足区中药资源分布、种类、数量等家底,为这些中药资源的合理开发与产业发展提供了研究基础。

简析中药资源普查的质量管理

本文针对目前正在开展的第四次全国中药资源普查试点工作中存在的问题,结合笔者参与普查工作管理和实践的体会,就如何保证中药资源普查质量问题,从野外调查、内业整理、组织管理角度进行了分析,提出了建议。

重庆城口发现野生曲茎石斛新分布

于2021年7月在重庆市城口县东安镇发现国家一级重点保护野生植物曲茎石斛(Dendrobium flexicaule)新分布记录,凭据标本存放于重庆市中药研究院标本馆(SM)。通过对曲茎石斛植株形态特征、生境群落及伴生植物特征进行描述,提供了相应图版,为重庆市兰科植物资源提供新资料。

我国主要栀子栽培资源分布与综合利用调查

为深入了解我国现有栽培栀子分布及综合利用情况,本研究通过查阅文献和实地调查相结合的方法,调查我国现有栽培栀子分布特征及生产状况。结果表明:我国现有栽培栀子主要分布在广西、湖南、江西、福建、浙江、湖北、河南、四川、重庆等省市,栽培面积达1.7万公顷,年产栀子近4万吨,受价格波动的影响,栀子栽培量呈下降趋势,同时栀子资源保护、优良品种筛选、规范化栽培技术及采收、初加工技术研究都亟待加强。本研究为认识、保护和研究利用我国栀子栽培资源提供理论基础。

基于地方文献的重庆石斛考

以不同时期的地方志、文史资料等地方文献为主,古代本草为辅,结合实地调查,对重庆石斛资源分布及应用历史进行考证。结果表明,重庆系石斛道地产区,有16部地方文献对石斛有相关记载,并以民国《巴县志》和《石柱县医药志》记载最为详细;原植物主要有石斛Dendrobium nobile Lindl.,分布在巴南、大足、江津、合川等渝中和渝西地区;也有少数的细茎石斛Dendrobium moniliforme(L.)Sw.、广东石斛Dendrobium wilsonii Rolfe和曲茎石斛Dendrobium flexicaule Z.H.Tsi,S.C.Cum et L.G.Xu等,主要分布在石柱、万州、云阳、黔江等渝东一带,在解放前曾大量采集、加工和应用。由于过度采集,重庆石斛资源已处于濒危状态,亟待保护,应积极探索野生资源的引种驯化和仿生栽培,以实现资源的可持续利用。

重庆黄连种植土壤中酚酸类物质累积与消减规律的研究

目的:建立黄连种植土壤中酚酸类物质的分析方法,探索其累积与消减规律。方法:采用Fe Cl3-K3[Fe(CN)6]比色法测定黄连种植土壤中总酚酸的含量,采用HPLC法测定黄连种植基地土壤中阿魏酸的含量。结果:测得黄连种植基地土壤中总酚酸含量约0.545-2.026 mg·100g-1在范围内,阿魏酸含量在0.139-0.652μg·100g-1范围内。结论:黄连种植土壤中酚酸含量变化规律明显,栽培过程中随黄连生长年限的增加,连地土壤中总酚酸与阿魏酸的含量均表现为增加,采收黄连后的休地过程中,土壤中总酚酸与阿魏酸的含量均呈现递减趋势,该变化趋势可为黄连连作障碍研究机制与解决方法研究提供了参考。

濒危藏药材甘青青兰野生资源的调查研究

目的:全面调查西藏中南部野生甘青青兰资源的分布及生存现状,为甘青青兰野生资源的保护及后续人工栽培甘青青兰提出指导性建议。方法:依据全国第四次中药资源普查技术方案,对西藏中南部17个区县开展甘青青兰资源调查。结果:在调查涉及的17个区县中,有13个区县均发现有野生分布。所采样品均为甘青青兰(原变种),没有矮生变种分布。甘青青兰居群分布的植被类型主要分为灌丛型、草地型、流石滩型三类,主要伴生植物共鉴定出39科94种;灌丛型和草地型居群的共有伴生物种较多;草地型居群的物种多样性及出现频率最高。甘青青兰生境主要为农田周边荒地或田埂、河谷坡地、村庄周边坡地,其野生分布点多位于坡度较为陡峭的下坡位置,坡向以东西向的半阳坡为主。结论:甘青青兰在西藏中南部的分布范围虽较广但资源量较少,建议加强野生甘青青兰资源的保护,深入开展甘青青兰人工栽培关键技术的研究。

复合木霉制剂防治黄连根腐病及其机理研究

为评价复合木霉制剂对黄连根腐病的防治效果,并揭示其防病机理,为黄连根腐病专用微生物农药的研发奠定基础,本试验将深绿木霉Trichoderma atroviride、长枝木霉T.longibrachiatum、钩状木霉T.hamatum、拟康宁木霉T.koningiopsis等4种木霉配制的复合制剂和尖镰孢Fusarium oxysporum以不同的方式分别施用于黄连,统计根腐病发生情况,检测黄连根部防御酶活性,用高通量测序分析根际土壤真菌群落结构。结果表明,复合木霉制剂对尖镰孢导致的根腐病具有明显预防效果;复合木霉制剂和尖镰孢分别接种黄连可提高SOD、POD、CAT、PAL、PPO等防御性酶活性,产生诱导抗性;而它们先后接种黄连可产生强化效应,从另一个途径提高植株抗病性。复合木霉制剂和尖镰孢都会降低真菌的数量、多样性,和某些真菌的相对丰度,而复合木霉制剂的抑菌作用更强烈,尤其能明显抑制尖镰孢、Ilyonectria sp.等病原真菌的生长,且能改善土壤真菌群落结构。木霉和尖镰孢都能在土壤中较长期定殖。可见,复合木霉制剂可以预防尖镰孢导致的黄连根腐病,防病机理包括诱导黄连植株产生抗性,接种后再遭受病原菌侵染产生的强化效应,优化土壤真菌群落结构,抑制土壤中病原菌等,且有效期较长。因此复合木霉制剂具有开发为微生物农药防治黄连根腐病的潜力。

茅苍术菌核病病原菌的分离与鉴定

为明确茅苍术菌核病种类和系统发育学特征,从茅苍术种植基地采集感病植株进行病原菌分离、纯化,按照柯赫氏法则进行致病性验证及再分离培养,采用形态学观察及ITS、G3PDH和HPS603个基因核酸序列分析对所采集病原菌进行鉴定。结果表明,根据形态学和多基因系统发育分析,经致病性测定及现代分子鉴定,可以确定引起重庆茅苍术菌核病的病原菌为核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum),且茅苍术是核盘菌的新寄主。本研究结果可为茅苍术菌核病防治提供参考。

水蛭弹性蛋白酶抑制剂基因HnGUA的克隆及原核表达研究

目的克隆获得水蛭Hirudo nipponia弹性蛋白酶抑制剂(guamerin)基因HnGUA,并对其进行生物信息学分析、蛋白原核表达、时空表达模式等研究,以期为揭示水蛭抗凝类小分子物质生物合成途径、分子调控机理机制奠定基础。方法以日本医蛭为研究对象,基于前期转录组数据,采用cDNA末端快速扩增方法(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)获取HnGUA基因全长,并进行生物信息学分析;构建原核表达载体pET32a-HnGUA,并转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,诱导重组蛋白的表达;通过实时荧光定量检测了水蛭不同吸食阶段4个组织的HnGUA基因表达模式。结果HnGUA基因cDNA全长507 bp(GenBank登录号OP490295),开放阅读框(Open reading frame,ORF)231 bp,编码76个氨基酸,蛋白分子量和理论等电点分别为8.17 kDa和4.44,包含一段长19个氨基酸的信号肽序列。多重比对分析结果显示,HnGUA蛋白与其他蛭类抑制剂基因编码蛋白具有较高的同源性。原核表达分析结果显示,构建的pET32aHnGUA载体能在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,SDS-PAGE结果显示,诱导的重组表达蛋白相对分子质量在6 kDa左右,与预测大小一致。实时荧光定量PCR结果表明,HnGUA基因存在时空表达差异,其主要在皮肤和嗉囊组织中表达。结论该研究首次在日本医蛭中克隆得到HnGUA基因,使其重组蛋白在大肠杆菌中成功表达,并且进一步研究了该基因的时空表达模式,为后续深入研究该基因功能奠定基础,同时对于不依赖于水蛭药材直接生产活性成分,加快实现中药现代化进程具有重要的理论和实践意义。

藏药鼠麴草的质量评价研究

目的:评价鼠麴草(Gnaphalium affine D.Don)的质量。方法:采用TLC法进行定性鉴别,按2020年版《中华人民共和国药典》四部通则方法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分和浸出物含有量,通过HPLC法测定木犀草素和芹菜素的含有量。采用SPSS 20.0软件对23批鼠麴草进行聚类分析和主成分分析。结果:TLC斑点清晰,分离度好。23批样品水分、总灰分、酸不溶性灰分和浸出物含有量分别为7.83%~10.70%、5.95%~17.11%、0.83%~9.40%和8.87%~27.43%。木犀草素和芹菜素分别在0.7~374.5μg/mL(r=0.9999)和0.4~195.5μg/mL(r=0.9994)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为98.95%(RSD=1.94%)和97.18%(RSD=3.46%)。西藏地区的样品被聚为一类,其他地区样品分布离散,分类结果与地域有关。结论:该方法稳定可靠,可用于鼠麴草的质量评价。

不同产地栀子药材、土壤无机元素含量特征与有效成分的相关性研究

为了探索不同产地栀子及土壤中无机元素的分布规律与药材质量间的内在联系,本研究采用电感耦合等离子体发射光谱及液相色谱对全国范围内36个产地的栀子及土壤无机元素、有效成分含量进行测定,发现不同产地栀子及其土壤中无机元素存在较大的变异。总体来看,Ca、B、Cu、Zn、K和Cr是栀子药材的特征无机元素。药材中B、Cu、Zn、P、Ca与土壤中无机元素的显著相关。栀子有效成分的形成是多因素的交互作用,土壤无机元素的含量不是最直接因素。本研究为合理施肥、改良土壤、控制栀子中有害元素含量及提高品质提供理论依据。

不同产地川佛手中8种化学成分的分析与评价

建立HPLC法同时测定不同产地川佛手中木犀草素、6,7-二甲氧基香豆素、莨菪亭、5,7-二甲氧基香豆素、7-羟基香豆素、橙皮苷、槲皮素、阿魏酸8种成分含量的方法。采用Thermo BDS HYPERSIL C18(250 mm×4. 6 mm,5μm)色谱柱,甲醇-0. 2%冰醋酸水溶液进行梯度洗脱,流速1 m L/min,柱温30℃,检测波长322 nm。在该色谱条件下,川佛手中8种成分分离良好,平均加样回收率为91. 22%～96. 52%,RSD <5. 0%。不同产地的川佛手中8种成分含量存在差异,部分成分之间存在相关性,样品聚为3类。产于四川省宜宾市长宁县老翁镇的川佛手质量最优。该方法可为川佛手的资源开发利用、质量控制以及安全评价提供参考依据。

连作对玄参产量和根际土壤肥力及酶活性的影响

目的:研究连作对玄参产量、根际土壤肥力及土壤酶活性的影响。方法:采用单因素随机区组试验设计方法。结果:连作对玄参病情指数、烂根率、药材及子芽产量有显著影响,连作年限越长影响越严重;连作可降低玄参根际土多酚氧化酶和酸性磷酸酶活性,对过氧化氢酶、蔗糖酶、脲酶、酸性蛋白酶和纤维素酶的活性没有显著影响;连作也没有对玄参根际土的全氮、全磷、全钾、碱解氮、速效磷、速效钾、pH值和有机质有显著影响。结论:连作会严重影响玄参的生长,造成死苗、烂根等,但是没有影响到玄参根际土的营养平衡,多酚氧化酶和酸性磷酸酶可能是影响玄参产生连作障碍的关键性酶,连作对其他土壤酶活性影响不显著。

不同杀青方式对栀子有效成分及体外抗氧化活性的影响

为明确栀子的最佳杀青方法和时间,本研究设置不同杀青方式处理样品,采用HPLC、DPPH、FRAP、OH^-法评价其对栀子药材质量及体外抗氧化活性的影响。结果表明:不同的杀青方式对栀子药材质量及体外抗氧化活性有不同程度的影响。以沸水煮杀青9 min栀子苷和绿原酸含量最高,热风105℃杀青12 min西红花苷含量最高;蒸汽蒸15 min对DPPH清除能力显著强于其他处理,沸水煮9 min对Fe^(3+)的还原能力和羟自由基的清除能力显著高于其他处理。综合考虑药材质量、抗氧化活性,栀子杀青以沸水煮9 min为宜,本研究为栀子初加工过程中的质量控制提供一定的理论依据。

川牛膝不同产地药材质量综合评价研究

为了建立更全面的川牛膝药材质量评价方法,按照2015版《中华人民共和国药典》方法测定水分、总灰分、水冷浸物和乙醇冷浸物;新建HPLC法测定川牛膝中杯苋甾酮、前杯苋甾酮和齐墩果酸3种成分的含量,并通过SPSS 20.0软件进行聚类分析和主成分分析。本研究较全面地评价了全国54个产地川牛膝药材的质量,54批川牛膝样品的水分、总灰分、浸出物、含量均符合药典标准,为川牛膝药材的进一步开发提供了依据。

不同产地川佛手中重金属含量测定及安全性评价

建立川佛手重金属含量测定的电感耦合等离子体发射光谱(ICP-OES)分析方法,并对川佛手重金属含量进行分析与安全评价。样品经微波消解后,用ICP-OES方法测定其铅、镉、铜、汞、砷5种重金属含量。利用SPSS统计软件对不同重金属元素进行相关分析和聚类分析,结合单因子污染指数法和Nemerow综合污染指数法评价其安全性。结果表明,铅、镉和铜的线性范围为0～1.00μg/mL,砷和汞的线性范围为0～0.10μg/mL,线性关系良好(r>0.998 6),检测限范围为0.000 3～0.004 5μg/mL,精密度实验RSD为1.03%～4.39%,重复性实验RSD<5.00%,平均加样回收率在94%～101%。建立的ICP-OES方法可准确测定川佛手中5种重金属元素的含量。铅、镉、铜的平均含量分别为2.035、0.121、3.237μg/g,汞、砷均未检出。铅-镉、铜-镉之间存在负相关,铅-铜之间存在正相关。30个不同产地川佛手样品中重金属含量均在中国《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》规定范围内,综合污染指数为0.316～0.518,处于安全水平。

不同产地槐米的质量综合评价研究

为了进一步完善槐米的质量评价方法,并对不同产地槐米进行质量评价,本研究按照2015版《中华人民共和国药典》方法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物和总黄酮;采用HPLC法测定槐米中芦丁、水仙苷、槲皮素、异鼠李素4种成分的含量,并通过SPSS 20. 0软件进行聚类分析和主成分分析。54批槐米样品的水分、总灰分和酸不溶性灰分均符合药典标准;南方产槐米的浸出物及黄酮类成分含量均普遍高于北方产槐米。聚类分析和主成分分析将54批槐米聚为3类,分类结果与地域有较大关系。本研究较全面地评价了全国54个产地槐米的质量,为槐米的产品开发提供了实验依据。

黄连根腐病土赤壳属病原真菌的鉴定

【目的】鉴定黄连根腐病的病原,为该病害的防治提供参考依据。【方法】用组织分离法得到病根土赤壳属真菌,通过离体回接初步筛选出疑似病原,通过活体回接鉴定出其中的病原菌,对病原菌的菌落形态、产孢结构、孢子类型和形态等进行观察和测量,同时对其ITS序列测序,在GeneBank中进行同源性比对。【结果】共分离到土赤壳属真菌38株。不同株系的菌株侵染力有较大差异。其中二株菌致病性强,分离频率高,是病原菌。它们的ITS序列与Ilyonectria liliigena和I.destructans的同源性分别达99%,形态特征与这两株菌一致。结合分子和形态鉴定结果,将二者分别鉴定为I.liliigena和I.destructans。此外,部分土赤壳菌的菌落形态和致病性在培养过程中发生了变异,其ITS序列碱基也发生了突变。【结论】I.liliigena和I.destructans是黄连根腐病的病原真菌,这类土赤壳属真菌基因易发生突变。

深绿木霉对青蒿的促生作用

为了研究深绿木霉对青蒿的促生作用,用深绿木霉菌丝体和孢子分别施用于苗期和成株期的青蒿,统计比较各项生长发育指标和生理指标.结果表明:与清水对照相比,深绿木霉菌丝体和孢子均能显著促进青蒿幼苗生长,但对大田成株青蒿没有显著促生作用.深绿木霉适合作为青蒿苗肥,部分替代化肥.