虎血清中犬副流感病毒的抗体流行病学调查研究

为查明犬副流感病毒 (CPIV)对虎的感染情况 ,应用CPIV细胞培养物为血凝抑制 (HI)抗原 ,对上海、桂林、哈尔滨、宜昌、郑州等地区未曾使用过任何含CPIV疫苗免疫的 38只虎的血清进行HI抗体检测。结果表明 ,有 2 5份血清CPIV的HI抗体效价为 1∶4～ 1∶32 ,有 1 3份抗体效价 <1∶2 ,血清中CPIV的HI抗体阳性率达 65 79%。

橘皮素的结构改造及应用研究

通过磺酸化、卤化、酯化、乙酰化等途径对橘皮素进行结构改造后得到 8种新衍生物 :橘皮素磺酸取代物 - 1、橘皮素磺酸取代物 - 2、橘皮素溴取代物 - 1、橘皮素溴取代物 - 2、橘皮素碳酸酯、橘皮素甲基酮 - 1、橘皮素甲基酮 - 2、橘皮素乙酰酯。并对这 8种衍生物进行了离体兔耳痒螨药效筛选试验 ,结果除磺酸取代物 - 1无杀螨作用外 ,另 7种都具有较强的杀螨作用 ,其中橘皮素乙酰酯作用最强。将橘皮素乙酰酯制成乳浊液作药效试验 ,在 0 .1%、0 .0 5%和 0 .0 2 %浓度时 ,分别在 2～ 5min、3～ 6min和 8～ 10 min内将被试螨虫全部杀死 ,杀螨效力强于橘皮素 ,与螨净、双甲脒相近 ;将其制成 1%的擦剂 ,两次滴耳、涂擦治疗 2 5只耳痒螨感染病兔和 4 75只耳痒螨感染病狐 ,两周后治愈率达 96.5% ;将其制成 50 %的乳油 ,再稀释至 0 .0 5%和 0 .0 2 5%的浓度 ,间隔1周 ,药浴两次治疗 172只和 132只两群螨虫感染病羊 ,两周后 ,治愈率分别达到 99%和 98% ,优于同期药浴的辛硫磷对照组 ,且无任何异常现象发生。橘皮素乙酰酯毒性试验结果表明 :其小鼠腹腔注射 LD50 为 2 50 .0 3mg/kg,口服给药 L D50 分别为 182 1.2 8mg/kg(溶剂为玉米油时 )和 LD50 为 2 4 99.19mg/kg(溶剂为吐温 - 2 0时 ) ,对兔皮肤急性毒性大于

LHRH-PE40对荷瘤BALB/c小鼠抗肿瘤效果的实验研究

目的 观察LHRH-PE40对小鼠腹水瘤及实体瘤的治疗效果,为确定药理、毒理学实验剂量提供依据。方法 分别给BALB/c小鼠腹腔内和背部皮下接种骨髓瘤SP2/0细胞,接种后第4d和第9d,分别腹腔注射LHRH-PE40,并设空白对照组,停药后第5d处死,观察两组小鼠腹水和腹腔内肿瘤生长情况,称量瘤重,计算抑瘤率。结果 腹水瘤实验组所有小鼠腹部未见腹水,腹腔未见肿瘤。实体瘤实验组抑瘤率为54％。结论LHRH-PE40可以有效地抑制荷瘤小鼠实体瘤的生长。

狂犬病病毒SRV_9疫苗株糖蛋白核酸序列及抗原特性研究

狂犬病病毒SRV9株是经克隆获得的中等蚀斑口服弱毒疫苗候选株,具有安全和免疫原性较好等优点。本试验根据狂犬病病毒糖蛋白核苷酸5’末端和3’末端序列设计了一对引物,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分别扩增了 SRV9及其母源株SAD B19糖蛋白的全长cDNA。测序结果表明,SRV9和SAD B19糖蛋白cDNA读框长1575bp,编码524氨基酸残基的多肽。通过和其母源株SAD B19核苷酸序列比较发现,SRV9的158、575、931位碱基分别出现了G→A、A→G和A→G的转换,相应地导致第53位、192位、311位氨基酸出现了Gly→Glu、His→Arg、Thr→Ala突变;和我国现行的犬用疫苗株ERA的核苷酸和氨基酸比较,有10个碱基不同.7个氨基酸发生改变。经Jameson-Wolf抗原表位优势图分析发现,SRV9在192位氨基酸的改变,导致该部位产生了一个新的潜在抗原位点。由于狂犬病病毒糖蛋白是诱导机体产生中和抗体唯一抗原,因此,上述氨基酸的改变可能与其特殊的蚀斑特性和其安全性提高有关。保持对毒株的氨基酸序列分析也是监测其特性的重要手段之一。

光合细菌规模生产工艺研究

报道了大量培养光合细菌的密封式生物反应器的设计和制造 ,温度与流动培养采用自动化控制 ,能进行规模化生产。对培养基中的碳源、氮源、矿物质元素及生长因子进行了最适添加量试验 ,其中以酵母浸膏促生长作用最明显 ,对碳源的利用以葡萄糖、柠檬酸、苹果酸、甘露糖醇、烟酸、酒石酸较好 ,对氮源的利用氯化铵最好 ,硫酸铵次之。乙酸钠、氯化铵、硫酸锰、硫酸铁、氯化钴的最适添加量分别为 1 .75g/L、0 .75g/L、2 5μg/L、2 5mg/L、2 .75mg/L。最适培养环境 :光照强度为 50 0 0lx、温度为 3 0～ 3 4℃ ,pH值为 7.0～ 7.5。添加絮凝剂使光合细菌自然沉淀 ,简化了工艺流程 ,细胞密度达到 1 .5g/L ,而国外报道是 1 .3 g/L。

动物克隆技术及其研究现状

世界上第一只体细胞克隆动物——多利的降生 ,打破了人们的一个传统观念 ,那就是多少年来人们一直认为植物体细胞具有全能性而动物体细胞则没有全能性。克隆技术是目前生物技术领域研究的热点之一 ,其科学意义和应用价值重大 ,本文主要以克隆技术为着眼点 ,综述了克隆技术分类、研究进展、存在的问题 。

应用致敏SPA菌体提高CAV/CPV PCR检出率的研究

为消除粪便等病料中的PCR干扰物质 ,提高犬腺病毒与细小病毒 (CAV CPV)联合PCR检出率。根据免疫吸附的原理 ,应用CAV CPV高免血清致敏含A蛋白的金黄色葡萄球菌 ,制成致敏SPA菌体免疫吸附剂 ;以此免疫吸附提取粪便等病料中的CAV/CPV ,然后直接或经 3 5mol/LMgCl2 将所吸附病毒洗脱后再做PCR。结果 8份经电镜负染或HA/HI试验验证为阳性的粪便样品 ,如此处理后进行PCR检测 ,结果均为阳性 ;而直接取粪便离心后用上清进行PCR检测 ,结果均为阴性。表明该法可有效去除待检样品中的PCR干扰物质 ,提高PCR的检出率。

犬细小病毒分离鉴定及其基因型调查的基础研究

用F81细胞从不同地区送检的25份肠炎犬病料中分离出10株细小病毒,经形态学、理化学、生物学和分子病毒学等鉴定。结果这10株病毒均能在F81细胞上生长,产生细胞肿胀、变圆、破碎、脱落等细胞病变;病毒粒子呈立体对称,直径为20～24nm,无囊膜,抗氯仿,耐酸,耐热,能被5-IUDR抑制,可凝集猪、马、猫的红细胞,不能凝集人、鸡、豚鼠、兔的红细胞,HA试验能被抗CPV的特异性抗体所抑制。用犬细小病毒(CPV)特异性引物对10株病毒进行PCR扩增,结果扩增片段与阳性对照大小一致(771bp)。用PV/犬/JL/1/02、PV/犬/BJ/1/99和PV/犬/GZ/1/02三个毒株进行人工感染犬试验,结果人工感染犬在接种后白细胞总数出现短期不同程度的下降,在攻毒后4～14d粪便PCR检测阳性,其中接种PV/犬/BJ/1/99的一只犬出现严重的肠炎症状并死亡,其余接种犬没有出现明显的临床症状,但血清抗体均升高(大于5倍),而对照组的白细胞总数和血清抗体没有明显的变化,粪便PCR检测阴性。表明所分离毒株能够感染犬。鉴定结果证明,CPV在我国犬群中仍广泛存在。

用套式PCR法检测犬冠状病毒的研究

根据 Gen Bank中 Wesseling发表的犬冠状病毒 K378株纤突蛋白基因序列 ,设计合成了能扩增 372 bp基因片段的套式引物。用异硫氰酸胍—酚—仿一步抽取法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物进行套式 PCR扩增 ,并筛选出最佳套式 PCR扩增条件。结果经套式 PCR扩增能得到与设计大小相同的产物 ,并且不扩增犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬 型腺病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验表明 ,此法能扩增出犬冠状病毒强毒细胞培养物 (毒价为 1 0 -4.2 TCID5 0 / 0 .1 ml) 1 0 -6稀释的反转录产物 ,远高于常规 RT PCR。经初步应用表明 。

狼毒大戟抗菌抗病毒作用初步研究

通过对狼毒大戟的抗菌、抗病毒及药物毒性进行了初步研究表明 ,狼毒大戟提取物对大肠杆菌、沙门氏杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌的 MIC值分别为 :2 5 mg/ml、12 .5mg/ml、12 .5 mg/ml、12 .5 mg/ml、3.12 5 mg/ml。对 NDV、CPV的最大抑制率为 5 3.6 8%、5 3.96 %。结果证明狼毒大戟对细菌。

大肠杆菌热敏毒素研究概况

本文在分析大肠杆菌热敏毒素 (LT)生物学特性及其分子学水平研究的基础上 ,从蛋白质和基因水平阐述了猪源 L T与人源L T的亲缘关系 ,评述了 LT在研制人畜大肠杆菌腹泻疫苗中的应用价值 ,也通过对与 LT具有相似蛋白和基因结构的霍乱毒素 CT的分析 ,表明二者具有相同的进化起源 ,认为通过定点诱变的 L T能够取代

犬2型腺病毒对犬的口服免疫研究

对未经犬腺病毒免疫的两月龄左右杂交狼犬 ,随机分为 6组每组 5只 ,另设 5只对照 ,用作者分离鉴定和致弱驯化的犬喉气管炎病毒 (犬 2型腺病毒 )的第 60代 DK细胞培养物 ( SYCAV- 2 DK60 )对犬进行口服免疫试验 ,在免疫第 4周采血分离血清 ,测定犬腺病毒的血凝抑制抗体 ( HI)效价 ,结果 30只试验犬全部产生了 HI抗体 ,表明 SY CAV- 2可通过口服或饵料的途径对犬实施免疫 ,为犬口服联合疫苗以及犬 2型腺病毒为载体的口服狂犬

干细胞研究的新进展

近年来 ,干细胞因其自身的许多特性成为生命科学的研究热点。干细胞能够自我更新和多向分化的生物学特性 ,具有重要的医学价值 ,在基因治疗、组织工程学、药学研究等许多领域都具有广泛的应用。而且干细胞的研究对于科学家重新认识细胞生长、分化、生物发育机制等基本生命规律也将起到重大作用。虽然干细胞的研究已取得许多重大的研究进展 ,并展现出诱人的应用前景 ,但仍存在不少技术难题有待于进一步的研究。文章就干细胞的概念、特性、主要研究领域的最新进展。

中药治疗动物湿疹试验研究

皮肤瘙痒 ,并伴发有红斑、丘疹、水疮、脓疮、糜烂、痂皮以及有皮屑脱落 ,同时还伴有热痛等症状 ,而且反复发作 ,难以治愈。作者对具有上述症状、不同时期的患犬、猫和兔进行了中药治疗研究 ,以口服与洗浴同时进行 ,收到了满意疗效。

重组rPA基因在毕赤酵母细胞中的胞内表达研究

目的构建含rPA全长基因的重组酵母胞内表达质粒pPIC9K rPA ,并在毕赤酵母中进行表达。方法用限制性内切酶BamHI和NotI将含有rPA全长基因的质粒pJZ1 6双酶切后 ,克隆至酵母表达载体pPIC9K中 ,构建酵母重组表达质粒。rPA基因经DNA序列测定准确无误。通过电穿孔法转染毕赤酵母菌GS1 1 5 ,PCR鉴定阳性酵母转化子 ,将rPA基因整合入酵母基因组DNA ,在毕赤酵母中实现了胞内非融合表达。表达产物进行SDS PAGE、Western blots以及溶纤维蛋白活性检测。结果表达产物以胞内包涵体的形式存在 ,未糖基化。SDS PAGE结果显示表达蛋白质的相对分子量约为 39kD。Western blots检测表明表达蛋白质能与单克隆抗体发生特异性反应。包涵体经 8mol L脲溶液溶解后 ,有明显的溶纤维蛋白活性。

猪瘟病毒兔化弱毒(HCLV)疫苗株基因组全长cDNA的克隆与序列分析

根据猪瘟病毒基因组的序列设计合成了覆盖HCLV基因组全部序列的5对引物,通过RT-PCR从感染家兔脾脏中扩增获得了包含HCLV(bog cholera lapinized virus,HCLV)基因组全序列的5个cDNA片段,并将它们分别克隆至pGEM-T vector中。然后将这5个cDNA片段按它们在HCLV基因组上的位置从5’端至3’端的顺序依次通过酶切连接,一并克隆到pPoly2载体中得到HCLV基因组全长cDNA的质粒pPOHCLV。序列分析表明,HCLV基因组长度共12310bp,有一个大的ORF,编码一3898个氨基酸的多聚蛋白。其5'-NCR和3’-NCR长度分别是374nt和239nt。与非兔化毒株相比较,HCLV基因组在12133nt处有12个碱基的插入CTTTTTTCTTTT,该序列可能是病毒在适应兔体增殖过程中形成的。基于基因组全序列及其所推导的氨基酸序列的同源性分析表明,毒株的亲缘关系的远近与它们的毒力之间并没有相关性。

广西猪瘟流行现状的调查分析

据对广西 13个发病猪场 (疫点 )猪瘟 (CSF)的流行病学调查分析 ,发现当地CSF流行以非典型为主 ,典型CSF同时存在 ,发病猪多在 3月龄以下且病程较长。母猪存在隐性感染 ,部分表现为繁殖障碍 ,一些临床健康猪存在着带毒问题。此外 ,从疑似CSF病料中扩增出牛病毒性腹泻病毒 (BVDV) ,表明广西猪群中存在着BVDV的感染。分子流行病学调查结果表明 ,猪瘟病毒 (CSFV )广西流行株的基因型较复杂 ,分布 2个基因群的 4个亚群 ,其亲缘关系与 2个传统毒株石门株 (Shimen)和兔化弱毒株 (HCLV)相距甚远 ,最高可达 2 0 .0 %,说明广西CSFV流行株存在着遗传多样性。

抗A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体基因的克隆、表达及其生物学活性(英文)

应用RT PCR技术 ,从分泌具有中和活性的抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体 (McAb)的杂交瘤细胞株 1A8中 ,分别扩增出抗体VH 和VL 基因 ,用linker (Gly4Ser) 3 基因 ,将VH 和VL 基因连接成单链抗体 (ScFv)基因 ,并将其克隆至pGEM T载体中 .经核苷酸序列分析证实 ,VH 和VL 基因及linker基因拼接正确 ,ScFv 1A8基因全长为 72 6bp ,编码2 4 2个氨基酸 ,VH 和VL 基因符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征 ,分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ (A)和轻链κⅣ家簇 .将ScFv 1A8基因克隆至表达载体pHOG2 1中 ,构建了重组质粒pHOG 1A8,然后转化至受体菌XL1 BLUE中 ,得到重组菌株XL1 BLUE (pHOG 1A8) .ELISA检测和SDS PAGE分析表明 :经IPTG诱导后所表达的目的蛋白存在于重组菌株XL1 BLUE (pHOG 1A8)的胞周质中 .经薄层扫描分析 :重组菌株XL1 BLUE(pHOG 1A8)的蛋白表达产物占菌体可溶性蛋白的 1 2 % ,其相对分子量约为 31kD .ScFv的生物学活性研究表明 ,ScFv蛋白不但具有中和磷脂酶C的活性 。