hsa-miR-125a-5p促进非小细胞肺癌细胞侵袭

背景与目的microRNAs(miRNAs)是小的非编码RNA,它们通过与靶mRNA不完全互补连接的方式转录后调控靶基因的表达。尽管一些失常的miRNA调节机制在人许多恶性肿瘤中被发现,但是,hsa-miR-125a-5p在肺癌细胞中的表达及功能还尚不清楚。本研究探讨了hsa-miR-125a-5p在非小细胞肺癌细胞中的表达及其与肺癌细胞侵袭的关系。方法应用real-timePCR的方法检测了hsa-miR-125a-5p在6种肺癌细胞系中的表达情况,并在A549细胞中分别转染正义的hsa-miR-125a-5p2’-O-甲基寡核苷酸24h、36h、48h、60h和72h后检测hsa-miR-125a-5p的表达情况。同时应用transwell小室观察上调hsa-miR-125a-5p后,A549细胞侵袭能力的变化。结果hsa-miR-125a-5p在6种肺癌细胞系中低表达,以LH7、NCI-H460、SPC-A-1和A549细胞最为明显。在A549细胞中,转染正义的hsa-miR-125a-5p2’-O-甲基寡核苷酸36h后,hsa-miR-125a-5p表达最高,并进一步发现,上调hsa-miR-125a-5p后A549和NCI-H460细胞侵袭能力增强。结论hsa-miR-125a-5p在肺癌细胞中低表达,但上调hsa-miR-125a-5p能够促进A549和NCI-H460细胞侵袭。

CK34βE12、P63和P504S在前列腺良恶性病变中的表达

目的探讨CK34βE12、P63和P504S在前列腺良恶性病变中的表达及鉴别诊断意义。方法应用免疫组化S-P法对57例前列腺癌及49例良性前列腺增生组织中CK34βE12、P63和P504S的表达水平及鉴别诊断意义。结果CK34βE12、P63和P504S在57例前列腺癌中的阳性表达率分别为1.7%及96.4%,P63为100%阴性表达;CK34βE12和P63在49例良性前列腺增生中阳性表达率分别为100%及100%,P504S为100%阴性表达。结论在前列腺增生性病变组织中联合检测CK34βE12、P63和P504S的表达对于前列腺良恶性病变鉴别诊断有重要意义。

5-FU诱发小鼠气管上皮损伤修复过程及其基因芯片解析

背景与目的虽然气管干细胞的定位研究有较大进步,但其增殖分化调节机制至今不清。方法本研究应用形态学、免疫荧光、基因芯片等方法观察及分析5-FU诱发小鼠离体气管上皮损伤修复过程,探讨气管干细胞增殖分化调节机制。结果因5-FU作用气管上皮进入增殖期分化细胞坏死、脱落,基底膜上仅残留少数G0期细胞,放回普通培养液后,气管上皮变扁平、以后呈立方,以至恢复气管上皮。这些G0期细胞显示干细胞标志ABCG2阳性,表明为未分化细胞,能分化成纤毛细胞及Clara细胞,说明具有干细胞多分化能力。采用干细胞基因芯片比较在恢复24h及48h与正常气管上皮基因表达的差异。24h后差异基因8个上调,31个下调。48h后5个上调,42个下调。差异基因表达主要集中在细胞周期调控、细胞连接、FGF、BMP分子、Notch、Wnt信号通路上。结论差异基因表达与气管干细胞增殖分化调控机制关系密切。

干细胞标记物CK19、Notch3、CD133、P75NTR、STRO-1及ABCG2在肺鳞癌中的表达及意义

背景与目的已有研究表明在肿瘤中存在着能够自我更新与多向分化的肿瘤干细胞,它们与正常人体内的干细胞有着相似的特征。本研究选取了被认为可作为干细胞标记物的部分抗体,以观察它们在肺鳞癌中的表达及意义。方法采用S-P免疫组织化学方法,对54例手术切除肺鳞癌标本进行了CK19、Notch3、CD133、P75NTR、STRO-1及ABCG2的检测,另外选取了10例正常肺组织标本进行对照。结果54例肺鳞癌标本中,除发现STRO-1及P75NTR在所有病例均为阴性表达外,其余标记均存在不同程度的阳性表达,但是阳性细胞的分布无规律性。其中,CK19阳性率为66.67%(36/54),Notch3为87.04%(47/54),CD133为50%(27/54),ABCG2为61.11%(33/54),并且Notch3、CD133和ABCG2在中低分化肺鳞癌中的表达高于高分化鳞癌(P<0.05),而CK19、CD133和ABCG2在有淋巴结转移的肺鳞癌中的表达高于无淋巴结转移(P<0.05),在连续切片中4种标记同时阳性的细胞数均少于总细胞数目的2%,3种及4种抗体共同阳性细胞所占百分比与鳞癌的分化程度和是否有淋巴结转移无统计学相关。结论肺鳞癌中存在着某些干细胞标记物的表达,其表达程度与肺鳞癌的分化程度及淋巴结转移相关,但是阳性细胞在组织学的分布上无规律性,同时表达多种干细胞标记的肿瘤细胞数少于2%,可能为肿瘤干细胞。

p120ctn亚型在肺鳞癌、腺癌中表达及意义

背景与目的已有的研究显示:p120ctn(p120 catenin)与肿瘤的发生密切相关,在保持细胞黏附中起着重要作用,本研究通过观察p120ctn各亚型在肺鳞癌、腺癌和相应的癌旁肺组织中蛋白表达量的变化,探讨p120ctn亚型与各临床病理因素的关系。方法应用免疫荧光和Western Blot方法检测肺鳞癌、腺癌及对应癌旁正常肺组织中p120ctn各亚型的表达情况。结果与正常肺组织相比,p120ctn在肺癌细胞膜表达减弱,呈现胞膜荧光不连续或缺失,胞浆内存在p120ctn的蓄积。正常肺组织中p120ctn总蛋白量明显高于肺癌组织(P<0.001)。p120ctn蛋白以亚型1(120KD)和亚型3(100KD)表达为主,而在肺癌组织则出现1、3亚型表达缺失或减弱(P=0.001,P<0.001)。并且亚型3的这种缺失或减弱的现象与肺癌的淋巴结转移负相关(P=0.005)。结论p120ctn亚型1和3的蛋白表达的减弱或缺失是肺癌的普遍现象,且这种现象与淋巴结的转移相关。

Axin通过负向调控Wnt通路抑制A549细胞系增殖

目的:前期研究发现转染Axin能抑制A549细胞的增殖能力,本研究目的是探讨Axin抑制A549细胞增殖能力的机制。方法:我们构建了野生型和突变型Axin质粒(Axin与β-catenin结合位点剪切突变)转染A549细胞,并应用GSK-3βsiRNA处理细胞,Western bolt检测各处理组β-catenin和cyclin D1的变化,MTT检测各处理组细胞增殖能力的变化。结果:转染野生型Axin能够明显地下调β-catenin和cyclin D1(P<0.01),抑制Wnt通路活性和A549细胞的增殖(P<0.01),而GSK-3βsiRNA可以阻断Axin的这种功能;转染突变型Axin不能有效的下调Wnt通路或A549细胞的增殖能力。结论:Axin主要是通过负向调控Wnt通路抑制A549细胞的增殖。Axin可能成为未来治疗肺癌的新靶点。

Frat1与TCF4在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达的相关性及意义

目的:研究Frat1与TCF4在NSCLC中的表达及其意义。方法:用免疫组化SP法对95例原发性NSCLC患者手术标本中Frat1和TCF4的表达进行检测。结果:在NSCLC中Frat1表达与肺癌组织的低分化、淋巴结转移、TNM分期相关(P<0.05);TCF4的表达与淋巴结转移、TNM分期相关(P<0.05);Frat1的表达与TCF4的表达有相关性(P<0.05)。结论:Frat1和TCF4在NSCLC中与肺癌的侵袭和转移等恶性表型有关,Frat1和TCF4在癌组织中的表达有相关性。

中枢神经细胞瘤的病理研究

目的对8例脑中枢神经细胞瘤病例进行研究,探讨其组织学、免疫组化和超微结构特点。方法对2000～2012年间8例脑室肿瘤进行组织学观察,用免疫组化检测几种重要的肿瘤标记物的表达,其中包括细胞角蛋白(广谱)CK、上皮膜抗原(EMA)、波形蛋白(Vimentin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经突触素(Syn)、S100和Ki67。结果对8例中枢神经细胞瘤进行组织学检查,结果显示该肿瘤具有一定的形态学特点,肿瘤细胞呈现片状排列或不规则的"菊形团"样排列,也可见肿瘤细胞围绕血管形成"假菊形团",肿瘤细胞形态单一,细胞多呈圆形,细胞核圆形或卵圆形,染色质细腻呈斑点状。免疫组化结果显示8例中枢神经细胞瘤CK、EMA和vimentin染色均为阴性,GFAP阳性者5例,Syn阳性者8例,S100阳性者4例,8例Ki67染色均为阳性,但比率较低,均为1%～3%。结论中枢神经细胞瘤具有较为典型的形态学特征和免疫组化染色特点,这些特点对中枢神经细胞瘤的诊断具有重要的提示作用。

肺癌细胞系中p120-catenin的基因缺失调控small GTP酶活性

背景与目的作为catenin蛋白家族的重要成员之一,p120-catenin(p120ctn)是small GTPase酶的重要调节因子,影响细胞的运动能力,但其中具体的调节机制尚不清楚。本研究旨在探讨p120ctn在肺癌细胞系中对small GTP酶家族核心成员的调节作用,及其对肺癌细胞侵袭、转移的影响。方法应用siRNA方法成功地建立了p120ctn基因沉默的多种癌细胞系BE1、SPC、LTE的细胞克隆,采用Western Blot,pull-down蛋白活性分析,裸鼠移植等体内外实验探讨其可能的调节机制。结果p120ctn的基因沉默能激活Cdc42和Rac1,失活RhoA,并且在活体内外促进肺癌细胞的侵袭和转移。结论p120ctn的缺失可激活Cdc42/Rac1、失活RhoA,促进肺癌细胞的侵袭和转移能力。

p53负向调控肺癌A549细胞Wnt通路活性并抑制其增殖和侵袭

目的:探讨野生型p53对Wnt通路的调节以及对肺癌细胞生物学行为的影响。方法:分别利用野生型p53质粒及siRNA,分别转染和干扰A549细胞中的野生型p53,而后用Western blot检测A549细胞中β-catenin和cyclin D1的表达,用荧光素酶报告基因法检测Wnt通路活性,用MTT和Transwell实验检测A549细胞的增殖和侵袭能力。结果:转染野生型p53后能够明显下调A549细胞中β-catenin和cyclin D1表达(P<0.01),抑制肺癌细胞的增殖和侵袭(P<0.05),而干扰p53可以明显地上调β-catenin和cyclin D1表达(P<0.01),增强肺癌细胞的增殖力和侵袭力(P<0.05)。结论:野生型p53负向调控A549细胞中的Wnt信号转导通路,抑制其增殖和侵袭能力。

肺癌细胞系中p120-catenin亚型1A和亚型3A对E-cadherin和β-catenin的调节功能

背景与目的p120-catenin(p120ctn)作为catenin家族的重要成员,具有多种功能各异的亚型。由于这些亚型存在着组织和细胞学特异性,因而在不同的组织和细胞当中,p120ctn各亚型可能对细胞粘附发挥不同的调节功能,但至今尚缺乏直接相关的实验证明。方法选取p120ctn低表达的肺癌细胞系A549和NCI-H460,分别向其中转染p120ctn亚型1A和p120ctn亚型3A的cDNA质粒,应用RT-PCR、Western Blot、Transwell检测p120ctn各亚型对E-cadherin/β-catenin复合体的影响,及其对肺癌细胞侵袭和转移能力的调节作用。结果p120ctn亚型1A的高表达能够通过促进E-cadherin/β-catenin的表达,进而明显抑制肺癌细胞的侵袭能力;而p120ctn亚型3A的高表达却没有这样明显的调节作用。结论P120ctn亚型1A和亚型3A可能通过对E-cadherin/β-catenin的不同调节作用,在不同程度上调控肺癌细胞的侵袭能力。

曲古霉素A对胶质瘤细胞系U251增殖与侵袭的调节作用

目的:探讨曲古霉素A(Trichostatin A,TSA)处理对胶质瘤细胞系U251增殖和侵袭的调节作用。方法:分别将浓度为200ng/ml、400ng/ml和800ng/ml的TSA加入胶质瘤细胞系U251中。Western blot法检测乙酰化组蛋白H3和H4表达。MTT法检测不同浓度处理组中细胞的增殖能力。Transwell细胞侵袭实验检测不同浓度处理组和对照组中细胞侵袭能力。结果:TSA处理后的U251细胞中乙酰化组蛋白H3和H4表达明显上调(P<0.01)。MTT结果显示U251细胞经TSA处理后的增殖能力明显减弱(P<0.01),且具有剂量依赖性。Transwell细胞侵袭实验显示TSA处理后,U251细胞的侵袭细胞数明显减少(P<0.01),也具有剂量依赖性。结论:TSA可以比较有效地抑制胶质瘤细胞系U251的增殖和侵袭能力,为临床治疗胶质瘤提供了新思路。

p120-catenin和Rac1的协同表达与非小细胞肺癌恶性程度相关性的研究

背景与目的在肺癌组织中,p120-catenin(p120ctn)与smallGTP酶家族中的主要成员Rac1的表达是否具有相关性,至今尚不清楚。方法本研究应用S-P免疫组化、Western Blot、RT-PCR方法观察138例肺癌标本及2种具有不同侵袭转移能力的同源肺癌细胞系中p120ctn和Rac1的表达。结果在肺癌组织中p120ctn的蛋白和mRNA表达水平均明显低于正常肺组织,而Rac1在肺癌组织中的表达明显高于正常肺组织,p120ctn的异常表达与Rac1的过表达有较好的相关性(Correlation coefficient=0.720,P<0.001),并与肺癌的分化(P=0.022),分期(P=0.010)和淋巴结转移(P=0.009)相关。同时,在肺癌细胞系中我们还观察到p120ctn表达下降和Rac1的过表达现象在具有高转移能力的BE1细胞系中尤为突出。结论肺癌中p120ctn的异常表达与Rac1的过表达有关,并与肺癌的恶性程度相关。

p120-catenin亚型的表达减弱与肺癌的淋巴结转移明显相关

背景与目的已有的研究表明,p120ctn(p120catenin)在细胞粘附中起重要作用,与肿瘤发生关系密切。本研究探讨p120ctn亚型在肺鳞癌、腺癌中的表达及其与各临床病理因素的关系。方法应用RT-PCR方法检测肺鳞癌、腺癌及对应癌旁肺组织中p120ctn各亚型的表达情况,同时应用免疫荧光、Western-blot和RT-PCR方法检测了p120ctn各亚型在肺癌PG细胞系BE1和LH7中的表达。结果p120ctn的总mRNA及其亚型1和亚型3的mRNA在癌旁肺组织中的表达量要明显高于肺鳞、腺癌组织中的表达量(P<0.001,P<0.001,P=0.001)。且亚型1mRNA的表达缺失与淋巴结转移呈负相关(P=0.01),而亚型3mRNA的表达缺失与癌组织的淋巴结转移呈正相关(P=0.029)。高转移能力的BE1细胞中p120ctn亚型1和亚型3的表达减弱比LH7更为明显。结论p120ctn亚型1和3mRNA的表达减弱或缺失是肺癌中普遍存在的现象,且这种现象与淋巴结的转移有密切关系。

乳腺癌中P-JNK与beclin 1的表达及临床意义

目的分析人乳腺组织中P-JNK和beclin 1的表达变化,探讨二者在乳腺癌鉴别诊断及治疗中的临床作用。方法应用免疫组化SP法检测20例乳腺正常上皮、30例乳腺导管原位癌和70例乳腺浸润性导管癌中P-JNK和beclin 1蛋白的阳性率,Western blot检测乳腺浸润性导管癌及正常乳腺组织中P-JNK和beclin 1蛋白的表达量。结果 1在正常乳腺组织、乳腺导管原位癌和乳腺浸润性导管癌中P-JNK阳性率分别为80%、43.3%和18.6%,beclin 1阳性率为85%、46.7%和24.1%。2乳腺癌中二者阳性率与组织学分级相关(P<0.05),与患者临床分期、淋巴结转移、ER和PR阳性率无关(P均>0.05)。370例乳腺癌组织中,P-JNK和beclin 1表达呈正相关性(P<0.01)。4Western blot结果表明,P-JNK和beclin 1蛋白在乳腺癌组织中蛋白表达量低于二者在乳腺正常组织中的蛋白表达量(P<0.05)。结论在乳腺癌中P-JNK和beclin 1均低表达,P-JNK和beclin 1具有正相关性,二者可能在乳腺癌发生、发展过程中受到抑制,因此推断联合检测P-JNK和beclin对于乳腺良、恶性病变的鉴别以及对乳腺癌的治疗、评价预后有重要参考价值。

肺癌组织Axin与DNMT1表达及其生物学意义的探讨

目的:分析Axin和DNA甲基转移酶1(DNMT1)在肺癌组织中的表达和相关性,及其与肺鳞癌和腺癌临床病理因素的关系。方法:采用免疫组化方法检测Axin和DNMT1在100例肺癌组织中的表达情况。结果:Axin在肺鳞癌和腺癌组织中表达明显减少,其细胞质表达与肺癌的分化程度相关(P=0.044),核表达与肺癌的组织学类型(P=0.001)和TNM分期(P=0.016)相关。DNMT1在肺癌组织中的表达明显增加,并与肺鳞癌和腺癌的组织学类型(P=0.005)、分化程度(P=0.038)、TNM分期(P=0.031)和淋巴结转移(P=0.032)显著相关。Axin在肺癌组织中的低表达与DNMT1高表达显著负相关(r=-0.222,P=0.027),而在肺腺癌组织中Axin的核表达也与DN-MT1的表达显著负相关,r=-0.308,P=0.026。结论:Axin在肺鳞癌和腺癌组织中的低表达与DNMT1的高表达显著相关。DNMT1的表达可以作为肺癌恶性程度和进展情况的指标之一。

肺癌组织Disabled-2与Axin的表达及临床意义

目的:分析Disabled-2(Dab2)和Axin在肺癌组织中的表达和相关性,及其与肺鳞癌和腺癌临床病理因素的关系。方法:采用免疫组化方法检测Dab2和Axin在110例肺鳞癌和腺癌组织中的表达情况。结果:在110例肺鳞癌和腺癌中,Dab2的表达(高表达21.82%、中等表达46.36%、低表达31.82%)低于癌旁正常肺组织(高表达58.24%、中等表达36.55%、低表达5.21%,P<0.001),并与肺癌的组织学分型有关,P<0.001。Dab2可在肺癌细胞核内表达,但表达率明显低于癌旁正常肺组织,并且与肺癌的分化程度相关,P=0.027。Axin的细胞质表达与肺癌的分化程度相关(P=0.032),而Axin的核表达与肺癌的腺癌组织学类型(P<0.001)和TNM分期(P=0.013)相关。Dab2在肺癌细胞质中的低表达与Axin的低表达显著相关(r=0.354,P<0.001),同时,Dab2的核表达也与Axin的核表达显著相关(r=0.399,P<0.001)。结论:Dab2在肺鳞癌和腺癌中表达明显减少。Dab2的核表达与肺癌的分化程度相关。Dab2和Axin在肺癌组织中可能具有协同表达的现象。