高糖微环境下小鼠晶状体上皮细胞中赖氨酸乙酰化的蛋白质组学分析

目的探讨高糖微环境下小鼠晶状体上皮细胞中赖氨酸乙酰化生物学过程和功能。方法采用小鼠晶状体上皮细胞系α-TN4建立正常处理组(葡萄糖5.5 mmol/L)和高糖处理组(葡萄糖45 mmol/L)。利用稳定同位素标记氨基酸标记2组细胞,使用泛乙酰化抗体富集,高分辨率液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测和生物信息学数据挖掘。基因本体(GO)、亚细胞定位、真核直系同源组(KOG)、GO富集、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集、结构域富集和复合物富集分析小鼠晶状体上皮细胞中的乙酰化生物学过程和功能。结果在高糖微环境下,晶状体上皮细胞中乙酰化分别在分子功能、细胞成分、生物学过程、KOG和亚细胞定位中存在上调或下调变化;功能富集显示乙酰化主要参与和影响物质和能量代谢以及线粒体生物学过程。结论高糖诱导的赖氨酸乙酰化参与和改变多种生物功能、通路、结构域和蛋白质复合物,进而改变众多蛋白的表达及其功能。

年龄相关性白内障患者miR-138的表达及其对人晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的检测miR-138在年龄相关性白内障晶状体组织中的表达情况,并探讨miR-138对人晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响及其可能的靶基因。方法采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qP CR)检测年龄相关性白内障患者(白内障组)与正常对照组中miR-138和预测靶基因沉默信息调节因子1(silent in-formation regulator 1,SIRT1)氉的表达水平。向人晶状体上皮细胞系(SRA01/04)细胞中分别转染miR-138模拟物、模拟物阴性对照物、miR-138抑制物、抑制物阴性对照物,采用RT-qP CR检测SIRT1的mR NA表达,Western blotting检测SIRT1的蛋白表达水平;转染72 h后细胞暴露于200μmol·L-1H2O21 h,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性。双荧光素酶报告基因检测验证miR-138与SIRT1的靶向关系。结果与正常对照组相比,白内障组miR-138的表达(3.64±0.19)显著升高(P<0.001),SIRT1的mR NA表达(0.32±0.06)显著下降(P<0.001);相对于模拟物阴性对照组,miR-138模拟物组的SIRT1的mRNA(0.42±0.05)及蛋白(0.46±0.05)表达水平均明显降低,Caspase-3活性(3.24±0.17)明显升高(均为P<0.05);相对于抑制物阴性对照组,miR-138抑制物组的SIRT1的mR NA(2.95±0.13)及蛋白(1.98±0.12)表达水平均明显升高,Caspase-3活性(0.42±0.05)均明显下降(均为P<0.05);双荧光素酶报告基因检测确证SIRT1为miR-138的直接作用靶点。结论 miR-138在年龄相关性白内障患者晶状体囊膜中高表达,miR-138通过靶向性负性调控SIRT1表达,促进晶状体上皮细胞凋亡。

miR-138调控年龄相关性白内障晶状体上皮细胞抗氧化应激作用的机制

目的:探讨miR-138对年龄相关性白内障晶状体上皮细胞抗氧化应激能力的影响及其作用机制。方法:采用实时定量PCR(RT-q PCR)检测年龄相关性白内障与正常人透明晶状体前囊膜组织中及人晶状体上皮细胞系(SRA01/04)氧化应激模型中miR-138的表达水平。利用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内源性活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。向人晶状体上皮细胞中分别转染miR-138 mimics,mimic controls,miR-138 inhibitors,inhibitor controls 72h后细胞暴露于400μmol/L H_2O_2 1h,采用RT-qPCR检测p53和Bax的mRNA表达,western blotting检测p53和Bax的蛋白表达水平,MTS法检测细胞增殖活力。结果:与正常对照组相比,年龄相关性白内障晶状体组织中与人晶状体上皮细胞氧化应激模型中miR-138的表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.001);人晶状体上皮细胞氧化应激模型中内源性ROS的水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.001)。相对于对照组,miR-138 mimics组p53和Bax的mRNA、蛋白表达水平均明显升高,细胞增殖活力明显下降,差异有统计学意义(均P<0.001);miR-138 inhibitors组p53和Bax的mRNA、蛋白表达水平均明显下降,细胞增殖活力显著升高,差异有统计学意义(均P<0.001)。结论:miR-138在年龄相关性白内障囊膜组织中表达上调,通过正调控下游靶基因p53和Bax,下调人晶状体上皮细胞抗氧化应激的能力,抑制人晶状体上皮细胞增殖和修复,从而参与年龄相关性白内障的发生过程。

3种小鼠晶状体组织石蜡切片固定液的比较

目的比较3种固定液对小鼠晶状体组织石蜡切片的影响,优化小鼠晶状体组织石蜡切片固定方法。方法选取3种常用固定液(改良Davison’s固定液、传统Davison’s固定液和10%中性甲醛固定液),固定小鼠晶状体组织,并制成石蜡切片,经HE染色后在显微镜下观察。结果传统Davison’s固定液固定的晶状体组织切片无碎裂,改良Davison’s固定液固定的晶状体组织中央区碎裂。改良Davison’s固定液和传统Davison’s固定液固定的小鼠眼球外形均无明显变形和收缩,未见明显的视网膜脱离,镜下视网膜组织结构完整清晰,各层细胞排列紧密,无明显裂隙,染色鲜艳。采用10%中性甲醛固定液固定的小鼠眼球壁组织发生严重皱缩,晶状体组织皱缩,空隙和空泡形成。结论传统Davison’s固定液固定的小鼠眼球晶状体组织石蜡切片质量效果优于改良Davison’s固定液和10%中性甲醛固定液。

Mfn2在TGF-β2诱导的晶状体上皮细胞上皮-间质转化中的作用

目的研究线粒体融合蛋白基因2(mitofusin 2,Mfn2)在转化生长因子β2(transforming growth factorβ2,TGF-β2)诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的表达及作用。方法实时荧光定量PCR检测不同浓度(10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1)TGF-β2处理HLECs 24 h后,各TGF-β2处理组与对照组(0 ng·mL-1 TGF-β2)Mfn2 mRNA表达量差异。选取最佳作用浓度后,免疫荧光细胞化学检测TGF-β2处理组与对照组的Mfn2蛋白表达变化,实时荧光定量PCR和免疫荧光细胞化学检测分别验证TGF-β2处理组与对照组中E-钙黏蛋白(E-Cadherin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA表达量和蛋白表达变化。Mfn2基因荧光表达载体(pEGFP-Mfn2)转染后实时荧光定量PCR和免疫荧光细胞化学检测分别验证转染组和对照组Mfn2、E-Cadherin和Vimentin mRNA表达量差异和蛋白表达变化。结果TGF-β2处理组与对照组相比,E-Cadherin mRNA表达量减少;Vimentin、Mfn2的mRNA表达量均增加,且差异均有统计学意义(均为P<0.001)。E-Cadherin蛋白表达降低,Vimentin、Mfn2的蛋白表达增加。成功转染Mfn2后转染组与对照组相比,E-Cadherin mRNA表达量下调,Vimentin mRNA表达量均增加,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。E-Cadherin蛋白表达降低,Vimentin蛋白表达增加。结论HLECs在发生EMT时Mfn2表达量上调,过表达Mfn2可使HLECs发生EMT。Mfn2参与了TGF-β2诱导的HLECs的EMT过程。

过表达ATG4A对晶状体上皮细胞上皮-间质转化的影响

目的探讨自噬相关基因4A(ATG4A)过表达对晶状体上皮细胞中上皮-间质转化水平的影响。方法用细胞转染的方法在晶状体上皮细胞中过表达ATG4A并设为过表达ATG4A组(OE-ATG4A组),转染进空载体的细胞设为阴性对照组(NC组),通过实时q PCR和Western blotting方法分别检测2组细胞上皮-间质转化水平,并测定2组活性氧(ROS)水平。结果与NC组比较,OE-ATG4A组晶状体上皮细胞上皮-间质转化水平明显升高(P<0.05),但ROS水平无统计学差异(P>0.05),说明ATG4A能够促进上皮-间质转化水平,但不影响ROS水平。结论ATG4A能够促进晶状体上皮细胞中上皮-间质转化。

基于体外分区囊袋模型的不同类型人工晶状体对晶状体上皮细胞迁移的抑制作用

目的构建体外分区囊袋模型,探讨不同类型360°连续直角边缘人工晶状体(IOL)对晶状体上皮细胞(LECs)迁移的抑制作用。方法使用Transwell小室、细胞爬片、人源Ⅳ型胶原、IOL建立后发性白内障(PCO)体外分区囊袋模型作为模型组,并设置一个空白处理的Transwell小室作为对照组。人LECs细胞系SRA01/04培养于各组Transwell小室中,应用倒置显微镜观察各组中PCO早期病理表现;采用苏木精-伊红染色观察各组细胞形态改变。根据体外分区囊袋模型植入的IOL类型分为平台板式袢HydroSmart组、C型袢HydroSmart组、C型补偿袢Hydrophobic组,并设置不植入IOL为空白对照组。应用Transwell法检测各组IOL前囊膜区迁移细胞数目并计算前囊膜细胞迁移抑制率;应用细胞排斥区分析法检测各组IOL后囊膜区细胞迁移数目并计算后囊膜细胞迁移抑制率。结果模型组细胞培养48 h后体外分区囊袋模型后囊膜区可见细胞形成类似早期Soemmering环和小型Elschnig珍珠样小体等PCO特征性病理表现;苏木精-伊红染色显示模型组迁移的细胞呈纤维状。对照组中均未见类似细胞分布及形态改变。平台板式袢HydroSmart组、C型袢HydroSmart组、C型补偿袢Hydrophobic组前囊膜区域单位面积迁移细胞计数分别为18.80±5.53、24.67±9.80和34.47±10.80,后囊膜袢光学部移行区迁移细胞计数分别为56.43±9.00、162.20±16.38和121.30±12.01,IOL前囊膜细胞迁移抑制率分别为(92.02±1.94)%、(89.76±3.10)%和(86.27±4.54)%;后囊膜细胞迁移抑制率分别为(91.60±3.65)%、(70.14±5.35)%和(78.43±3.48)%。平台板式袢HydroSmart组前囊膜区迁移细胞数目明显少于C型补偿袢Hydrophobic组,细胞迁移抑制率明显高于C型补偿袢Hydrophobic组,差异均有统计学意义(均P<0.05);平台板式袢HydroSmart组后囊膜袢光学部移行区迁移细胞数、细胞迁移抑制率明显高于C型袢HydroSmart组和C型补偿袢Hydrophobic组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论成功构建体外分区囊袋模型。与C型袢HydroSmart IOL、C型补偿袢Hydrophobic IOL相比,HydroSmart平台板式袢IOL能更有效抑制LECs的迁移。

SUMO修饰在眼科的研究现状及进展

小泛素相关修饰物(small ubiquitin related modifier,SUMO)修饰是一种蛋白翻译后修饰,又称为小泛素相关修饰或类泛素修饰,与目标蛋白共价结合调控细胞进程,如蛋白与蛋白之间的相互作用、蛋白与DNA之间的相互作用、转录因子的激活等。SUMO修饰能够升高或抑制靶蛋白转录活性,为研究真核细胞基因表达的调控提供了新线索。我们将近期SUMO修饰在眼科领域的研究进展做以综述。

可注射水凝胶治疗眼科疾病的研究进展

眼部结构的特殊性使眼科疾病的治疗面临很多阻碍。水凝胶作为一种具备多维应用潜能的高分子材料,有着可控的力学性能及生物性能,是组织工程、生物工程等领域的研究热点。水凝胶良好的透明性、安全性、兼容性也提示了水凝胶在眼科领域广阔的研究前景。目前已应用于眼科的水凝胶有人工泪液、药物载体、黏附剂等。本综述介绍了可注射水凝胶在制作、性能及应用方面的特点,概述了可注射水凝胶作为药物载体、组织黏附剂、空间填充剂以及细胞载体在眼科疾病中的应用进展及挑战,特别介绍了可注射水凝胶近年来在角膜外伤、青光眼、白内障、视网膜脱离及年龄相关性黄斑变性等疾病治疗方面的研究。

上皮间充质转化在后囊膜下混浊中的研究进展

白内障是我国首位致盲性眼病,也是世界上多数国家致盲的主要原因,目前手术是唯一有效的治疗方法。而后囊膜下混浊即后发性白内障(PCO)是白内障术后常见的并发症,也是导致术后视力下降的主要原因。研究表明,术后残留的晶状体上皮细胞(LECs)发生上皮间充质转化(EMT)在PCO的发生发展中起到了重要的作用。本文主要概述了近些年来EMT在PCO中的研究进展。

改良ABC设计的非球面IOL植入对白内障患者术后视觉质量的影响

目的:评估改良非球面平衡曲线(ABC)设计的非球面人工晶状体(IOL)植入术后的视觉质量,同时进行临床IOL选择的影响因素分析,指导患者的IOL选择方案。方法:前瞻性病例对照研究。选取拟行白内障超声乳化联合折叠式IOL植入术的单纯性白内障患者67例74眼,其中观察组植入改良设计IOL 23眼(HOYA Vivinex XY1组),对照组植入传统设计IOL 51眼(Tecnis ZCB00组27眼,IQ SN60WF组24眼),术后1wk,1mo测量裸眼视力及最佳矫正视力、不同瞳孔直径下(3、4、5、6mm)全眼球差及彗差、不同瞳孔直径(3、4、5mm)下的调制传递函数(MTF)曲线、客观散射指数(OSI)、眼内散射光值Log(s)及对比敏感度。对所得的数据进行统计学分析。结果:三组术后1wk,1mo裸眼视力及最佳矫正视力均较术前显著提高,组间均无差异(P>0.05)。术后全眼球差值比较,术后1wk,5、6mm瞳孔直径下三组存在差异(P=0.045、0.037),术后1mo 6mm瞳孔直径下三组存在差异(P=0.042)。全眼彗差值比较,术后1wk,1mo 5、6mm瞳孔直径下三组均存在差异(P<0.05)。术后1wk,1mo,随瞳孔直径增加,Vivinex XY1组的全眼球差值增高程度小于其他两组,HOYA Vivinex XY1组在各个空间频率下的MTF值高于对照组,组间无差异(P>0.05);客观散射指数、眼内散射光值Log(s)及对比敏感度三组组间均无差异(P>0.05)。结论:改良设计的Vivinex IOL能够降低全眼球差及彗差,提高客观视觉质量,为改良式非球面IOL的选择提供了新的方案。

大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型中大黄素对神经节细胞的影响

目的探讨大黄素对视网膜缺血再灌注损伤后视网膜神经节细胞(RGC)密度的影响。方法通过前房灌注法使眼内压升高,建立大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型。将36只SD大鼠随机分为正常对照组、损伤后未注射药物组(IR组)、注射对照液干预组(IR+DMSO组)和注射大黄素干预组(IR+Emodin组),其中IR组根据损伤后时间不同分为损伤1、2、3周组(IR1w组、IR2w组、IR3w组),每组6只。IR+DMSO组与IR+Emodin组在缺血再灌注损伤后第3、9、15天玻璃体腔分别注射DMSO和蛋白激酶2(CK2)抑制剂大黄素。3周后采用逆行荧光金染色和免疫组织化学染色方法标记RGC,计数各组RGC密度,行统计学分析。结果 IR2w、IR3w组与正常对照组比较,RGC密度明显减少(分别为P<0.01和P<0.001)。IR+DMSO组与IR3w组比较,RGC密度的差异无统计学意义(P>0.05)。IR+Emodin组与IR3w组比较,RGC存活密度明显增多(P<0.001)。结论缺血再灌注损伤后RGC密度随缺血再灌注时间延长而逐渐减少,CK2抑制剂大黄素在视网膜缺血再灌注损伤过程中对RGC有保护作用,提示CK2参与了RGC损伤的过程。

双手法微切口白内障手术评价及术后早期视觉质量观察

目的评价双手法微切口白内障摘除联合1．4mm微切口人工晶体植入手术技术的安全性、有效性及其术后早期视功能恢复情况。方法选择2004年8月至2006年12月行老年性白内障摘除手术的患者320只眼，随机分成两组，A组进行常规3．Omm切口同轴超声乳化白内障摘除手术，B组进行微切口白内障摘除手术（MICS）。术后一个月对两组术眼进行以下检查：裸眼远、近视力；最佳矫正远、近视力；自动验光仪验光观察角膜散光；全眼像差变化，并比较两组的差异。结果术后1个月两组裸眼远视力有统计学差异，术后1个月两组手术前后散光变化有统计学意义（P〈0．05），全眼总像差及高阶相差A组均高于B组，MICS组的观察结果优于常规同轴超声乳化组。结论微切口白内障手术作为一种新的超声乳化手术技巧会逐渐发展完善，在临床中得到进一步应用。

飞秒激光辅助白内障手术最新研究进展

白内障是眼科最常见的致盲眼病,手术是目前最有效的治疗方法。飞秒激光辅助白内障手术是近年来新兴的白内障手术方式,在这种术式中各种飞秒激光设备联合应用于白内障手术中晶状体前囊膜切开、晶状体裂核碎核、角膜切口制作三个方面。虽然对飞秒激光辅助白内障手术的安全性、准确性的研究层出不穷,但是由于飞秒激光辅助白内障手术自身的不断完善和临床研究方法的不断更新,已有的研究结果仍未得到一致的结论;加上高精尖技术设备应用于手术时的困难性和高昂的医疗费用对其推广的限制,飞秒激光辅助白内障手术目前仍存在很多待解决的问题。本文将从飞秒激光辅助白内障手术系统的最新研究进展、飞秒激光辅助白障手术方式的最新研究进展、飞秒激光辅助白内障手术的成本效益分析及飞秒激光辅助白内障手术的未来四个方面讨论飞秒激光辅助白内障手术的最新研究进展。

不同形态年龄相关性白内障对客观视觉质量的影响

目的探讨不同形态早期年龄相关性白内障对客观视觉质量的影响。方法临床病例对照研究。选取2013年3月到2013年8月就诊于中国医科大学眼科医院的最佳矫正视力（BCVA）LogMAR≤0．3的年龄相关性白内障患者113例（121只眼），分为3组，其中皮质性白内障组41例（44只眼）、核性白内障组36例（39只眼）、后囊膜下白内障组36例（38只眼）。使用综合验光仪测量患者的BCVA，OQAS视觉质量分析仪测量患者的散射光（OSI），调制传递函数（MTF cut off）和斯特列尔比（SR）。结果三组的BCVA（LogMAR）分别为：皮质性白内障组（0．23±0．10）logMAR，核性白内障组（0．23±0．08）logMAR，后囊膜下白内障组（0．25±0．10）logMAR，三组BCVA的差异无统计学意义（F=0．68，P=0．51）。三组的年龄、眼内散射光的自然对数LN（OSI）、MTF（cut off），斯特列尔比（SR）：皮质性白内障组分别为64．57±6．25、1．35±0．63、11．85±4．24、0．09±0．02，核性白内障组：分别为69．90±5．01、1．01±0．43、14．82±5．50、0．10±0．03，后囊膜下白内障组分别为：61．03±9．52、1．85±0．58、8．71±6．36、0．08±0．03，ANOVA检验各种形态白内障组在年龄、LN（OSI）、MTF（cut off），SR之间的差异均有统计学意义（F=15．17、22．49、12．38、11．84，P〈0．05）；经Bonferroni检验，年龄为皮质性自内障组和后囊膜下白内障小于核性白内障组；OSI值为后囊膜下白内障、皮质性白内障及核性向内障依次减小；MTF cut off为后囊膜下白内障、皮质性向内障及核性白内障为依次增大；核性白内障的SR值比皮质性白内障、后囊膜下白内障大；皮质性白内障、核性白内障及后囊下白内障的BCVA与OSI均呈正相关（r=0.41，P〈0．01；r=0．33，P=0．04；r=0．32，P=0．05）。皮质性、核性及后囊下白内障的BCVA与MTF cut off均无统计学意义（r=-0．26，P=0．08；r=-0．09，P=0．58；r=-0．18，P=0．29）。皮质性、核性及后囊下自内障的OSI与MTF cut off相关性均差异有统计学意义（r=-0．88，P〈0．01；r=-0．70，P〈0．01；r=-0．76，P〈0．01）。结论散射光、MTF（cut off）、斯特列尔比町以客观地反映白内障形态对患者视觉质量的影响，后囊膜下白内障对视觉质量影响最大.

C-quant及OQAS对早期年龄相关性白内障散射光测量结果重复性和相关性

目的比较C-quant及OQAS测量早期白内障眼散射光的重复性和相关性。方法临床病例对照研究。选取2013年3-8月就诊于中国医科大学附属第四医院的早期年龄相关性白内障58例（58只眼），分别使用C-quant及OQAS测量散射光。根据混浊的形态将白内障眼分为三组，用组内相关系数评估两种仪器测量散射光的重复性，ANOVA比较不同白内障组别的散射光，两种仪器散射光测量结果的相关性比较采用Spearson相关分析。以P≤0．05作为差异有统计学意义。结果C-quant及OQAS两种方法测量早期年龄相关性白内障眼的散射光时均显示良好的可重复性（ICC分别为0．91和0．96）。两种方法测量3组早期白内障眼的散射光结果之间差异均有统计学意义（F=5．12．F=12．10：P〈0．05），使用Bonferroni法两两比较均得出后囊下组早期白内障眼散射光最大，核性白内障组散射光与皮质性白内障组散射光之间差异无统计学意义（P〉0．05）。两种方法对白内障眼测得的散射光之间的Spearson相关分析差异无统计学意义（r=0．24，P=0．07），对不同形态的早期年龄相关性白内障分别进行spearson相关分析：在核性白内障组，两种方法检查结果之间差异有统计学意义r=0．49，P：0．03）；而在皮质性白内障组及后囊下白内障组两种方法检查结果差异无统计学意义（r=-0．12;r=-0．05．P〉0．05）。结论C-quant及OQAS两种方法对早期白内障眼的散射光测量均具有良好的可重复性。在三组白内障散射光测量中，两种方法均得出后囊下白内障的散射光最大。两种方法对早期白内障眼散射光的测量结果仅在核性白内障组呈正相关，临床上使用两种方法测量散射光需要掌握两种方法测量原理的不同。

OQAS测量散射光和客观视觉质量的可重复性研究

目的 评价OQAS光学质量分析系统对健康人眼、屈光手术术后眼及早期年龄相关性白内障测量客观散射指数（OSI）和MTF截止频率（MTF cut off）、斯特列尔比（SR）等客观视觉质量指标的可重复性.方法 临床病例对照研究.选取2013年3～8月就诊于中国医科大学附属第四医院的50只健康人眼、50只屈光手术（LASIK）术后眼、50只早期年龄相关性白内障眼,使用OQAS测量受试眼的客观散射指数（OSI）、MTF截止频率（MTF cut off）、斯特列尔比（SR）,每项指标测量3次,使用组内相关系数（ICC）及变异系数（CV）为统计学指标评估其可重复性.结果 健康人眼组散射光、MTF cut off及SR测量的ICC及CV值分别为0.921、1.21;0.90、0.2;0.87、0.57;屈光手术术后组散射光、MTF cut off及SR测量的ICC及CV值分别为0.97、1.27;0.90、0.78;0.89、1.91;早期白内障组散射光、MTF cut off及SR测量的ICC及CV值分别为0.96、1.54;0.89、0.71;0.86、2.28.屈光手术术后眼及早期白内障眼的散射光较健康人眼增加,MTF cut off及SR较健康人眼降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 OQAS可以反映客观散射光及视觉质量,在健康人眼、屈光手术术后眼和早期年龄相关性白内障眼中使用重复性均较好。