黄精枸杞胶囊延缓秀丽隐杆线虫衰老作用研究

目的以秀丽隐杆线虫为模式生物,探讨黄精枸杞胶囊的抗衰老活性。方法将野生型N2秀丽隐杆线虫同步化处理后分为对照组和药物干预组,观察黄精枸杞胶囊对秀丽隐杆线虫寿命、应激抵御能力、生殖能力、咽部泵送能力和运动能力的影响,同时对抗氧化相关指标超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)进行检测,考察对突变体线虫TJ356 DAF-16基因核转位和对线虫AM141多聚谷氨酰胺(polyQ)聚集的影响。结果黄精枸杞胶囊能显著延长野生型秀丽隐杆线虫的寿命,增强其抗氧化应激和热应激、咽部泵送和运动能力,提高秀丽隐杆线虫体内SOD活性并降低其体内MDA水平,但对其生殖能力无明显影响;可促进TJ356线虫体内DAF-16的核转位,抑制polyQ在AM141线虫体壁细胞中聚集。结论黄精枸杞胶囊能延长线虫的健康寿命,其作用机制可能与通过调控DAF-16/FOXO通路,增强应激抵御能力有关。

感染加重慢性呼吸道疾病的小鼠模型研究进展

哮喘、慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)和肺部囊性纤维化(cystic fibrosis,CF)是3种常见的慢性呼吸道疾病,有证据表明,呼吸道疾病的恶化与呼吸道病毒和细菌的感染相关。综合目前的研究发现,生命早期的呼吸道感染会改变机体的免疫反应和肺部结构,从而加重哮喘,成年期感染甚至会使哮喘患者抵抗类固醇的治疗。COPD患者呼吸道感染会加重肺部炎症和气道重塑水平。呼吸道铜绿假单胞菌感染会诱导和加重肺部CF。然而,目前尚缺乏有效的治疗措施能够阻止或逆转感染诱导的呼吸道疾病恶化,所以,需要建立能够模拟人类疾病特征的小鼠模型,帮助研究感染在疾病恶化中的作用。该文对近年来关于感染加重呼吸道疾病的小鼠模型研究进展进行综述,重点概述通过小鼠模型发现的3种呼吸道疾病的病理改变,并探讨基于这些小鼠模型可以发展和验证的治疗方法,为后续的呼吸道疾病研究和临床治疗提供参考。

樟树精油及其单体抗白色念珠菌活性及安全性研究

为探究樟树精油及其单体抗白色念珠菌活性及安全性,本研究通过纸片法和微量肉汤稀释法测定了樟树精油、葡萄柚精油、柠檬精油、薰衣草精油抗白色念珠菌活性,同时对樟树精油进行GC-MS挥发性成分鉴定,进一步分析樟树精油主要化学成分对白色念珠菌的抑菌活性,最后观察樟树精油及其单体对豚鼠皮肤刺激和小鼠血管收缩性影响。结果表明,樟树精油抗白色念珠菌活性强于葡萄柚、柠檬、薰衣草精油;樟树精油抗白色念珠菌的活性来源于α-松油醇、异松油烯、α-松油烯、松油烯-4-醇、桧烯、1,8-桉叶油素;豚鼠皮肤在连续5 d涂抹4%樟树精油后出现轻微的红斑,而4%松油烯-4-醇在涂抹2 d后就会出现轻微的红斑;另外,4%松油烯-4-醇会明显增加小鼠的血管通透性。研究结果为樟树精油的开发利用及治疗白色念珠菌相关疾病提供理论依据。

7种植物精油对糠秕马拉色菌抑制效果比较及樟树精油抑菌作用研究

通过比较7种精油的抗糠秕马拉色菌活性,筛选作用效果最佳的植物精油并进一步分析其对糠秕马拉色菌的抑制作用。采用K-B纸片扩散法和微量肉汤稀释法筛选抑菌作用效果最佳的植物精油,同时利用气相色谱-质谱联用仪(GCMS)对效果最佳的植物精油的挥发性成分进行鉴定,进一步对其主要化学成分与抗糠秕马拉色菌活性进行相关性分析,然后利用扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察糠秕马拉色菌形态变化,最后采用流式细胞术检测其对糠秕马拉色菌细胞凋亡的影响。结果表明樟树精油抗糠秕马拉色菌的活性强于其他6种精油;GC-MS共鉴定出14个化学成分且抗糠秕马拉色菌活性来源于3-蒈烯、松油烯-4-醇、α-松油烯、异松油烯;SEM显示樟树精油使糠秕马拉色菌细胞轻度损伤,局部细胞膜凹陷;TEM显示樟树精油使糠秕马拉色菌质壁分离,胞内基质变淡;樟树精油会使糠秕马拉色菌凋亡明显增加。综上,樟树精油对糠秕马拉色菌作用效果显著,其可通过破坏菌体细胞壁与细胞膜,实现其抑菌效果。

小鼠异种皮肤移植模型的建立及对免疫抑制药物的药效评价

目的建立小鼠异种皮肤移植模型,以期为免疫抑制药物提供研究模型。方法将C57BL/6小鼠耳部皮肤移植到BALB/c小鼠背部,同时设立同种移植对照(BALB/c小鼠耳部皮肤移植到BALB/c小鼠背部)。选用环孢素A作为抑制异种移植引起的免疫排斥反应的免疫抑制剂,利用该模型评价环孢素A免疫抑制效果。在移植和给药后,对移植排斥评分和移植皮肤的存活率进行统计。移植手术4 d和9 d后,ELISA法对血清中IL-4、IL-12和IFN-γ的水平进行测定。12 d后,计算胸腺和脾脏系数,对脾脏T细胞中CD4^+和CD8^+的比例进行分析,同时将移植皮肤进行病理观察。结果皮肤移植后,排斥评分逐渐增加,移植皮肤的存活率逐渐下降,有明显的水肿、炎症细胞浸润等炎症反应。环孢素A可明显降低移植排斥评分,提高移植皮肤的存活率,使小鼠胸腺和脾脏系数明显降低,高剂量可明显降低脾脏T细胞中CD4^+和CD8^+细胞的比例。同时,环孢素A处理可明显降低移植皮肤的炎症反应。结论小鼠经异种皮肤移植后会出现急性移植排斥反应,环孢素A可有效抑制移植排斥反应,并呈现出明显的剂量依赖性。

润肠通便药物筛选小鼠模型的选择及药效评价研究

目的建立机制不同的润肠通便药物筛选小鼠模型,探讨作用于不同靶点的药物对动物模型的选择性,为新药开发提供基础。方法以复方地芬诺酯和多巴胺分别诱导机制不同的小鼠便秘模型,选择纳洛酮和伊托必利作为工具药,以小鼠小肠推进率为指标,考察机制不同的动物模型是否只适用于对应靶点润肠通便药物的筛选。在此基础上,考察伊托必利和麻仁润肠丸两个工具药对正常小鼠小肠推进率的影响,以探讨正常小鼠能否用于润肠通便药物的筛选。结果复方地芬诺酯可显著抑制小鼠小肠推进,而纳洛酮可显著对抗复方地芬诺酯对小肠推进的抑制作用,但伊托必利无类似的明显拮抗作用。对于多巴胺诱导的便秘模型,伊托必利能有效促进多巴胺诱导的便秘模型小鼠的小肠推进。伊托必利和麻仁润肠丸均能明显促进正常小鼠的小肠推进率。结论作用机制不同的润肠通便药物筛选对动物模型具有一定的选择性,进行润肠通便药物作用评估筛选时,应采用相对应作用靶点药物复制的小鼠模型。然而针对靶点未知或多靶点作用的药物,可利用正常小鼠进行润肠通便药效筛选。

类器官模型在前列腺癌研究与治疗中的应用

前列腺癌(prostate cancer,PCa)是男性常见恶性肿瘤之一,由于其高度异质性及耐药性,一般治疗无法使患者获得最大收益。啮齿类动物与人的前列腺发育有较大区别,现有2维模型无法重现PCa患者特性,而类器官体外模型的出现,为PCa研究提供新思路,架起2维培养与体内模型之间的桥梁。该文介绍现有的前列腺模型,包括2维细胞系模型,患者来源的异种移植模型(来源系患者、循环肿瘤细胞、诱导多能干细胞的类器官模型)以及患者来源的异种移植的类器官模型,概述其在应用中的优势以及不足之处。

基于Biacore T200分析系统研究阿达木单抗生物学活性

目的利用Biacore T200生物分子相互作用分析系统研究阿达木单抗的生物学活性。方法将人源阿达木单抗偶联于CM5传感芯片,利用Biacore T200系统观察重组人肿瘤坏死因子α(TNF-α)和食蟹猴TNF-α与阿达木单抗结合的动力学常数,并采用不同种属的重组TNF-α验证种属特异性,进一步研究阿达木单抗抑制重组TNF-α的细胞毒作用,以确认阿达木单抗的生物活性。结果阿达木单抗与重组人TNF-α的结合常数(K_a)为(2.114±0.007)×105,解离常数(K_d)为(5.315±0.220)×10^(-5),亲和力常数(K_D)为(2.515±0.107)×10^(-10);与重组食蟹猴TNF-α的K_a为(2.574±0.068)×105,K_d为(1.554±0.124)×10^(-5),K_D为(5.320±1.271)×10^(-10)。阿达木单抗与50 nmol/L重组人TNF-α、重组食蟹猴TNF-α、重组小鼠TNF-α和重组大鼠TNF-α结合的响应值分别为84.3、66.4、1.3和-0.8 RU,呈现明显的种属差异。阿达木单抗可抑制重组人TNF-α和重组食蟹猴TNF-α对L929细胞的毒性作用,其半数有效浓度分别为194.0和685.5 pmol/L,但对重组小鼠或重组大鼠TNF-α导致的细胞毒作用无影响,细胞水平检测结果与Biacore T200系统检测结果一致。结论用Biacore T200生物分子相互作用分析系统研究抗原抗体结合简便快速准确,该方法适合用于重组人TNF-α单抗生物学活性分析与药效学评价。

不同级别蛹虫草子实体菌粉对免疫低下小鼠非特异性免疫功能的调节作用比较

目的比较超Ⅴ星虫草和Ⅰ星虫草子实体菌粉对地塞米松诱导的免疫低下小鼠非特异性免疫功能的调节作用。方法 50只健康♂BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、超Ⅴ星虫草(1 g·kg^(-1))组、Ⅰ星虫草(1 g·kg^(-1))组和虫草胶囊(阳性药,1 g·kg^(-1))组。除对照组外,其余各组于实验d 22、23腹腔注射地塞米松20 mg·kg^(-1)。末次给药后24 h解剖,测血常规,计算脏器指数,分析NK细胞和腹腔巨噬细胞功能及细胞因子分泌水平。结果地塞米松会导致小鼠体质量明显下降,脏器指数降低以及免疫细胞功能降低等免疫低下状态。超Ⅴ星虫草和Ⅰ星虫草均可明显拮抗地塞米松导致的免疫功能低下,在提高脾脏指数,增强NK细胞杀伤能力,提高巨噬细胞分泌TNF-α水平方面,超Ⅴ星虫草作用明显优于Ⅰ星虫草。结论超Ⅴ星虫草对地塞米松诱导的免疫功能低下的各个环节的改善作用均明显优于Ⅰ星虫草。

新型AMPA受体正向变构调节剂抗疲劳活性筛选

目的寻找以AMPA(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid)受体为靶点的新型抗疲劳化合物。方法以胡椒酸、3,4,5-三甲氧基苯甲酸、3,4-二甲氧基苯甲酸,这3个化合物分别作为母体结构,对苯甲酰胺的酰胺氮原子引入基团进行结构修饰,设计合成43个化合物,结构经1H-NMR确认。采用MTT法评价新化合物的细胞毒性,通过戊巴比妥钠镇静催眠实验进行中枢兴奋性筛选,最后采用小鼠负重游泳实验评价目标新化合物抗疲劳活性。结果化合物2j细胞毒性低,具有一定的中枢兴奋性与抗疲劳活性。结论化合物2j具有较好的抗疲劳作用,具有进一步开发潜力。

颈舒颗粒中肉桂酸在大鼠体内的药代动力学研究

目的建立超高效液相色谱/串联质谱联用技术(UPLC-MS/MS法)测定大鼠血浆中肉桂酸的浓度,研究颈舒颗粒给药后肉桂酸的药代动力学。方法采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)柱(1.7μm,2.1 mm×100 mm),甲醇-0.1%甲酸水梯度洗脱,流速为0.2 ml/min,进样量为5μl,柱温为35℃;Xevo TQ-S质谱在ESI+模式下采集数据,扫描方式为选择反应监测。结果肉桂酸在10～1 000 ng/ml浓度范围内呈现良好线性,批内、批间精密度均小于10%,稳定性良好。结论该方法准确、灵敏、专属,复方中药物的相互作用能改变肉桂酸在大鼠体内的吸收和代谢能力。

3,4-亚甲二氧苯基甲酰吗啉与AMPA受体的结合作用研究

目的研究3,4-亚甲二氧苯基甲酰吗啉(化合物1)与AMPA受体的结合作用。方法采用放射性配体受体结合试验测定化合物1与AMPA受体结合的IC50值;采用分子对接技术研究化合物1与AMPA受体的结合能力和结合模式。结果化合物1与AMPA受体结合的IC50值为1.74×10^(-9)mol·L^(-1),具有较强的结合能力;化合物1与AMPA受体的结合能为-5.46 kcal·mol^(-1),同样表明结合能力较强。结合的驱动力主要是氢键、疏水作用和静电作用。化合物1结构中O原子可与AMPA受体的Ser108、Ser242氨基酸残基形成氢键,这可能是该化合物与AMPA受体结合的重要位点。结论化合物1可与AMPA结合,且结合能力较强。

平消胶囊治疗乳腺疾病的研究进展

平消胶囊是一种纯中药制剂,具有扶正祛邪、活血化瘀、清热解毒和止痛散结等功效。平消胶囊对浆细胞性乳腺炎、乳腺增生和乳腺癌等乳腺疾病具有较好的治疗效果。本文综述平消胶囊在多种乳腺疾病临床治疗中的应用评价及相关研究进展。

2014—2019年国产儿童用药批准情况分析

目的:分析已上市国产儿童用药批准情况,为其新药研制及临床使用提供参考。方法:对国家人口健康科学数据中心提供的儿童用药数据进行整理挖掘,对其剂型、治疗领域分布进行分析。结果:中成药在我国儿童专用药方面具有一定的发展潜力。片剂和颗粒剂是儿童用药接受度高、生产工艺相对成熟的剂型;不经胃肠道给药的剂型在儿童专用剂型上具有一定的发展潜力。在儿童临床用药中,化学药研制较多;中成药研制在儿童常见病方面比较集中,研制儿童用中成药在消化系统和解热镇痛用药方面更有潜力。结论:我国应在鼓励儿童用药研制的前提下,借鉴国外先进经验,尽早完善儿童用药体系。

基于血清药物化学研究香青兰抗心肌缺血活性部位的活性成分

建立了高效液相色谱法对香青兰抗心肌缺血活性部位进行化学成分指认,共指认了29个化合物。对该活性部位进行初步血清药物化学研究,在给药组血清中共发现20个成分峰,其中12个为代谢产物,8个为原型成分。主要入血原型成分为(+)methyl rabdosiin(1)、(+)rabdosiin(2)、迷迭香酸(5)、田蓟苷(13)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(18)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(19)、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(20)和金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(21)。进一步对入血原型成分进行药效研究,发现黄酮类化合物13、18和19体外给予30μg/ml,对二磷酸腺苷(ADP)诱导的大鼠血小板聚集有抑制作用,聚集抑制率分别为8.11%、9.32%和3.27%;酚酸类化合物1、2和5在浓度为12.5μg/ml时,对H_2O_2诱导原代心肌细胞氧化损伤有保护作用,细胞存活率分别为82.79%、84.60%和88.48%。研究表明黄酮类和酚酸类化合物是香青兰抗心肌缺血活性部位中的活性成分。

1α,25-(OH)_2D_3生物样品含量测定方法的研究进展

1α,25-二羟基维生素D3(1α,25-(OH)_2D_3)是维生素D体内代谢的重要活性物质,被证实与多种疾病的生理病理进程相关。操作简单且高灵敏度的1α,25-(OH)_2 D_3生物样品含量测定方法的开发有很高的科研和临床应用价值。本综述主要讨论免疫分析法和色谱分析法在1α,25-(OH)_2D_3生物样品测定中的应用,重点阐述液相色谱-串联质谱联用技术在该领域的应用。

胰腺类器官研究进展

类器官作为近年来新兴的体外基础研究模型,具有类似真实器官的复杂结构及细胞类型,能模拟原始组织或器官的生理功能。胰腺作为人体内的特殊脏器,包含了内、外分泌腺。虽目前来源于成体组织及多能干细胞的胰腺导管和胰岛样类器官已在体外实现长期扩增,但胰腺类器官技术的发展依然面临许多挑战,建立更贴近人体真实情况的复合型胰腺类器官依然是亟待解决的研究难点。现就胰腺的发育过程、现有胰腺类器官模型的构建方法及其相关应用的研究进展作一综述。

肿瘤类器官与免疫细胞共培养模型研究进展

随着免疫学以及免疫疗法的高速发展,深入地了解免疫细胞与肿瘤细胞之间的相互作用及机制,以改善免疫疗法的临床效果、开发新的治疗方法越来越具备可能性及重要性。传统二维细胞培养存在各种方面的限制,而新型的类器官初步具备了起源组织复杂的细胞微环境,且在基因组及分子标志等方面,与体内来源组织或器官高度相似。类器官与免疫细胞共培养的环境使类器官的体外培养增加了免疫细胞浸润的环境刺激,更贴近体内生长环境,为自身免疫疾病、肿瘤及其相关免疫疗法等研究提供理想的实验平台。现就肿瘤类器官与免疫细胞共培养的研究进展以及两者相互作用的可能机制作简要综述。

苯丙素类化合物毛蕊花糖苷对人肠癌的抑瘤作用及其机制研究

目的探讨苯丙素类化合物毛蕊花糖苷(A01)对于肠癌的抗肿瘤作用。方法通过体外增殖抑制试验、划痕试验、克隆形成试验、蛋白质印迹法、人源类器官模型(patient-derived organoids,PDO)和体内抗肿瘤试验,评价A01对肠癌的抑制作用及其初步作用机制。结果细胞增殖抑制试验显示,A01作用72 h对HCT116细胞抑制作用的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)为743.41μmol/L。迁移抑制试验显示,作用10 h,100μmol/L A01和500μmol/L A01的抑制率(inhibition rate,IR)分别为25.77%和55.67%;作用24 h,100μmol/L A01和500μmol/L A01的IR分别为30.78%和62.97%。细胞克隆形成试验显示,100μmol/L A01和300μmol/L A01的IR分别为55.7%和100%,表明A01对HCT116细胞的克隆形成具有较强的抑制能力。PDO显示,A01作用24 h对人肠癌肿瘤类器官的IC50为900.09μmol/L。体内抗肿瘤显示,对A01人肠癌HCT116裸鼠移植瘤的抑瘤率为44.21%,抑制肿瘤生长。蛋白质印迹法结果显示,700μmol/L A01可以促进Bcl-2相关X蛋白表达,提高LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ的比值。结论苯丙素类化合物A01具有抗肠癌增殖作用,其机制可能通过诱导细胞凋亡和自噬途径实现。

肿瘤类器官的研究进展

类器官是通过三维结构培养技术,将组织来源的成体干细胞培养成可自行组织的结构,来源于多能干细胞或离体器官的祖细胞。至今从小鼠和人类干细胞中已成功培养出多种类器官。在三维结构培养体系下,肿瘤类器官可长期扩增、冷冻保存和基因改造,并在扩增和冻存的过程中保持遗传和表型稳定,其优势被广泛地用于各种肿瘤的研究中。该文针对肿瘤类器官的发展及研究进展作综述。