HLA分子重构法检测多肽与HLA-B*1301的结合力

目的:建立弱酸处理后细胞表面HLA分子重构法检测多肽与HLA-B*1301的结合力,并评估其实用性。方法:采用不同pH的柠檬酸缓冲液处理高表达HLA-B*1301的C1R细胞不同时间,中和pH后用含β2m蛋白、布雷非德菌素A的培养液重悬细胞,加入多肽(多肽组)或不加多肽(空白对照)37℃孵育,加入抗HLA抗体后采用流式细胞术检测,以多肽组与空白对照组荧光强度的比值作为衡量HLA分子重构水平强弱的指标,进而代表多肽与HLA-B*1301分子的结合力。结果:pH3.0的缓冲液处理1 min的条件下,HLA-多肽复合物变性解离,细胞表面只保留HLA重链分子,添加具有结合力的多肽可显著提升HLA分子重构水平,可以此评价多肽与HLA-B*1301的结合力。结论:HLA分子重构法检测多肽与HLA-B*1301的结合力操作简便,结果可靠,也可为研究其他低频HLA分子抗原递呈模式提供参考。

甲苯二异氰酸酯职业暴露对血清中基质金属蛋白酶-9和金属蛋白酶组织抑制剂-1水平的影响及其与肺功能的相关性分析

目的探讨甲苯二异氰酸酯（TDI）职业暴露对血清中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-11水平的影响及其与肺功能的相关性。方法采用横断面研究设计，于2014年10月，以整群抽样方法选择我国西部地区某TDI生产厂的作业T人为暴露组，共61名，纳人工种包括装桶T、巡检T、制造T。根据各工种外暴露浓度的不同，将装桶工归为高暴露组，巡检工和操作工归为低暴露组。另根据年龄、性别匹配原则，选择该工厂内与暴露组工人工作强度相似但不接触TDI及其他致敏物质的企业管理人员作为对照组，共计58名。通过问卷调查获取调查对象性别、年龄、工龄、吸烟及饮酒情况、个人及家族过敏史、职业史及近期患病情况。用8h加权平均浓度（8h-TwA）表示TDI空气中外暴露水平。采用ELISA检测血清中MMP-9和TIMP—1的水平，采用便携式肺功能仪测定用力肺活量（FVC）、第一秒用力呼气容积（FEV1．0）。采用Spearman相关分析法分析MMP-9、TIMP-1、MMP-9／TIMP-1与FVC、FEV1．0及工龄的关系。结果暴露组调查对象作业场所空气中TDI8h．TWA的平均值为0．39mg／m3，其中，装桶工为0．76mg／m3，操作工和巡检工均为0．25mg／m3。对照组、低暴露组及高暴露组血清中MMP-9的水平分别为（807．21±347．70）、（586．91±317．50）、（388．94±312．01）ng／ml（Z2=16．69，P〈0．001）；MMP-9／TIMP-1的P50（P25-P75）分别为4．67（2．87～6．68）、2．3（1．44～3．481、1．11f0．59—1．48）（22=39．42，P〈0．001）；TIMP-1分别为（173．44±72．67）、（236．12±51．98）、（302．81±44．39）ng／ml（F=20．09，P〈0．001）。暴露组中肺功能FVC、FEV1．0和FEV1．0／FVC的P50（P25～P75）分别为92．8％（86．0％～101．8％）、85．5％（76．7％～92．8％）和112．5（108．2～118．5），均低于对照组[124．3％（107．9％～144．2％）、142．7％（119．1％～155．7％）和129．2（123．5—134．0）[（Z值分别为7．70、8．97、8．62，P值均〈0．001）。Spearman相关分析结果显示，MMP-9水平与肺功能指标FEV1．0、FEV1．0／FVC均存在正相关关系（r值分别为0．27、0．25，P值均〈0．05）；TIMP-1水平与FVC、FEV1．0和FEV1．0／FVC均存在相关关系（r值分别为-0．33，-0．39，-0．39，P值均〈0．05）；MMP-9水平与暴露时间呈负相关关系（r=-0．26，P=0．040）；MMP-9／TIMP-1比值分别与FVC、FEV1．0、FEV1．0／FVC呈正相关（r值分别为0．34，0．44，0．40，P值均〈0．05）。结论TDI职业暴露可以引起MMP-9和MMP-9／TIMP-1降低，且与肺功能存在相关关系，在一定程度上反映了TDI职业暴露所导致的呼吸系统炎性损伤。

铜蓝蛋白在石英诱导的JNK/ERK/AP-1信号通路改变中的作用

目的探讨铜蓝蛋白(Cp)在石英诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中JNK/ERK/AP-1信号通路改变中的作用。方法分别在100μg/ml石英作用前1 h、同时和作用后1h加入30μg/ml Cp,同时设立单独用石英和单独用Cp处理以及不做任何处理的细胞组,刺激细胞24 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法观察Cp对石英诱导的HELF细胞增殖的影响。用100μg/ml石英分别作用于HELF细胞、转染JNK显性失活突变体质粒的HELF细胞(DN-JNK)和转染ERK显性失活突变体质粒的HELF细胞(DN-ERK)24 h;用100μg/ml石英作用1 h后,加入30μg/ml Cp作用24 h;同时设立不做任何处理的对照组。用MTT法检测分别抑制JNK和ERK后对细胞增殖的影响;用蛋白免疫印迹(Western blotting)实验检测JNK、ERK、c-Jun、c-Fos及其磷酸化水平的改变。结果石英作用1 h后加入Cp,对石英诱导的细胞增殖有促进作用,后续的实验选择这种作用模式。Cp可以明显增加JNK、ERK蛋白及磷酸化ERK(pERK)、磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)和磷酸化c-Fos(p-c-Fos)蛋白水平。抑制JNK蛋白活性后,Cp诱导的p-JNK、p-c-Jun和p-c-Fos蛋白水平的增加被抑制,Cp、石英以及Cp和石英共同诱导的细胞增殖加快被抑制;抑制ERK蛋白后,Cp诱导的p-ERK和p-c-Fos的增加被抑制,Cp、石英以及Cp和石英共同诱导的细胞增殖加快被抑制。结论 Cp通过JNK/c-Jun和c-Fos及ERK/c-Fos通路进一步增强石英诱导的促细胞增殖作用。

p53在苯并[a]芘诱导所致p21和细胞周期蛋白改变中的作用

目的探讨在苯并[a]芘(B[a]P)诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中p53蛋白对p21、cyclin D1和CDK4蛋白间相互作用的影响。方法向转染p53小干扰RNA(p53siRNA)质粒的HELF细胞即p53-H细胞组、载体CMV的HELF细胞即HELF/CMV细胞组中分别加入2μmol/L B[a]P作用24 h,向p53化学抑制剂Pifithrin-α(PFT-α)组即HELF/CMV+PFT-α细胞组中同时加入2μmol/L B[a]P和20μmol/L PFT-α作用24 h,各组同时设立不做任何处理的对照组。用免疫印迹(Western blot)法检测细胞中p53、p53-ser20以及p21、cyclin D1和CDK4蛋白水平的变化,同时利用免疫沉淀方法分析p53蛋白对p21、cyclin D1以及CDK4蛋白间相互作用的影响。结果利用PFT-α或p53 siRNA技术抑制p53蛋白后,B[a]P诱导的p53蛋白20位丝氨酸磷酸化水平和p21蛋白水平的增高受抑制,B[a]P诱导的cyclin D1水平的增加不受影响,CDK4的水平不受B[a]P的影响;免疫沉淀实验结果表明,B[a]P引起的p21和CDK4结合的增加受到抑制,B[a]P引起的p21与cyclin D1结合的增加不受影响,cyclin D1和CDK4的结合不受B[a]P的影响。结论B[a]P通过p53-ser20影响人胚肺成纤维细胞p21和CDK4的结合。

慢性氯乙酸接触对作业工人肺功能及淋巴细胞亚群的影响

目的探讨慢性氯乙酸接触对作业工人肺功能及血液学指标的影响，为氯乙酸作业工人的健康监护提供参考指标。方法采用横断面分子流行病学设计，选择121名氯乙酸作业工人作为接触组，69名非职业性氯乙酸接触工人为对照组。用便携式肺功能仪对工人的肺功能进行检测，流式细胞术检测研究对象外周血淋巴细胞亚群水平，利用线性回归模型校正研究对象的年龄、饮酒状况、及BMI指数后，比较暴露组与对照组间肺功能指标及淋巴细胞亚群的差异。结果男性和女性作业工人氯乙酸接触组FEV。dFVC与对照组相比显著降低，差异有统计学意义（P值均〈0．01）。与对照组比较，男性作业工人氯乙酸接触组的CD8＋T细胞和单核细胞明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。按吸烟分层后，与对照组比较，只有吸烟者氯乙酸接触组的CD8＋T细胞和单核细胞水平明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01，P〈0．05），而在非吸烟者中，氯乙酸接触组和对照组各项血液学指标均无明显改变，差异无统计学意义（P〉0．05）。未发现氯乙酸接触对女性作业工人血细胞计数和淋巴细胞亚群的影响。结论慢『生氯乙酸接触导致作业工人肺功能下降及免疫功能抑制，男性及吸烟者是免疫抑制效应的敏感人群。

转基因动物在接触性超敏反应研究中的应用

接触性皮炎（contact dermatitis，CD）是最常见的职业性皮肤疾病，国外统计职业性接触性皮炎大约占了所有职业性皮肤病的90％-95％，接触性皮炎分为刺激性接触性皮炎（irritant contact dermatitis，ICD）和过敏性接触性皮炎（allergy contact dermatitis，ACD）。