基于Copula函数的中药有效成分群谱效分析

目的通过构建适合的二元Copula函数模型,对中药有效成分群指纹图谱与药物活性进行分析,探索简单易行的中药质量控制方法。方法本文首先分别模拟分析二元Copula函数和二元正态分布对中药有效成分群谱效关系的拟合情况,然后选取合适的Copula函数模型分析18批次怀牛膝药材指纹图谱与成骨细胞增殖活性的相关关系,最后利用选择的Copula函数模型对中药怀牛膝进行质量判别。结果五种常见的Copula函数中,二元单参数Gumbel Copula函数对所研究的中药怀牛膝有效成分群谱效关系有较好的拟合效果,其相关系数τ=0.5547,ρs=0.7422,λup=0.6384,λlo=0。结果表明此函数上尾部呈现出较强的相关性而下尾部渐近独立,即质量好的中药其细胞增值活性也较强,质量差的对细胞药效影响则不显著。结论 Copula函数能够用于分析中药有效成分群谱效关系,尤其对尾部相关性的描述为质量辨别提供了新方法,为中药谱效关系研究提出新思路。

杜仲指纹图谱中化学成分的归属研究

目的:对杜仲指纹图谱进行成分归属研究,为科学评价和有效控制其质量提供依据。方法:在相同的色谱条件下,以保留时间相近为原则,用对照品比对确认杜仲指纹图谱中的化学成分;采用HPLC-TOF/MS技术,通过负离子模式检测获得化合物精确分子量,结合化学成分数据库信息推测指纹图谱中的化学成分。结果:通过对照品比对确认了10个成分,利用HPLC-TOF/MS推测了14个成分。结论:该研究比较全面地阐明了杜仲的化学组成,使指纹图谱的特征性更强,为杜仲的鉴别与质量评定奠定了基础。

多中心临床试验疗效一致性评价方法

随着临床试验全球化的增长趋势,多中心临床试验已经受到了广泛的关注。其中各个中心治疗效果的一致性评价是多中心临床试验中的一个关键问题。本文系统综述了关于多中心临床试验在评价整体一致性中的常用方法,对一致性评价方法的选择、检验的功效和假阳性的概率以及样本容量与方法之间的关系给出了一些简单的讨论,旨在为从事多中心临床工作者提供借鉴,希望有更多的国内学者关注这一领域的研究,推动多中心临床试验在我国的发展,为新药临床试验提供理论依据。

HPLC法测定不同产地胡颓子根中三萜苷元的含量

目的:测定不同产地胡颓子根中三萜苷元(Emodinol)的含量,为合理利用该药材资源提供依据。方法:采用高效液相色谱法测定胡颓子根中Emodinol的含量。结果:8个产地胡颓子根中Emodinol的含量范围为0.013%～0.082%。结论:不同产地胡颓子根中Emodinol含量差异较大,以湖北所产含量最高,浙江所产含量最低。

Corey内酯中间体2-氧代三环[2.2.1.0^(3,5)]庚烷-7-羧酸的新拆分方法

光学纯2-氧代三环[2.2.1.03,5]庚烷-7-羧酸是全合成前列腺素类化合物的重要中间体。本文采用(S)-(-)-N-苄基苯-α-苯乙胺为手性拆分剂,以醋酸异丙酯为溶剂,以非对映异构体结晶法制备光学纯(+)-2-氧代三环[2.2.1.03,5]庚烷-7-羧酸。本方法成功完成了消旋体酸(70 g)的拆分,总收率57%,所得产品对映体过量(e.e.)大于99%。本方法操作简便,收率高,溶剂及手性胺可回收。

HPLC法测定杨梅叶中杨梅苷的含量

目的:建立HPLC法测定杨梅叶中杨梅苷含量的方法。方法:采用Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长358 nm,柱温30℃。结果:杨梅苷在0.088-0.880 mg/mL内与峰面积呈良好线性关系,A=36113C-401.56,r=0.9994;平均回收率为102.4%,RSD=1.9%(n=9)。测得杨梅叶中杨梅苷含量为1.43%。结论:该测定方法准确,可靠,对于杨梅的进一步开发利用具有重要的参考意义。

不同采收期东北铁线莲药材中灵仙新苷的含量变化研究

目的:考察不同采收期东北铁线莲药材中灵仙新苷(Clematichinenoside AR)含量,研究其动态含量变化和最佳采收期。方法:采用色谱柱Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相:乙腈-水溶液梯度洗脱程序,流速1.0 mL/min,检测波长203 nm,柱温:30℃。结果:灵仙新苷以8月下旬到9月中旬的含量最高。结论:东北铁线莲药材的最佳采收期为8月下旬到9月中旬。

黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达

目的构建糖类标记载体筛选克隆。方法以pPIC9K-βGl2为模板,通过PCR扩增得到全长的Bgl2基因片段,克隆至pET-28a载体,转化E.coli BL21(DE3),Cel-M9培养基筛选阳性克隆,经DNA测序分析,成功构建pET28a-Bgl2表达载体。SDS-PAGE显示,重组菌经IPTG诱导后表达了目的蛋白,其相对分子质量与预期结果相符。结果 PCR扩增得到Bgl2基因片段,SDS-PAGE显示蛋白以包涵体形式表达,克隆可用Cel-M9培养基筛选。结论用Cel-M9培养基筛选出阳性克隆为构建食品级载体奠定基础。

不同炮制方法对芫花中4种黄酮苷元含量的影响

目的:采用高效液相色谱法分析芫花不同炮制品中4种黄酮苷元成分的含量,研究不同炮制方法对4种成分的影响。方法:采用Hanbon Hedera C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相甲醇-0.4%醋酸水溶液(70∶30),流速1.0mL.min-1,柱温30℃,检测波长338nm。结果:在线性范围内,木犀草素、芹菜素、3'-羟基芫花素、芫花素4种化合物分离度良好。在相应浓度范围内,4种化合物线性关系良好,r均在0.999 8以上;精密度RSD≤1.64%;平均加样回收率为99.69%～101.70%。结论:该方法快速、准确,适用于芫花不同炮制品中4种化学成分的定量分析。在7种炮制方法中,醋制法(药典)较其他6种方法能明显提高木犀草素、芹菜素、3'-羟基芫花素、芫花素的含量,同时能提高总黄酮苷元含量。

HPLC法测定续断药材中常春藤皂苷元的含量

目的:建立续断药材中常春藤皂苷元的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为phenomenex-C18柱(4.6mm×25cm,5μm);流动相为乙腈:水:甲酸(64∶36∶0.1);流速为1mL.min-1;柱温30℃;检测波长为212nm。结果:常春藤皂苷元的线性范围为31.25～1000μg/mL,平均加样回收率为100.13%,RSD小于2%。结论:该方法准确,专属性高,可为续断药材的综合开发利用提供参考。

HPLC法同时测定黑果小檗根中7种成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定黑果小檗根中木兰花碱、阿魏酸、小檗胺、非洲防己碱、药根碱、巴马汀和小檗碱的含量。方法:采用Waters Symmetry? C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-含0.2%三乙胺的0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液,梯度洗脱;流速:0.6 mL/min;检测波长:282 nm;柱温:30℃。结果:木兰花碱、阿魏酸、小檗胺、非洲防己碱、药根碱、巴马汀和小檗碱分别在2.56~25.6μg/mL、3.98~39.8μg/mL、4.64~46.4μg/mL、1.08~10.8μg/mL、2.12~21.2μg/mL、2.06~20.6μg/mL、5.94~59.4μg/mL范围内与峰面积的线性关系良好(r≥0.9995);平均加样回收率为99.27%~103.86%,RSD为1.18%~2.86%。结论:该方法准确可靠、重复性好,可为黑果小檗药材质量控制提供方法。

7种中药鼻吸嗅给药后对中暑大鼠血压的影响

目的:研究7种中药鼻吸嗅给药后对中暑大鼠血压的影响。方法:将SD大鼠随机分为8组,第1～7组为7种不同中药给药组,第8组为空白对照组。先用BESN-Ⅱ型多通道尾动脉无创测压系统测定大鼠在室温(25℃左右)下的血压,然后将大鼠放入温度为(42±2)℃的自制高温仓内,30min后测定大鼠的血压,随后第1～7组通过鼻腔给药,给药时间持续5min,然后测定大鼠的血压,观察给药前后不同组别大鼠血压的变化情况并记录。结果:和空白对照组相比,厚朴、白芷、石菖蒲给药后收缩压的数值小于空白对照组,具有统计学差异(P<0.01);白芷给药后舒张压的数值小于空白对照组,具有统计学差异(P<0.05)。结论:厚朴、白芷、石菖蒲这三味中药在一定程度上可以降低中暑大鼠的血压,具有开发成抗中暑中药新药的前景。

基于随机微分方程的群体药物代谢动力学参数的极大似然估计

目的:阐述基于随机微分方程的混合模型在群体药物代谢动力学中参数估计的应用。方法:在随机微分方程的框架下,写出精确的似然函数,通过极大似然估计求解参数值。结果:利用计算机随机模拟证明方法的可行性,并对模拟的结果进行统计分析,得到各参数的点估计值和置信域,符合模拟的预设值。结论:在群体药物代谢动力学研究中,对基于随机微分方程的混合效应模型采用极大似然估计可以得到较好的估计值。

黑果小檗根不同极性部位抑制肠痉挛和抗炎活性的体外研究及组分初探

目的通过体外实验探究黑果小檗根(Berberis heteropoda Schrenk roots)不同极性部位的肠道解痉作用和抗炎活性;通过成分对比分析,初步推测潜在活性组分。方法(1)用60%乙醇和水分别提取黑果小檗根的主要成分,再对乙醇提取物依次进行系统溶剂萃取(石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和饱和正丁醇),得到不同极性萃取物。(2)采用高效凝相色谱法(HPLC法)对不同极性提取物中代表性组分进行定量分析并比较其含量差异。(3)通过小鼠离体结肠平滑肌实验,研究不同提取物对正常和痉挛状态下肠道肌肉张力的影响,筛选具有抑制肠痉挛作用的活性部位。(4)采用脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞建立体外炎症细胞模型,通过不同提取物干预后测定细胞上清液中一氧化氮(NO)和白介素-6(IL-6)含量,筛选抗炎活性部位。(5)采用半制备液相色谱法对潜在活性部位进行成分分离,并用核磁共振法和质谱法进行成分定性。结果(1)HPLC成分对比分析表明,饱和正丁醇萃取物中木兰花碱、非洲防己碱、药根碱的含量高于其他萃取物,二氯甲烷萃取物中小檗胺、阿魏酸、巴马汀和小檗碱的含量高于其他萃取物。此外,发现乙酸乙酯萃取物中含有明显区别于其他萃取物的的未知峰(峰面积占比60%)。(2)小鼠结肠张力的体外实验结果表明,二氯甲烷萃取物对正常小鼠结肠张力有明显的抑制作用。此外,二氯甲烷萃取物可缓解乙酰胆碱和氯化钡引起的肠痉挛。(3)炎症细胞模型干预实验的结果表明,乙酸乙酯萃取物的抗炎作用明显优于其他萃取物。(4)从乙酸乙酯萃取物中分离得到了先前发现的未知峰化合物,结果鉴定为阿魏酸-4-O-葡萄糖苷。结论研究发现黑果小檗根二氯甲烷部位同比其他部位的肠道解痉作用最强,同时乙酸乙酯部位是发挥抗炎作用的主要活性部位,以此丰富了黑果小檗根已知的药理作用。此外,从黑果小檗根中首次分离得到了化合物:阿魏酸-4-O-葡萄糖苷,为黑果小檗根的物质基础研究提供了参考。

UPLC法测定千里香胶囊中3种黄酮含量

目的 建立超高效液相色谱（UPLC）法测定千里香胶囊中3种黄酮的含量.方法 采用Waters Acquity UPLC系统,Waters Acquity BEH C18色谱柱（2.1mm×50mm,1.7μm）,流动相为乙腈-0.2%甲酸,流速为0.5mL·min-1,柱温35℃,检测波长337nm.结果 5,6,7,3＇,4＇-五甲氧基黄酮、5,6,7,3＇,4＇,5＇-六甲氧基黄酮、5,7,3＇,4＇-四甲氧基黄酮在0.0025～0.025mg·mL-1浓度范围内均具有良好的线性关系（R2≥0.999）;平均回收率在96%～99%,RSD＜2.0%,精密度良好.结论 本方法分离效果及重复性好,且快速、简便,有机溶剂的消耗少,可作为该制剂的质量控制方法.

支持向量机在肝纤维化模型诊断中的应用

目的:利用血清指标建立数学模型实现肝纤维化的准确分级和变量筛选。方法:在Matlab平台上,采用支持向量机(SVM)构建数学模型预测肝纤维化分级,然后采用平均影响值(MIV)的方法对变量的相对重要性进行排序实现变量筛选。结果:实验利用分类模型预测训练集的准确率为92.3077%,预测测试集准确率为90.9091%。利用变量筛选模型得出对肝纤维化程度影响较大血清指标依次为Hyp、STB、LN、A/T、IV-C等。结论:支持向量机和平均影响值方法可以很好的分类肝纤维化程度和筛选变量,对实际应用具有一定的参考价值。

基于Bootstrap的中药模糊评价的多重检验

目的:研究Bootstrap方法结合多重检验在中药多组分鉴别中的应用。方法:运用Bootstrap方法和R软件,检验给药组与控制组、模型两两比较差异的显著性。结果:通过本方法得到了各给药组与控制组、模型组的拟合曲线,以及在组内每个分子上的检验结果。结论:在中药模糊评价中,运用Bootstrap结合多重检验方法,检验中药组分是否具有显著性差异,具有可行性。

漏芦降脂作用的研究

目的:研究祁州漏芦水提物和醇提物的降血脂活性的差异。方法:采用75%蛋黄乳造模的小鼠高脂血症模型,以小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)为指标研究漏芦醇提液和水提液的降脂作用的差异。结果:与模型组相比,漏芦醇提液低剂量组和漏芦水提取液高剂量组小鼠TC、TG和LDL-C的水平显著降低(P<0.05),漏芦水提取液低剂量组小鼠HDL-C(P<0.01)的水平有极显著升高。结论:漏芦水提液的降脂作用优于漏芦醇提液的作用。

佐剂增强的肿瘤细胞裂解物疫苗抗小鼠H22肝癌作用

以鼠源肝癌H22全细胞裂解物为抗原,通过化学偶联白喉毒素(DT)和串联重复的T辅助表位mH-SP70407-426肽段,混合OK432(链球菌A群)制成肿瘤全细胞疫苗H22-DT-M2-OK432(HDTMOK)。治疗性免疫结果显示,疫苗激发的免疫应答对H22肿瘤起到了有效的抑制作用。为进一步提高该疫苗的抗肿瘤效果,用偶联的疫苗制备免疫刺激复合物(ISCOM),并验证其抑瘤效果。治疗性免疫结果显示,与PBS组相比,ISCOM疫苗组平均瘤重和瘤体积显著降低(P<0.01),同时有效地抑制了小鼠皮内肿瘤模型中的血管新生(P<0.01);ELISA法从血清中检测到高滴度的抗体。且与HDTMOK疫苗相比,ISCOM疫苗抑瘤作用提升显著(P<0.05)。HDTMOK能有效抑制小鼠肝癌实体瘤生长,佐剂配伍后的疫苗对H22的抑制更为显著,能够有效提升肿瘤全细胞疫苗的抗肿瘤能力。

基于成分群动态变化探索药材质量优劣判断方法初步研究

目的:探索评价药材质量优劣的新方法。方法:以怀牛膝药材为研究对象,采用HPLC法构建18批怀牛膝药材的化学成分群图谱;采用MTT法测定各批怀牛膝药材相应的成骨细胞增殖活性,由此构建活性数据库;利用偏最小二乘法(PLS)对药材指纹图谱与成骨细胞增殖活性的相关性进行分析;对分析得到的YZL值进行正态拟合,并界定判定药材质量优劣的YZL值区间;并以另外10批药材对该判定方法和YZL区间值进行验证。结果:从测定得到的18批怀牛膝药材的指纹图谱中提取得到16个共有峰;以PLS法建立了药材共有峰峰面积与活性间的回归模型,得到相应的标准化回归系数,由此判断出怀牛膝指纹图谱的16个共有峰中1、2、4、5、6、7、11、13、15、16号色谱峰与活性呈正系数相关,其余各峰与活性呈负系数相关;基于回归模型相应标准化回归系数的正负性,经多重综合分析,提炼出YZL值(正、负系数相关峰峰面积和之比值);通过对YZL值进行正态拟合并界定,得到当YZL值≥0.9639时,该怀牛膝药材为优品;当YZL值≤0.6112时,该怀牛膝药材为劣品;该判定方法得到了验证。结论:PLS法适用于怀牛膝指纹图谱与成骨细胞增殖活性的相关性分析;YZL值可用于判定和划分怀牛膝药材质量的优劣;当YZL值≥0.9639时怀牛膝药材为优品,当YZL值≤0.6112时怀牛膝药材为劣品;验证性判断结果支持本文所建立的药材质量优劣评价新方法。