新加坡国立大学和中国药科大学药物分析本科教学的比较

对新加坡国立大学和中国药科大学本科药学专业的药物分析课程进行比较性研究,从课程设置、教学方式、评价模式和实验教学等方面进行概述,为药物分析的教学改革和课程建设提供参考。

UPLC-MS/MS法分析β淀粉样蛋白中Asp残基的外消旋化

目的:建立β淀粉样蛋白中Asp外消旋化的LC-MS/MS分析方法。方法:采用胰蛋白酶和Glu-C酶两步酶解β淀粉样蛋白,酶解产物LC-MS/MS分析的色谱条件:分离柱为InfinityLab Poroshell 120 EC-C18色谱柱(2.7μm,3.0×150 mm Agilent),流动相A为5%乙腈-0.1%甲酸水,流动相B为75%乙腈-水,梯度洗脱(0~30 min,0~28%B;30~30.01 min,28%~100%B;30.01~35 min,100%~100%B;35.0~35.01 min,100%~0%B;35.01~40 min,0%B),流速为0.3 mL/min。质谱条件:采用电喷雾离子源及正离子多反应监测模式(SRM)定量。结果:在L型多肽存在下,D型多肽的质量浓度在1~250 ng/mL内,其峰面积与多肽的质量浓度之间线性良好(r>0.999),最低定量限(LLOQ)为1 ng/mL;LLOQ、低(LQC)、中(MQC)、高浓度(HQC)日内和日间精密度RSD值均小于15%,加样回收率为85.3%~107.3%。建立的方法对D/(D+L)型淀粉样蛋白为2%~50%的混合样本中Asp1,Asp23外消旋化测定结果准确,准确度在95.35%~117%之间。联合胰蛋白酶与Glu-C成功鉴定了淀粉样蛋白中Asp7残基的外消旋化。结论:所建立的方法可用于淀粉样蛋白中Asp残基外消旋化的分析,该方法操作简便,结果准确,灵敏度高。

高效液相色谱-质谱联用鉴定黄芩总苷元提取物中黄酮类成分

目的:使用高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF/MS)技术,分离鉴定黄芩总苷元提取物中的黄酮类成分,并总结其裂解规律。方法:采用岛津LX-20210330-01 C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.1%甲酸为流动相A,甲醇-乙腈(50∶50)为流动相B进行梯度洗脱,对黄芩总苷元提取物中的黄酮类成分进行分离,利用电喷雾离子化-四极杆-飞行时间串联质谱高分辨测定各成分母离子及其子离子的准确质量,结合电喷雾离子源正、负离子模式下的质谱信息和色谱保留时间进行结构鉴定。结果及结论:除了黄芩素和汉黄芩素两个已知成分外,从黄芩总苷元提取物中共鉴定出31种黄酮类成分,包括12种苷类与19种苷元,其中有3个化合物为本研究首次鉴定,并分析归纳了黄酮类成分在电喷雾离子源正、负离子模式下的质谱碎片裂解规律。

铁死亡对阿尔茨海默病的影响及药物研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种慢性中枢神经系统退行性疾病。铁死亡是近年来发现的新型铁依赖性细胞死亡形式,典型特征为铁积累过多、谷胱甘肽过氧化物酶4失活、活性氧和脂质过氧化物升高。近年来的证据表明,铁死亡在AD的病理过程中起重要作用,但其具体机制尚不清楚。本文综述了铁平衡失调导致老年斑和神经元纤维缠结、加剧神经炎症以及介导神经细胞死亡等潜在相互作用,并总结了铁螯合剂、抗氧化剂以及铁死亡调节因子等针对铁死亡相关的AD治疗策略,以期为AD诊断和治疗提供有价值的信息。

盐酸米诺环素胶囊在中国健康受试者中生物等效性研究

目的评价2种盐酸米诺环素胶囊空腹和餐后状态下在中国健康人群中生物等效性。方法生物等效性试验采用随机、开发、两周期、自身交叉的设计,健康受试者56例,空腹和餐后各半,每周期单次给予参比制剂或受试制剂50 mg,清洗期为7 d。应用高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中米诺环素浓度,计算其药动学参数并评价受试制剂与参比制剂的生物等效性。结果空腹口服米诺环素受试制剂和参比制剂后,米诺环素峰浓度(C_(max))分别为(541±137)和(558±140)ng·mL^(-1),血药浓度-时间曲线下面积(AUC_(0-t))分别为(8347±1986)和(8205±1790)h·ng·mL^(-1),半衰期(t 1/2)分别为(18.2±2.84)和(18.0±3.05)h。餐后口服米诺环素受试制剂和参比制剂后,米诺环素C_(max)分别为(349±72.1)和(352±73.2)ng·mL^(-1),AUC_(0-t)分别为(6428±1077)和(6588±1118)h·ng·mL^(-1),t 1/2分别为(18.5±3.10)和(18.4±3.21)h。在空腹试验中两制剂的C_(max)、AUC_(0-t)和AUC_(0-∞)几何均值比值的90%置信区间分别为(90.84%,101.46%)、(95.2%,102.8%)和(95.31%,102.71%)。在餐后试验中受试制剂和参比制剂的C_(max)、AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)几何均值比值的90%置信区间分别为(94.71%,103.42%)、(95.40%,99.83%)和(95.79%,100.02%)。结论中国健康人群在空腹和餐后状态下口服米诺环素2种制剂生物等效。

离子淌度质谱法在D-氨基酸修饰多肽研究中的进展

D-氨基酸修饰多肽(D-Amino Acid Containing Peptides,DAACPs)具有独特的稳定性和生物学活性,并已在包括哺乳动物在内的多种动物体内检测到。但因为检测手段的匮乏,可能仍有许多种类的DAACP还未被发现,所以开发高效的DAACPs的分析方法是很必要的。而离子淌度质谱因其独特的分离原理很适用于多肽外消旋化研究,本文概括了离子淌度质谱法对外消旋化前后多肽的分析策略,为DAACPs高效率的检出提供可能的方法,并综述了预测碰撞截面值(Collision Cross Section,CCS)的相关方法,总结了离子淌度质谱在外消旋化修饰位点鉴定及含量测定方面的优势,为离子淌度质谱法对DAACPs的分析提供参考。

SPE-UPLC-MS/MS同时检测污水中多种滥用药物及其代谢物

建立一种基于固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱(SPE-UPLC-MS/MS)同时检测污水中多种滥用药物及其代谢物的定量分析方法。样品在pH 2条件下过滤后加入内标,利用Oasis Prime MCX固相萃取柱、甲醇淋洗溶剂4 mL、5%氨水-乙腈洗脱溶剂4 mL和0.1%甲酸水溶液复溶溶剂进行固相萃取,采用色谱柱ZORBAX Eclipse Plus C18进行色谱分析,流动相0.1%甲酸水溶液和乙腈进行梯度洗脱;采用ESI离子源正离子方式,多反应监测模式(MRM)进行定量分析。所有待测物在各自的标准曲线范围内线性关系良好(r≥0.9932),定量限为1 ng/L(除苯丙胺为2.5 ng/L),提取回收率范围为82.13%~99.96%,日内与日间精密度均小于9.43%。该方法准确可靠、重复性好,适用于污水中多种滥用药物及其代谢物的定量检测,为实时监测药品滥用提供了分析手段。

皮肤中转运蛋白对药物透皮吸收的作用

经皮给药是临床避免药物首关效应、提高生物利用度的有效方法,具有口服和注射给药不可替代的优点。皮肤存在一系列转运蛋白,会影响药物的透皮吸收。研究皮肤中转运蛋白的分布、功能以及表达的调节对经皮给药和化妆品的研发具有重要意义。人类转运蛋白可分为ATP结合盒(ABC)转运蛋白和溶质转运体(SLC)。这两种类型的转运蛋白在皮肤中均有表达,影响药物透皮吸收。该文综述皮肤各种转运蛋白的表达及其在经皮给药中的作用。

肿瘤中乳酸脱氢酶B作用机制的研究进展

有氧糖酵解增加是肿瘤代谢重编程的主要特征。有氧糖酵解不仅为癌细胞提供能量而且为其生物合成提供必要的前体,这对促进肿瘤生长非常重要。癌细胞通过对糖酵解酶进行调节来满足其自身需求,糖酵解酶在促进肿瘤存活、转移、侵袭等方面发挥着积极作用。乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)作为有氧糖酵解的关键酶,由乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)和乳酸脱氢酶B(lactate dehydrogenase B,LDHB)两种亚基组成。LDHA被认为在有氧糖酵解过程中起着关键作用,并得到了广泛的研究,然而对于LDHB的研究却较少。但目前LDHB在各种肿瘤进展中的重要作用已被越来越多的报道,大量研究表明,LDHB在多种肿瘤中异常表达,与肿瘤恶性进展相关。本文从LDHB在肿瘤中的调控机制、与肿瘤发生发展的关系以及作为肿瘤诊断的生物标志物等方面综述了其近10年的研究进展,有助于深入了解该蛋白在肿瘤中的作用机制。

类紫杉醇脂质体体外释放的桨膜结合分析法研究

体外释放度是评价脂质体制剂质量的重要指标,目前各国药典中均未收载脂质体体外释放度评价方法,致使脂质体质量评价缺乏统一标准和无法提供安全性保障。本研究以自制类紫杉醇脂质体为例,通过优化外部释放条件建立的桨膜结合法模拟了在生理条件下类紫杉醇药物12 h的释放情况,结果表明以0.5%SDS-HEPES作为释放介质,采用截留分子量为1000 kD的透析袋对脂质体水溶液进行释放的结果满足要求,且具有区分能力,为载药脂质体体外释放方法开发提供参考。

基于质量源于设计理念优化抑肝散提取物中生物碱的含量测定方法

目的运用质量源于设计理念开发抑肝散提取物中生物碱的高效液相色谱分析方法。方法利用响应面设计法和Drylab软件优化抑肝散提取物中生物碱含量测定色谱条件,并通过单因素影响实验验证方法可靠性。结果采用Hanbon Megres C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈(A)∶15 mmol/L乙酸铵(B)=45∶55进行等度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为245 nm,柱温35℃,钩藤碱和异钩藤碱在1~50μg/ml内的线性关系良好,数据均符合要求。结论基于QbD理念进行药物分析方法的开发和完善,有效提高了实验效率,有利于分析方法的转移。

HPLC-ELSD测定灵芝孢子油中8个甘油三酯类成分的含量

目的:建立灵芝孢子油中甘油三酯类成分含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测测定法。方法:采用ODS(100 mm×4.6 mm,2.7μm)色谱柱,以有机混合溶剂乙腈-无水乙醇-甲基叔丁基醚(45∶45∶10)为流动相等度洗脱,采用蒸发光散射检测法,分离了灵芝孢子油中8个主要甘油三酯类成分,以峰面积对数(lg A)为Y,质量浓度对数(lg C)为X进行线性回归并测定含量。结果:方法验证结果表明,各组分峰间的分离度符合要求,它们的蒸发光散射响应均在4.0~200μg·mL^(-1)浓度范围呈现良好的线性关系(r>0.999),平均加样回收率为96.63%~107.53%(RSD<5.0%)。结论:该方法专属性好,分析洗脱时间适宜,定量准确,满足灵芝孢子油中甘油三酯类成分质量控制的要求。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定N-乙酰氨基葡萄糖中的葡萄糖和氨基葡萄糖的含量

目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定发酵工艺来源的N-乙酰氨基葡萄糖中的葡萄糖和氨基葡萄糖的含量。方法采用Asahipak NH_(2)P-50 4E(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(80∶20)为流动相,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃;使用蒸发光散射检测器,载气为空气,气体压力为350 kPa,漂移管温度为80℃,增益为5。结果N-乙酰氨基葡萄糖与葡萄糖和氨基葡萄糖之间分离度良好,葡萄糖在76.12~304.50µg·mL^(-1)、氨基葡萄糖在124.68~498.71µg·mL^(-1)、N-乙酰氨基葡萄糖在150.15~600.60µg·mL^(-1)与峰面积线性关系良好,R^(2)均大于0.9990。结论本方法准确、简便,可用于发酵工艺来源的N-乙酰氨基葡萄糖中葡萄糖和氨基葡萄糖的检测。

GC-MS测定大鼠血浆中反式氧化樟脑含量及其体内药动学研究

目的测定大鼠血浆中反式氧化樟脑的含量并研究其在大鼠体内药动学。方法采用液液萃取法处理血浆样品,以甲苯为内标,采用气质联用法测定。色谱柱为HP-5MS毛细管柱,载气为氦气,流速为1.11 mL·min^-1;进样量1μL,分流进样,程序升温;采用电子轰击离子源,以单离子监测方式进行正离子扫描。6只大鼠静脉给予氧化樟脑注射液后采血,测定血药浓度,采用DAS 2.1.1拟合房室模型并计算药动学参数。结果血浆反式氧化樟脑浓度在0.1~10.0μg·mL^-1范围内线性关系良好;定量下限为0.1μg·mL^-1;绝对回收率平均在76.94%~85.31%,基质效应平均值在94.42%~98.50%,批内、批间精密度RSD1.45%~10.36%。大鼠的药时曲线符合二房室模型,反式氧化樟脑在大鼠体内消除迅速,主要药动学参数为AUC(0-t)为(20.459±2.034)mg·L^-1·min,t1/2z为(6.938±3.093)min,CLz为(0.175±0.017)L·min^-1·kg^-1,Cmax为(5.604±0.641)mg·L^-1。结论该方法样品前处理简单,且准确度高、专属性强,适用于反式氧化樟脑的血药浓度测定,可为其人体内药动学研究提供参考。

牛肝二硫键异构酶的纯化及其对重组人粒/单系集落刺激因子体外折叠作用的研究

自牛肝中纯化二硫键异构酶（PDI）。经匀浆、热沉淀、硫酸铵分级分离、阳离子和阴离子交换层析等步骤，得到了比活950U／g电泳纯的PDI。在此基础上研究了PDI对重组人粒／单系集落刺激因子（rhGM－CSF）体外复性作用。结果表明，在PDI与rhGM－CSF摩尔比为2：1时，可使0．5mg／ml的rhGM－CSF正确折叠率提高到60％，比活性由5．0×106U／mg提高到1．0×107U／mg。

气相色谱法测定复方丁香吸入剂中有效成分的含量

以正十一醇为内标，用程序升温填充柱ＧＣ法同时测定复方丁香吸入剂中的丁香酚、冰片及薄荷醇的含量。本法采用ＦＩＤ为检测器，色谱柱为１０％ＰＥＧ－２０ＭＣｈｒｏｍｏｓｏｂＷＡＷ－ＤＭＣＳ８０～１００目。２ｍ×４ｍｍ（Ｉ．Ｄ．）不锈钢填充柱，柱室温度程序为１４０℃（６ｍｉｎ）３℃／ｍｉｎ→１７５℃（１０ｍｉｎ）。样品用乙酸乙酯超声振荡提取３０ｍｉｎ，过滤后便可进样分析。

远志-石菖蒲药对配伍前后远志化学成分定性定量分析

研究药对远志-石菖蒲配伍对远志药材化学成分的影响。采用HPLC-Q-TOF-MS/MS法对远志-石菖蒲配伍前后远志化学成分进行定性,并用HPLC-UV法进行定量分析。采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱;质谱使用电喷雾离子源,在正离子模式下扫描;通过对照品对照、质谱数据和对比文献对远志化学成分的各色谱峰进行归属,并比较远志-石菖蒲配伍前后远志各化学成分的含量变化。从远志中鉴定出8个化学成分:3,4,5-三甲氧基肉桂酸、对甲氧基肉桂酸、细叶远志皂苷、西伯利亚远志糖A5、远志酮Ⅲ、细叶远志苷B、3,6'-二芥子酰基蔗糖和细叶远志苷A;经石菖蒲配伍后,远志的8个化学成分含量无明显变化。远志-石菖蒲配伍后的化学成分定性定量研究可为该药对的体内配伍作用探索提供方法依据。

Nrf2激活剂在阿尔茨海默病治疗中的应用

阿尔茨海默病是一种不可逆的神经退行性疾病,以细胞外老年斑(SP)中β淀粉样蛋白的异常沉积、tau蛋白过度磷酸化形成的细胞内神经原纤维缠结(NFT)为特征,病因尚不明确,氧化应激被认为是导致AD发生发展的重要因素。Keap1-Nrf2-ARE信号通路是机体抗氧化和/或亲电应激的最重要的防御机制之一,激活此通路可诱导一系列细胞保护基因的转录,减少氧化应激,发挥神经保护作用。本文概述了黄酮类、酚类、羧酸类、酯类及其他类Nrf2激活剂对阿尔茨海默病的治疗作用。

大黄及牛黄解毒片大鼠给药后血浆中大黄活性成分的药代动力学比较研究

考察大黄及牛黄解毒片给药后大黄活性成分在大鼠体内药代动力学行为的差异。大鼠分别灌胃给予大黄生药材96 mg/kg(含总蒽醌1.83 mg/kg,相当于大黄酸0.28 mg/kg、大黄素0.30 mg/kg、大黄酚0.81 mg/kg、芦荟大黄素0.23 mg/kg及大黄素甲醚0.20 mg/kg)及牛黄解毒片250 mg/kg(含总蒽醌与大黄生药材等量,相当于大黄酸0.33 mg/kg、大黄素0.38 mg/kg、大黄酚0.71 mg/kg、芦荟大黄素0.24 mg/kg及大黄素甲醚0.17 mg/kg),血浆经甲醇沉淀后,采用LC-MS/MS法测定大黄活性成分血药浓度,Win Nonlin 7.0软件计算药代动力学参数。大鼠灌胃大黄及牛黄解毒片后,大黄酸的c_(max)分别为(121±103)及(474±251)μg/L,AUC_(0-t)分别为(275±176)及(406±194)μg·h/L;大黄酚异构体的c_(max)分别为(2 325±1 390)及(3 580±2 169)μg/L,AUC_(0-t)分别为(8 170±2 661)及(8 856±4 023)μg·h/L;仅在牛黄解毒片给药大鼠血浆中检测出大黄素,且牛黄解毒片给药后大鼠血浆中大黄酸的c_(max)、AUC及t_(1/2),大黄酚异构体的Vd及CL与单味大黄相比显著增加,大黄酚异构体的t_(max)显著下降。实验结果表明,牛黄解毒片复方配伍增强了大黄活性成分在大鼠体内的吸收利用,改变了大黄活性成分的药代动力学行为。

衍生化HPLC法测定酒石酸伐尼克兰中甲醛和乙二醛的含量

建立酒石酸伐尼克兰原料药和中间体中基因毒性杂质甲醛和乙二醛的检查方法。甲醛和乙二醛经2,4-二硝基苯肼衍生化,改善HPLC-UV检查的色谱保留和检测灵敏度。利用C8(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-水(50∶50)流动相进行线性梯度洗脱分离,在紫外光波长380 nm下进行检测,外标法测定供试品中的甲醛和乙二醛的含量。甲醛和乙二醛均在0.094~1.88μg/L范围内线性关系良好,检测限和定量限分别达0.047μg/mL(19μg/g)和0.094μg/mL(38μg/g),平均回收率分别为(95.0±1.1)%和(99.4±2.6)%。经过方法学验证,本方法适用于酒石酸伐尼克兰原料药及其中间体中的微量基因毒性杂质甲醛和乙二醛的含量测定。伐尼克兰原料药及其中间体成品中甲醛和乙二醛的含量检查结果均符合每日允许最大摄入量的限度要求,而中间体粗品中乙二醛的含量易超出限度。研究所建立的方法可应用于酒石酸伐尼克兰生产工艺过程的质量控制。