四逆汤改善缺血心肌能量代谢的作用及其机制探讨

目的：探讨四逆汤改善缺血心肌能量代谢的作用及其机制。方法：垂体后叶素性小鼠心肌缺血模型，四逆汤（浓度１０３ｇ生药／Ｌ）灌胃，剂量０１ｍＬ／２０ｇｗｔ·ｄ－１，心肌超微结构用电镜观察分析，心肌ＡＴＰ含量用高效液相色谱法测定，乳酸浓度用常规生化方法测定。结果：与缺血组相比，四逆汤组缺血心肌线粒体损伤显著减轻（Ｐ＜００５），糖原消耗显著减少（Ｐ＜００５），乳酸浓度显著下降（Ｐ＜００５），心肌营养血流量显著上升（Ｐ＜００１），氧自由基浓度显著降低（Ｐ＜００１）。结论：四逆汤具有显著改善缺血心肌能量代谢的作用。

清热利湿法对慢性乙型肝炎湿热证患者自然杀伤细胞、自由基水平的影响

清热利湿法对慢性乙型肝炎湿热证患者自然杀伤细胞、自由基水平的影响张诗军，马翠玉，陈泽雄，罗致强，马志楷，杨惠玲，郑芹我们对慢性乙型肝炎湿热证患者用自拟龙胆酸枣场清热利湿治疗，为了探讨其治疗机理，我们从自然杀伤细胞（ＮＫ）水平、自由基损伤方面进行了研究...

成人骨髓间质干细胞定向诱导为神经元样细胞的研究

目的 :体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞。方法 :采用Ficoll -Paque液 (1 0 77× 10 3 g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,分别采用含巯基乙醇和硫代甘油等试剂的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增 5代可获 5× 10 7个细胞。加入巯基乙醇等或硫代甘油等诱导剂诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF表达阳性 ,GFAP阴性。结论 :成人骨髓间质干细胞在体外可以分化为神经元样细胞。

丹参注射液诱导间质干细胞分化为神经元样细胞

【目的】丹参注射液体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞。【方法】采用Ficoll Paque液离心分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达 ,分别采用含丹参注射液或硫代甘油等试剂的无血清达乐伯克改良必需基本培养基 (DMEM )诱导MSC分化为神经元 ,免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白(NF M )、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、巢蛋白 (nestin)的表达。【结果】成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得 0 5× 10 6,15代可获得 (2～ 3)× 10 12 个细胞 ,细胞流式细胞仪检测结果显示CD2 9、CD44、CD90、CD10 5、CD16 6表达阳性 ,CD11a、CD14、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性。加入丹参或硫代甘油诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF M、nestin表达阳性 ,GFAP阴性。

增强型体外反搏对冠心病患者血清一氧化氮和丙二醛的影响

目的：探讨增强型体外反搏对冠心病患者血清一氧化氮（ＮＯ）和丙二醛（ＭＤＡ）的影响。方法：采用硝酸盐还原酶法测定６９例冠心患者（反搏组３１例，药物组３８例）和３５名正常人血清中ＮＯ２－和ＮＯ３－的含量，以反映ＮＯ的浓度，同时检测血清中ＭＤＡ的含量，观察冠心病患者增强型体外反搏过程中及反搏后血清ＮＯ和ＭＤＡ的动态变化。结果：治疗前，反搏组和药物组冠心病患者血清ＮＯ含量（３８８８±１７０３）μｍｏｌ／Ｌ，（４０７８±７３８）μｍｏｌ／Ｌ明显低于正常人水平（７０８６±７６１）μｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜００５。经过３个疗程的增强型体外反搏治疗，患者血中ＮＯ含量明显增高（１０５４７±２５５８）μｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜００５，对照组经过６周药物治疗，血中ＮＯ也有一定程度的增高（４８５２±１００４）μｍｏｌ／Ｌ，但仍低于正常水平。与此相反，治疗前反搏组和药物组冠心病患者血清ＭＤＡ含量（５７４±０５３）ｎｍｏｌ／Ｌ，（５７１±０５９）ｎｍｏｌ／Ｌ明显高于正常人水平（３８７±０６５）ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜００５。经过３个疗程的增强型体外反搏治疗，患者血中ＭＤＡ含量明显降低（４０４±０６５）ｎｍｏｌ／Ｌ，?

成人骨髓间质干细胞定向诱导为脂肪细胞的研究

目的 :体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为脂肪细胞。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液 (1 0 77× 10 3 g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达 ,地塞米松、IBMX、胰岛素、indomethacin定向诱导MSC分化为脂肪细胞。油红O检测中性脂肪 ,光镜下细胞计数。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增 5代可获得 1× 10 8个细胞。流式细胞仪检测结果显示CD2 9、CD44、CD90、CD10 5、CD16 6表达阳性 ,CD14、CD34、CD45、CD11a为阴性。诱导 48h后 ,细胞内有脂滴出现 ,随着时间延长 ,脂滴逐渐增加并融合为脂泡。细胞由梭形转变为圆形或多角性。细胞计数结果显示 85 %以上细胞转变为脂肪细胞。结论 :成人骨髓间质干细胞在体外可以分化为脂肪细胞。

PPD对豚鼠实验性哮喘气道炎症的作用

目的 探索结核菌素纯蛋白衍生物 (purifiedproteinderivative ,PPD)对豚鼠实验性哮喘气道炎症的作用。方法 实验采用 31只豚鼠 ,体质量 2 50g左右 ,分为对照组、卵蛋白 (ovalbumin ,OVA)致敏组和PPD治疗组。用OVA(Ⅲ级 )致敏豚鼠复制豚鼠哮喘模型。结果 经过OVA致敏的动物气道支气管肺泡灌洗液 (BALF)和肺组织中嗜酸粒细胞以及BALF中白细胞总计数有明显增加 ,PPD可不同程度地降低肺组织嗜酸粒细胞的气道浸润 ,并使BALF中炎性细胞总数降低。

从胚胎干细胞诱导发育为浆细胞的体外实验研究

目的：建立胚胎干细胞体外定向诱导分化为浆细胞的体系，为研究造血发生的基因调控及Ｂ淋巴细胞发育过程奠定基础。方法：分阶段培养，第一、二阶段使用半固体培养，分组加入细胞因子、２－巯基乙醇和胚胎细胞条件培养液，用流式细胞仪、免疫组化及Ｗｒｉｇｈｔ’ｓ染色鉴定细胞，第三阶段移入骨髓基质细胞滋养层。结果：第一阶段：加入ＳＣＦ、ＴＰＯ、ＩＬ－６、ＩＬ－３、Ｅｐｏ、和Ｇ－ＣＳＦ，４ｄ后细胞大片坏死，仅加入２－巯基乙醇可形成胚胎体。第二阶段：加入ＳＣＦ和ＴＰＯ，细胞增殖缓慢，再加入条件培养液，发育３～４ｄ可形成ＣＤ３４＋的细胞集落。第三阶段：移至骨髓基质细胞饲养层后，发育为浆细胞。结论：胚胎干细胞在体外可定向分化为浆细胞。胚胎干细胞在早期发育不需要细胞因子，胚胎细胞的条件培养液可促使其向造血细胞发育。

成年大鼠骨髓间充质干细胞体外分化为神经元样细胞

目的 探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞（ａｄｕｌｔ ｒａｔ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ｒＭＳＣｓ）的体外 增殖和特异性诱导分化为神经元样细胞的能力。方法 分别采用３种不同的诱导方法体外定向诱导第三至五代的 ｒＭＳＣｓ向神经元样细胞分化，并分别应用相差显微镜观察神经元样细胞和免疫细胞组化检测神经元样细胞所表达 的神经元特异性标志［神经元特异性烯醇化酶（ｎｅｕｒｏｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｏｌａｓｅ，ＮＳＥ）和神经丝蛋白（ｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ，ＮＦ）］及 星形胶质细胞特异性标志［胶质纤维酸性蛋白（ｇｌｉａ ｆｉｂｅｒ ａｃｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＡＰ）］，并进行神经元样细胞定量分析。结 果 所采用的３种定向诱导方法都能使ｒＭＳＣｓ特异性诱导分化为神经元样细胞，此神经元样细胞都能特异性地表 达出ＮＳＥ和ＮＦ，而不表达ＧＦＡＰ。经过定量计数分析发现用上述方法处理ｒＭＳＣｓ后出现ＮＳＥ阳性的细胞约为 ７５．５％±３．５％，出现ＮＦ阳性的细胞约为７７．２％±２．８％。结论ｒＭＳＣｓ能在体外扩增、传代，并能被定向诱导分 化为神经元样细胞。

隐丹参酮诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的:观察隐丹参酮体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞。方法:采用Ficoll-Paque液分离成人MSC,体外扩增,FACScan流式细胞仪检测表面抗原表达,采用含隐丹参酮的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元样细胞。免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF—M,NF—H)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(Nestin)的表达。结果:成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得0.5×106个细胞,15代可获得(2～3)×1012个细胞,流式细胞仪检测显示CD29、CD44、CD90、CD105、CD166表达阳性,CD11a、CD14、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性。加入隐丹参酮诱导后,MSC胞体收缩,突起伸出;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF-M,NF-H、Nestin表达阳性.GFAP阴性。结论:隐丹参酮在体外可诱导成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。

小柴胡汤对小鼠肉瘤S_(180)的抑制作用和血浆内皮素的影响

目的：探讨小柴胡汤（ＸＣＨＴ）对小鼠肉瘤Ｓ１８０的抑瘤作用及机制。方法：通过体内实验，观察不同浓度ＸＣＨＴ浸膏对小鼠肉瘤Ｓ１８０的抑制作用和用放射免疫测定法（ＲＩＡ）测定荷瘤小鼠血浆内皮素（ＥＴ）含量的变化。结果：高、中和低浓度ＸＣＨＴ（１０ｇ／ｍｌ，０５ｇ／ｍｌ和０２５ｇ／ｍｌ）溶液治疗１０天后，对小鼠肉瘤Ｓ１８０有明显的抑瘤作用，抑瘤率为４７７％～５６６％。同时发现荷Ｓ１８０肉瘤小鼠血浆内皮素水平明显高于正常对照组（Ｐ＜００５），而经过高、中、低浓度ＸＣＨＴ溶液治疗后荷Ｓ１８０肉瘤小鼠血浆内皮素含量明显降低，达到正常或低于正常水平。结论：ＸＣＨＴ对小鼠肉瘤Ｓ１８０的生长具有抑制作用。

PD98059对人骨髓间质干细胞分化为成骨细胞的影响

目的 :探讨胞外信号调节激酶 (ERK)信号传导途径对骨髓间质干细胞 (MSC)分化为成骨细胞的影响。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC ,体外扩增 ,应用地塞米松、β -甘油磷酸钠、vitaminC定向诱导MSC分化为成骨细胞。在成骨诱导液中加入不同剂量的PD980 59,观察其对成骨细胞形成的影响。结果 :MSC体外扩增 1 5代可获得 (3 - 4 )× 1 0 1 2 个细胞。在成骨诱导液作用下 ,MSC可在体外定向分化为成骨细胞。不同剂量的PD980 59均可抑制MSC分化为成骨细胞 ,并有剂量依赖关系 ;同时促使部分细胞转化为脂肪细胞。结论

雷公藤多甙片治疗小儿哮喘疗效及其免疫作用机理的研究

作者对37例小儿哮喘病患者经用雷公藤多甙片(Tabellon Multiglycosidorum Triptergii)治疗12周后,随访8个月,其中有效者33例,总有效率为89.18%,各类型病者间有效率无显著差异(P>0.05);对其中27例病儿服药前后外周血T细胞亚群及抑制性细胞活性进行检测,结果显示:病儿CD_?^+亚群从25.36±5.16%上升为28.96±3.03,(P<0.05),CD_3^+、CD_4^+亚群改变不大(P>0.05),而抑制率(SR)从-20.86±39.10上升为11.93±30.83(P<0.001),同时发现,抑制率的恢复与临床疗效间有一定关系。由此,作者认为,该药对小儿哮喘的治疗机理可能与机体免疫抑制功能恢复有关。

热休克反应对缺血-再灌心肌保护作用的机制探讨

目的：探讨热休克反应对大鼠缺血-再灌心肌保护作用的可能机制。方法：SD大鼠，随机分为对照组及热休克组，动物经热休克处理恢复2或24h后复制缺血再灌模型并进行各项检测。结果：①热休克处理后心肌组织内SOD活性显著高于对照组，MDA含量则显著低于对照组。②热休克组心肌组织内乳酸及ATP含量均显著高于对照组，糖原含量则显著低于对照组。③热休克反应能诱导HSP70i的转录。结论：热休克反应对缺血-再灌心肌的保护作用与心肌能量代谢的改善、抗氧化能力的增强以及HSP70i的转录合成增强有关。

补阳还五汤对受创血管内皮PDGF受体基因表达的调节作用

经皮腔内冠脉成形术（ＰＴＣＡ）后再狭窄的防治，包括采用补阳还五汤等方法已初见成效，实验表明ＰＴＣＡ术后兔胸主动脉的内膜厚度在用药和对照组间有显著差异（Ｐ＜０．０５）。采用原位引物标记法对术后７天的标本测得服药组与对照组血管内皮的ＰＤＧＦ受体ｍＲＮＡ表达有显著差异（Ｐ＜０．０５），此表明服药组的胸主动脉内皮ＰＤＧＦ受体的基因表达受到抑制，提示调节受创血管内皮ＰＤＧＦ受体的基因表达是补阳还五汤临床疗效的重要分子机制。

地塞米松诱导裸鼠脾细胞程序性死亡的研究

本文用地塞米松（ＤＥＸ）与裸鼠脾细胞共培养，发现ＤＥＸ能有效地诱导脾细胞（包括ＮＫ细胞）发生细胞程序性死亡（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ，ＰＣＤ）或凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）从而明显抑制脾ＮＫ细胞活性。结果表明：（１）常规电镜显示细胞收缩但胞膜完整，核凝缩，呈现典型的ＰＣＤ特征。（２）加入ＤＥＸ的脾细胞ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳呈现特征性梯状图谱，片段大小为１８０ｂｐ或其倍数，（３）脾ＮＫ细胞活性测定结果表明ＤＥＸ浓度在１０￣（－８）～１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ范围内可诱导出明显的ＰＣＤ现象发生；而当浓度太低（１０￣（－１０）ｍｏｌ／Ｌ）时则ＰＣＤ现象不明显；当浓度太高（１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ）时ＰＣＤ现象也不明显，呈现特有的剂量效应关系。（４）动力学结果显示（根据电镜及电泳图）在ＤＥＸ作用１２ｈ已开始有典型的ＰＣＤ现象发生，２４ｈ后则以坏死现象为主。

单克隆抗-D细胞株的建立及抗-D抗体Fab段的基因序列分析

目的 :建立分泌抗 -D抗体的人B淋巴细胞株 ,分析编码一株人单克隆抗 -D抗体Fab段的基因序列。方法 :以EB病毒 (EBV)转化分泌抗 -D抗体的人B淋巴细胞 ,建立分泌抗 -D抗体的淋巴细胞株。设计扩增人lgM重链Fd段及κ轻链的引物 ,以聚合酶链反应进行扩增 ,对扩增产物进行分子克隆及测序。结果 :分别用轻链引物和重链引物从一分泌lgM抗 -D的单克隆细胞株扩增出一约 650bp和 70 0bp的特异带。序列分析表明 ,其核苷酸及其所推导的氨基酸 (AA)序列符合人lgFab段的序列特征。结论 :获得了抗 -D抗体Fab段基因 ,为基因工程抗

人胚胎成纤维细胞对人胚胎干细胞生长的作用

目的 :比较人和小鼠胚胎成纤维细胞对人胚胎干细胞生长的作用 ,为胚胎干细胞定向诱导各系统细胞应用于临床 ,消除异种蛋白污染打下基础。方法 :分别采用人胚胎成纤维细胞和小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层细胞 ,支持人受精卵的培养 ,观察其增殖和分化情况。结果 :人和小鼠胚胎成纤维细胞分别加入白血病抑制因子 (hLIF)均能很好支持人胚胎干细胞生长增殖 ,并保持未分化状态。结论 :完全可以使用人胚胎成纤维细胞支持人胚胎干细胞增殖 ,消除异种蛋白污染的可能性 ,为胚胎干细胞定向诱导分化发育应用于临床打下坚实基础。

亚致死量^(60)Coγ射线照射后小鼠骨髓造血细胞程序性死亡特性研究

照射可引起免疫器官萎缩和免疫功能抑制,研究发现其机制为照射后胸腺细胞发生了程序性死亡(programmed cell death,PCD)。骨髓组织对射线也很敏感,造血细胞辐射损伤机制目前尚不清楚。本实验研究从超微结构、DNA裂解、PI染色FACS分析等方面,动态地观察了^(60)Coγ射线照射后小鼠骨髓细胞的变化。实验采用成年SPFBALB/c小鼠。2.0,4.0,6.0Gy照射后6小时透射电镜显示细胞出现空泡,有不同程度的固缩;第3,6,9,12,24,36小时测得DNA裂解百分率较对照组增高;27000×g上清DNA琼脂糖凝胶电泳有大量小分子片段,分子量约为180bp的整倍数,呈典型梯状图谱;FACS分析也表明PCD细胞百分率于第3小时增高,渐增强,24小时达高峰。实验表明,亚致死量照射可引起骨髓有核细胞PCD。由于造血干细胞在形态上难以辨认,故射线有无引起造血干细胞PCD尚不能肯定,有待进一步研究。

巨噬细胞移动抑制因子在油酸致急性肺损伤动物模型肺组织中的表达

目的 :研究急性肺损伤 (ALI)大鼠肺组织中巨噬细胞移动抑制因子 (MIF)的表达与血气改变、肺系数及肺脏病理变化、炎症细胞浸润的关系。方法 :静脉注射油酸制造急性肺损伤大鼠模型为油酸组 ,静脉注射生理盐水作对照组。静脉注射油酸或生理盐水 6h后 ,测定左心PaO2 、PaCO2 及肺系数 ,同时采用微波免疫组化双重染色的方法 ,对比研究对照组和急性肺损伤组肺组织中MIF表达及肺间实质中MIF+、鼠抗CD68抗体 (ED1)、MIF+/ED1+细胞数与血气指标、肺系数改变的关系。结果 :油酸组PaO2 明显低于对照组而PaCO2 高于对照组 (P <0 0 1)。油酸组肺系数 ( 1 0 2± 0 0 8)高于对照组 ( 0 70± 0 0 5 ) ,P <0 0 1。急性肺损伤大鼠肺组织中MIF表达明显多于和强于对照组 ,ALI肺组织中MIF+、ED+1、MIF+/ED1+细胞数与PaO2 、肺系数呈明显正相关。结论 :MIF在介导急性肺损伤中可能起重要作用 ,其表达强弱可反映肺组织损害及病变严重程度。