川芎嗪对中枢神经系统的药理作用及其机制的研究进展

川芎嗪药理作用广泛,近几年因其对中枢神经的药理作用多样而逐渐受到重视,作者从抗中枢神经缺血损伤、改善学习记忆、抑制癫痫发作等方面对川芎嗪的中枢神经药理作用及其机制作一综述,并认为川芎嗪的中枢药理作用及其机制研究将可能是今后研究的重点方向之一。

雪貂在抗感染药物非临床研究中的应用

雪貂应用于抗感染药物评价的优势在于病原微生物(尤其是病毒株)能不经宿主适应直接进行感染和传播,且动物感染后的临床症状与人极为相似。虽然雪貂在抗病毒药物的研发中起到了极为重要的作用,但其应用范围仍有一定的局限性,可能与雪貂缺少相应的实验动物饲养和应用的国家级标准,缺乏特异性的诊断和检测试剂等因素有关。本文对雪貂作为感染疾病模型的特点进行总结,并汇总分析了雪貂在抗感染药物研究中的应用方向,旨在促进雪貂作为实验动物的标准化应用。

健康汉族人硫嘌呤甲基转移酶遗传多态性研究

背景与目的:近年来发现了多种导致硫嘌呤甲基转移酶(thiopurineS-methyltransferase,TPMT)活性降低或缺乏的TPMT突变等位基因。中国人与白种人TPMT活性的分布比较具有种族差异性。在测定TPMT活性的基础上,本研究对常见的4种TPMT基因突变类型在健康汉族人中的发生频率进行分析和探讨。方法:对225名健康汉族人的TPMT基因型进行测定。采用等位基因特异性的PCR(allele-specificPCR,ASPCR)方法和限制性片段长度多态性(PCR-restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)的方法分别检测G238C(TPMT2)、G460A和A719G(TPMT3A、3B、3C)的等位基因频率。结果:在225例健康汉族人中没有找到TPMT2、TPMT3B和TPMT3A,一共找到6例TPMT3C杂合子。这6例TPMT3C杂合子的TPMT活性平均值为(9.62±3.58)U/mlRBC。健康汉族人总的TPMT突变等位基因频率是1.33%(6/450)。结论:TPMT突变基因在中国汉族人的发生频率较低,TPMT3C有可能是该人群中最主要甚至是唯一的突变等位基因。

复方丹参注射液抗脂多糖诱导的兔弥漫性血管内凝血

目的:研究复方丹参注射液对脂多糖(LPS)诱导的兔弥漫性血管内凝血(DIC)的作用。方法:用LPS诱导兔DIC模型。凝固法测定纤维蛋白原含量,全自动凝血分析仪检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和纤维蛋白原含量;全自动血细胞分析仪进行血小板计数;全自动血浆分析仪测定谷丙转氨酶(ALT)以及血尿素氮(BUN);发色底物法测定蛋白C及抗凝血酶Ⅲ的活性。观察复方丹参注射液对LPS诱导的兔DIC的拮抗作用。结果:兔耳缘静脉持续滴注LPS,观察到:APTT和PT显著延长;血小板计数和纤维蛋白原含量明显减少;ALT和BUN显著升高;蛋白C和抗凝血酶Ⅲ的活性明显降低。给予复方丹参注射液后,APTT和PT的延长明显缩短;血小板计数和纤维蛋白原的含量均明显恢复;ALT和BUN显著下降;蛋白C及抗凝血酶Ⅲ的活性显著改善。结论:复方丹参注射液对LPS诱导的兔DIC有良好的拮抗作用。

基质金属蛋白酶-3在强直性脊柱炎中的作用和意义探讨

目的通过比较强直性脊柱炎(AS)病人抗肿瘤坏死因子(TNF)-α单克隆抗体药物(remicade)治疗前后的膝关节滑膜细胞的基因谱变化,找出缓解AS病情相关的主要基质金属蛋白酶(MMP)-3,并探讨MMP-3潜在调控的作用和在AS发病中的作用机制和意义。方法从AS病人在remicade治疗前和治疗3个月后的关节滑膜细胞的基因表达谱(用含1176基因的cDNA微阵列检测)结果中筛选的靶基因即差异表达最显著的MMP-3为特异性刺激因子,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测它诱导健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)的炎症相关基因TNF-α、c-jun和c-fos的表达。结果比较AS病人治疗前后的关节滑膜细胞基因差异表达的结果,MMP-3治疗后下调最显著(P=0.0147)。与MMP-3聚类在一起的基因有111个,和MMP-3相关性最强的基因是金属蛋白酶抑制剂前体(TIMP)-1;MMP-3能显著诱导PBMC的TNF-α、c-jun和c-fos的表达。结论在remicade治疗AS过程中,下调MMP-3是最重要的环节之一;通过检测MMP-3在关节滑膜细胞组织中的表达水平可作为AS诊断和病情进展监控的参考指标;MMP-3下调,可能使TNF-TNFR2-JNK-AP-1信息通道的激活状态减弱,从而减少致炎因子的释放,调整异常的基质降解和血管形成等病理因素,缓解AS炎症、减少软骨和骨质破坏的作用。

糖尿病大鼠视网膜血流变化的彩色多普勒分析

[目的]采用彩色多普勒超声检查对糖尿病大鼠视网膜中央动脉(CRA)血流进行测定,探讨糖尿病早期视网膜病变的血流动力学的变化规律。[方法]链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导而成糖尿病大鼠模型共66只并随机分为4周、8周及12周3组。采用彩色多普勒超声检查测定大鼠右眼CRA的血流参数,包括峰值血流速度(PSV)、舒张期最低流速(EDV)、平均血流速度、阻力指数(RI)、搏动指数(PI)以及血管内径。检查结束后,立即摘除大鼠右眼,进行视网膜血管消化铺片的制作。[结果]光镜下,糖尿病大鼠的视网膜血管消化铺片在12周,始观察到视网膜的早期病变,表现为毛细血管周细胞的形态学变化。4周时,糖尿病大鼠CRA的各血流参数与对照组无显著性差异;8周时,糖尿病大鼠的CRA的PSV及EDV显著下降;12周时,糖尿病大鼠的CRA的流速均显著低于对照组,而RI、PI则显著增高。[结论]在糖尿病早期,视网膜出现血管病变之前,视网膜血流动力学已经出现异常改变,并进行性加重。视网膜血流减少与血液灌注不良是糖尿病视网膜病变的重要发病原因。

MicroRNA155通过下调清道夫受体表达抑制巨噬细胞泡沫化形成

【目的】探讨microRNA-155(miR-155)对巨噬细胞泡沫化过程的影响及机制。【方法】实时定量PCR检测miR-155的表达,Western Blot方法检测巨噬细胞A类清道夫受体SR-A和B型清道夫受体CD36的表达,激光共聚焦显微镜观察miR-155对THP-1结合、摄取DiI标记氧化型低密度脂蛋白(DiI-oxLDL)能力的影响。【结果】80μg/mL的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)时间依赖性地诱导巨噬细胞miR-155表达上调。过表达miR-155抑制SR-A和CD36的表达,同时巨噬细胞结合、摄取DiI-oxLDL的能力明显降低。而反义-miR-155则明显上调SR-A和CD36的表达,同时巨噬细胞结合、摄取DiI-oxLDL的能力明显增强。【结论】MiR-155通过降低巨噬细胞SR-A和CD36的表达抑制巨噬泡沫细胞的形成。

ClC-3氯通道对H_2O_2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究C lC-3氯通道蛋白过表达对H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法蛋白免疫印迹法检测C lC-3蛋白表达;形态学方法、DNA琼脂糖电泳、MTT法和流式细胞仪观察和分析H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞形态学改变、DNA断裂、细胞存活率、凋亡率及C lC-3蛋白过表达对其影响。结果C lC-3蛋白过表达减轻H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞形态学改变、DNA断裂及细胞凋亡率,增加细胞存活。结论提示C lC-3氯通道蛋白过表达保护H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡。

中国新疆维吾尔族硫嘌呤甲基转移酶基因突变研究

目的研究硫嘌呤甲基转移酶(thiopurine S-methyltransferase,TPMT)在新疆维吾尔族中的基因突变频率.方法用等位基因特异性的PCR方法和限制性片断长度多态性的方法检测4种常见的导致酶活性降低的突变类型:TPMT*2,TPMT*3A,TPMT*3B和TPMT*3C.结果在160名维吾尔族中发现了1例TPMT*3A(A719G/G460A)杂合子、5例TPMT*3C(A719G)杂合子,TPMT*3A和TPMT*3C的等位基因频率分别是0.3%和1.6%.结论维吾尔族总的TPMT突变等位基因频率(1.9%)同中国其他民族相近;TPMT*3C是维吾尔族最主要的突变类型.

小檗碱及其亲脂性衍生物抑制恶性胶质瘤C6细胞的增殖及迁移与侵袭

【目的】考察小檗碱及其亲脂性衍生物对大鼠C6胶质瘤细胞增殖、迁移与侵袭的影响。【方法】合成四种小檗碱衍生物9-O-十二烷基小檗碱(B3)、9-O-十六烷基小檗碱(B4)、9-O-十八烷基小檗碱(B5)、9-O-苄基小檗碱(B6)。采用1H NMR、13C NMR及ESI-MS确证其结构。四唑盐(MTT)比色法检测化合物在不同浓度下作用24、48、72 h后对C6细胞增殖活性的影响;细胞划痕实验和transwell迁移实验检测对细胞迁移能力的影响,transwell侵袭实验检测对细胞侵袭能力的影响。【结果】MTT结果显示,衍生物抑制细胞增殖作用显著强于对照组与小檗碱组(P<0.05);其中,B3的抑制作用最强。划痕实验、transwell迁移与侵袭实验结果显示,与对照组比较,小檗碱及其衍生物能明显抑制C6细胞的迁移与侵袭(P<0.05);其中,B3与B4抑制作用最强。【结论】小檗碱的亲脂性衍生物能有效地抑制C6胶质瘤细胞的增殖、迁移与侵袭,为开发新的恶性胶质瘤治疗方法提供新的思路。

大鼠小脑颗粒神经元凋亡相关的差异表达基因ARNT2的克隆

【目的】研究凋亡与非凋亡大鼠小脑颗粒神经元(cerebellar granule neuron,CGN)细胞中基因表达的差异,克隆出与大鼠CGN凋亡相关的基因。【方法】用荧光差异显示聚合酶链反应(florescent differential display polymerase chain reaction,FDD PCR)从低钾诱导的大鼠CGN凋亡模型中筛选出差异表达序列标签(expressed sequence tag,EST),反向Northern blot杂交进一步验证后,用cDNA 5’末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA 5’Ends,5’RACE)克隆差异表达EST的目标基因,用RT-PCR及Western blot进一步验证目标基因mRNA 及蛋白质水平的表达差异。【结果】用FDD PCR筛选出5号差异表达EST,经反向Northern blot验证后,用5’RACE法成功地克隆到5号EST完整开放阅码框,序列同源性分析证实为大鼠基因ARNT2,RT-PCR及Western blot证实低钾诱导后ARNT2 mRNA与蛋白质水平的表达均显著地上调,统计学分析显示差异有显著性(P< 0.001)。【结论】ARNT2在低钾诱导的大鼠凋亡CGN中表达上调,提示ARNT2与CGN凋亡相关并在该过程中发挥重要作用。

氧葡萄糖剥夺-再恢复小鼠小胶质细胞的激活及Toll样受体9表达的变化

目的观察氧葡萄糖剥夺-再恢复(OGDR)对小鼠BV-2小胶质细胞的激活以及Toll样受体9(TLR9)表达的影响。方法采用OGDR法建立BV-2细胞缺氧、缺糖模型,以常氧培养的BV-2细胞作为对照。使用倒置相差显微镜观察BV-2细胞在OGDR后0、6、12、24、48、72 h形态的变化,CCK8法检测OGDR后不同时间点细胞存活率的变化,反转录PCR和Western Blot检测细胞内TLR9 mRNA和蛋白的表达。结果①OGDR后BV-2细胞由原来静止的分枝状变成激活的阿米巴状。②OGDR后,细胞存活率明显下降,0 h为对照组的(65.7±9.2)%;12 h下降至最低,为对照组的(44.8±2.3)%,后逐渐升高,48、72 h分别为对照组的(60.8±10.2)%、(72.3±10.0)%。③OGDR后,随着时间的延长,TLR9 mRNA表达逐渐升高,24 h达高峰,后逐渐降低,但72 h仍高于0 h时间点的表达。TLR9蛋白表达亦呈升高趋势,在72 h达高峰。对照组各时间点TLR9 mRNA、TLR9蛋白表达差异均无统计学意义。④相同时间点的比较,OGDR组OGDR后6～72 h,TLR9 mRNA表达均明显高于对照组(P<0.05,或P<0.01,);12～72 h,TLR9蛋白表达显著高于对照组(P<0.05,或P<0.01)。结论 OGDR后BV-2细胞被激活,其细胞内TLR9表达随着时间的延长逐渐增高,可能在脑缺血-再灌注后的炎性反应中,发挥重要作用。

广东连南汉族和瑶族儿童硫嘌呤甲基转移酶研究

目的:本文对硫嘌呤甲基转移酶（Thiopurine S-methyltransferase,TPMT）在广东连南地区健康汉族儿童（n=87）和瑶族儿童（n=126）中的活性分布和4种常见TPMT基因突变的等位基因频率进行研究。方法:采用高效液相色谱法测定红细胞的TPMT活性;采用等位基因特异性的PCR（allelespecific PCR,ASPCR）方法和限制性片断长度多态性（PCR-restrictionfragment length polymorphism,RFLP）的方法检测 TPMT2（G238C）、TPMT3A（A719G/G460A）、TPMT3B（G460A）和 TPMT3C（A719G）的等位基因频率。结果:健康汉族儿童和瑶族儿童的TPMT活性都呈正态分布,活性的平均值分别为13.01±2.80U·ml-1pRBC和13.54±3.89U·ml-1pRBC,两者的差异无显著性。在健康汉族儿童中只找到1例TPMT3C杂合子（该汉族儿童的TPMT活性为12.36U·ml-1pRBC）,没有找到TPMT2、TPMT3A和TPMT3B,汉族儿童总的TPMT基因突变频率是0.6％。在健康瑶族儿童中没有找到这几种突变。结论:广东连南地区汉族和瑶族儿童TPMT的活性分布和总的TPMT基因突变频率没有显著性差异。

注射用呋异丙苷的安全性实验

目的 观察注射用呋异丙苷的安全性。方法 选取NIH小鼠、新西兰兔和豚鼠分别进行急性毒性试验、过敏试验、肌肉刺激试验、血管刺激试验及溶血性试验。结果 呋异丙苷无过敏反应和溶血现象 ,对静脉血管及肌肉无刺激反应 ,NIH小鼠经尾静脉及腹腔注射LD50 分别为 130 9.2mg/kg和 170 7.4mg/kg。

五步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的肾纤维蛋白沉积的作用

目的观察五步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的兔肾纤维蛋白沉积的作用。方法用脂多糖(LPS)诱导的兔肾血栓模型作为本实验的研究方法。生理盐水作阴性对照组;尿激酶作阳性对照组。兔肾组织学检查及测定血浆FDP含量以观察五步蛇毒纤溶酶FⅡ对兔肾纤维蛋白沉积的溶解作用。结果阴性对照组,给药2、6h后,兔肾组织有大量的纤维蛋白的沉积,FDP含量分别为(7821±479)%和(8427±621)%;阳性对照组,给药2、6h后,肾组织有少量纤维蛋白的沉积,FDP含量分别为(13334±427)%和(21017±542)%。FⅡ分别以01mg·kg-1·h-1(低)、03mg·kg-1·h-1(中)、06mg·kg-1·h-1(高)3个剂量滴注。低剂量组的兔肾组织有纤维蛋白的沉积,但比阴性对照组减少;中剂量组的兔肾组织有少量纤维蛋白的沉积;高剂量组的兔肾组织几乎无纤维蛋白的沉积;血浆FDP含量在低、中和高剂量组均比阴性对照组增加,并有量效关系(P<005)。结论步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的兔肾纤维蛋白沉积有良好的降解作用。

吡格列酮对异氟醚麻醉引起的老年小鼠认知功能损伤的影响

目的:研究高选择性的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂吡格列酮(Pi)对异氟醚引起的老年小鼠认知功能障碍和脑内炎症细胞因子的影响。方法:136只11个月大的雄性C57BL/6J小鼠随机分成5组:对照组(Con)、异氟醚组(Iso)、吡格列酮(10 mg/kg)+异氟醚组(Pi10+Iso)、吡格列酮(20 mg/kg)+异氟醚组(Pi20+Iso)和单纯吡格列酮(20 mg/kg)组(Pi20)。各异氟醚处理组的小鼠吸入混合1.4%异氟醚的氧气2 h;Con和Pi20组的小鼠仅吸入氧气2 h。吡格列酮溶于1%的羧甲基纤维素钠(CMC),在小鼠吸入异氟醚或单纯氧气前2 h,按10 mg/kg或20 mg/kg灌胃,Con组和Iso组小鼠仅给予相同容量的1%CMC。在异氟醚处理结束后48h行恐惧记忆实验以检测小鼠的学习记忆功能;6 h时取部分小鼠分离皮质和海马行Western blotting检测PPARγ蛋白及ELISA法检测脑组织IL-1β和TNF-α水平。结果:与Con组比较,Iso组的僵住行为减少(P<0.05),海马IL-1β水平增加(P<0.05);与Iso组比较,Pi10+Iso组的僵住行为和PPARγ蛋白表达无明显变化(P>0.05),而Pi20+Iso组的僵住行为和PPARγ蛋白表达均明显增加(P<0.05)且海马中IL-1β水平降低(P<0.05)。各组海马和皮质TNF-α水平以及皮质中IL-1β水平无明显差异(P>0.05)。结论:吡格列酮可以减轻异氟醚引起的老年小鼠的认知功能障碍,并可以缓解异氟醚引起的小鼠海马IL-1β含量的增加。

实验性高血压所致的基底动脉结构改变及血管紧张素转换酶抑制剂的影响

探讨高血压大鼠基底动脉结构的变化及血管紧张素转换酶抑制剂对其的影响。选用易卒中型肾血管性高血压大鼠模型 ,分为高血压组、卡托普利治疗组、假手术正常血压对照组。分别于肾动脉狭窄术后 4、8、12周处死动物 ,取基底动脉 ,制片后分别用光镜和透射电镜观察 ,并进行体视学定量分析。术后 4周时高血压组基底动脉光镜下无明显形态学变化 ,8周和 12周时中膜厚度、壁腔比值均比同时期正常血压对照组增加 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;卡托普利治疗后中膜厚度、壁腔比值均小于高血压组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。术后 4周高血压组基底动脉平滑肌细胞间隙略增宽 ;术后 8周细胞器肿胀 ,部分溶解 ,间质轻度水肿 ;12周时平滑肌细胞肌丝变性、断裂、溶解 ,内质网扩张 ,线粒体部分空泡变性 ,细胞坏死。卡托普利组各时期超微结构改变不明显。表明高血压可致基底动脉肥厚和超微结构破坏 ,而卡托普利可以预防高血压所致的基底动脉结构破坏。

T_4 DNA连接酶介导的5’RACE法克隆大鼠Nor 1全长cDNA

目的:克隆75AEST全长cDNA序列。方法:抽提在25mmol/L KCl条件下培养7d的大鼠小脑颗粒神经元的总RNA后,用DNA连接酶介导的5’RACE法克隆75A表达序列标签(EST)cDNA5’端未知序列,其产物亚克隆到pGEM-Teasy后进行序列测定以及同源性分性。结果:首轮5’RACE扩增出2.5kb序列后,75A EST鉴定为神经来源孤儿受体1(Nor1)基因的部分序列;再经过二次轮5’RACE,我们首次克隆Nor-1的全长cDNA序列。结论:T_4DNA连接酶介导的5’RACE是一种效率较高的克隆mRNA5’端未知序列的好方法,为进一步研究Nor1在小脑颗粒神经元存活或分化过程中的作用奠定基础。

硫嘌呤甲基转移酶分子机制研究进展

硫嘌呤甲基转移酶（TPMT）在硫嘌呤类药物的体内代谢中起着关键作用,其活性水平与药物效应及毒副作用密切相关。TPMT活性具有遗传多态性和种族差异。TPMT酶活性降低或缺乏与其基因突变密切相关。对TPMT遗传多态性分子基础的研究具有重要意义。本文综述有关TPMT基因表达调控和TPMT基因突变的分子机制的研究进展。

扩张型心肌病与β_1受体自身抗体关系初探

目的 探讨抗 β1受体自身抗体与扩张型心肌病 (DCM)之间的关系。方法 以人心脏 β1受体细胞外第二环表位肽段作为抗原 ,应用酶联免疫吸附测定 (ELISA)技术 ,检测 2 8例DCM患者和 3 2例正常人血清中 β1受体的自身抗体。结果 DCM患者血清中有 13例 (4 6% )抗 β1受体自身抗体阳性 ,正常人血清中有 2例 (6% ) ,两组阳性率差异有显著性 (P <0 .0 1) ;DCM组自身抗体平均几何滴度为 1:92 ,显著高于正常对照组 1:2 0 (P <0 .0 1) ;DCM患者中自身抗体阳性者的抗体滴度在不同心功能间的分布差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。结论 DCM患者存在着