外周血循环细胞和三种肿瘤标志物检测对Ⅰ期子宫内膜癌的诊断价值

【目的】探讨外周血循环肿瘤细胞(CTC)和三种肿瘤标志物检测对Ⅰ期子宫内膜癌(EC)的诊断价值,为寻找一种无创的早期EC诊断方法提供科学依据。【方法】选取2016年5月至2021年11月期间,335例健康女性体检者(对照组)、291例子宫内膜良性病变患者(良性病变组)、268例Ⅰ期EC患者(EC组)为研究对象,抽取体检者,患者的术前静脉血液标本3.2 mL,采用免疫荧光杂交和染色技术测定CTC水平,乳胶增强免疫比浊法测定SAA水平,电化学发光法测定HE4、CA125水平,观察3组研究对象的CTC、SAA、HE4、CA125阳性率及水平差异,比较CTC、SAA、HE4、CA125、(SAA+HE4+CA125)、(CTC+SAA+HE4+CA125)检测对Ⅰ期EC诊断的灵敏度、特异度、符合率、阳性预测值、阴性预测值、约登指数和受试者工作特征(ROC)曲线面积(AUC)的差异。【结果】①CTC、SAA、HE4、CA125、(SAA+HE4+CA125)、(CTC+SAA+HE4+CA125)检测在EC组的阳性率均高于对照组和良性病变组,差异均具有统计学意义(P<0.01)。在良性病变组中,(CTC+HE4+SAA+CA125)检测的阳性率高于其他检测指标,与HE4、CTC检测比较,差异具有统计学意义(χ^(2)=8.58,P=0.003;χ^(2)=33.26,P<0.001)。在EC组中,(CTC+HE4+SAA+CA125)检测的阳性率高于其他检测指标,与CTC、SAA、HE4、CA125、(SAA+HE4+CA125)检测比较,差异具有统计学意义(P<0.001)。②EC组的CTC、SAA、HE4、CA125表达水平最高,与对照组、良性病变组比较,差异具有统计学意义(P<0.001)。③(CTC+SAA+HE4+CA125)检测诊断Ⅰ期EC的灵敏度和符合率度最高,阴性预测值和约登指数最大。④CTC、SAA、HE4、CA125、(SAA+HE4+CA125)、(CTC+SAA+HE4+CA125)检测的AUC分别为0.86、0.81、0.75、0.78、0.82、0.95。【结论】(CTC+SAA+HE4+CA125)检测对诊断Ⅰ期EC具有较高的灵敏度、符合率、阴性预测值、约登指数,较大的AUC,是一种诊断早期EC的较佳组合模式。

巨细胞胶质母细胞瘤的临床病理观察及分子遗传分析

目的 探讨巨细胞胶质母细胞瘤(GCG)临床病理及分子遗传学特征。方法 回顾性分析2019年3月—2023年2月中山大学肿瘤防治中心收治的3例GCG患者的临床病理资料及分子遗传学特征,并结合相关文献进行复习。结果 3例GCG中,1例位于额叶,2例位于颞叶。组织学特征多为奇异性具有丰富嗜酸性细胞质的多核巨细胞,偶尔伴有丰富的网状蛋白纤维。免疫组织化学结果显示,2例肿瘤细胞表达GFAP、ATRX、INI1、p53;1例表达表皮生长因子受体(EGFR)、vimentin、Olig2;2例不表达CK;2例1p19q无缺失;Ki-67增殖指数分别为20%、40%和60%。分子检测发现3例异柠檬酸脱氢酶(IDH)1/2、2例H3F3A、2例BRAF及2例TERT为野生型;2例O^(6)-甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)发生甲基化。2例进行二代基因测序,其中1例检测到TP53基因错义突变及7号染色体发生扩增。另外1例未检测到致病性基因变异。检测到RB1基因无义突变,TP53及POLE基因临床意义不明的错义突变。随访期间1例发生两次局部复发。结论 GCG是一种罕见的中枢神经系统肿瘤,具有巨型瘤巨细胞等独特的组织学形态,及一定特征的免疫表型及分子遗传学,需与类似形态的胶质肉瘤及伴有间变特征的多形性黄色瘤型星形细胞瘤等鉴别。

毛细胞型星形细胞瘤116例临床病理及分子遗传学特征分析

目的探讨毛细胞型星形细胞瘤(PA)临床病理及分子遗传学特征,分析预后相关因素。方法回顾性分析116例PA患者临床病理随访资料及治疗信息,分析各指标预后意义。结果116例PA主要临床表现为头晕头痛和共济失调。免疫组化结果显示GFAP、Olig-2、ATRX、S-100阳性表达,IDH1阴性表达,NeuN大部分阴性表达,Ki-67增殖指数低,p53蛋白呈弱阳性或阴性表达,1p/19q绝大部分无缺失。KIAA1549-BRAF融合基因阳性率在年龄和肿瘤部位的差异有统计学意义(P<0.05)。Log-rank单因素分析结果显示,肿瘤切除率是影响本组患者PFS的主要因素(P<0.05),年龄,性别,肿瘤部位、KIAA1549-BRAF融合基因对生存率的影响无统计学意义。Cox回归分析结果显示,肿瘤切除率仍是影响PFS的独立危险因素(P<0.05)。结论手术完整切除是PA首选治疗方式。分子遗传学特征及正确的组织形态学判断对于PA的精确诊断具有重要作用。

荧光原位杂交技术检测滑膜肉瘤SS18基因易位的诊断价值

【目的】探讨荧光原位杂交(FISH)技术检测石蜡包埋滑膜肉瘤组织中染色体易位的病理学辅助诊断意义。【方法】收集168例肿瘤标本,其中75例确诊滑膜肉瘤、33例疑似滑膜肉瘤,采用LSI SS18(18ql1.2)双色断裂分离探针检测SS18基因易位状况;60例非滑膜肉瘤作为阴性对照,制定SS18基因易位阳性的判断阈值。【结果】165例肿瘤标本成功进行FISH检测,其中129例(78.2%)SS18基因二体性,36例(21.8%)SS18基因多拷贝数。根据建立的SS18基因易位阳性的判断阈值,确诊滑膜肉瘤的病例中85.1%(63/74)可检测到SS18基因易位,余11例结合形态学及免疫组化结果仍诊断为SS;疑似滑膜肉瘤的病例中71.1%(22/31)可检测到阳性结果,余9例最终诊断为其他肿瘤。【结论】FISH法检测SS18基因易位是滑膜肉瘤诊断的有效辅助手段,滑膜肉瘤的最终诊断及鉴别诊断需结合形态学、免疫组化及分子生物学检测的综合分析。

IgH基因单克隆重排检测及其在B细胞性非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用

目的:建立准确可靠、操作性强、适用于临床实际工作的免疫球蛋白重链(immunoglobulin heavychain,IgH)基因单克隆重排检测方法,用于B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-cell non-Hodgkin lymphoma,B-NHL)的辅助诊断。方法:采用骨架区(framework region,FR)引物FR2、FR3和重链连接区(joining region of heavy chain,JH)引物LJH、VLJH组合、A管+B管模式、半巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法对121例B-NHL、58例T细胞性非霍奇金淋巴瘤(T-cell non-Hodgkin lymphoma,T-NHL)和19例淋巴结反应性增生的石蜡组织进行IgH基因单克隆重排检测,分析IgH基因单克隆重排检出率在B-NHL组、T-NHL组和淋巴结反应性增生组中的差异,以及B-NHL中联合应用FR2和FR3与单独应用FR2、FR3之间IgH基因单克隆重排检出率的差异。结果:118例成功检测的B-NHL中,IgH基因单克隆重排检出率为81%(96/118);54例成功检测的T-NHL中,IgH基因单克隆重排检出率为4%(2/54);19例成功检测的淋巴结反应性增生中未检出IgH基因单克隆重排。B-NHL组与T-NHL组、淋巴结反应性增生组相比,IgH基因单克隆重排检出率差异具有显著性(P<0.05)。B-NHL中,FR2基因单克隆重排检出率为58%(68/118),FR3基因单克隆重排检出率为55%(65/118),联合应用FR2和FR3,IgH基因单克隆重排检出率为81%(96/118),联合应用FR2和FR3与单独应用FR2、FR3的检出率有显著差异(P<0.05)。结论:采用FR2、FR3、LJH及VLJH引物组合、A管+B管模式和半巢式PCR法进行石蜡组织IgH基因单克隆重排检测,简单易行,结果准确可靠,阳性率较高,可用于临床B-NHL的辅助诊断。

血清miR-103可作为乳腺癌潜在的诊断标记物

目的探究血清miR-103在乳腺浸润性癌患者中表达的诊断价值及其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法搜集50例首治的乳腺癌患者的血清及相应的石蜡包埋组织和50例正常女性的血清作为对照,从血清中提取总RNA,运用荧光定量PCR的技术检测miR-103在乳腺癌和正常人血清中的表达情况。运用SPSS16.0软件行t检验、ANOVA、χ2检验、秩和检验及MedCalc软件进行受试者工作特征曲线(ROC)分析。结果与对照组相比,miR-103在乳腺癌患者血清中表达量显著上调(P<0.01),血清中miR-103上调的相对表达量与乳腺癌临床分期(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.05)相关。miR-103所得ROC曲线下面积为84.3%,区别乳腺癌和正常人的敏感性和特异性分别为84%、70%。结论血清miR-103可作为乳腺癌一项潜在的诊断标记物,并对乳腺癌的临床病理特征具有提示作用。

Ig及TCR克隆性重排在Castleman病诊断中的应用

目的探讨Castleman病克隆性重排检测及其在鉴别诊断中的应用。方法收集组织病理学确诊的Castleman病38例，利用根据BIOMED一2引物体系设计的IdentiClone系列淋巴瘤基因重排检测试剂盒及Genescanning法进行免疫球蛋白（Ig）和T细胞受体（TCR）基因克隆性重排检测及结果分析。结果38例CD病理组织学分型为透明血管型25例，浆细胞型9例及混合型4例。根据临床病变累及部位为局限型21例，多中心型17例。克隆性分析结果，10例CD克隆性重排阳性，其中6例为Ig克隆性重排，2例为TCR基因重排，2例为Ig和TCR基因双重排。2例MCD为IgH和／或Igk单克隆重排，随访13及21个月后发展为滤泡性淋巴瘤及弥漫大B细胞淋巴瘤。结论大多数cD的淋巴细胞为多克隆性起源，Ig和／或TCR基因发生克隆性重排提示单克隆性增生具有恶性转化趋势和潜能，对推测预后有一定帮助。

二代测序在子宫内膜癌分子分型的临床应用

[目的]为了探索杂交捕获二代测序技术在子宫内膜癌分子亚型的临床应用。[方法]收集中山大学附属肿瘤医院经病理确诊的子宫内膜癌112例,均进行基于1021个基因panel的杂交捕获二代测序检测,分析各分子亚型的分子变异谱及与临床病理特征之间的关系。[结果]DNA聚合酶ε(POLE)突变型8例(7.1%),错配修复功能缺陷型34例(30.4%),TP53突变型26例(23.2%),非特异性分子谱型44例(39.3%),4个亚型肿瘤突变负荷中位数分别为252.0、38.4、5.8及5.4 Muts/Mb。子宫内膜癌各分子亚型之间与患者临床分期、肌层浸润深度及是否有脉管内癌栓与淋巴结转移等临床病理特征无统计学差异。PTEN(75.5%)、PIK3CA(66.7%)、ARID1A(55.9%)、TP53(40.2%)、NF1(29.4%)为子宫内膜癌最常见的突变。[结论]对子宫内膜癌进行二代测序,可同时获悉其分子分型各项指标,有效筛查Lynch综合征、各亚型分子变异谱、为免疫治疗及靶向治疗提供指导,并有助于分子遗传特征的进一步积累及探索。

外周血循环肿瘤细胞、人附睾蛋白4、糖类抗原199检测在子宫内膜样腺癌筛查及分期预测中的价值

目的探讨术前外周血循环肿瘤细胞(CTC)、人附睾蛋白4(HE4)、糖类抗原199(CA199)单独和联合检测检查在子宫内膜样腺癌筛查及分期预测中的临床价值。方法选取2017年3月至2022年1月于中山大学肿瘤防治中心体检或就诊的293例子宫内膜正常体检者(正常组)、359例无非典型性子宫内膜增生患者(良性组)、381例子宫内膜样腺癌患者(恶性组)作为研究对象。观察3组及恶性组各分期CTC数量及HE4、CA199表达水平,以及单独和联合检测的阳性率,分析CTC、HE4、CA199单独和联合检测对子宫内膜样腺癌的诊断效能及分期的预测价值。结果3组CTC数量及HE4、CA199表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);恶性组CTC数量及HE4、CA199表达水平高于良性组,差异有统计学意义(P<0.05);CTC、HE4、CA199单独和联合检测阳性率高于良性组和正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。恶性组各分期CTC数量及HE4表达水平差异有统计学意义(P<0.05),而各分期CA199表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。恶性组各分期CTC、CA199、CTC+HE4、CTC+CA199、CTC+HE4+CA199检测阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CTC+HE4+CA199检测组合对子宫内膜样腺癌诊断的受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积、灵敏度、符合率、约登指数等高于其他检测组合及单项检测,CTC+HE4+CA199联合检测的曲线下面积、灵敏度和特异度分别为0.945、87.93%、92.79%。结论CTC+HE4+CA199联合检测对子宫内膜样腺癌筛查和分期预测的临床价值较高。

IDH突变和1p/19q共缺失型少突胶质细胞瘤临床病理特征和预后分析

目的探讨I D H突变和1p/19q共缺失型少突胶质细胞瘤的临床病理特征及预后相关影响因素。方法收集54例IDH突变和1p/19q共缺失型少突胶质细胞瘤病例,分析其临床病理特点,包括年龄、组织学分级和肿瘤部位等因素对无进展生存期和总生存期的影响。结果 54例患者中,肿瘤发生于1个脑叶者46例,发生于2个脑叶以上者8例。肿瘤组织学WHO分级2级12例,3级42例。FISH检测显示54例均为1p/19q共缺失;免疫组织化学检测显示Olig2均为弥漫强阳性;GFAP均为阳性;p53有6例强阳性;48例患者ATRX未缺失;Ki-67增殖指数5%~60%。Sanger测序显示54例均发生IDH基因突变(40例为IDH1突变,14例为IDH2突变),33例发生TERT启动子突变。16例在治疗过程中发生复发及转移。单因素分析显示,手术后复发转移间隔时间超过2年可以延长患者无进展生存和总生存期。54例患者平均无进展生存期33.5个月,平均总生存期40.7个月。结论 IDH突变和1p/19q共缺失型少突胶质细胞瘤术后联合精准放化疗降低了进展风险,手术后复发转移间隔时间与该型患者预后相关。

结直肠癌微卫星不稳定状态与KRAS、NRAS、BRAF基因突变和临床病理特征及预后的关系

目的 探讨结直肠癌(CRC)的微卫星不稳定(MSI)状态与KRAS、NRAS、BRAF基因突变、临床病理特征及预后的相关性。方法 选取2015年3月至2020年12月于汕头市中心医院和中山大学肿瘤防治中心收治的经病理确诊为CRC的861例患者作为研究对象,检测其4种错配修复(MMR)蛋白表达、MSI状态,KRAS、NRAS、NRAS基因突变情况。分析MMR蛋白表达、KRAS、NRAS和BRAF基因突变与CRC患者临床病理特征的相关性,MMR蛋白表达与KRAS、NRAS和BRAF基因突变的相关性,并采用COX回归模型探讨CRC患者2年内死亡的独立影响因素。结果 CRC中的MMR蛋白表达总缺失率为12.08%,KRAS基因突变率为42.28%,NRAS基因突变率为2.21%,BRAF基因突变率为6.50%。不同年龄、肿瘤部位、组织学类型、肿瘤最大径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移状态、CEA水平的患者MMR蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别、肿瘤部位、组织学类型、分化程度、TNM分期、淋巴结转移状态、CA199水平的患者KRAS基因突变比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同CEA水平的患者NRAS基因突变比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤部位、组织学类型、肿瘤最大径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移状态的患者BRAF基因突变比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MMR蛋白表达与KRAS基因突变呈负相关(r=-0.137,P<0.001)。MMR蛋白表达与NRAS基因突变不相关(r=-0.007,P=0.834)。MMR蛋白表达与BRAF基因突变呈正相关(r=0.162,P<0.001)。淋巴结转移、KRAS突变、BRAF突变、MSI-H是CRC患者2年内死亡的独立影响因素。结论 MSI状态、KRAS、NRAS、BRAF基因突变与CRC的临床病理特征具有相关性,上述指标的检测有助于CRC的生物学行为分析及预后判断。

散发性结直肠癌微卫星不稳定状态与错配修复蛋白表达缺失及临床病理特征的相关性

目的:探讨散发性结直肠癌微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)情况及其与错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白MLH1、MSH2、MSH6、PMS2表达缺失的相关性,并总结MSI散发性结直肠癌的临床病理学特征。方法:多重荧光PCR法检测散发性结直肠癌肿瘤组织DNA的微卫星不稳定性,免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)S-P法检测散发性结直肠癌肿瘤组织MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白的表达缺失,分析MSI发生与MMR蛋白表达缺失及临床病理特征的相关性。结果:75例散发性结直肠癌检出MSI 21例(28%),包括MSI-H 19例、MSI-L 2例,其他54例(72%)为MSS。检出MMR蛋白表达缺失16例(21.33%),其中15例(93.75%)为MSI-H、1例(6.25%)为MSS;MMR蛋白表达59例(78.67%),其中4例(6.78%)为MSI-H、2例(3.39%)MSI-L,其他53例为MSS。MSI组MMR蛋白缺失率(15/21,71.43%)显著高于MSS组(1/54,1.9%)(P<0.01)。MSI与患者年龄,是否黏液腺癌,肿瘤有无远处转移有关(P<0.01),其中MSI-H好发于年龄>50岁、肿瘤无远处转移、MMR蛋白缺失人群,且类型以黏液腺癌为主。结论:散发性结直肠癌肿瘤组织中MSI发生率高于MMR蛋白缺失率,并且MSI-H的散发性结直肠癌转移风险较低、预后较好。检测MSI状态对提高结直肠癌的预防、诊断和治疗水平,降低结直肠癌的发病率和病死率有着重要意义。

EGFR敏感突变的晚期非小细胞肺癌患者EGFR-TKIs原发性耐药相关基因突变分析

背景与目的活化的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变鉴定和EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-tyrosinekinaseinhibitors,EGFR-TKIs)的应用已经极大地改变了非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)的治疗策略。然而,耐药性的产生限制了EGFR-TKI治疗的长期疗效。本研究旨在探讨EGFR激活突变的晚期NSCLC患者中8种驱动基因的突变与EGFR-TKIs原发耐药性的相关性。方法回顾分析2004年4月至2011年3月,在中山大学肿瘤防治中心首次接受EGFR-TKIs治疗的416例Ⅲ/Ⅳ期或复发的NSCLC患者的临床资料。通过常规临床技术检测到多种与EGFR-TKIs疗效相关的基因突变,包括BIM、ALK、KRAS、PIK3CA、PTEN、MET、IGF1R和ROS1基因突变。采用Kaplan-Meier生存分析和logrank检验,比较不同组间的无进展生存(progression-free survival,PFS)和总生存(overall survival,OS)。采用Cox比例风险回归模型计算与PFS和OS相关的多变量校正危险比(hazard ratios,HRs)及其95%置信区间(confidence intervals,CIs)。结果在所调查的患者中,169例NSCLC患者携带EGFR敏感突变。PTEN缺失的EGFR突变患者比PTEN正常的EGFR突变患者的PFS和OS短(PFS,P=0.003;OS,P=0.034)。在EGFR信号通路和耐药基因的联合分子分析中发现,EGFR突变患者的EGFR信号通路也发生了改变,且存在耐药基因的患者比没有耐药基因的患者的PFS更差(P<0.001)。多因素校正后,Cox比例风险回归模型确定PTEN缺失(HR=4.29,95%CI:1.72–10.70)和低PTEN表达(HR=1.96,95%CI:1.22–3.13)、MET FISH+(HR=2.83,95%CI:1.37–5.86)是EGFR-TKIs治疗患者PFS的独立预后因素。结论癌基因突变可能是EGFR-TKIs原发耐药性的原因之一。

复发转移性胃癌患者HER2基因扩增、蛋白表达及预后的关系

目的探讨复发转移性胃癌肿瘤原发灶HER2基因扩增与蛋白表达的相关性,及与临床病理特征和预后的关系。方法收集237例复发转移性胃或胃食管交界处腺癌肿瘤原发灶标本,分别应用荧光原位杂交法(FISH)和免疫组织化学法(IHC)检测HER2基因扩增和蛋白的表达。结果 FISH检测HER2基因扩增18.1%(43/237);IHC检测HER2蛋白表达-、1+、2+、3+分别为160例(67.5%)、34例(14.3%)、17例(7.2%)和26例(11.0%)。HER2总体阳性率(FISH+或IHC 3+)为19.0%(45/237)。FISH与IHC方法总的符合率较好,达92.4%(219/237),呈显著正相关(r=0.696,P<0.01)。HER2更常见于胃食管交界处腺癌、肠型胃癌及分化较好的胃癌。胃癌HER2阳性表达与肝、肺等广泛的转移相关。对215例接受全身化疗的患者进行生存分析显示,HER2阳性状态与较差的生存时间相关。结论胃癌HER2基因扩增及蛋白表达具有较好的一致性。胃癌HER2的表达与预后差相关。

穿心莲内酯对人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨穿心莲内酯（Andro）对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖及细胞周期的影响,为其应用于乳腺癌的治疗提供理论基础。方法 将实验分为对照组及Andro组,Andro组加入终浓度为10、20、40、60、80、100μmol/L的Andro[Andro粉末先用DMSO溶解,再用培养基稀释至细胞处理浓度,控制DMSO的含量为0.1%（v/v）],对照组仅用0.1%DMSO溶剂。采用CCK8检测Andro不同浓度及不同处理时间（24、48、72 h）对MCF-7细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测两组细胞周期分布情况;应用预胶化淀粉细胞块制作方法,将两组细胞制作成石蜡切片,应用免疫组织化学方法检测切片中MCF-7细胞增殖相关的核抗原Ki67及细胞周期相关抗原周期素D1（Cyclin D1）及周期素依赖性激酶4（CDK4）的表达。结果 CCK8检测结果显示Andro浓度为10、20、40、60、80、100μmol/L显著抑制MCF-7细胞的增殖,IC_（50）值为25μmol/L,并且在IC_（50）浓度下24、48、72 h Andro均显著抑制MCF-7细胞的增殖,并随着作用时间的延长,抑制作用越明显。细胞周期检测结果 Andro处理后G_0/G_1期细胞数量达（75.51±1.56）%,与对照组（49.16±1.35）%比较,显著升高（P〈0.05）,而S期的细胞数量仅为（12.69±0.87）%,与对照组（44.07±0.98）%比较,显著降低（P〈0.05）。细胞块免疫组织化学结果显示对照组与Andro组Ki67的表达分别为（91.77±2.75）%、（78.05±2.61）%,显著降低（P〈0.05）,Cyclin D1的IOD值分别为（2.14±0.17）×10^7、（1.27±0.22）×10^7,显著降低（P〈0.05）,CDK4的IOD值分别为（1.14±0.014）×10^7、（1.16±0.024）×10^7,无明显差异。结论 Andro可通过抑制MCF-7细胞的增殖及抑制Cyclin D1的表达从而阻断MCF-7细胞的细胞周期进程从而发挥抗肿瘤作用,Andro不能通过影响CDK4的表达发挥阻断MCF-7细胞周期。

慢病毒介导shRNA抑制垂体腺瘤PTTG基因表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响

【目的】观察慢病毒介导的sh RNA对GH3和At T20型垂体腺瘤中垂体肿瘤转化基因(PTTG)表达的抑制作用,以及对肿瘤细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制探讨。【方法】筛选最佳抑制效果的干扰序列构建PTTG基因sh RNA的慢病毒表达载体,转染GH3和At T20型垂体腺瘤细胞。流式细胞仪分析细胞转染效率,RT-PCR和Western blot检测细胞PTTG基因m RNA和蛋白的表达水平,MTT和Ed U法分别检测靶向PTTG的sh RNA对肿瘤细胞增殖生长的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期变化。Transwell小室检测细胞侵袭能力的变化,基因芯片筛查干扰后的基因表达谱差异并进行生物信息学分析。【结果】细胞转染表达PTTG基因sh RNA的慢病毒载体后,能显著抑制肿瘤细胞PTTGm RNA和蛋白的表达,与对照组相比有统计学差异(P<0.05),细胞的增殖能力受到明显抑制,且增殖抑制效应具有时间依赖性;细胞生长显著变慢,G0/G1期细胞比例显著增高,克隆形成能力下降,细胞侵袭能力也显著减弱,均与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。PI3K等信号通路的基因表达也发生显著变化。【结论】慢病毒介导sh RNA沉默PTTG基因表达可能是通过对PI3K信号通路的调控,抑制了GH3和At T20垂体腺瘤细胞的生长,抑制肿瘤细胞的体外增殖和侵袭能力。

PTEN基因缺失与EGFR突变型非小细胞肺癌患者EGFR-酪氨酸激酶抑制剂疗效的关系

目的 探讨PTEN基因缺失与EGFR突变型非小细胞肺癌患者EGFR酪氨酸激酶抑制剂的疗效关系。方法收集169例使用EGFR-TKI的EGFR基因突变型非小细胞肺癌,采用LSI PTEN/CEP10探针对组织标本进行PTEN基因拷贝数的检测,并分析PTEN基因缺失与患者临床病理学及EGFR-TKI的疗效关系。结果在169例NSCLC病例中5例（3.0%）PTEN基因杂合性缺失,杂合性缺失组与非缺失组ORR（0.0%对42.5%）及DCR（60.0%对92.5%）无显著差异（P分别0.078及0.058）。PTEN基因缺失组PFS及OS分别为4.9月及13.2月,显著低于非缺失组PFS 12.1月（HR=3.64,95%CI=1.57~9.00,P=0.002）及28.1月（HR=2.86,95%CI=1.04~7.89,P=0.034）。结论 PTEN基因缺失可能作为EGFR突变型非小细胞肺癌患者EGFR-TKI原发性耐药的有效指标。

H3K27M突变型弥漫性中线胶质瘤39例临床病理特征及预后分析

目的探讨H3K27M突变型弥漫性中线胶质瘤(diffuse midline glioma,DMG)的临床病理特征、免疫表现及分子病理学改变,并分析其预后相关因素。方法选取2017年11月至2021年1月就诊于中山大学肿瘤防治中心的39例DMG患者,分析其临床病理特点,根据年龄、发病部位和组织病理学分级等因素分层,结合患者的治疗和随访资料,分析不同因素对患者预后的影响。结果39例DMG患者中,男24例,女15例,发病年龄28(3~69)岁。临床表现:累及丘脑的肿瘤多表现为头痛、恶心或嗜睡,累及脑干表现为步态不稳、肢体乏力,累及脊髓可表现为下肢麻木疼痛、无力、无法直立行走。组织病理学形态多样,主要表现为高级别胶质瘤,少见情况下呈毛细胞型星形细胞瘤和间变性室管膜瘤。肿瘤组织病理学分级WHOⅠ级2例(5.1%),Ⅱ级1例(2.6%),Ⅲ级2例(5.1%),Ⅳ级34例(87.2%)。WHOⅠ级患者年龄均>20岁,组织病理学呈毛细胞型星形细胞瘤样特征。39例行H3K27M免疫组织化学检测,38例弥漫表达H3K27M,1例仅个别瘤细胞表达;23例(82.1%,23/28)MGMT阳性表达;26例(70.3%,26/37)p53强阳性;29例(80.6%,29/36)ATRX表达缺失;Ki-67阳性指数1%~60%。39例(包括1例H3K27M个别细胞表达者)行基因检测均显示H3F3A基因发生K27M突变。所有病例IDH1基因检测均为阴性。13例发生颅内及脊髓播散。39例患者平均总生存期(12.1±8.0)个月。Log-rank单因素分析结果显示,性别、组织病理学分级、颅内/脊髓播散转移是DMG患者总生存期的影响因素(P<0.05)。Cox回归分析结果显示,颅内/脊髓播散转移是DMG患者总生存期的独立影响因素(P<0.05)。结论H3K27M突变型DMG好发于儿童和青少年,呈浸润性生长,好发的中线部位是丘脑、脑干和脊髓。组织病理学可表现为WHOⅠ~Ⅳ级样肿瘤,毛细胞型星形细胞瘤样病变在成人中更多见。

HPV阳性患者基因分型及病毒负载量分析

目的研究广州地区宫颈人乳头状瘤病毒(HPV)的感染状况及基因型分布,并探讨病毒负载量与宫颈鳞状上皮内病变的关系。方法收集中山大学肿瘤防治中心2013年7月至2015年10月收治的1 105名女性的宫颈刷取物标本,采用表面等离子体谐振技术(SPR)检测HPV型别及负载量,同时行宫颈液基细胞学检查(LCT)。细胞学检查阳性患者加做阴道镜及病理活检。结果共检测出HPV阳性标本210例,感染率为19.00%。共检出23个基因型,包括16个高危型(HR-HPV)和7个低危型(LR-HPV)。单一高危型169例(15.29%),平均负载量为(170.59±85.91)m°;单一低危型20例(1.81%),平均负载量为(111.75±37.39)m°;HPV多重感染21例(1.90%)。单一HR-HPV阳性患者的平均病毒负载量显著高于阴性患者,差异有统计学意义(Z=-3.256,P=0.001)。结论 SPR和LCT联合检测有助于宫颈癌前病变的诊断,对进一步临床治疗有指导意义。

ALK基因在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)基因在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义。方法采用荧光原位杂交法(fluorescent in situ hybridization,FISH)检测ALK在213例HCC组织中的表达,并分析其与患者临床病理特征及预后的相关性。结果 213例HCC中无ALK基因重排阳性,28例存在ALK基因拷贝数增加(ALK gene copy number gain,ALK-CNG)现象。ALK-CNG阳性表达与HCC患者年龄、性别、AJCC分期、Child-Pugh评分及复发情况均无明显相关性(P>0.05),与HCC患者预后相关(P=0.048),晚期患者中ALKCNG阳性组与阴性组的无进展生存率差异有统计学意义(P=0.007)。单变量和多变量Cox回归分析显示,ALK-CNG阳性是HCC患者的独立预后预测指标(P=0.046)。结论 HCC患者ALK基因重排阳性少见,但存在ALK基因拷贝数增加现象,且可能是影响HCC患者预后的不良因素。