人羊膜间充质细胞的神经生物学特性及其治疗帕金森模型小鼠的实验研究

目的评价人羊膜组织来源间充质细胞(hAMCs)的神经生物学特性及其脑移植对帕金森病(PD)小鼠的治疗观察。方法应用免疫细胞化学染色,通过间充质干细胞、神经干细胞、多巴胺能神经元和神经发生相关标记物Vimentin、STRO-1、nestin、CD133、β-tubulin、TH、DAT、Ngn2和mash-1抗体,鉴定在hAMCs中的表达;RT-PCR检测神经干细胞标记物Vimentin及nestin mRNA在hAMCs的表达。C57BL/6小鼠MPTP(i.p.)建立PD模型,将hAMCs移植到右侧纹状体内。通过自发运动和转杆实验以及抗人线粒体和TH抗体在脑纹状体免疫组织化学形态学,评价hAMCs对PD小鼠的治疗作用。结果经神经细胞培养基诱导培养后的hAMCs表达间充质干细胞、神经干细胞、多巴胺能神经元和上述所有与神经发生相关的特异性标记物。hAMCs移植后的PD小鼠自发运动次数增加(P<0.05),转杆时间延长(P<0.05)。结论hAMCs经体外诱导培养后具有神经细胞特性,移植到PD模型小鼠纹状体内能够改善MPTP所致的运动功能损伤。

人羊膜组织细胞的神经干细胞特性形态学研究

目的:利用形态学研究方法,探讨神经干细胞特异性标志蛋白的表达和增殖分化特性,鉴定人类羊膜组织中神经干/前体细胞的存在。方法:利用免疫组织化学法,检测人类羊膜组织和培养人类羊膜细胞中nestin、musashi-1、vimentin和PSA-NCAM等神经干细胞特异性标志蛋白的表达,利用BrdU掺入实验鉴定羊膜组织来源神经干/前体细胞的增殖分化能力。结果:免疫组织化学检测证实人羊膜组织表达nestin、musashi-1、CD133和vimentin等神经干细胞特异性标志蛋白,主要分布于羊膜组织的间质层。培养羊膜细胞的免疫荧光化学染色显示nestin、musashi-1、vimentin和PSA-NCAM阳性细胞的存在。BrdU掺入的组织形态学实验显示培养羊膜细胞中存在BrdU标记阳性细胞,其中具有BrdU与nestin、musashi-1、vimentin双标阳性细胞,显示羊膜细胞中存在具有增殖活性神经干细胞标记蛋白表达阳性细胞;而BrdU与β-tubullinIII、TH和GFAP双标阳性细胞的存在,表明神经元和胶质细胞是由培养羊膜细胞增殖分化的。结论:羊膜组织中存在神经干细胞特异性标记蛋白Nestin、Musashi-1、CD133、PSA-NCAM和Vimentin表达阳性细胞,BrdU掺入的组织形态学结果不仅证实羊膜细胞中Nestin、Musashi-1、Vimentin阳性细胞具有增殖活性,而且其中存在已分化的神经元和胶质细胞,提示羊膜组织细胞内存在神经干/前体细胞。

人羊膜组织细胞神经生物学特性形态学研究

目的利用神经干细胞特异性标志蛋白,鉴定人羊膜组织中神经细胞的存在,从组织和细胞形态学角度探讨羊膜组织细胞的神经生物学特性。方法利用TH、AchT、NeuN、MAP2、CNPase、MBP和GFAP单克隆抗体,通过免疫组织化学、免疫细胞化学和免疫荧光细胞化学技术方法,检测羊膜组织细胞中的多巴胺能神经元、胆碱能神经元、神经元、少突胶质细胞和胶质细胞。结果羊膜组织细胞中存在TH、AchT、NeuN、MAP2、CNPase、MBP和GFAP等神经细胞特异性标记蛋白表达阳性细胞。结论实验结果提示羊膜组织细胞内可能存在多巴胺能神经元、胆碱能神经元少突胶质细胞和星形胶质细胞等。这对细胞移植治疗帕金森氏病、老年痴呆和多发性硬化等神经系统疑难疾病将具有一定的临床意义。

地黄苏合香合剂对轻微肝性脑病模型大鼠治疗的实验研究

目的观察中药地黄、苏合香(地苏合剂)对四氯化碳(CCl4)致轻微肝性脑病(MHE)大鼠模型的治疗作用。方法采用灌胃给予CCl4致化学性肝损伤大鼠模型,通过开场实验和Morris水迷宫实验,观察地苏合剂低、中、高3个剂量组对模型鼠自发运动、空间记忆能力的影响,并检测肝脾及血液生化学指标;阳性药采用乳果糖。结果造模12周后发现MHE模型鼠的自发运动明显减少,Morris水迷宫空间记忆能力明显下降;服用地苏合剂12周后高剂量治疗组模型鼠的自发运动和空间学习记忆明显改善(P<0.01,P<0.05);同时血中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和血氨(Amm)浓度明显低于未治疗组(P<0.05,P<0.01)。结论地苏合剂对轻微肝性脑病模型大鼠有明显的治疗作用。

人类羊膜细胞表达神经干细胞特异性蛋白研究

目的利用神经干细胞特异性标志蛋白鉴定人类羊膜组织中多分化潜能神经前体细胞的存在。方法利用免疫组织化学法检测人类羊膜组织和培养人类羊膜细胞中巢蛋白(nestin)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、musashi-1、波形蛋白(vi mentin)和PSA-NCAM等神经干细胞特异性标志蛋白的表达。结果人羊膜组织中存在nestin/GFAP双阳性细胞,此外,还表达musashi-1、vi mentin和PSA-NCAM等神经干细胞特异性标志蛋白;培养羊膜细胞中存在vi mentin和PSA-NCAM阳性细胞,以及nestin/GFAP双阳性细胞。结论羊膜组织和培养羊膜细胞中有神经干细胞特异性标记蛋白的表达。

褪黑素与神经退行性疾病相关的研究进展

氧化应激和线粒体功能失调被认为是神经退行性疾病如阿尔茨海默病和帕金森病共同的病理生理机制。随着年龄的增加,褪黑素水平明显的降低可能是年老人体内氧化应激增加的原因之一,因此褪黑素的神经保护作用日益引起关注。本文就近年褪黑素抗神经退行性疾病的机制,包括自由基清除作用、抑制凋亡、神经保护作用、神经营养作用、抗β-淀粉样蛋白神经毒性、调节炎症反应和调节细胞骨架蛋白等方面作一综述。

CCK-8和MTS法检测人羊膜上皮细胞增殖的比较

目的探讨CCK-8、MTS两种不同的四唑盐试剂在羊膜上皮细胞增殖检测中的最适实验条件,并比较两者细胞毒性。方法取体外培养对数生长期羊膜上皮细胞,用完全培养基（DMEM/F12＋10%胎牛血清）配制成不同浓度的细胞悬液加入96孔板中培养24 h,分别加入CCK-8、MTS后于450 nm、492 nm波长处测定光密度（OD）。在同一细胞浓度下,根据同一波长不同时间检测的OD确定CCK-8的最佳孵育时间。取体外培养的对数生长期羊膜上皮细胞分别用DMSO、CCK-8、MTS处理1 h、2 h、3 h和4 h后,继续培养24 h,在450 nm处以CCK-8检测细胞增殖,并通过台盼蓝染色计数活细胞数。结果 CCK-8法的最佳波长为450 nm,MTS法的最佳波长为492 nm。CCK-8法灵敏度稍低于MTS法。1~4 h内,CCK-8试剂与待检测细胞最佳孵育时间为4 h。CCK-8法对细胞增殖影响及细胞毒性均小于MTS法。结论 CCK-8法是一种更为方便、细胞毒性作用较小的试剂。

地黄苏合香合剂对早期肝性脑病大鼠一氧化氮、一氧化氮合酶、肿瘤坏死因子-α的影响

目的观察中药地黄、苏合香(地苏合剂)对CCl4致早期肝性脑病(HE)大鼠模型的治疗作用。方法采用灌胃给予CCl4致化学性肝损伤大鼠模型,检测大鼠血清一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及大鼠海马肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果模型组大鼠血清NO含量、NOS活性以及海马TNF-α水平较对照组明显升高(P<0.01);服用地苏合剂12周后高剂量治疗组模型鼠血清NO含量、总NOS活性以及海马TNF-α水平较模型组均明显降低(P<0.01)。结论地苏合剂可以通过降低早期HE大鼠血清NO含量、总NOS活性以及海马TNF-α水平延缓HE的发生、发展。

地黄苏合香合剂对早期肝性脑病大鼠脑内外周型苯二氮受体的影响

目的观察中药地黄、苏合香(地苏合剂)对早期肝性脑病大鼠脑皮层线粒体外周型苯二氮受体(PBRs)活性的影响。方法采用CCl4致化学性肝损伤大鼠模型,阳性药组给予乳果糖6 g/kg,治疗组分别给予不同剂量的地苏合剂,同位素法检测PBRs。结果模型组PBRs结合活性较对照组明显升高(P<0.01),中、高剂量组PBRs结合活性较模型组降低(P<0.05);模型组脑皮层线粒体PBRs的最大结合容量(Bmax)值较对照组明显升高(P<0.01),高剂量组较模型组明显降低(P<0.01)。结论地苏合剂可能通过降低早期肝性脑病大鼠脑皮层线粒体PBRs结合活性,减少神经损伤,从而延缓肝性脑病的发生、发展。

以高效液相色谱法测定苏合香中3个成分的含量

目的建立苏合香中苯甲酸、肉桂酸、苯甲酸苄酯含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Kro-masil 100 AC18(150mm×4.6mm,5μm),柱温40℃;以1%冰醋酸水溶液(A)–乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0ml/min;在232nm(苯甲酸和苯甲酸苄酯)和280nm(肉桂酸)波长下进行检测。结果苯甲酸的线性范围为0.14532～2.9064μg(r=1.0000),平均回收率(n=6)为99.60%,RSD为1.8164%;肉桂酸的线性范围为0.00328～0.0656μg(r=1.0000),平均回收率(n=6)为101.8%,RSD为0.7052%;苯甲酸苄酯的线性范围为0.22192～4.4384μg(r=0.9998),平均回收率(n=6)为102.4%,RSD为0.8541%。结论高效液相色谱法简便可行,结果准确可靠,其测量结果可做为苏合香质量控制的参考。