云南省烟草黑胫病菌致病力分化的研究

将分离自云南省不同地区的２１株黑胫病菌（ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｎｉｃｏｔｉａｎａｅＢｒｅｄａｄｅＨａａｎ）接种烟草品种Ｋ３２６、Ｇ２８和红大，测定其对不同烟草品种的致病力。经统计分析，发现其对烟草的致病力有差异。采用菌丝块创伤和不创伤两种接种方法测定致病力的结果不同。对不同地区的黑胫病菌间的致病力以及由烟草和非烟草寄主上获得的烟草疫霉菌株的致病力进行了比较，结果表明，云南省黑胫病菌的致病力较强，由烟草上获得的烟草疫霉菌株对烟草的致病力强于非烟草菌株。实验结果还发现，供试的３个烟草品种，以Ｋ３２６对云南省烟草黑胫病菌的抗病性最强，红大品种较感病。

云南省烟草上青枯雷尔氏菌的致病力、生化型和致病型研究

为了解云南省烟草上青枯雷尔氏菌的多样性,对分离自云南省6个县烟草病株的菌株进行了致病力、生化型和致病型测定。烤烟品种K326的离体叶片致病力测定结果表明,165个青枯雷尔氏菌株可划分为强、中、弱3种致病力类群,分别占45.4%、46.7%和7.9%,强、中致病力菌株占优势。对其中具代表性的81个菌株的生化型测定结果表明,43个菌株分别属于生化型Ⅲ,占53.1%;32个菌株分别属于生化型Ⅲ-1,占39.5%;6个菌株分别属于生化型Ⅲ-2,占7.4%。对其中55个来自不同采集地点和不同致病力菌株的致病型测定结果表明,弱毒力(Ⅰ)型菌株的比例最高,占63.6%,中毒力(Ⅱ)型菌株的比例其次,占27.3%,强毒力(Ⅲ)型菌株的比例较少,占9.1%。菌株致病型的地理分布存在较大差异。

云南省烟草黑胫病菌对甲霜灵抗性的检测

云南省烟草黑胫病菌对甲霜灵抗性的检测王革１郑小波１陆家云１李天飞２（１南京农业大学植保系，农业部病虫监测与治理重点开放实验室，南京２１００９５；２云南省烟草科学研究所）ＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯＦＲＥＳＩＳＴＡＮＣＥＯＦＢＬＡＣＫＳＨＡＮＫＴＯＭＥＴＡＬ...

抗青枯病烟草种质资源在云南省的评价

筛选出抗性稳定的种质资源是选育抗病品种的重要基础。本文采用人工接种和病田自然发病方法鉴定了48份烟草种质的青枯病抗性表现。土壤盆栽接种鉴定表现为高抗的材料有CF207、岩烟97、TI448A、DB101、G80、RG17、GTH-1等7份材料,表现抗病的有MSK149、Oxford 2028、NC95、YN108、K346、K358、Enshu FC、Oxford 207、RG11等9份材料。苗期恒温水培接种鉴定结果表明,Oxford 207和岩烟97表现为高抗,Enshu FC表现抗病,抗病材料与云烟85和K326杂交F1的抗性表现为中感至抗病。田间自然发病鉴定结果表明,我国审定的中抗青枯病的品种RG17、RG11、K358和K346,在云南省田间抗性表现为中抗,产值较高。TI448A田间表现为抗青枯病,但易感黑胫病和空茎病。Oxford 2028和Oxford 207田间表现为抗病至高抗,产值较高。G3和岩烟97田间分别表现为高抗和抗病,产值较低。根据接种鉴定和田间病圃2年抗性鉴定,筛选出育种潜力较大的青枯病抗源Oxford 207、Enshu FC,岩烟97和TI448A。

云南省烟草青枯病危害调查与病原菌分离

为了了解云南省烟草青枯病的危害情况,指导病害预测预报与综合防治;2004年至2006年,对云南省烟草青枯病的发生进行了调查,对田间采集的烟草茎下部黑色坏死症状样品进行了病原菌分离。在文山州文山县、砚山县、广南县、西畴县和麻栗坡县主要栽烟乡镇的重病田块,茎下部黑色坏死病株86.3%感染青枯病,27.7%感染黑胫病,其中包括14%病株复合感染青枯病和黑胫病。从云南省12个县(市)采集的258个烟草病样中分离青枯雷尔氏菌株219个,病原菌回接试验和ELISA检测结果表明文山州、保山市的烟草茎下部黑色坏死症状病害,大部分为烟草青枯病,伴随部分黑胫病。

云南省烟草黑胫病菌的交配型及其分布

１９９４～１９９５年从云南省不同地区采集烟草黑胫病标本，经分离鉴定共获得烟草黑胫病菌（Ｐｈｙｔｏｐｈ－ｔｈｏｒａｎｉｃｏｔｉａｎａｅＢｒｅｄａ）１０４个菌株。交配型测定结果表明：烟草疫霉菌的Ａ２交配型在云南省占绝对优势，分离到的１０４个菌株中，８９株为Ａ２交配型，占总数的８５．６％；１４株Ａ０交配型，占１３．５％；１株为Ａ１Ａ２交配型（同宗配合），仅占０．９％。对同宗配合烟草疫霉菌株的同宗配合性状在无性和有性后代的遗传测定结果表明。

云南烟草根结线虫病发生及防治研究

烟草根结线虫病（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅｓｐｐ）是云南旱地烤烟的主要病害，全省发病面积４０余万亩，发病烟田减产３０％～４５％。省地两级组成研究组于１９９０～１９９３年开展研究，获得病原线虫发生三代，南方根结线虫为优势种群，少孢节丛孢菌能捕食病原线虫。亩施１０％克线磷３ｋ７防效５１％；１５％铁灭克７００７防效５８．７％；５％涕灭威２１００ｇ防效与铁灭克相近。实施深耕施肥用药等综合防治，田间防效达７６·１７％。

云南省烟草青枯病的侵染动态

为了指导烟草青枯病的测报和防治,采用定期挖根调查采样和ELISA检测方法,对云南省烟草青枯病的侵染动态进行了研究。移栽后每周挖根调查结果和根、茎部样品的检测结果表明,在文山州青枯病重病田块,移栽后第5周根部样品首先检测出青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum,简称青枯菌)阳性,个别烟株根部出现黑色坏死症状;移栽后第7周根部样品青枯菌检出率达到50%左右、根部黑色坏死发病率开始快速上升,茎部无明显症状;移栽后第9周,根部发病率达到50%左右、个别烟株茎部出现黑色坏死症状。移栽后第12周,茎部青枯菌检出率、根发病率和茎部发病率均达到80%以上。根部样品青枯菌检出阳性、烟株根部显症、烟株茎部显症表现出一定的时间顺序(先后间隔约21d)。根青枯菌检出阳性时期和根黑色坏死的始发期可作为确定第一次施药时期的依据。对ELISA检测的验证试验结果表明,ELISA检测为青枯菌阳性的样品,可分离到典型青枯菌菌落,分离物ELISA检测同样为青枯菌阳性。

云南烟草丛枝症病害研究 V传染途径

在隔离环境中，按植物病毒学的标准程序，测试云南烟草丛枝症病害的传染途径，结果表明：云南烟草丛枝症病害具有广泛的传染途径，可以通过机械传染（嫁接、摩擦）和介体传染（菟丝子、蚜虫、烟盲蝽、叶蝉）等方式传播．

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅺ 病原研究:类病毒问题

感染云南烟草丛枝症病害的病苗的细胞切片中观察到类似于旁壁体的质膜体，旁壁体是类病毒侵染植物形成的特征病变结构，但多次双向电泳实验均未检测到类病毒分子，质膜体的形成可能和莫笑晗等发现的与云南烟草丛枝症病害相关的稳定ＲＮＡ有密切关系，但线性开环结构和失活温度说明其不具有类病毒核酸特征．

云南烟草丛枝症病原及传媒研究初报

云南烟草丛枝症一直被认为是烟草丛枝病 ,其病原是植原体。由于生物学测定结果与植原体病害一般特性不尽相符 ,对云南烟草丛枝症的病原尚难以确定。我们对典型烟草丛枝症的原发病株和转接发病株按照检测植原体的方法提取DNA ,扩增病株中植原体 16SrDNA片段 ,在云南烟草丛枝症中没有检测到植原体的存在。在检测DNA提取物含量过程中 ,原发病株和转接发病株样品中检测出含量较高的RNA带 ,分子量约 0 8kb ;而健康烟株和枣疯病株中未检测出 ,由此说明云南烟草丛枝症的病原不是植原体 ,病株中检测出的RNA带是该病的病原还是感病后的诱导产物 ,有待进一步研究 ;RNA可作为室内鉴别烟草丛枝症的方法。在理论上证明烟蚜是烟草丛枝症的传播媒介 ,同时估计云南烟草丛枝症的病原是病毒 ,并与以往国内报道的烟草病毒病害不同 ,可能是一种新的病毒病害。

云南烟草丛枝症病害研究 VI综合防治技术的研究与示范推广

１９９４至１９９８年，在云南烟草丛枝症病害的重病区进行药剂治疗和治虫防病等研究，并进行大面积综合防治技术示范（３１１５ｈｍ２）和推广工作（６４０３２ｈｍ２），结果表明：抗生素类药剂和抗病毒制剂无治疗效果，单纯治虫防病的效果也不理想，采用以网罩隔离育苗培育无毒苗、药剂控制传媒昆虫、淘汰和更换病苗、保健栽培为技术核心的综合防治措施，能够有效地控制病害的发生和流行，防治效果在９５％以上．

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅶ 激素的变化

采用植物激素ＥＬＩＳＡ测定试剂盒，对比测定了烟草感染丛枝症的病株与健株体内细胞分裂素（ｉＰＡ和ＺＲ）与生长素（ＩＡＡ）含量的变化．结果表明：生长素含量在整个发病期间健株都较高于病株，细胞分裂素含量在发病初期明显高于健株，随后呈下降趋势并趋于稳定，Ｃ／Ａ值在病程中相对处于较高水平．

云南烟草丛枝症病害研究I田间发病规律

系统地调查云南烟草丛枝症病害的田间自然发病情况和介体发生情况，并实验测定烟草品种的抗病性，结果表明：烟草丛枝症病害在病区常年均有发生，最早发病时间在４月下旬，保山市１９９４，１９９５和１９９７年属一般年份，１９９３，１９９６和１９９８年属流行年份，导致病害流行的主要因素是苗期和移栽初期的两次蚜虫迁飞期高峰，以网罩隔离培育无毒烟苗、避开蚜虫迁飞高峰期移栽并同时施药是最有效的防治方法．目前生产上审定推广的品种全为高感品种，测定３１个烤烟和１４５个晒晾烟品种未发现抗病品种．

云南烟草丛枝症病害研究 II细胞的超微病变

超薄切片观察云南烟草丛枝症病害的病叶组织，并抽提试验材料的总核酸电泳检测，结果表明：病组织中检测到与烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ，切片中未观察到病毒粒子，薄壁细胞中发现细胞膜系统的畸变：质膜体（ｐｌａｍａｌｅｍｍａｓｏｍｅ）和双层膜泡囊（ｄｏｕｂｌｅｍｅｍｂｒａｎｏｕｓｖｅｓｉｃｌｅｓ）．质膜体由细胞质膜或液泡膜伸入空泡形成，直径约１０００～２０００ｎｍ，结构类似于类病毒侵染寄主形成的旁壁体．双层膜泡囊是含纤维状物内含物的泡囊，直径约１００～２００ｎｍ，结构类似于某些病毒侵染寄主形成的细胞质泡囊（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｖｅｓｉｃｌｅｓ）和植原体（ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａｓ），但因其广泛分布于寄主细胞中，不能认为是植原体．文献显示这些病变是类病毒和某些病毒侵染的特征，初步认为云南烟草丛枝症病害可能是病毒病害，发病早期细胞内出现小分子核酸侵染的细胞病变特征，此与莫笑晗等发现病株体内含有大量低分子量ＲＮＡ可能有密切关系．

云南烟草丛枝症病害研究：Ⅻ病原研究：病毒问题

云南烟草丛枝症病害病程表现为潜伏、过敏反应、缩顶、丛枝等４个阶段，以过敏反应导致叶片严重坏死和枯死为前期特征，以腋芽丛生而表现为黄化丛枝症为后期特征，苗期感染形成僵苗症，大田期感染表现丛枝症；汁液摩擦接种１１科３２种植物发现其只侵染烟属植物，通过机械传染（嫁接、汁液）和介体传染（菟丝子、蚜虫、烟盲蝽、叶蝉）等方式传播，该病害与文献记载的烟草丛枝、丛顶和丛蔟类病害有明显区别，可能是未见记载的病害．在云南烟草丛枝症病株的老叶和带毒蚜虫中抽提到直径约２２～２４ｎｍ的球状病毒，回接烟草发病，病株检测到和云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ，说明该病毒和云南烟草丛枝症病害有密切的关系，且与ＳＢＭＶ，ＶＴＭＶ，ＴＲＳＶ，ＡｒＭＶ，ＣａｒＭＶ，ＣＭＶ，ＢＣＭＶ，ＴＮＶ等８种病毒无血清学关系，综合各项研究和文献检索结果，作者推测该病毒可能是未见记载的病毒，建议称为“烟草簇矮病毒（Ｔｏｂａｃｏｂｕｓｈｙｄｗａｒｆｖｉｒｕｓ）”．

云南烟草丛枝症病害研究 I病害的症状学及其病程

以云南烟草丛枝症病株为毒源，通过蚜虫传染接种大十字期、猫耳朵期、摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期的烟株，观察症状反应并检测与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ．研究表明：云南烟草丛枝症病害的病程可分为４个阶段：潜育期、过敏反应期、缩顶期和丛枝期，烟株从感染到表现丛枝要经过约１个月；蚜虫接种后约１周，在蚜虫口针刺吸部位开始出现褪绿斑，继而产生强烈的过敏反应，即从褪绿斑中心开始坏死出现蚀点斑，叶片上布满坏死斑纹，有典型的环纹和蚀纹，严重的烟株叶片破裂，细脉坏死；随后进入缩顶期，烟株生长缓慢，叶间距明显缩短，顶部几乎成为一个平面，叶色稍黄，大十字期和猫耳朵期接种烟株缩顶后生长极其缓慢，萎缩成为僵苗，不表现丛枝症状，也不会开花结实；感染约４周后，摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期接种的烟株开始腋芽丛生，生长速度加快，几天后便表现为典型的黄化丛枝症状，叶黄化且变圆，能够开花结实．其症状和文献记载的所有烟草丛枝、丛顶和丛蔟类病害有明显区别，初步认为是１种未见记载的新病害，建议称之为“烟草簇矮病（Ｔｏｂａｃｏｂｕｓｈｙｄｗａｒｆ）”．文中附病程症状图２版．

云南省烟草病虫害及防治多媒体光盘的设计与制作

基基于当前烟草植保防治的特点,利用Dream weaver,Fireworks,Flash等工具软件开发了云南省烟草病虫害及防治多媒体光盘,目的是推广当前烟草植保的研究成果,为云南省烟草生产提供方便可靠的服务,从而促进我省烟叶的发展。

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅷ 验证与烟草丛枝症病害相关的稳定RNA

来自云南省２２个县市的烟草丛枝症标本均检测到与云南烟草丛枝症病害相关的稳定ＲＮＡ，大小相当于８００ｂｐ左右的ＤＮＡ；病株的根、茎、叶、花和枯叶中含有此ＲＮＡ，种子中未检测到此ＲＮＡ；此ＲＮＡ的最大吸收峰为２６９ｎｍ；能被蛇毒磷酸二酯酶Ｉ消化，不具有类病毒结构特征，推测可能是病毒的基因组分；支持莫笑晗等对此ＲＮＡ的结构推测，即可能是有广泛内部配对、具有类似发叉结构的线性长度为１６１ｋｂ的单链ＲＮＡ．与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ目前发现的超稳定ＲＮＡ．

云南烟草丛枝症病害研究 IV建立标准毒株

以蚜虫传染发生云南烟草丛枝症病害的烟株为材料进行组织培养，连续培育３代，以第３代组培烟苗为毒源经蚜虫传染健康烟株，提取毒源和各实验烟株的总核酸进行琼脂糖凝胶电泳．结果表明：第３代组培烟苗为毒源经蚜虫传染的烟株发病表现丛枝症，并检测到与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ．说明与云南烟草丛枝症病害相关的病原能在寄主离体培养组织中长期保存，成功建立云南烟草丛枝症病害的标准毒株．