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鹅源鼠伤寒沙门菌crp、hfq基因缺失株的构建及生物学特性分析 被引量:3
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作者 李仕楷 刘佳琪 +6 位作者 李荣旭 苏文楠 陈亦杏 郑炜鸿 朱婉君 陈济铛 张济培 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期17-24,共8页
为构建鹅鼠伤寒沙门菌单基因缺失株并鉴定其生物学特性,本研究以广东地区鹅源鼠伤寒沙门菌流行株A29为研究对象,采用λ-Red同源重组技术,分别构建crp、hfq基因缺失株(A29Δcrp和A29Δhfq)及相应基因回补株,并分别采用相应引物经PCR鉴定... 为构建鹅鼠伤寒沙门菌单基因缺失株并鉴定其生物学特性,本研究以广东地区鹅源鼠伤寒沙门菌流行株A29为研究对象,采用λ-Red同源重组技术,分别构建crp、hfq基因缺失株(A29Δcrp和A29Δhfq)及相应基因回补株,并分别采用相应引物经PCR鉴定。通过细菌培养,对各菌株生物学特性进行比较;通过PCR鉴定各菌株的遗传稳定性;采用K-B纸片扩散法检测各菌株的药物敏感性;将各菌株纯培养物经腹腔注射4周龄小鼠,测定各菌株对小鼠的毒力,并观察感染后小鼠的临床症状及各组织剖检病变与组织病理变化。PCR和测序结果表明,正确构建各基因缺失株和相应回补株。生物学特性试验结果显示,与亲本株相比,A29Δcrp菌落直径极显著变小(P<0.001),不产酸、不产生H_(2)S,菌体极显著变短(P<0.001);A29Δhfq菌落边缘不整齐,不产生H_(2)S,菌体极显著变长(P<0.001),表明crp、hfq基因影响细菌的菌落形态、生化特性和形态特征。菌株遗传稳定试验结果显示,菌株传至60代时,基因缺失株仍能够稳定缺失。药敏试验结果显示,与亲本株比较,A29Δcrp对氨基糖苷类、碳青霉烯类、环丙沙星、甲氧苄啶、阿奇霉素等药物的敏感性降低,对四环素类药物的敏感性增强,A29Δhfq对除青霉素类、头孢唑啉以外的12种药物的敏感性增强。小鼠毒力试验结果显示,与亲本株的LD_(50)(2.479×10^(4)cfu)相比,A29Δcrp的LD_(50)(5.379×10^(5) cfu)和A29Δhfq的LD_(50)(5.012×106 cfu)均明显上升。各菌株感染小鼠后的临床症状及各组织剖检病变基本一致;组织病理变化观察显示,与亲本株相比,A29Δcrp组小鼠肝组织可见多量大小不一的坏死灶,脾组织红髓面积增大、白髓面积减小,A29Δhfq对小鼠脾脏、肝脏及脑组织损伤均较小。本研究为探究鼠伤寒沙门菌crp和hfq基因功能奠定了基础,同时也为进一步研发鹅沙门菌病疫苗提供了参考依据。 展开更多
关键词 鹅源鼠伤寒沙门菌 基因敲除 crp基因 hfq基因 生物学特性
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广东部分地区鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定和耐药性分析
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作者 陈亦杏 张美琳 +5 位作者 李仕楷 杨智灿 李宛珈 陈济铛 朱婉君 张济培 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3185-3194,共10页
【目的】了解广东部分地区鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)的流行、耐药及耐药基因携带情况。【方法】本试验于2020-2022年从广东地区采集101份疑似RA感染病死鸭、鹅的肝脏、心脏、脑等组织,对采集的组织进行细菌分离,通... 【目的】了解广东部分地区鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)的流行、耐药及耐药基因携带情况。【方法】本试验于2020-2022年从广东地区采集101份疑似RA感染病死鸭、鹅的肝脏、心脏、脑等组织,对采集的组织进行细菌分离,通过革兰染色、生化试验及PCR鉴定分离株。对分离鉴定为RA的菌株进行血清型鉴定,并使用K-B纸片扩散法和PCR对分离株进行药敏试验和相应的耐药基因检测,采用统计学软件SPSS 22.0对分离株的耐药表型及耐药基因型进行统计,分析其相关性。【结果】分离菌在含5%新生牛血清的TSA平板培养后可见圆形、稍突、表面有光泽、乳脂状小菌落,革兰染色镜检为阴性短小杆菌。生化鉴定结果显示,分离株不发酵碳水化合物,氧化酶阳性,硝酸盐还原、西蒙氏枸椽酸盐、蛋白胨水、MR试验、VP试验、H_(2)S阴性,部分菌株能液化明胶和产生尿素酶。经PCR鉴定ompA基因阳性,本试验共分离得到51株RA。对分离株进行血清型鉴定,共检测到5种血清型,分别为血清1、2、4、11、18型,分析不同宿主来源的分离株血清型发现,血清18型仅在鹅上检测到。药敏试验结果显示,选择的25种药物中,RA对氟苯尼考、氧氟沙星、多西环素、大观霉素、头孢噻呋和头孢拉定6种药物敏感;对β-内酰胺类、氨基糖苷类耐药性最为严重,其中,对β-内酰胺类大部分药物耐药率在50.0%以上,对氨基糖苷类药物耐药率在80.0%以上。多重耐药统计结果显示,三重及以上耐药性菌株高达96.08%。分析不同宿主来源耐药性发现,鹅源RA分离株对青霉素、阿莫西林、氨苄西林、头孢唑啉4种药物的耐药率高于鸭源,其余药物鸭源和鹅源差异不明显。对15种耐药基因进行检测,其中blaCTX-M、aph(3′)Ⅱa、qnrB、qnrS、floR、tetM、ermF基因检出率较高,检出率分别为70.59%、68.63%、76.47%、96.08%、88.24%、82.35%和96.08%。耐药表型与耐药基因的相关性分析结果表明,耐药基因aph(3′)Ⅱa与新霉素、链霉素耐药株的产生具有显著相关性(P<0.05),耐药基因ermF与阿奇霉素耐药株的产生具有显著相关性(P<0.05),耐药基因tetX与多西环素耐药株的产生具有显著相关性(P<0.05)。【结论】本研究成功分离到51株RA,分离株对多种药物耐药,多重耐药现象严重。本试验结果可为指导广东地区制定RA感染的临床治疗用药方案提供参考。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏杆菌 分离鉴定 耐药性 耐药基因
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广东鹅源圆环病毒分子流行病学调查与毒株遗传进化分析 被引量:7
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作者 陈济铛 陈冈 +5 位作者 牛森 朱婉君 张溢珊 刘敏芳 陈建红 张济培 《中国家禽》 北大核心 2020年第4期97-102,共6页
为了解广东地区圆环病毒在鹅群中的流行情况。研究针对鹅圆环病毒全基因组保守序列设计特异性检测引物,采用PCR方法对送检的232份鹅疑似鹅圆环病毒感染病例进行检测。并针对其中一份阳性样品病毒全基因组进行测序,获得该毒株全基因组序... 为了解广东地区圆环病毒在鹅群中的流行情况。研究针对鹅圆环病毒全基因组保守序列设计特异性检测引物,采用PCR方法对送检的232份鹅疑似鹅圆环病毒感染病例进行检测。并针对其中一份阳性样品病毒全基因组进行测序,获得该毒株全基因组序列信息。对该毒株全基因进行遗传进化分析、Cap蛋白相似性分析和B细胞抗原表位预测。结果显示,232份样品中阳性检出率为44.4%,表明鹅圆环病毒在广东地区鹅群中普遍存在,鹅圆环病毒毒株与其他已报道的鹅源毒株处于同一遗传进化分支,鹅源毒株间Cap蛋白相似性为98.0%~100%,但与鸭圆环病毒相似性低(46.9%~48.2%);Cap蛋白B细胞线性表位预测结果提示,鹅源和鸭源毒株表位位置相近,但氨基酸序列差异较大,提示两种毒株之间交叉保护力可能存在差异。研究为了解广东地区鹅源圆环病毒流行、进化情况,并进一步做好相关防控工作提供理论参考。 展开更多
关键词 鹅圆环病毒 PCR检测 流行病学 遗传进化
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鹅源鸡毒支原体分离鉴定与致病性研究 被引量:5
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作者 刘英慧 陈亦杏 +5 位作者 李仕楷 刘佳琪 朱婉君 张溢珊 张济培 陈济铛 《中国家禽》 北大核心 2022年第2期106-111,共6页
为了解广东省部分地区鹅源鸡毒支原体流行情况,试验对50例鹅慢性呼吸道病病例进行鸡毒支原体检测,结果显示:鸡毒支原体mgc2基因PCR检测阳性21份,进一步纯化培养出8个分离株,经菌体染色镜检及16 SrRNA基因系统进化树分析,确定为鸡毒支原... 为了解广东省部分地区鹅源鸡毒支原体流行情况,试验对50例鹅慢性呼吸道病病例进行鸡毒支原体检测,结果显示:鸡毒支原体mgc2基因PCR检测阳性21份,进一步纯化培养出8个分离株,经菌体染色镜检及16 SrRNA基因系统进化树分析,确定为鸡毒支原体,且与疫苗株同源性达97.8%以上;分离株1117经卵黄囊接种6日龄鹅胚和经气管接种50日龄乌鬃鹅,证明该分离株对鹅胚及鹅有一定的致病力。研究表明鸡毒支原体在广东部分地区鹅群中具有广泛流行性,并对鹅有致病性,该结果为广东地区鹅源鸡毒支原体流行病学监测提供参考。 展开更多
关键词 慢性呼吸道病 鸡毒支原体 16 SrRNA 致病性试验
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鹅源副鸡禽杆菌的分离鉴定及致病性试验 被引量:5
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作者 钟嘉诚 陈济铛 +6 位作者 仇桂玲 刘英慧 朱婉君 张溢珊 王杰煌 王贺 张济培 《中国家禽》 北大核心 2021年第3期112-117,共6页
研究从面部肿胀的成年狮头鹅眶下窦中分离到一株细菌,经生长特性、菌体染色镜检、生化试验、16 S rDNA测序比对及HMTp210基因扩增方法对其进行鉴定,确定分离菌株为血清型B型的副鸡禽杆菌,具有NAD依赖性;副鸡禽杆菌hagA基因系统进化树显... 研究从面部肿胀的成年狮头鹅眶下窦中分离到一株细菌,经生长特性、菌体染色镜检、生化试验、16 S rDNA测序比对及HMTp210基因扩增方法对其进行鉴定,确定分离菌株为血清型B型的副鸡禽杆菌,具有NAD依赖性;副鸡禽杆菌hagA基因系统进化树显示分离株与国内大部分副鸡禽杆菌分离株的亲缘性相近,与国外副鸡禽杆菌分离株的差异较大;药敏试验结果显示喹诺酮类药物和氟苯尼考的MIC较低,分别为0.25μg/mL和4μg/mL,氨苄西林等6种药物的MIC值均大于128μg/mL,表明菌株具有较强的耐药性;分离纯培养物人工感染7日胚龄鸡胚后24~48 h内致死鸡胚,经眶下窦感染80日龄乌棕鹅,48 h鹅开始出现流鼻液、鼻窦部肿胀,72 h剖检可见眶下窦有干酪样渗出物,从渗出物中又重新分离出副鸡禽杆菌;表明分离到的副鸡禽杆菌对鹅具有较强的致病力。 展开更多
关键词 鹅源副鸡禽杆菌 hagA基因 药物敏感性试验 致病性试验
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广东地区禽源致病性大肠杆菌对5种β-内酰胺类抗生素的耐药情况与ESBLs基因的携带情况 被引量:3
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作者 钟嘉诚 仇桂玲 +7 位作者 陈济铛 邓银燕 谭结敏 姚江清 刘英慧 张溢珊 朱婉君 张济培 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第16期62-67,72,共7页
为了解广东地区禽源致病性大肠杆菌(APEC)对5种β-内酰胺类抗生素的耐药情况和超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)基因(blaCTX-M、blaTEM、blaOXA)的携带情况,以更好地指导临床治疗,试验对2014-2019年从广东多地... 为了解广东地区禽源致病性大肠杆菌(APEC)对5种β-内酰胺类抗生素的耐药情况和超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)基因(blaCTX-M、blaTEM、blaOXA)的携带情况,以更好地指导临床治疗,试验对2014-2019年从广东多地病死禽中分离鉴定得到的102株APEC采用PCR方法作系统进化分群与ESBLs基因检测,采用K-B纸片扩散法检测APEC对5种β-内酰胺类抗生素的敏感性,并分析不同禽源APEC对不同药物的耐药情况、102株APEC对5种抗生素的多重耐药性分布情况和耐药谱型,以及菌株耐药基因与耐药表型相关性。结果表明:A、B1、B2和D群比例分别为65.69%、9.80%、2.94%、21.57%。blaCTX-M、blaTEM、blaOXA基因的检出率分别是43.14%、35.29%、8.82%,组合blaCTX-M+blaTEM的阳性率为13.73%。APEC对2种青霉素类抗生素(阿莫西林、氨苄西林)和头孢拉定的耐药率均在85.71%以上,对头孢唑啉和头孢噻呋的耐药率分别为62.75%、47.06%。blaCTX-M基因与头孢唑啉和头孢噻呋的耐药率呈极显著相关(P<0.01),验证了blaCTX-M基因主要介导对头孢类抗生素的水解作用。说明广东地区APEC对5种β-内酰胺类抗生素的耐药情况较严重,耐药基因blaCTX-M、blaTEM的检出率要高于blaOXA基因。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 Β-内酰胺类抗生素 超广谱β-内酰胺酶基因 大肠杆菌系统发育群基因 耐药基因 药物敏感性试验
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2020年广东肇庆地区鹅细小病毒VP1基因遗传进化分析 被引量:2
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作者 赵丹 陈德成 +3 位作者 胡楚坪 朱婉君 陈济铛 张济培 《广东畜牧兽医科技》 2021年第3期77-81,共5页
2019~2020年从广东肇庆地区的部份鹅场中收集到12份疑似小鹅瘟病例,对疑似小鹅瘟病例进行病原核酸鉴定,对阳性病例进行病毒分离和VP1基因的序列扩增和遗传进化分析。结果表明,12份疑似小鹅瘟病例中,共检测到7份阳性样品,阳性检测率为58... 2019~2020年从广东肇庆地区的部份鹅场中收集到12份疑似小鹅瘟病例,对疑似小鹅瘟病例进行病原核酸鉴定,对阳性病例进行病毒分离和VP1基因的序列扩增和遗传进化分析。结果表明,12份疑似小鹅瘟病例中,共检测到7份阳性样品,阳性检测率为58.3%。从阳性病例样本中分离获得7株小鹅瘟病毒毒株,其中1株与Ⅰa亚群毒株核苷酸序列相似性高达99.1%~99.3%,另6株则聚类形成此前未报道过的新亚群,本文将其命名为Ⅰf亚群。本研究结果进一步完善了我国广东地区小鹅瘟的流行病学信息,为本地区小鹅瘟病毒的流行病学调查及该病的综合防控奠定理论基础。 展开更多
关键词 小鹅瘟病毒 VP1基因 遗传进化树分析
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鹅源产气荚膜梭菌的分离鉴定与药物敏感性试验 被引量:3
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作者 刘佳琪 李仕楷 +6 位作者 苏文楠 陈亦杏 钟嘉诚 张溢珊 陈济铛 朱婉君 张济培 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1194-1202,共9页
对2020年7月至2021年6月临床症状与病理剖检初步诊断为鹅坏死性肠炎疑似病例肠道内容物和肝脏进行细菌分离并纯化,获得52株菌。分离菌株经培养特性、生化试验、种特异性PCR鉴定,确定52株菌均为产气荚膜梭菌;采用PCR对分离株毒素基因鉴定... 对2020年7月至2021年6月临床症状与病理剖检初步诊断为鹅坏死性肠炎疑似病例肠道内容物和肝脏进行细菌分离并纯化,获得52株菌。分离菌株经培养特性、生化试验、种特异性PCR鉴定,确定52株菌均为产气荚膜梭菌;采用PCR对分离株毒素基因鉴定,结果显示分离株均为毒素型A型,其中cpβ_(2)基因的检出率为61.5%,未检测到肠毒素cpe基因和netB毒素基因。药敏试验结果显示,分离株对头孢噻肟(100%)、头孢噻呋(100%)、氟苯尼考(100%)和多西环素(94%)表现为高度敏感,其次为恩诺沙星(88%)和氧氟沙星(88%);而耐药率最高的药物为磺胺类药物,其中磺胺甲恶唑耐药率为100%,其次是林可胺类药物,林可霉素与克林霉素耐药率分别为58%和46%;中药体外抑菌试验结果显示,单味中药黄连、黄柏、黄芩和复方中药乌梅散、白头翁汤、郁金散对产气荚膜梭菌均有一定的抑菌作用,其中黄连的MIC值为1.57 g/L,远低于其他试验中药的MIC值,具有较强的抑菌作用。本试验为广东省主要鹅养殖区域鹅产气荚膜梭菌病的有效防治提供了参考依据。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 鹅源 毒素基因分型 中药体外抑菌试验
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1株鹅星状病毒分子进化分析及纤突蛋白多克隆抗体的制备 被引量:3
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作者 伍辉吉 赵丹 +3 位作者 陈济铛 张溢珊 朱婉君 张济培 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期2333-2339,共7页
以2018年分离鉴定的1株鹅星状病毒为研究对象(LHC株),采用分子克隆方法获得病毒衣壳蛋白基因序列,通过生物信息学方法分析分离株分子进化情况与纤突蛋白变异情况,构建纤突蛋白原核表达质粒对纤突蛋白进行原核表达,免疫新西兰白兔制备兔... 以2018年分离鉴定的1株鹅星状病毒为研究对象(LHC株),采用分子克隆方法获得病毒衣壳蛋白基因序列,通过生物信息学方法分析分离株分子进化情况与纤突蛋白变异情况,构建纤突蛋白原核表达质粒对纤突蛋白进行原核表达,免疫新西兰白兔制备兔抗纤突蛋白多克隆抗体,以原核表达的衣壳蛋白验证其反应活性。结果显示,LHC株为鹅源星状病毒2型毒株,第425~665位氨基酸残基为衣壳蛋白纤突结构,2014—2018年不同地区分离到的鹅星状病毒2型毒株的纤突蛋白享有很高的序列及结构相似性,表明2014—2018年中国不同地区间的鹅星状病毒2型毒株尚未发生明显变异。制备的兔抗纤突蛋白血清可与纤突蛋白及衣壳蛋白特异性结合,表明重组纤突蛋白具有良好的免疫原性,制备的兔抗纤突蛋白多克隆抗体具有良好的反应活性。为鹅星状病毒纤突蛋白功能研究、血清学检测方法的建立以及亚单位疫苗的制备奠定理论基础。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 衣壳蛋白 纤突蛋白 多克隆抗体
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水禽变形杆菌的分离鉴定与药物敏感性分析
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作者 仇桂玲 谭洁敏 +6 位作者 邓银燕 刘英慧 陈济铛 钟嘉诚 张溢珊 朱婉君 张济培 《养禽与禽病防治》 2021年第2期12-17,共6页
本研究从临床疑似变形杆菌感染水禽病例中分离到17株细菌,对新分离菌株进行形态学、菌株生化特性、变形杆菌atpD基因特异性PCR鉴定以及菌株药物敏感性试验。结果显示:菌株镜检为革兰阴性菌,具有明显多形性;在鲜血琼脂培养基上有明显的... 本研究从临床疑似变形杆菌感染水禽病例中分离到17株细菌,对新分离菌株进行形态学、菌株生化特性、变形杆菌atpD基因特异性PCR鉴定以及菌株药物敏感性试验。结果显示:菌株镜检为革兰阴性菌,具有明显多形性;在鲜血琼脂培养基上有明显的迁徙现象;atpD基因特异性PCR扩增并测序比对确认分离株为变形杆菌;药敏试验结果表明,本研究分离的水禽变形杆菌具有多重耐药性,对常用抗生素表现低敏或耐药,仅对庆大霉素敏感。 展开更多
关键词 水禽变形杆菌 分离鉴定 药敏试验
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