第十九届全国烧伤救治与创面修复研讨会纪要

第十九届全国烧伤救治与创面修复研讨会于2024年6月20—22日在广东省佛山市成功召开,共计700余名代表参加了此次学术盛会。本次会议以“拓展、融合与规范”为主题,旨在拓展烧伤相关学科的学术交流,实现多学科的交叉融合发展,推动烧伤临床救治与创面修复等规范化,助力学科发展。共有近200名知名专家学者在大会上进行了为期2天的主旨论坛及重症救治、创面修复、瘢痕防治、康复护理、交叉融合等专场学术研讨。学术交流紧凑全面、临床与基础兼备,会议成果丰硕。

干扰hsa_circ_0013958/miR-637对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨环状RNA(circularRNA,circRNA)hsa_circ_0013958对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(Humankeloid fibroblast,HKF)增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法:将人瘢痕疙瘩成纤维细胞分为si-NC组、si-hsa_circ_0013958组、miR-NC组、miR-637组、si-hsa_circ_0013958+anti-miR-NC组和si-hsa_circ_0013958+anti-miR-637组。实时荧光定量PCR(Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)试剂盒检测hsa_circ_0013958、miR-637表达;四甲基偶氮唑盐(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测细胞存活率;平板克隆实验检测细胞集落形成数;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测hsa_circ_0013958和miR-637的靶向关系。结果:瘢痕疙瘩组织中hsa_circ_0013958表达水平较正常皮肤组织升高,miR-637表达水平降低(P<0.05)。干扰hsa_circ_0013958表达或过表达miR-637后,HKF细胞存活率、集落形成数以及迁移、侵袭细胞数均降低(P<0.05)。hsa_circ_0013958和miR-637有靶向调控关系;抑制miR-637表达逆转了干扰hsa_circ_0013958对HKF增殖、迁移侵袭的影响。结论:干扰hsa_circ_0013958通过调控miR-637抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、迁移和侵袭。

丹参川芎嗪注射液对重度烧伤患者炎性因子影响及预防脓毒症发生效果分析

目的:探讨丹参川芎嗪注射液对重度烧伤患者炎性因子影响及预防脓毒症发生效果。方法:收集2013年4月至2017年3月入院的80例重度烧伤患者随机分为两组,对照组患者给予常规治疗,观察组患者则加用丹参川芎嗪注射液,比较两组患者炎性因子、其他疾病相关参数与脓毒症预防效果。结果:观察组患者治疗后1d、3d、7d、10d与14d的TNF-α、IL-1、IL-6、CRP与PCT水平组间比较均显著性低于对照组;治疗后PT、TT、ALT与AST水平组间比较均显著性低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);SIRS总发生率明显低于对照组,存在明显差异(P<0.05)。结论:丹参川芎嗪注射液对重度烧伤患者炎性因子影响及预防脓毒症发生效果显著,具有借鉴意义。

负压创面联合富血小板血浆对慢性难愈性创面患者疼痛及炎症指标的影响

目的:探讨负压创面治疗技术联合富血小板血浆对修复慢性难愈性创面患者疼痛程度及炎症指标的影响。方法:选取2017年6月-2019年1月我院收治的60例慢性难愈性创面患者为研究对象,按分层随机法分为观察组和对照组,各30例。对照组仅以负压创面治疗,观察组在其基础上联合富血小板血浆治疗,对比两组创面修复效果及患者疼痛程度及炎症指标变化。结果:观察组住院时间、创面愈合时间以及二期手术准备时间均短于对照组(P<0.05);治疗前两组WBC、CRP和ESR水平对比差异无统计学意义(P>0.05),治疗后两组WBC、CRP和ESR水平明显低于治疗前,且观察组治疗后WBC、CRP和ESR水平低于对照组治疗后(P<0.05);两组治疗前VAS评分比较无显著差异(P>0.05),治疗后3天和7天两组VAS评分均低于治疗前(P<0.05),观察组治疗后3天和7天VAS评分低于对照组(P<0.05)。结论:在慢性难愈性创面中联合应用负压创面治疗技术和富血小板血浆可以促进患者创面愈合,缩短住院时间,改善炎症反应,减轻疼痛,有一定借鉴意义。

富血小板血浆治疗糖尿病足难愈性创面的作用研究

目的观察富血小板血浆(PRP)治疗糖尿病足难愈性创面的临床疗效。方法38例糖尿病足患者,根据治疗方法不同分为实验组(22例)和对照组(16例)。对照组采用常规方法治疗,实验组在对照组基础上联合PRP治疗。比较两组治疗后1、2、3周的创面愈合率、愈合时间、截肢(趾)率及创面复发率。结果治疗后1、2、3周,实验组创面愈合率分别为(26.6±5.5)%、(58.4±8.4)%和(93.6±9.2)%,对照组分别为(21.8±5.7)%、(38.7±6.8)%和(62.5±9.3)%。治疗后1周,两组创面愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后2、3周,实验组创面愈合率显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组平均愈合时间(18.2±3.4)d明显短于对照组的(28.6±6.8)d,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组截肢(趾)率为22.7%(5/22),明显低于对照组的56.3%(9/16),差异具有统计学意义(P<0.05)。除3例脱访(实验组2个,对照组1个),其余患者随访6个月。实验组复发率为13.6%(3/20),明显低于对照组的46.7%(7/15),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论PRP可以有效的促进糖尿病足难愈性创面的愈合,缩短住院时间,降低截肢(趾)率,减少复发率,明显改善患者的生活质量。

骨髓间充质干细胞来源的外泌体对糖尿病大鼠创面炎症因子的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的外泌体移植后,对糖尿病大鼠创面愈合及炎症因子的影响。方法全骨髓贴壁法分离BMSCs,超速离心法提取BMSCs外泌体。选取清洁SD大鼠30只构建糖尿病大鼠创伤模型,成功建模后,将存活大鼠分为对照组(n=13)、外泌体组(n=14);采取尾静脉途径,予外泌体组大鼠0.2 mg/ml外泌体悬液1 ml,同时予对照组等剂量PBS溶液注射;采用Image J软件分析大鼠的创面愈合率,并通过HE染色评估创面组织中炎症程度;采用酶联免疫分析法(ELISA)检测大鼠创面组织中TNF-α、IL-1β、IL-10的浓度;采用Western blot检测创面组织中TLR-4的表达。结果流式细胞术鉴定BMSCs表面抗原,CD29、CD90高表达,CD40低表达;超速离心法获取的BMSCs外泌体直径分布于60~160 nm;与对照组比较,外泌体组大鼠创面愈合率较高,且组织中炎性因子浓度较低,TLR-4表达较低(均P<0.05)。结论BMSCs外泌体可通过调控TLR-4的表达降低糖尿病大鼠创面组织的炎症程度。

单细胞RNA测序解析普通小鼠和糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面中CD34^(+)细胞的类型与功能

目的单细胞RNA测序解析普通小鼠和糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面中CD34^(+)细胞的类型与功能。方法该研究为实验研究。构建CD34^(+)细胞谱系追踪小鼠,实现CD34^(+)细胞在荧光条件下可视化。取6只7~8周龄雄性CD34^(+)细胞谱系追踪小鼠(设为糖尿病组),腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病模型,于小鼠13周龄时在其背部制备全层皮肤缺损创面;另取6只13周龄雄性CD34^(+)细胞谱系追踪小鼠(设为对照组),在其背部制备全层皮肤缺损创面。伤后4 d,分别收集对照组3只小鼠和糖尿病组2只小鼠创面组织,消化制备单细胞悬液,采用荧光活化细胞分选法筛选出CD34^(+)细胞后进行单细胞RNA测序,采用R语言的Seurat 4.0.2程序通过降维可视化和细胞聚类分析CD34^(+)细胞类型并筛选注释各CD34^(+)细胞亚群的标记基因,对2组小鼠创面组织间CD34^(+)成纤维细胞(Fb)、平滑肌细胞、角质形成细胞(KC)、类软骨细胞的差异表达基因(DEG)进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)富集分析,探索细胞功能。结果伤后4 d,2组小鼠创面组织中CD34^(+)细胞均包含7种细胞类型,具体为内皮细胞、Fb、KC、巨噬细胞、T细胞、平滑肌细胞和类软骨细胞,其中Fb细分为5个亚群。与对照组比较,糖尿病组小鼠创面组织中的CD34^(+)内皮细胞、Fb亚群1、Fb亚群4、KC、类软骨细胞占比升高,CD34^(+)Fb亚群2、Fb亚群3和平滑肌细胞占比下降。注释CD34^(+)类软骨细胞、内皮细胞、Fb亚群1、Fb亚群2、Fb亚群3、Fb亚群4、Fb亚群5、KC、巨噬细胞、平滑肌细胞、T细胞的标记基因分别为转移相关肺腺癌转录本1、脂肪酸结合蛋白4、Gremlin 1、补体成分4B、H19印记母源表达转录本、Dickkopf Wnt信号通路抑制剂2、纤维调节蛋白、角蛋白5、CD74分子、G蛋白信号调节蛋白5、可诱导T细胞共刺激分子。KEGG和GO富集分析显示,与对照组比较,糖尿病组小鼠伤后4 d创面组织中CD34^(+)Fb差异表达显著的DEG显著富集于炎症反应、细胞外基质(ECM)组装、细胞增殖调控、衰老相关条目(P值均<0.05),CD34^(+)平滑肌细胞差异表达显著的DEG显著富集于细胞迁移、凋亡过程、转录的正调控、吞噬体等条目(P值均<0.05),CD34^(+)KC差异表达显著的DEG显著富集于线粒体功能、转录、神经退行性疾病相关条目(P值均<0.05),CD34^(+)类软骨细胞差异表达显著的DEG显著富集于节律调控、ECM、病毒感染等相关条目(P值均<0.05)。结论CD34^(+)细胞在普通小鼠和糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中均存在高异质性,2种小鼠创面间CD34^(+)细胞亚群差异表达显著的DEG显著富集的相关功能与创面愈合过程紧密相关。

miR-214-5p通过调控SFRP2影响人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡

目的研究人瘢痕疙瘩形成过程中微小RNA-214-5p(miR-214-5p)与分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)2对成纤维细胞增殖及凋亡的影响并分析可能作用机制。方法分离培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)与正常皮肤成纤维细胞(NFB),miR-214-5p mimic、miR-NC、si-SFRP2、si-NC分别转染KFB细胞,应用qRT-PCR与Western印迹分别检测miR-214-5p、SFRP2 mRNA及蛋白表达变化。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法与流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡。采用双荧光素酶报告实验检测miR-214-5p是否可调控SFRP2基因。结果 KFB细胞中miR-214-5p表达水平显著低于NFB细胞(P<0.05),而SFRP2 mRNA与蛋白表达水平显著高于NFB组(P<0.05)。miR-214-5p组KFB细胞增殖活力明显低于miR-NC组(P<0.05),与miR-NC组相比,miR-214-5p组CyclinD1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而p21、p27蛋白表达水平显著升高(P<0.05),转染miR-214-5p mimic后KFB细胞凋亡率显著高于miR-NC组(P<0.05),Bcl-2表达水平显著降低(P<0.05),而Bax、酶切caspase-3表达水平均显著升高(P<0.05),SFRP2与miR-214-5p存在结合位点,共转染miR-214-5p mimic与WT-SFRP2野生型质粒的KFB细胞相对荧光素酶活性显著低于共转染miR-NC与WT-SFRP2野生型质粒的KFB细胞(P<0.05),表明miR-214-5p可与SFRP2基因的3′UTR结合而调控其活性。miR-214-5p组SFRP2蛋白(0.17±0.03)显著低于miR-NC组(0.58±0.05,P<0.05);anti-miR-214-5p组SFRP2蛋白(0.92±0.08)显著高于anti-miR-NC组(0.59±0.06,P<0.05)。相较于si-NC组,转染si-SFRP2可显著抑制细胞增殖及显著促进细胞凋亡,共转染miR-214-5p mimic与pcDNA-SFRP2后细胞增殖活力显著高于miR-214-5p+pcDNA组(P<0.05),与miR-214-5p+pcDNA组比较,miR-214-5p+pcDNA-SFRP2组细胞凋亡能力显著降低(P<0.05)。结论 miR-214-5p负向调控SFRP2表达并通过影响细胞增殖及凋亡蛋白表达进而抑制KFB增殖并促进细胞凋亡。

自体富血小板血浆在糖尿病足治疗中的应用进展

糖尿病足引发的慢性难愈性创面是目前社会所面临的重要健康问题之一。目前,糖尿病足有越来越多先进的治疗方案,包括组织工程人工皮肤替代物法、高压氧治疗法、应用负压敷料等,然而,仍缺少十分有效的治疗手段。自体富血小板血浆(PRP)富含血小板、白细胞、生长因子等多种成分,具有促进创面修复,减轻创面疼痛,封闭保护创面,抑制局部细菌生长等特点,在糖尿病足治疗的应用中有确实的疗效。随着PRP技术日趋成熟,PRP可能成为糖尿病足领域最有发展前景的治疗方式之一。