藏药柳茶提取物对非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏保护作用及其机制研究

目的研究藏药柳茶提取物(治疗胃胀痛及消化不良藏药)对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠肝脏保护作用的机制。方法用高脂饮食复制NAFLD大鼠模型,随机分为4组:模型组、柳茶提取物低、中、高剂量组;同时设立正常对照组,相应干预8周后,处死。制作肝组织切片观察形态变化;检测血清ALT、AST水平;荧光定量RT-PCR法测抗氧化酶GSH-PX2及CAT mRNA表达量。结果与模型组相比,柳茶干预组肝细胞损伤减轻,肝功能改善,CAT mRNA表达显著增加,GSH-PX2 mRNA表达有不同程度增加。结论藏药柳茶提取物对NAFLD大鼠肝脏损伤具有保护作用;可能与上调肝脏抗氧化酶GSH-PX2、CATmRNA的表达,增强其抗脂质过氧化能力有关。

人β防御素-2稳定表达细胞株的建立及其表达产物对耐药大肠埃希菌抗菌活性研究

目的建立稳定表达人β防御素2(hBD2)的COS-7细胞株,并检测其表达产物对耐药大肠埃希菌的抗菌活性。方法将重组hBD2真核表达载体pCMV-hBD2通过脂质体转染COS-7细胞,筛选稳定表达hBD2单克隆细胞株;经RT-PCR和Western blot检测稳定转染后目的基因在转录水平和蛋白水平的表达;用微量稀释法检测稳定转染后细胞培养上清液对耐药大肠埃希菌的抗菌作用。结果筛选出稳定表达hBD2的COS-7细胞株,检测到目的基因在转录水平和蛋白水平均有表达,且其表达产物使耐药大肠埃希菌存活率降至15%。结论建立了稳定表达hBD2的COS-7细胞株,其表达产物对耐药大肠埃希菌具有一定的抗菌活性。

乳腺导管内增生性病变及乳腺浸润性导管癌中TRβ1基因甲基化的研究

目的:了解乳腺浸润性导管癌及乳腺导管增生性病变组织甲状腺素受体β1(thyroid hormone receptorβ1,TRβ1)基因启动子区甲基化状态,探讨其与乳腺癌发生的关系。方法:采用甲基化特异性PCR(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)技术,研究40例乳腺浸润性导管癌(infiltrating ductal carcinoma,IDC)、12例普通型导管增生(usual ductal hyperplasia,UDH)、8例乳腺不典型性导管增生(atpical ductal hyperplasia,ADH),24例导管原位癌(duetal carcinoma in situ,DCIS)组织及10例健康成人女性乳腺组织中TRβ1基因启动子区甲基化状态。结果:正常乳腺组织、UDH、ADH、DCIS和IDC中,TRβ1基因甲基化率分别为0.0%(0/10)、16.7%(2/12)、37.5%(3/8)、62.5%(15/24)和80.0%(32/40),正常组织TRβ1基因甲基化率与DCIS和IDC相比差异有统计学意义(P正常组对DCIS=0.001,P正常组对IDC=0.000);UDH与DCIS相比,差异无统计学意义(P=0.009);UDH与IDC相比差异有统计学意义(P=0.000)。结论:TRβ1基因启动子区CpG岛甲基化是乳腺癌发生过程中的早期事件,可能在乳腺癌发生和乳腺增生病癌变过程中起重要生物学作用。

人β防御素抗肿瘤作用的研究进展

人β防御素具有广谱抗菌活性、趋化作用和调节获得性免疫应答的功能,近年来发现人β防御素还具有抗肿瘤作用,其机制可能为抑制肿瘤生长和增殖,促进抗肿瘤免疫应答,抑制肿瘤迁移、侵袭及抑制肿瘤新生血管的形成。

曲马多联合电针对神经病理性疼痛大鼠模型的治疗及对脊髓IL-1β和IL-10的影响

目的通过神经病理性疼痛大鼠模型,研究曲马多联合电针对神经病理性疼痛的治疗效果,以及对脊髓IL-1β和IL-10水平的影响。方法本研究采用坐骨神经分支选择性损伤的神经病理性疼痛模型,在术后第4天开始,连续7天进行曲马多,电针和针药联合治疗。观察治疗后大鼠机械性痛阈和冷诱发持续性疼痛的变化以及对脊髓IL-1β和IL-10水平的影响。结果①连续治疗7天后,与单独使用曲马多和电针相比,针药联合治疗能有效降低冷板抬足次数和提高50%缩爪阈值,达到更强的镇痛效果;②电针不影响脊髓中IL-1β的水平;③电针可以增加脊髓中IL-10的含量,并且与曲马多具有协同作用。结论曲马多联合电针对神经病理性疼痛治疗,比单独使用曲马多和电针都具有更强的镇痛作用。电针可以增加脊髓中IL-10的水平,并与曲马多具有协同作用。

医学本科生科研创新能力培养的探讨

随着医学的发展及科技成果快速应用于临床,培养具有科研创新能力的医学人才成为医学院校培养目标之一。文章根据笔者指导本科生科研过程经历,分析目前医学本科生科研创新能力培养中面临的科研创新能力认识不足、学生理论知识薄弱、动手能力差、创新能力缺乏、平台建设及经费不足、教师投入回报不对等各种问题,对医学本科生科研创新能力培养方法进行探讨,明确本科科研教育目标、开展课堂和项目依托的培养途径、建立政策支持及平台建设,为医学本科生科研创新能力培养提供参考。

藏药柳茶提取物对单纯性肥胖大鼠脂质代谢的影响

目的观察藏药柳茶对单纯性肥胖大鼠脂质代谢的影响,初步探讨其作用机制。方法:复制单纯性肥胖大鼠模型,藏药柳茶水提取物灌胃给药8周后,检测体重、体长,计算Lee’s指数,分离并称取肾周及睾周脂肪重量;生化法检测血糖(GLU)、血总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)的含量;放射免疫法检测血清瘦素(LEP)和胰岛素(INS);琼脂糖凝胶电泳检测脂肪细胞凋亡状况。结果:柳茶治疗后动物血糖、血脂含量明显降低,血瘦素和胰岛素水平下降。但实验未见到明显促脂肪细胞凋亡的作用。结论:藏药柳茶可明显抑制大鼠体重增长,其作用机制可能与改善瘦素和胰岛素抵抗、加快脂肪代谢有关。

乳腺癌组织中甲状腺受体β1基因表达及临床意义

目的:探讨甲状腺素受体β1(TRβ1)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法:运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测40例乳腺癌及10例正常乳腺组织中TRβ1基因表达情况。结果:TRβ1基因在10例正常乳腺组织中全部表达,而TRβ1基因在40例乳腺癌组织中mRNA表达下降34例(85%)。乳腺癌组织中TRβ1基因表达明显低于正常乳腺组织(P<0.05)。不同年龄的患者TRβ1基因mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05),在不同临床分期、淋巴有无结转移、ER的阳性与阴性表达及肿瘤大小不同的患者中,TRβ1基因mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TRβ1在乳腺癌的浸润和转移方面起重要作用,可成为评估乳腺癌严重程度的新指标。

LY294002联合姜黄素对人膀胱癌EJ细胞的体外抑制作用

目的研究磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)特异性抑制剂LY294002与姜黄素联合对体外培养的人膀胱癌EJ细胞的抑制作用。方法用MTT法,检测姜黄素单独或联合PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002对人膀胱癌EJ细胞的抑制率;用流式细胞技术及Western blotting法,检测药物单独或联合作用对EJ细胞凋亡的影响。结果联合LY294002能够显著提高姜黄素对EJ细胞的抑制率;联合LY294002能够增加EJ细胞的凋亡水平。结论 LY294002通过促进细胞凋亡有效提高姜黄素对EJ细胞抑制作用的敏感性,通过抑制PI3K/Akt信号转导通路的激活,可明显提高姜黄素对膀胱癌的治疗效果。

人β-防御素-2基因表达及其抗菌活性

目的获得人β-防御素-2(humanβ-defensin-2,hBD2)基因并构建其真核表达载体,转染小鼠纤维母细胞(L929),检测其表达,观察hBD2的体外抗菌活性。方法采用逆转录(RT)-PCR方法从人宫颈癌组织获取人β-防御素-2基因,然后进行克隆扩增,重组真核表达载体pCAGG-hBD2,通过磷酸钙共沉淀法将pCAGG-hBD2导入L929细胞,并用RT-PCR法检测hBD2的表达,用Kirby-Bauer纸片扩散法检测其抗菌活性。结果RT-PCR凝胶电泳及测序分析的结果显示,所克隆的hBD2基因序列正确,并成功构建了真核表达载体pCAGG-hBD2。Kirby-Bauer纸片法显示,hBD2对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌有明显的杀灭效应。结论转染pCAGG-hBD2的L929细胞能高效表达hBD2,其对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌有杀灭作用。

羟基红花黄色素A对淀粉样蛋白诱导的氧化应激和学习记忆功能损伤的影响

目的:研究羟基红花黄色素A(HSYA)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的氧化应激和学习记忆功能损伤的影响。方法:通过侧脑室注射Aβ建立学习记忆功能损伤的动物模型,术后通过腹腔注射HSYA进行干预,采用Morris水迷宫实验来检测学习记忆功能的改变,测定大鼠脑组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量以及炎症因子IL-6和TNF-α的水平。结果:HSYA能够改善由Aβ诱导的学习记忆功能损伤,降低脑组织海马中MDA的含量,增加SOD和GSH的含量;降低脑组织海马中IL-6和TNF-α的水平。结论:HSYA能抑制由Aβ诱导的脑组织中氧化应激水平和炎症反应,改善由Aβ诱导的学习记忆功能损伤。

硼替佐米联合自体外周血造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤

本研究探讨硼替佐米联合自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)治疗多发性骨髓瘤(MM)的疗效。对5例MM患者行自体外周血造血干细胞移植,在APBSCT前和预处理中以及移植后的维持治疗中均应用硼替佐咪治疗。选择预处理方案为:硼替佐米(bortezomib)+马法兰(melphalan)。输注的外周血单个核细胞(PBMNC)数为4.06×108(4.09×108-4.37×108)/kg,CD34+细胞数为3.98×106(2.49×106-8.2×106)/kg。结果表明:5例患者造血完全重建,中性粒细胞(ANC)大于0.5×109/L中位时间为14(13-25)天,Plt大于50×109/L中位时间为28(21-58)天。无移植相关死亡病例,5例患者均无病生存。结论:硼替佐米联合自体外周血造血干细胞移植是治疗MM的有效方法,移植后给予硼替佐米维持治疗可能是患者延长生存时间、提高生活质量的较好方法。

藏药柳茶提取物对非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏脂肪代谢的影响

目的:研究柳茶提取物对非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏脂肪代谢的影响.方法:高脂饲料饲养SD大鼠,6wk后建立非酒精性脂肪肝病模型.随机分为4组:模型组、柳茶提取物低、中、高剂量组,另设正常对照组.分别给相应干预8wk后处死,测血丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)水平及肝匀浆脂肪含量;制作肝组织切片在光镜下观察形态变化;实时荧光定量RT-PCR法测肝脏脂肪代谢关键酶PPARα、ACOmRNA表达量,Westernblot检测PPARα蛋白表达水平.结果:与模型组相比,柳茶提取物各剂量组肝功能有不同程度好转,与模型组比较,柳茶提取物低、中剂量组ALT、AST水平均明显降低,有统计学差异(29.83mmol/L±2.78mmol/L,25.78mmol/L±2.63mmol/Lvs31.90mmol/L±2.52mmol/L;110.53mmol/L±12.33mmol/L,100.45mmol/L±12.57mmol/Lvs128.61mmol/L±16.01mmol/L,P<0.05或0.01);肝匀浆中柳茶提取物中剂量组胆固醇(CHOL)及三酰甘油(TG)含量均较模型组明显下降,差异具有统计学意义(0.30mmol/L±0.02mmol/Lvs0.47mmol/L±0.04mmol/L,0.75mmol/L±0.06mmol/Lvs0.85mmol/L±0.04mmol/L,P<0.01或0.05).肝细胞形态学改善以柳茶提取物中剂量组表现最为显著,肝细胞内脂滴消失,无炎性细胞浸润及细胞坏死,胞质疏松,肝窦增宽;与模型组相比,柳茶提取物中、高剂量组PPARα、ACOmRNA表达量增加(均P<0.01);柳茶组PPARα蛋白与模型组相比有不同程度的增加,且与柳茶剂量呈正相关,剂量越大,PPARα蛋白的表达量也越大.结论:柳茶提取物可上调脂肪代谢关键酶PPARα、ACOmRNA水平,促进PPARα蛋白合成,增强非酒精性脂肪肝大鼠肝脏脂肪酸氧化,改善肝功能.

柳茶对荷瘤小鼠脾淋巴细胞产生IL-2和TNF-α的影响

目的:观察藏药柳茶水提物对肿瘤生长的抑制作用以及其对荷瘤鼠脾淋巴细胞产生细胞因子IL-2和TNF-α水平的影响。方法:采用腹水型肉瘤细胞株和昆明种小白鼠建立小鼠肿瘤模型,用ELISA(酶联免疫吸附试验)双抗体夹心法测定荷瘤鼠脾淋巴细胞产生水平。结果:柳茶能明显抑制肿瘤的生长,可增强小鼠脾淋巴细胞产生IL-2和TNF-α的能力。结论:柳茶可以促进机体细胞因子IL-2和TNF-α的分泌,通过调节免疫功能而发挥抗肿瘤的作用。

银杏二萜内酯葡胺对阿尔茨海默病大鼠学习记忆障碍的改善作用

目的探讨银杏二萜内酯葡胺对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆障碍的改善作用及对突触相关蛋白表达的影响。方法40只大鼠随机分为假手术组、模型组和银杏二萜内酯葡胺低、中、高剂量组(15、30、60 mg/kg)。通过侧脑室定位注射Aβ_(1-42)建立AD大鼠模型,尾静脉注射给药4周后,通过Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,蛋白免疫印迹法检测大鼠脑组织海马中突触蛋白NR2B、PSD95、BDNF表达,以及下游信号通路蛋白ERK1/2、CaMKⅡ、CREB、TrkB表达。结果与模型组比较,银杏二萜内酯葡胺中、高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短(P<001),穿越平台次数、目标象限停留时间和游程增加(P<001),海马p-NR2B、p-CaMKⅡ、p-ERK、p-CREB、PSD95、BDNF、p-TrkB蛋白表达升高(P<001)。结论银杏二萜内酯葡胺能改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能与激活NR2B相关的CaMKⅡ/ERK/CREB信号通路,增强PSD95、BDNF表达,激活TrkB信号通路相关。

NF-κB、TNF-α在淹溺大鼠脑组织中的表达及其与脑损伤的相关性

目的:探讨淡水淹溺后大鼠脑组织中细胞因子NF-κB、TNF-α的表达及其与淹溺应激引起脑损伤之间的关系。方法:Wistar大鼠70只,其中正常对照(Ⅰ组)、溺水致死(Ⅱ组)、溺水后存活(Ⅲ组)3h、6h、12h、24h、40h各10只,剥取脑组织固定、切片,HE染色后光镜下观察形态学改变;SABC免疫组化法检测各组大鼠脑组织中NF-κB、TNF-α的表达。结果:Ⅰ组脑组织结构清晰,无水肿、出血、坏死病灶;Ⅱ组脑实质疏松,小血管周隙增宽,部分神经细胞体积增大变性;Ⅲ组随溺水后存活时间的推移,脑损伤程度逐渐加重,其中24h脑水肿最重,40h个别脑实质小灶性液化性坏死。Ⅱ组脑指数明显高于Ⅰ组(P<0.05),并高于Ⅲ组,与3h、6h、12h差异有统计学意义(P<0.05)。与Ⅰ组相比,Ⅲ组6h时NF-κB表达显著增加(P<0.05);12h时TNF-α表达显著增加(P<0.05)。结论:淡水淹溺后存活大鼠发生脑损伤时NF-κB和TNF-α高表达,提示NF-κB、TNF-α与淹溺应激所致脑损伤有关。

壳聚糖抗肿瘤缓释药物的特征

背景:肿瘤严重危害人类的健康,应用有效的化学药物治疗具有重要的意义。目的:分析壳聚糖载药缓释系统抗肿瘤的作用机制及治疗效果。方法:分析壳聚糖抗肿瘤药物缓释材料释放药物机制以及抗肿瘤的作用机制,并分析壳聚糖及其衍生物负载多种抗肿瘤药物如阿霉素、表阿霉素、表柔比星、5-氟尿嘧啶、紫杉醇等的特征及抗肿瘤作用效果。结果与结论:壳聚糖抗肿瘤缓释药物材料具有良好的药物缓释性能以及抗肿瘤性能,能够负载各种常用的抗肿瘤药物,可以控制药物释放速率,延长药物作用时间,维持有效的药物浓度,降低药物的毒副作用,并且对肿瘤及组织器官具有靶向性作用,明显提高了化疗药物对肿瘤的治疗作用。

大鼠β-防御素-2的重组表达及抗菌活性检测

目的构建大鼠β-防御素-2(rBD2)基因的真核表达载体pCAGG-rBD2,并转染小鼠纤维母细胞(L929),为解决细菌耐药性问题提供进一步的实验基础。方法以大鼠肺组织总RNA为模板,采用RT-PCR的方法获得β-防御素-2基因cDNA,将其克隆到pGEM-T Easy载体并构建含有目的片段的真核表达载体pCAGG-rBD2,经脂质体介导转染L929细胞,通过RT-PCR和Western blotting检测目的基因表达情况。结果成功克隆并构建了含有目的基因rBD2的真核表达载体pCAGG-rBD2,转染pCAGG-rBD2的细胞中检测到了rBD2基因在转录水平和蛋白水平的表达,其细胞培养的上清液对金黄色葡萄球菌具有杀灭作用。结论防御素在真核表达系统的成功表达,为进一步开发高效能杀灭耐药性致病微生物的多肽类新药提供实验基础和理论依据。

LPS诱导L929细胞β防御素2和schlafen-2基因的表达及其信号转导

目的:通过研究LPS对于小鼠成纤维细胞(L929)β防御素(defb)和schlafen(slfn)基因表达的影响及其信号转导通路,探讨纤维细胞对病原微生物的防御作用。方法:LPS(200ng/ml)处理L929细胞2、4、6小时,提取细胞总RNA,用RT-PCR和荧光定量PCR的方法检测defb1,2和slfn1,2,3基因表达;应用Westernblot的方法检测了defb2蛋白的表达。NF-κB和P38MAPK两种信号转导通路的化学抑制剂BMS345541和PD169316检测defb2和slfn2基因表达的信号转导通路。结果:LPS能诱导小鼠成纤维细胞defb2的表达,并增强slfn2的表达;P38MAPK和NF-κB信号转导通路调控小鼠成纤维细胞defb2和slfn2的表达。结论:在感染时,小鼠成纤维细胞可能通过诱导defb2的产生而发挥抵御病原微生物的作用。

CpG-ODN及PolyICLC在结核亚单位疫苗中的佐剂效应

目的观察TLR识别配体不同组合佐剂对结核分枝杆菌融合蛋白免疫原性的影响及DDA对TLR识别配体的辅助效应。方法 CpG-ODN(CpG)和/或PolyICLC联合/不联合DDA,分别与融合蛋白Mtb10.4-HspX(MH)混合,制备亚单位疫苗,于第1、4、7周皮下免疫C57BL/6小鼠。以PBS和BCG(仅免疫1次)作为对照。末次免疫后6周,采血检测血清抗体水平,并分离脾淋巴细胞,检测分泌IFN-γ的淋巴细胞水平。结果经MH及HspX抗原刺激后,MH+CpG+PolyICLC+DDA组小鼠分泌IFN-γ的脾淋巴细胞数高于其它各组(P<0.05),MH+CpG+PolyICLC组其次,显著高于MH+CpG及MH+PolyICLC组(P<0.05);联合DDA佐剂组均分别高于对应的未联合DDA佐剂组(P<0.05)。各亚单位疫苗组诱导产生的抗MH及HspX的IgG1、IgG2b、IgG2c水平均明显高于BCG组(P<0.05),其中MH+CpG+PolyICLC+DDA组3种抗体水平最高;各亚单位疫苗组IgG2c/IgG1均高于BCG组(P<0.05)。结论 CpG+PolyICLC+DDA佐剂增强了结核分枝杆菌融合蛋白的免疫原性;CpG和PolyICLC具有佐剂协同作用;DDA有助于CpG和/或PolyICLC诱导特异性细胞免疫应答。