抗菌肽在细菌感染动物模型中的抗菌活性和毒性评价方法研究进展

抗菌肽作为新型的潜在抗菌药物,在耐药问题日益严峻的今天引起了广泛关注。在对抗菌肽体外研究不断深入的同时,抗菌肽体内研究也逐渐成为关注重点。论文主要从抗菌肽的体内抗菌活性研究和毒性评价两个方面进行了综述,在体内抗菌活性研究中介绍了模型设计及动物试验原则、接种途径和模型鉴定方法,并对常用于抗菌肽体内研究的几种典型细菌感染动物模型建立及活性试验方法进行了总结,在毒性评价中主要介绍了测定半数致死量(LD50)法,同时对建模及活性毒性评价研究中的不同方法进行了对比分析。

HPLC用于阿司匹林片药动学教学实验改革与设计

血药浓度法研究阿司匹林片在家兔体内的药物动力学实验是我校针对药学专业学生开设的一个主要实验,原实验是用显色法测定阿司匹林主要代谢产物水杨酸的血药浓度,样品处理时所加的混合试剂[HCl、Fe(NO3)3、HgCl2]毒性大、操作繁琐、稳定性差、导致学生实验结果不好。本文介绍了高效液相色谱法用于家兔口服学生自制的阿司匹林片的药物动力学教学实验的改革与设计,改进后的样品处理方法操作安全简便、检测灵敏度高,重现性及稳定性好,适用于测定水杨酸血药浓度及阿司匹林药物动力学研究,同时在生物药剂学与药物动力学实验教学中提高学生的综合素质。

线粒体移植增强人神经胶质瘤U87细胞的辐射敏感性

线粒体移植(mitochondrial transplantation)是从患者正常组织分离线粒体然后注入线粒体损伤或缺失的部位,使损伤细胞获得救治、器官功能得以恢复的全新干预技术。本研究重点探讨线粒体移植对人神经胶质瘤细胞(U87)辐射敏感性的影响。提取人星形胶质细胞(human astrocytes,HA)的线粒体,用荧光探针Mito-Tracker Red进行标记后再与U87细胞共培养,激光共聚焦显微镜观察发现,Mito-Tracker Red的红色荧光大量出现在U87细胞内;随后对进入细胞内的游离线粒体荧光强度进行定量分析,游离线粒体和U87细胞共培养12 h时,单细胞内荧光强度由本底值0. 08上升至1. 83,表明游离线粒体可以通过共培养方式进入U87细胞内。随后给予U87细胞X射线辐照,Western印迹结果显示,联合组与单独辐照组相比,Cyto-C和Bax的表达量分别由179. 5%和198. 5%升高至251. 72%和256. 10%,Bcl-2的表达量由57. 17%降低至22. 23%;使用Annexin V/PI双染法检测到联合组U87细胞凋亡量相比单独辐照组的3. 1%和23. 5%上升至19. 2%和43. 8%; RT-CES检测结果表明,96 h内联合组U87细胞生长曲线被抑制;联合组克隆形成率相对单独辐照组的53%下降至29. 3%。鬼笔环肽染色发现,线粒体移植组细胞表面丝状伪足相比对照组明显减少。本研究提示,线粒体移植能够促进辐射诱导的肿瘤细胞凋亡,对U87细胞具有辐射增敏作用,其作用机制与重新激活线粒体凋亡通路、降低肿瘤恶性程度有关。

长效胸腺五肽的合成

目的提高长效胸腺五肽(mPEG(10kD)-TP5)——定位单链聚乙二醇化修饰的胸腺五肽的合成产率。方法选用Fmoc-Tyr(tBu)-Wang树脂和Fmoc/t-Butyl策略完成所有氨基酸的缩合,三氟乙酸对Wang树脂、侧链切割脱除。在碱性条件下,单甲氧基聚乙二醇修饰物(mPEG(10kD)-SPA)定点连接到赖氨酸的侧链氨基(ε-NH2)上。中间产物经钯碳催化氢化,得到mPEG(10kD)-TP5。结果目标产物总收率为20%,新合成路线比我们之前报道的方法产率提高了10倍。结论路线操作简单,易于纯化,产率较高。

甘草黄酮分离纯化工艺

目的:筛选具有酪氨酸酶抑制作用的甘草黄酮分离、纯化工艺。方法:以甘草总黄酮含量及酪氨酸酶抑制率为指标,对甘草黄酮分离纯化工艺进行优化,同时考察不同分离条件对其酪氨酸酶抑制活性的影响。结果:甘草黄酮的最佳分离纯化工艺为30～60目聚酰胺,上样液pH 6,料液比(甘草黄酮粗提物-聚酰胺)32.48∶1,上样液质量浓度3.215 g·L-1,洗脱剂乙醇体积分数70%,洗脱流速3 mL·min-1·g-1,洗脱剂用量1 BV。结论:采用该优选工艺成本低,收率高,安全,操作简便,适合工业化大生产。

抗肿瘤活性的新型高效细胞穿膜肽[Cys-CPT(2,9)] penetratin的设计及活性评价

本文将半胱氨酸-喜树碱(Cys-camptothecin,Cys-CPT)引进penetratin第2、9位,合成新型穿膜肽类似物[Cys-CPT^(2,9)]penetratin,旨在探索一条具有强穿膜活性且具有抗肿瘤活性的新型细胞穿膜肽。通过激光共聚焦实验和流式细胞术观察[Cys-CPT^(2,9)]penetratin在He La细胞中荧光摄取情况,使用不同内吞抑制剂研究[Cys-CPT^(2,9)]penetratin的细胞摄取机制,最后通过MTT实验测试[Cys-CPT^(2,9)]penetratin抗肿瘤活性。在激光共聚焦及流式细胞术实验中显示[Cys-CPT^(2,9)]penetratin的穿膜活性显著增强,它的胞内荧光强度比penetratin明显提高5倍。而对于[Cys-CPT^(2,9)]penetratin的细胞摄取机制,它主要通过网格蛋白和巨胞饮内吞途径进入细胞内。[Cys-CPT^(2,9)]penetratin对He La细胞具有抗肿瘤活性,并强于抗肿瘤药物喜树碱。结果说明,[Cys-CPT^(2,9)]penetratin是一个新的高膜转导活性的细胞穿膜肽,同时对HeLa细胞具有抗肿瘤活性。