基于模拟婴儿胃肠消化的骆驼初乳和常乳中蛋白质和脂肪消化特性的比较分析

该研究采用婴儿体外消化模型,对驼初乳与常乳中的蛋白质、脂质和微观结构的消化特征进行了比较分析,旨在揭示两者消化行为上的差异。结果表明,在胃消化30 min和肠消化30 min后,驼初乳和常乳的蛋白浓度急剧下降,水解度存在显著差异。驼初乳中含有对婴儿免疫系统有益的蛋白质,水解后释放更多必需氨基酸,有利于婴儿生长发育。两者脂质在胃消化后脂解程度差异不大,进入肠消化后迅速脂解,消化结束时存在显著差异。驼初乳脂解产物中甘油三酯、甘油二酯和单甘酯较多,而常乳产生更多游离脂肪酸,其中C16:0、C16:1和C14:0含量较高,对婴儿细胞结构和生长发育,以及神经系统和脑部发育至关重要。上述研究结果表明,驼初乳和常乳中的蛋白质和脂肪可以被婴儿很好地消化,产生的游离氨基酸和游离脂肪酸有利于婴儿的生长发育,为今后驼初乳和常乳基婴儿配方乳粉的开发提供了参考。

免疫检测技术在食源性致病菌中的应用研究进展

食品安全已成为一个重要的公共卫生问题,快速、准确地监测和检测食源性致病菌是控制和预防人类食源性疾病的最有效方法之一。由于食品基质的复杂性、细菌的多样性及不同生长和复制特性,给食源性致病菌检测带来了重大挑战。传统微生物检测方法耗时费力,不足以满足不可培养活菌细胞和现场快速食品检测的要求。因此,近年来针对食源性致病菌开发了各种免疫检测技术,比传统方法更加灵敏、简单和高效,具有广阔的应用前景。该文结合食源性致病菌亚致死损伤、活的不可培养(viable but non-culturable,VBNC)和休眠3种代谢状态的生物学特征及抗体的类型和特点,综述了当前用于食源性致病菌常见的免疫技术的检测原理、优缺点和应用,并对现有方法的局限性和未来发展方向进行讨论,以期为食源性致病菌免疫检测技术的开发和利用提供参考。

基于纳米抗体建立icELISA检测乳制品中黄曲霉毒素M1

纳米抗体(nanobody,Nb)具有稳定性高、特异性强、易于表达等优势,已经成为小分子免疫分析的重要工具。为了监测乳制品中黄曲霉毒素M1(aflatoxin M1,AFM1)的污染情况,以先前从双峰驼AFM1免疫文库中淘选得到的抗AFM1型纳米抗体M6为研究对象,评估其理化性质并建立间接竞争酶联免疫吸附测定法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。优化反应体系中封闭方法、甲醇溶液、pH值和离子强度等参数后,建立竞争抑制标准曲线,并进行方法学验证特异性和准确性。结果表明,Nb-M6具有良好的亲和力和热稳定性;Nb-icELISA的检测限(limit of detection,LOD)为0.111 ng/mL,半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))为1.498 ng/mL,乳制品加标回收率为89.8%~104.1%,与高效液相色谱法的检测结果趋于一致。该方法操作简单、便捷,可应用于乳制品中AFM1的初步批量筛查。

驼血蛋白中胰脂肪酶抑制肽的计算机模拟评估

本研究利用中性蛋白酶对驼血蛋白进行酶解,对其酶解工艺、胰脂肪酶(PDB code:1ETH)抑制活性、多肽分子特征以及分子结合模式进行研究,以期获得高活性的胰脂肪酶抑制肽。结果表明:中性蛋白酶在酶用量为5%、酶解pH为7.0、酶解温度为55℃、酶解时间为3 h的最佳工艺条件下酶解驼血蛋白所获多肽的胰脂肪酶抑制率为42.13%。使用LC-MS/MS共鉴定出533种肽段,肽兰克评分大于0.8的有8条肽段。其中ALERMFLGF、GQPAVPVRF、WDPSKVPPR三条肽段与胰脂肪酶结合显著。通过AMBER 19进行分子动力学模拟,结果显示,三条肽段均能与胰脂肪酶活性口袋残基结合,主要通过静电作用、氢键和疏水相互作用抑制其活性。其中GQPAVPVRF结合能最高且具有更多的结合位点而成为最具潜能的胰脂肪酶抑制肽。本研究为开发新型PL抑制剂肽提供了参考,为驼血蛋白的高价值利用提供了新途径。

基于UPLC-MS非靶向代谢组学分析不同年龄双峰驼肉代谢物差异

基于超高效液相色谱-质谱联用的非靶向代谢组学方法探究不同年龄组驼肉代谢物的差异及变化规律。结果表明,在3个年龄组(3~4、6~7岁和9~10岁,分别以I、II和III组表示)骆驼背最长肌中共鉴定出显著差异代谢物710种;在I vs II组显著差异代谢物有78个,其中I组上调47个,II组上调31个;在II vs III组显著差异代谢物有49个,其中II组上调18个,III组上调31个;在I vs III组显著差异代谢物有65个,其中I组上调29个,III组上调36个。京都基因与基因组百科全书通路分析结果表明,差异代谢物主要富集到蛋白质和氨基酸代谢、脂肪酸、维生素和矿物质代谢等相关通路,说明不同生长阶段骆驼中各营养素的消化代谢均有差异。I组中的多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA)(尤其n-6 PUFA、n-3 PUFA)含量和PUFA/不饱和脂肪酸值均显著高于III组,这主要与相关代谢通路上的花生四烯酸、亚油酸和13-L-过氧化氢油酸浓度的显著上调有关;同时L-亮氨酸、L-缬氨酸、L-谷氨酰胺等差异代谢物可以作为不同年龄驼肉品质差异的潜在标记物。

不同年龄驼肉蛋白组成的差异分析

采用串联质谱标签定量蛋白质组学与液相色谱-串联质谱联用技术分析不同年龄组驼肉之间蛋白质组成差异,筛选与驼肉品质相关的关键蛋白。结果发现,蛋白质的差异表达对骆驼不同年龄肉品质的差异有重要影响。在3个年龄组(3~4、6~7岁和9~10岁;分别以Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ表示)骆驼背最长肌中共检测到差异显著蛋白质311种;ⅠvsⅡ组、ⅡvsⅢ组以及ⅠvsⅢ组差异蛋白质数分别为245、16个和139个,其中上调蛋白质分别为194、1个和110个,下调蛋白质分别为51、15个和29个。基因本体论功能注释分析表明,结构蛋白质、代谢蛋白质和热应激蛋白质可以作为驼肉不同年龄的标志蛋白质。京都基因与基因组百科全书通路分析表明,差异蛋白质主要参与了脂肪酸代谢、糖酵解/葡萄糖生成、氨基酸的生物合成和低氧诱导因子-1信号通路;蛋白质相互作用分析表明,代谢酶类蛋白质是影响驼肉的关键连接蛋白质;相关性分析表明,共有16个差异蛋白质与嫩度品质有显著相关性,3个年龄组驼肉嫩度品质主要受肌动蛋白、组蛋白和蛋白激酶类的影响。本研究结果可为驼肉的分级评定、屠宰年龄的选择以及驼肉品质特性研究提供科学依据。

抗黄曲霉毒素M1纳米抗体的筛选与初步鉴定

黄曲霉毒素M1(aflatoxin M1,AFM1)对人类和动物具有致癌性、诱变性、致畸性等,广泛存在于哺乳动物乳汁及其乳制品中。因此,制备特异性强、灵敏度高的抗体来检测AFM1至关重要。该研究以AFM1-BSA为抗原免疫双峰驼,采血分离淋巴细胞,提取总RNA反转录为cDNA,通过巢式PCR获得重链可变区(variable domain of heavy chain,VHH),与pComb3XSS载体连接电击转化至Escherichia coli TG1,构建AFM1特异性噬菌体展示文库。以AFM1-OVA为靶向抗原,使用4轮酸洗脱和竞争洗脱相结合的策略对文库进行淘选,并对抗AFM1纳米抗体进行初步鉴定,最后预测了精准的三维模型结构。结果显示,抗AFM1纳米抗体文库库容量为2.27×10^(9)CFU,多样性丰富,插入率为100%。经淘选共获得6条独特序列的纳米抗体。其中VHH-M4和VHH-M6具有较高的灵敏度,初步测定半抑制浓度分别为0.415 ng/mL和1.877 ng/mL,线性范围分别为0.141~1.652 ng/mL和0.800~3.811 ng/mL。一级和二级结构结果显示VHH-M4和VHH-M6均为亲水性蛋白,框架区(framework region,FR)和互补决定区(complementarity determining region,CDR)区符合典型纳米抗体的结构特征。该研究为AFM1免疫学检测提供核心元件,并为探究AFM1与VHH的分子结合机制奠定基础。

纳米抗体多聚化测略提升间接竞争性酶联免疫吸附实验检测黄曲霉毒素M_(1)的灵敏度

酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容易变性,贮存期短,易受到检测环境中其他物质干扰而造成假阳性或假阴性等。该实验使用实验室前期获得的抗黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))纳米抗体(nanobody-M4,Nb-M4)与C4结合蛋白(recombinant C4 binding protein alpha,C4BPa)C端片段融合形成自组装七聚体融合蛋白(Nb-M4-C4 bpα),并基于该七聚体开发应用于乳制品中AFM_(1)的间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。在最佳实验参数下,AFM_(1)的IC_(50)为0.038 ng/mL,检测限为0.009 ng/mL,较单体Nb-M4的提高了8.63倍和5.56倍。与AFM_(1)类似物和其他常见真菌毒素的交叉反应可忽略不计,且在加标乳样中获得了良好的回收率和可重复性。此外,将所开发的方法应用于实际样品中AFM_(1)的分析,结果与HPLC的结果具有很好的相关性(R^(2)=0.995)。该研究表明,自组装的七聚化纳米抗体是改善亲和力和信号放大的有效策略,今后可用于灵敏、选择性和快速检测食品中的霉菌毒素和其他小分子污染物。

免疫分析技术在检测真菌毒素中的研究进展

真菌毒素是真菌在适宜条件下产生的次级代谢产物。真菌毒素不仅会危害人类和动物的健康,还对农业经济造成无法估量的损失。常见的真菌毒素检测方法以大型仪器检测为主,需要专业的实验人员进行检测,且耗时长。新兴的免疫分析技术具有操作简便、耗时短、成本低、干扰小、能同时处理大量样品等优点。本文综述了近年来几种常见的免疫分析技术中免疫原、抗体的开发,系统地对比了各类免疫分析技术的优缺点,为免疫分析技术在检测真菌毒素中的发展提供了新的思路。

骆驼乳清蛋白对对乙酰氨基酚致小鼠肝损伤的保护作用

本试验旨在研究骆驼乳清蛋白(CWP)对对乙酰氨基酚(APAP)所致小鼠肝损伤的保护作用。选取6周龄KM小鼠,适应性饲养1周后,随机分成6组,每组8只。正常对照组(NC)和APAP致肝损伤模型组(LD)的小鼠饲喂基础日粮并每天灌胃生理盐水,连续处理8 d后,LD组小鼠经腹腔注射APAP(325 mg/kg);N-乙酰半胱氨酸阳性药物对照组(NAC)的小鼠,每天腹腔注射N-乙酰半胱氨酸(150 mg/kg),连续处理8 d后,经腹腔注射APAP(325 mg/kg);CWP低、中、高剂量组(LCWP、MCWP和HCWP)的小鼠,每天分别灌胃100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg CWP,连续处理8 d后经腹腔注射APAP(325 mg/kg),造成小鼠急性肝损伤。注射APAP后12 h,各组小鼠经眼球采血并分离血清后处死。采集肝组织经H&E染色后观察组织学变化;检测小鼠血清中肝功能生物标志物水平、氧化应激标志物水平及肝脏中的抗氧化酶活性。结果表明:与LD组相比,低、中、高剂量CWP干预均能显著降低小鼠血清丙氨酸氨基转移酶活力、天冬氨酸氨基转移酶活力和肿瘤坏死因子-α含量(P<0.05),显著增强超氧化物歧化酶活性(P<0.05);中、高剂量CWP可显著降低小鼠血清丙二醛和白介素-6含量(P<0.05);高剂量CWP可有效缓解APAP所致的小鼠肝组织病理学改变,显著提高血清谷胱甘肽水平(P<0.05)。由此可见,CWP可增强小鼠肝脏的抗氧化能力,并抑制炎症反应,最终缓解了APAP诱导的肝损伤。