柯里拉京抗肿瘤作用的研究

目的 观察柯里拉京 (Corilagin)体内、外抗肿瘤活性及其量效关系。 方法 体外药效试验用MTT法 ,体内用小鼠移植性肿瘤及裸鼠移植人肿瘤细胞株观察柯里拉京抑瘤活性及与其他化疗药的协同作用。结果 柯里拉京体外对人卵巢癌细胞 (A2 780 )、鼻咽癌细胞 (KB)、骨肉瘤细胞 (OS 732 )和人结肠癌细胞 (HCT 8)IC50 值分别为 0 .2 5 μg/ml、1.2 μg/ml、7.4 2 μg/ml及 9.0 8μg/ml。体内对小鼠移植性肿瘤及裸鼠移植人肿瘤细胞株也显示出较显著抑制作用。结论 柯里拉京体外对A2 780、KB、OS 732和HCT 8人结肠癌细胞有明显的细胞毒活性 ,体内对小鼠肝癌H2 2 ,裸鼠移植人OS 732、HCT 8也显示出较好的抑制作用。

沈阳汉族人群HLA－DR、DQ、DP的DNA分型研究

使用ＰＣＲ／ＳＳＯ方法对９４名沈阳汉族健康人群进行了ＨＬＡ第Ⅱ类抗原等位基因的完全分型。共发现６６种等位基因，基中ＤＲＢ１２８种，ＤＲＢ３３种，ＤＲＢ５４种，ＤＱＡ１８种，ＤＱＢ１Ｉ３种，ＤＰＢ１１０种。分析了ＤＲ－ＤＱ连锁的五位点单倍型，共发现３８种，其中２１种是在白人为主的人群中已发现过的。本研究提出了中国东北人群ＨＬＡ第Ⅱ类抗原等位基因的遗传基本情况，可用于疾病研究的对照和其他中国人群资料的比较。

骨骼生长衰老规律和原发性骨质疏松症预诊的研究

采用单光子和双能Ｘ线骨密度仪对中国健康人群的桡、尺骨和腰椎、股骨近端骨密度进行了测量，找出了骨骼生长、发育及衰老的基本规律，从而也确定了中国人群桡、尺骨、腰椎及股骨近端骨密度的正常值范围，同时证明了中医“肾主骨”理论的正确。在调查结果的基础上，提出了原发性骨质疏松症生理年龄预诊法，并对全国人群进行原发性骨质疏松发生率的预诊，估计全国约有六千三百万人患有不同程度的骨质疏松症。所以全社会应充分重视对原发性骨质疏松症的研究和防治。

MGMT在神经胶质瘤中表达的临床意义及联合应用STZ对愈后的影响

目的:通过观察神经胶质瘤中O6甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6methylguanineDNAmethyltransferaseMGMT)的表达状态,探讨MGMT在胶质瘤中的表达与亚硝脲(ACNU/BCNU)耐药之间的关系;同时对于部分MGMT阳性患者给予链脲菌素(STZ)联合ACNU/BCNU治疗,观察疗效。方法:采用免疫组化法对神经胶质瘤石蜡标本检测MGMT,并与临床亚硝脲的随访结果进行比较;对8例MGMT阳性率高且对亚硝脲治疗无效的难治性脑瘤患者,开展STZ联合ACNU治疗。结果:68例神经胶质瘤,MGMT表达的总阳性率为55.9%。在使用亚硝脲治疗的患者中,除8例加用STZ联合治疗外,余60例中,27例MGMT(-)者,使用ACNU治疗绝大部分有效;30例MGMT(+～++)者,使用ACNU治疗后绝大部分复发或死亡,表明MGMT表达与亚硝脲化疗呈负相关;另外8例MGMT阳性患者在进行了STZ联合ACNU治疗后,1例可测肿瘤全部消失,2例肿瘤体积缩小在50%以上,4例肿瘤体积消退<50%,1例无效。结论:MGMT阳性的胶质瘤患者比MGMT阴性的患者明显耐药,且耐药程度与MGMT表达强度无关,仅与其是否阳性有关。对于MGMT阳性患者,可选择ACNU/BCNU联合STZ使用,以提高亚硝脲的疗效。因此,化疗前检测胶质瘤MGMT的表达情况,预测化疗敏感性,对指导临床化疗具有重要意义。

柴黄益肾颗粒对单侧输尿管梗阻小鼠肾纤维化的作用及其机制

目的探讨柴黄益肾颗粒对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化的作用及其机制。方法将24只8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、模型组及柴黄益肾颗粒低、高剂量组(n=6)。对照组仅暴露且游离右侧肾输尿管;模型组行UUO建立UUO动物模型;柴黄益肾颗粒低、高剂量组按模型组方法建立UUO小鼠模型并分别予以3.8、7.6 g/kg柴黄益肾颗粒灌胃,7 d后麻醉处死小鼠收集肾标本。采用HE、Masson染色观察肾脏病理变化及纤维化程度,天狼星红染色观察胶原沉积情况。采用Western blotting检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)相关蛋白的表达水平。采用RT-PCR检测A33及GSK-3β、β-catenin mRNA水平的变化。同时,以正常小鼠肾小管上皮细胞(TCMK1)作为正常组,并利用转化生长因子-β(TGF-β)刺激TCMK1建立体外纤维化模型,柴黄益肾颗粒含药血清处理建立体外用药模型;并通过转染A33过表达质粒在TCMK1细胞内过表达A33,观察纤维化相关指标及A33及GSK-3β、β-catenin mRNA的表达变化。结果RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,模型组A33水平明显升高,而柴黄益肾颗粒高、低剂量组明显降低(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,模型组α-SMA、FN、Col-Ⅰ等纤维化相关因子的表达水平明显高于对照组(P<0.05);与模型组比较,柴黄益肾颗粒低、高剂量组α-SMA、FN、Col-Ⅰ的表达水平明显降低(P<0.05)。HE、Masson、免疫组化染色结果显示,与对照组比较,模型组肾脏结构损伤严重,胶原沉积明显增加,且GSK-3β、β-catenin蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,柴黄益肾颗粒低、高剂量组肾脏结构良好,肾脏损伤及纤维化均明显好转,GSK-3β、β-catenin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。体外实验结果证实,与正常组比较,A33过表达可促进TCMK1细胞纤维化相关因子的上调,明显增加Wnt/β-catenin信号通路下游靶点GSK-3β和β-catenin mRNA的表达(P<0.05),且A33过表达可逆转柴黄益肾颗粒含药血清下调的细胞纤维化改变(P<0.01)。结论柴黄益肾颗粒可通过下调A33/Wnt/β-catenin信号通路明显减缓UUO小鼠肾纤维化,且A33可能是肾纤维化的一个潜在治疗靶标。

温阳中药对实验性肝纤维化治疗作用的研究

目的 观察温阳中药对实验性肝纤维化的疗效。方法 32只 Wistar大鼠随机分为正常对照组与模型组 ,模型组采用皮下注射 CCl4 及饮用 1 0 0 ml/ L乙醇的方法制备出大鼠肝纤维化模型后 ,随机分为治疗组与病理对照组 ,治疗组予温阳药灌胃治疗一月 ,每日一次 ,实验结束后测定肝组织羟脯氨酸含量 ,并依据改进的炎症活动度及纤维化半定量计分系统 (SSS)评分 ,观察治疗组与病理对照组的组织学变化 ,同时对 SSS纤维化计分结果与肝组织羟脯氨酸含量进行相关性分析。结果 治疗组肝组织羟脯氨酸含量较对照组明显降低 (P<0 .0 1 ) ,SSS计分炎症活动度及肝纤维化程度明显改善 ,同时纤维化计分与肝组织羟脯氨酸含量正相关。

不同音乐作用下人的自主神经生理反应的研究

本实验研究试图通过对聆听不同类型乐曲人的自主神经生理反应进行观察及指标统计,进而寻求调节心理的选曲规律。同时,通过音乐专业与非音乐专业人员对不同音乐类型与生理反应的对应关系,为音乐调节身心的治疗功能提供有效地科学依据。研究表明,表达不同情绪的音乐可引发人体产生呼吸频率、心率和皮肤电阻的变化,但不能特异性的反映情绪的类别;专业组的生理反应幅度大于非专业组,提示专业组的音乐情绪情感体验强于非专业组。

人鼻咽癌细胞胞质内骨架系统的观察和维胺酸作用后对其影响的研究

用原位包埋法、细胞质骨架生物化学抽提、免疫组织化学和组织化学等方法，对正常人胚肺成纤维细胞、非洲绿恒河猴肾上皮细胞和人鼻咽癌细胞胞质骨架的形态学特征作了比较观察，并就维胺酸对人鼻咽癌细胞胞质骨架的形态分布、角蛋白、波形纤维蛋白等骨架成分的影响进行了研究。结果表明，与正常细胞相比，人鼻咽癌细胞胞质内骨架系统发育不良。维胺酸作用后，癌细胞中细丝状骨架纤维增多，并出现应力纤维束样排列，角蛋白增加。

永生化人肝细胞治疗小鼠急性肝衰竭的实验研究

目的评价微载体培养的永生化人肝细胞(immortalized human hepatocytes,IHH)对裸鼠急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)的治疗作用。方法采用腹腔注射四氯化碳(CCl4)建立裸鼠ALF模型,将微载体培养的IHH注射于裸鼠腹腔内进行腹膜透析治疗,并设未治疗组和空微载体治疗组,比较各组动物的肝功能损伤指标,肝组织病理和动物生存率。结果腹腔注射CCl4后24h,所有动物的转氨酶升高达正常值10倍以上,未治疗组和空微载体治疗组动物48h内全部死亡,肝组织检查发现肝细胞广泛坏死;而采用IHH微载体治疗组,48h的动物生存率为83.3%,持续14d后转为长期存活。存活的动物转氨酶降至正常水平,肝组织检查显示肝细胞坏死显著减少,免疫组织化学染色显示腹腔微载体上肝细胞仍存活,并表达人肝细胞特异蛋白α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)。结论采用微载体培养的IHH腹腔透析治疗小鼠ALF是有效的,表明IHH适合作为生物人工肝的细胞材料。

糖尿病患者红细胞形态和渗透脆性的初步研究

应用扫描电镜观察了22例糖尿病人4400个红细胞形态的异常百分比，并测定红细胞的渗透脆性。结果表明随着糖尿病病程延长、糖化血红蛋白升高，口形、嵴形红细胞的百分比明显升高（2．64±1．27比4．29±1．03，P＜0.001），细胞渗透脆性明显上升（0．17±0．04比0．33±0．17，P＜0.05）。提示，糖尿病人异常形态红细胞的出现不仅与红细胞的能量代谢障碍外，还可能与红细胞所处的高血糖、高血脂、高血液粘度的环境有关。而影响红细胞的渗透脆性的因素较为复杂，红细胞的圆形隆起在降低其渗透脆性方面起了重要作用。

柯里拉京抗肿瘤和致突变作用实验研究

目的 :观察柯里拉京药效和对人肿瘤细胞株的抑制生长作用。方法 :对柯里拉京 (Corilagin)进行了Ames试验、中国仓鼠肺细胞 (CHL)染色体畸变试验、小鼠骨髓多染红细胞微核试验和体外对人癌细胞株抗肿瘤活性试验。结果 :柯里拉京 (312 5～ 5 0 0 0 μg 皿 )对鼠伤寒沙门氏菌的诱发回变菌落数均未超过自发回变菌落数的 2倍 ;对CHL细胞 (14～ 2 2 0 μg mL)分别作用 6～ 4 8h的最高畸变率为 4 % ;对昆明小鼠 (112～ 11 2mg kg ,ip× 1)的微核细胞率测定最高 <3‰ ;体外对人卵巢癌细胞 (A2 780 )、鼻咽癌细胞 (KB)、骨肉瘤细胞 (OS 732 )、人肺腺癌 (A5 4 9)和人结肠癌细胞 (HCT 8)IC50 值分别为 0 2 5、1 2、7 4 2、8 2 5及 9 0 8μg kg。结论 :Corilagin对A2 780、KB、OS 732、A5 4 9和HCT 8细胞具有明显的抑制作用 。

继发性甲状旁腺增生与钙敏感受体表达的相关性研究

目的探讨钙敏感受体(CaR)在继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT)患者甲状旁腺组织中的表达及其在发病机制中的作用。方法采用免疫组化二步法对14例继发性甲状旁腺增生及8例正常甲状旁腺的石蜡标本进行CaR检测。结果14例甲状旁腺增生患者的切片中均可见到CaR阳性细胞,CaR阳性率平均为(20.816±3.41)%,其中8例结节性增生(NH)的CaR阳性率平均为(16.75±1.38)%,6例弥漫性增生(DH)病例为(28.16±2.16)%。结论CaR阳性表达的减少与甲状旁腺组织增生密切相关,甲状旁腺增生组织中的表达明显低于正常甲状旁腺组织;而在NH和DH中,以NH组表达减少更为显著。慢性肾功能衰竭所导致的CaR抑制,是引起SHPT的重要原因。

临床检验参考值及其意义(四)(下)

4.6血清碱性磷酸酶(Serum alkaline phosphatase,AKP) 4.6.1正常参考值Bessey Lowry速率法:100～280 IU/L(37℃) 4.6.2临床意义碱性磷酸酶(AKP)主要来自肝细胞和毛细胆管的微绒毛,当胆汁排出受阻,毛细胆管内压升高时,可刺激诱生AKP.其次胃、肠、肾、胎盘也可产生AKP,相应组织发生病变,也可引起AKP升高.妊娠3个月时胎盘产生AKP,9个月时达高峰,分娩以后1个月左右恢复正常水平.另正发育成长的儿童AKP活力也升高.

肾脏基础理论与临床(8)——谈肾小球肾炎的发病机制

1917年Schick提出肾炎的基本成因是免疫反应。60年代发现许多类型的肾小球肾炎病变同时伴有多种免疫球蛋白、补体和纤维粘连蛋白抗原在肾小球不同部位、肾小管和间质沉积。90年代末已公认肾小球肾炎的起始原因是免疫反应所产生的肾小球内免疫复合物。但免疫复合物并不一定致病。

肾脏基础理论与临床(5)——谈肾脏疾患的尿液检查(下)

1 尿糖定性及定量试验1.1 尿糖定性试验 正常人尿内含微量葡萄糖(【1.11mmol/L,20mg/dl),一般定性试验不能测出,一旦出现尿糖阳性,则称糖尿。通常用斑氏还原法,取尿液10ml,正常为阴性。 出现糖尿的原因有(1)糖代谢异常使血糖升高,超过正常肾糖阈,见于糖尿病、脑外伤、颅内出血、高血压脑病、重症脑膜炎、麻醉、窒息引起的酸中毒及某些肝病。短期内摄入大量的糖类(大于200g)、情绪激动、剧烈运动等(一过性糖尿)。(2)肾糖阈降低时,血糖虽未增高,亦可出现糖尿,且尿糖保持阳性者,称肾性糖尿。因肾小管对糖的重吸收功能减退所致,多为先天性、家族性或某些妊娠及哺乳期的妇女。

肾脏基础理论与临床(7)——浅谈肾小球疾病及分型

肾小球疾病意味着疾病起始于肾小球或者主要病变位于肾小球,而不是肾组织的其他基本成分(指肾小管、肾间质或肾的血管)。肾小球疾病可以由各种原因引起,最常见的是原发性肾小球肾炎。这一大类疾病在临床表现上、组织形态上、功能改变上具有共性。

行车人员职业应激损伤预警研究与行车安全

铁路行车人员属特殊职业群体,仅机车乘务员就达6万余人,其职业具有“轮班作业,长期接受质量较差的昼间睡眠;超劳(或局部时间的相对超劳)和紧张作业;不仅要承受社会、家庭双重压力,作业中还要受多种物理、化学性有害因素影响”的特点,致使大多产生职业应激效应—职业紧张。长久的应激负荷会引起细胞分子生物学的一系列改变,不仅可使该职业人群心脑血管等疾病高发,更使多数处于亚健康状态,出现诸如倦怠、惰性情绪、反应迟钝等亚临床表现,给行车安全带来严重的事故隐患。研究表明,单胺类神经递质(DA、NE、5HT)可作为职业应激的直接评价指标,血糖、血脂宜作为间接指标;再结合职业紧张量表的研究,就可对职业应激损伤提出良好的预警防护线。通过及时心理疏导,定期离岗休息,及时药物干预,就可防止职业应激相关疾病的发生;防止在岗位上突发心、脑血管意外而造成行车安全事故。因此,加强行车人员职业应激损伤预警的研究,对保障行车安全是十分重要的。

柴黄益肾颗粒抑制巨噬细胞Mincle改善小鼠慢性肾病模型肾纤维化

目的研究柴黄益肾颗粒对小鼠慢性肾病模型肾脏纤维化的影响及潜在作用机制。方法将36只C57BL/6雄性小鼠随机均分为假手术组、模型组、柴黄益肾颗粒低剂量(3.835 g·kg^(-1))组、柴黄益肾颗粒高剂量(7.67 g·kg^(-1))组、阳性对照厄贝沙坦组和柴黄益肾颗粒高剂量+Mincle激动剂海藻糖-6,6-二苯甲酸酯(trehalose-6,6-dibehenate,TDB)组(术后1 h,一次性腹腔注射TDB 10 mg·kg^(-1))。采用单侧输尿管结扎法(UUO)建立小鼠肾脏纤维化模型。术后1 h,各药物组给小鼠灌胃相应药物,假手术组和模型组灌胃生理盐水,每日1次,连续7 d。通过苏木精-伊红染色和天狼星红染色观察各组小鼠肾脏病理变化和纤维化改变,采用Real-time PCR和ELISA法检测各组肾脏中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达和分泌,免疫组化和Western Blot法检测纤维化指标α-SMA和Fn的蛋白水平,免疫荧光和Western Blot法检测Mincle及其下游信号Syk/NF-κB的蛋白水平,流式细胞术分析Mincle阳性的巨噬细胞比例。结果与模型组比,柴黄益肾颗粒低、高剂量组均能有效改善UUO诱导的肾脏损伤和纤维化,抑制肾脏α-SMA和Fn的蛋白水平(P<0.01)。同时,柴黄益肾颗粒高剂量组可有效降低UUO模型肾脏炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达和分泌(P<0.01),抑制NF-κB的磷酸化(P<0.01)。机制研究表明,柴黄益肾颗粒高剂量组可明显下调UUO小鼠肾脏中巨噬细胞Mincle的蛋白水平以及下游信号Syk的活性(P<0.01)。采用Mincle激动剂TDB激活Mincle后,柴黄益肾颗粒高剂量组改善的肾脏损伤、炎症因子分泌和纤维化效果明显减弱(P<0.05,P<0.01)。结论柴黄益肾颗粒可改善UUO诱导的小鼠肾损伤、炎症和纤维化,其作用机制可能与下调巨噬细胞Mincle/Syk/NF-κB信号有关。

沉默MKRN1基因表达对人胚胎肾细胞HEK-293T增殖及凋亡的影响

背景:研究报道敲低MKRN1可以抑制肿瘤细胞的生长,但MKRN1是否作为肿瘤相关蛋白在机体发挥作用还需进一步研究。由于siRNA介导的基因沉默是瞬时表达,持续时间短且常规慢病毒技术存在脱靶效应,利用四环素调控(Tet-on)慢病毒系统构建稳定沉默MKRN1基因的细胞系有着可逆的优势,且可规避上述缺点,对于深入研究MKRN1的生物学功能有重要的意义。目的:构建Tet-on慢病毒系统介导的MKRN1基因沉默载体,研究沉默MKRN1基因表达对人胚胎肾细胞HEK-293T增殖、凋亡的影响。方法:采用RNAi技术,针对MKRN1基因设计3条shRNA(命名为sh1,sh2,sh3),将3条shRNA序列连入四环素诱导表达载体pTripz中验证连入序列;通过三质粒系统转染HEK-293T细胞,并用含有1 mg/L强力霉素的完全培养基培养,进行慢病毒包装,收取48 h及72 h病毒液,将其浓缩后感染HEK-293T细胞,感染48 h后用荧光显微镜观察病毒感染效率。通过实时荧光定量PCR、Western blot检测MKRN1的敲减效率;Western blot检测四环素诱导表达系统是否构建成功;通过集落形成实验及Western blot检测沉默MKRN1表达后对HEK-293T细胞增殖、凋亡能力的影响。结果与结论:(1)设计的3条MKRN1-短发夹RNA(sh1、sh2、sh3),均成功连入Tet-on载体,且各组载体序列正确;通过慢病毒成功感染HEK-293T细胞;(2)实时荧光定量PCR及Western blot检测发现3条shRNA序列中1号序列敲低MKRN1水平明显降低(P<0.05),且沉默组不加入强力霉素诱导后目的基因的表达得到回复;(3)集落形成实验发现沉默MKRN1后HEK-293T细胞增殖能力下降(P<0.05);Western blot检测敲低MKRN1后,增殖细胞核抗原表达下调,细胞凋亡相关指标BAX表达增加,Bcl2表达下调,Bcl2/BAX的比值下调(P<0.001);(4)结论:采用Tet-on慢病毒载体系统构建了稳定沉默MKRN1的HEK-293T细胞株,且沉默MKRN1后能够抑制HEK-293T细胞的增殖,并促进其凋亡。通过构建稳定沉默MKRN1的HEK-293T细胞可为进一步研究MKRN1的生物学功能奠定基础,也为研究其他基因的生物学功能提供一个方法学上的参考。