茶色素对兔实验性动脉粥样硬化的预防作用

为探讨茶色素对高胆固醇兔动脉粥样硬化的影响 ,将 2 4只新西兰雄性白兔按血脂水平随机分为对照组、茶色素低剂量组 [32 μg (g·d) ]和高剂量组 [96 μg (g·d) ],每组 8只 ,实验期间均以高胆固醇饮食。喂养 8周后处死动物 ,测定血脂水平、血浆内皮素水平和斑块面积比。结果发现 ,实验 4周及 8周后血清总胆固醇和甘油三酯水平明显高于实验前 ,但三组间没有明显差异。实验 8周后对照组、茶色素低剂量组和高剂量组血浆内皮素水平分别为 775 .5 8± 6 6 8.72 μg L、2 5 1.73± 2 41.5 7μg L和 6 5 .43± 17.18μg L。与对照组相比 ,茶色素低剂量组内皮素水平有所降低 ,但无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,茶色素高剂量组内皮素水平明显降低 (P <0 .0 5 )。对照组、茶色素低剂量组和高剂量组动物胸主动脉斑块面积百分比分别为 0 .793± 0 .0 77、0 .5 88± 0 .2 0 5和 0 .437± 0 .116 ,内膜面积与中膜面积百分比分别为 0 .6 2 5± 0 .2 0 6、0 .32 6± 0 .2 76和 0 .175± 0 .0 92 ,茶色素组斑块面积明显低于对照组 (P <0 .0 5 )。结果提示 ,茶色素能够防止兔实验性粥样斑块的形成 。

G1型A组轮状病毒地方株VP7基因在杆状病毒系统中的表达

Ａ组轮状病毒是导致婴幼儿重症腹泻的最主要病毒病原，每年因轮状病毒腹泻造成的死亡超过１００万人。ＶＰ７是病毒外壳上的主要糖蛋白，具有中和抗原活性，与病毒的毒力及免疫保护性有关。也是划分血清型的主要标志，而对疫苗的研究证明，不同血清型之间的交叉保护作用甚...

转导野生型p53的K562细胞出现生长抑制和凋亡

把重组有编码野生型p53的逆转录病毒载体转导到p53蛋白缺失的K562细胞,以观察野生型p53蛋白在K562细胞表达后对K562细胞增殖和凋亡的影响。应用RT-PCR和Western印迹杂交方法检测K562细胞p53表达,应用流式细胞仪计数检测细胞的增殖,采用梯形DNA和细胞形态学方法检测细胞凋亡变化。研究结果表明:感染pLXSN-p53病毒24小时后,K562细胞p53表达阳性,K562-p53细胞的生长受到抑制,少数细胞进入凋亡状态。结论提示,野生型p53可促进p53表达阴性的K562细胞生长抑制与凋亡。

化学发光免疫分析法测定血清甲状腺素

建立了以鲁米诺、过氧化氢作为发光底物，辣根过氧化物酶作为标记酶的化学发光免疫分析法，用于血清中甲状腺素水平测定，此法灵敏度为４．６ｎｇ／ｍｌ，不同水平Ｔ＿４批内变异系数为４．５％～７．８％，批间变异系数为７．０％～７．４％。加入Ｔ＿４５０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、２００ｎｇ／ｍｌ，回收率分别为１０５％、１０１％、１０４％，与放免法有较好的相关性，ｒ＝０．８３１，Ｐ＜０．００１，关系式为Ｔ４－ＣＬＩＡ＝０．９１５Ｔ４－ＲＩＡ＋２７．１（ｎｇ／ｍｌ），ｎ＝２６。 此法操作简便，检测速度快，适合于临床应用。

FcγR基因在成人牙周炎中的分布

目的 探讨FcγR 基因多态性与成人牙周炎(AP) 易感性的关系。方法 提取60 例AP 和36 例健康对照者的静脉血白细胞DNA,分别用PCR+ BstUI酶切和PCR+ 测序检测FcγRIIA 和FcγRIIIB 的基因型,比较各基因型检出率的差别。结果 FcγRIIA 和FcγRIIIB 基因型在重度AP 吸烟者与不吸烟者间的分布无差别,在不吸烟的重度、轻中度AP 和健康组三组间的分布也无差别,FcγRIIA H131 、R131 等位基因频率和FcγRIIIB NA1 、NA2的分布亦无差别。结论 本研究提示中国人中FcγRIIA 和FcγRIIIB 基因型与AP 的遗传易感性无关。

转染野生型p53对乳腺癌细胞所致细胞凋亡的研究

目的 为研究 p5 3对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响 ,用重组人野生型 p5 3全长 c DNA的逆转录病毒载体转染Bcap37细胞 ,观察其增殖的凋亡变化。方法 应用 Northernblotting和 Western blotting检测 Bcap37细胞 p5 3表达变化 ,流式细胞仪计数检测细胞增殖及周期变化 ,MTT及苔盼兰计数观察紫外线刺激后细胞存活率差异 ,DNA末端原位标记技术检测细胞凋亡变化。结果 外源野生型 p5 3在Bcap37细胞表达后 ,使细胞生长速度变慢 ,克隆形成所需时间增加 ,并使细胞周期发生变化 ,主要表现在 G1 期生长抑制 ,即细胞停滞于 G1 期 ,紫外线刺激后 ,细胞存活率比对照细胞下降 2 0 %～ 40 % ;细胞凋亡明显增加 (所有数据均 P<0 .0 1)。结论 转染野生型 p5 3的 Bcap37细胞出现生长抑制 ,并加速 U

BCL—2蛋白不能抑制VP16诱导的乳腺癌细胞(Bcap37)凋亡

目的 为了解BCL—2在Bcap37细胞表达增高能否抑制足叶乙甙诱导的细胞凋亡,把重组的逆转录表达载体pLXSN—bcl—2和pLXSN—neo转染Bcap37细胞,经G418筛选获得表达细胞(Bcap37—bcl—2,Bcap37—neo)。方法 经RT—PCR和Western blotting检测bcl—2基因的表达,并用不同浓度的VP16处理两种细胞16小时,经细胞形态观察、细胞凋亡原位显示、MTT实验检测细胞的凋亡变化。结果 两种细胞的凋亡变化没有显著差异。结论 BCL—2高表达不能阻滞VP16诱导的Bcap37细胞凋亡,这与我们以前所做的关于BCL—2能阻滞VP16诱导的K562细胞凋亡作用相反,推测BCL—2的抗凋亡作用可能和细胞类型有关,可能还有其它因素参与BCL—2对细胞凋亡的调节。

复合核苷氧钒配合物(VRC)的合成及对RNA酶的抑制效应

运用改进的有机溶剂助溶法合成了复合核苷氧钒配合物（ＶＲＣ）──一种强的核糖核酸酶（ＲＮＡａｓｅ）抑制剂，并经紫外差谱、红外光谱、顺磁共振光谱研究了核昔与氧钒离子在不同ｐＨ值和不同金属／核苷比中的结合及结合方式。实验结果表明，用本法制备的ＶＲＣ在保护核糖核酸免受核糖核酸酶的降解方面与国外同类产品具有同样的效能，与蛋白类的核糖核酸酶抑制剂ＲＮＡａｓｉｎ相比，可在较高的温度下发挥核糖核酸酶抑制剂的作用。

视网膜视细胞的成片移植

目的 探索用准分子激光切削技术制备视网膜单层视细胞植片，经内入路视网膜下腔的单层视细胞成片移植。方法用准分子激光对大鼠视网膜进行切削，制取单层视细胞植片，此后，按内入路手术方法进行了兔视网膜下腔的异种移植。结果 切削后所得视细胞植片由单层视细胞组成，结构完整，包括外丛状层、外核层和外节层；视细胞植片经明胶包埋后被准确植入宿主视网膜下腔中，移植术后第１，２天宿主视网膜未能复位，呈脱离状态，移植物没能与视网膜色素上皮层相贴；移植后１０天，宿主视网膜复位，视细胞移植片平铺于宿主视网膜下腔中，植片视细胞外节与宿主视网膜色素上皮层相贴，未见明显免疫排异现象。结论 准分子激光制备单层视细胞植片方法简单、可行；初步观察到内入路单层视细胞成片移植后，视细胞植片能够在宿主视网膜下腔中以正常生理位置存活；视网膜下腔为理想的视网膜移植的受位。

介绍一种PCR鉴定重组体DNA插入方向及转染的方法

介绍一种用ＰＣＲ方法鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及其是否导入细胞的方法．其原理是选择紧靠载体克隆位点上游的一段序列为上游引物，以扩增插入序列的上、下游引物分别作为下游引物进行ＰＣＲ．载体上游引物加插入序列的上游引物可扩出产物者为反向连接；加插入序列的下游引物可扩出产物者为正向连接．该法简单、快速，可广泛用于鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及基因转染时外源基因是否导入细胞内．

腺病毒介导的LacZ基因对视网膜色素上皮细胞的转导

目的探索腺病毒载体用作眼科基因治疗以及视网膜移植物标记的可行性。方法用腺病毒介导ＬａｃＺ基因转导视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞；ＭＴＴ法测定毒性影响。结果腺病毒滴度为４．６×１０６时可使ＲＰＥ细胞１００％感染；ＬａｃＺ基因表达阳性细胞整个呈蓝色；腺病毒转导与未转导的ＲＰＥ细胞间ＯＤ５７０值无显著性差异。结论就ＲＰＥ细胞而言，腺病毒载体具有很高的转导效率、安全可靠，可用于它的基因治疗。

在昆虫细胞中表达G2型轮状病毒地方株VP7基因

Ａ组轮状病毒是导致婴幼儿重症腹泻的最主要病毒病原，ＶＰ７是病毒外壳上的主要糖蛋白，它具有中和抗原活性，与病毒的毒力及免疫保护性有关，也是划分病毒血清型的最主要标志之一〔１〕。ＶＰ７基因及其编码蛋白一直是人们研究的主要对象，很多研究工作和诊断试剂都需大...

胶体金标记单抗诊断包虫病初探

胶体金标记单抗诊断包虫病初探林文玉，周学良，曹和洵，于继岗胶体金是新近发展的新一代标记物。由于胶体金制备方法简单，能和多种蛋白质交联，标记物稳定，影响因素少以及灵敏度高而发展很快，胶体金标记技术主要用于组织切片的免疫组织化学染色。针对我国西北地区人兽...

多元耐药基因(MDRI)在急性白血病细胞中表达的意义

观察多元耐药ＭＤＲ１基因在急性白血病细胞中的表达及其意义。方法取１５例急性白血病（ＡＭＬ１２例，ＡＬＬ３例）患者的骨髓细胞通过ＲＴＰＣＲ等法，检测ＭＤＲ１，分析其表达情况以及与临床治疗效果。结果９／１５例（ＡＭＬ８例，ＡＬＬ１例）的ＭＤＲ１表达阳性（阳性率６０％）。其中６／９例经化疗不缓解。１／９例部分缓解，２／９例完全缓解，在ＭＤＲ１表达阴性者中，５／６例完全缓解，１／６例不缓解。结论急性白血病患者的ＭＤＲ１基因表达和化疗的效果有密切联系。

降钙素基因相关肽基因转导对内皮损伤兔髂动脉血管环舒缩反应的影响

目的：探讨降钙素基因相关肽（ ＣＧＲＰ） 基因转导兔动脉内膜对其舒缩功能的影响。方法：利用逆转录病毒载体，将ＣＧＲＰ 基因在体转导兔髂动脉内膜，取动脉环做灌流试验，研究其对血管活性物质的反应。结果：转基因血管内皮细胞的增殖较对照组活跃，动脉的内皮依赖性舒张反应较强，１０ －６ｍｏｌ／Ｌ 的乙酰胆碱引起的舒张为３３－０８ ％ ±１０－０１ ％ ，对照组为－ １７－５７ ％ ±５－５９ ％ ，Ｐ＜ ０－０１ 。结论：ＣＧＲＰ 基因转导损伤的免髂动脉内膜可促进内皮细胞增殖，并使动脉内皮依赖性舒张反应改善。

化学发光杂交进行菌落克隆的原位筛选

用化学发光杂交试剂代替３２Ｐ进行菌落原位筛选重组Ｐ５３阳性克隆，可减少同位素的放射性损害和污染及半衰期短等缺点．本方法实验周期短、特异性可和同位素相当，可用于重组目的基因的原位杂交筛选．

增强化学发光技术的发展和在生物学与医学中的应用

增强化学发光技术的发展和在生物学与医学中的应用杨晓林，王申五，蒋中华，毕建进，马立人（北京医科大学附属人民医院中心实验室，北京１０００４４）编者按：本刊自１９９３年第二期刊登“生物和化学发光技术在生物、医学中的应用”专题以来，该技术的应用又有了许多新...

强直性脊柱炎相关抗原HLA-B2704基因克隆

目的对ＨＬＡ－Ｂ２７０４的编码基因进行克隆。方法通过酚提法获取基因组ＤＮＡ，用ＥｃｏＲⅠ酶切，６ｇ／Ｌ琼脂糖凝胶分离目的基因片段，采用同位素末端标记的寡核苷酸探针对重组体噬斑进行转膜原位杂交，筛选阳性克隆，并进一步克隆化，用ＷｉｚａｒｄλＤＮＡ纯化系统试剂盒提取纯化λＤＮＡ。结果经酚提法获取基因组ＤＮＡ浓度为０．８ｇ／Ｌ，Ｄ２６０／Ｄ２８０为１．７５，经高盐洗脱和乙醇纯化法获取的ＤＮＡ浓度为０．１６ｇ／Ｌ，Ｄ２６０／Ｄ２８０为１．８０，构建的λｇｔ１０重组体，体外包装后转染Ｃ６００ｈｆｌＡ大肠杆菌，形成无色透明的重组噬菌体噬斑。对所建文库用同位素末端标记的寡核苷酸探针对重组体噬斑进行转膜原位杂交，筛选出３个阳性克隆。重复克隆化，用阳性噬菌体噬斑转染Ｃ６００ｈｆｌＡ大肠杆菌，产生溶菌物。结论建立了Ｂ２７０４基因组文库，并克隆了Ｂ２７０４ＤＮＡ。