肾小管及肾小球标志物在2型糖尿病患者不同肾损伤阶段诊断价值的研究

目的探讨肾小管及肾小球相关标志物在2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者不同肾损伤阶段的诊断价值。方法选取于2018年4月1日至2019年10月31日入住首都医科大学附属北京同仁医院内分泌科的T2DM患者272例,完善临床生化指标及尿蛋白四项:尿微量白蛋白/肌酐(urinary albumin to creatinine ratio,ACR)、α1-微球蛋白/肌酐(urinary α1-microglobulin to creatinine ratio,UA1CR)、免疫球蛋白G/肌酐(urinary immunoglobulin G to creatinine ratio,UIGG)、转铁蛋白/肌酐(urinary transferrin to creatinine ratio,UTRF);进行眼底照相、核医学99mTc-EC检测肾有效血浆流量(effective renal plasma flow,ERPF)和99mTc-DTPA检测肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)。根据ACR和眼底检查结果分为4组:正常蛋白尿无糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)132例,即对照组(ACR≤30 mg/g);正常蛋白尿合并DR 32例,为糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)前期组;微量蛋白尿组78例(30<ACR≤300 mg/g)和大量蛋白尿组30例(ACR>300 mg/g)。比较四组间尿蛋白四项和ERPF、GFR的水平,通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评价上述各指标在不同肾损伤阶段的诊断价值。结果尿蛋白四项和ERPF、GFR的水平在不同组间差异有统计学意义(P<0.05)。在尿蛋白正常组中,DR组中肾小管功能标志物UA1CR较对照组明显升高(P<0.01);肾小球功能标志物ACR、UTRF和GFR在两组间差异无统计学意义(P>0.05),DR组UIGG较对照组升高(P<0.01)。在微量蛋白尿组和大量蛋白尿组,尿蛋白四项随肾损伤程度增加而增加,而ERPF和GFR随肾损伤程度增加而降低。ROC曲线分析显示,在尿蛋白排出正常的T2DM患者中合并DR组中肾小管功能标志物UA1CR和ERPF的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为68.2%(P<0.01)和60.5%(P<0.05),而肾小球功能标志物ACR和GFR的AUC均小于60%,差异无统计学意义(P>0.05)。尿蛋白四项及GFR在微量和大量蛋白尿组的AUC均大于60%(P<0.05),ERPF在大量蛋白尿组AUC为67.2%(P<0.05)。结论T2DM极早期微血管改变即ACR正常仅有DR时,肾小管标志物UA1CR先于肾小球标志物ACR和GFR发生变化。肾损伤早期,肾小管标志物诊断效能优于肾小球;肾损伤后期,肾小球标志物诊断效能优于肾小管。提示DKD肾小管功能的改变可能早于肾小球。

北京市东城区与通州区的社区2型糖尿病人群糖尿病视网膜病变患病率及相关因素横断面研究

目的糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是导致我国成人盲最常见的原因。DR早期筛查和防治具有重要意义。然而,国内对DR患病率及危险因素研究仍存在争议。本研究旨在评估北京地区2型糖尿病患者中DR患病率及相关因素。方法在北京市东城区和通州区进行整群抽样,共选取4个社区,以辖区里的年龄18~80岁居民中2型糖尿病患者为研究对象进行横断面调查,所有受试者接受问卷调查、体格检查、实验室检查及眼底照相检查。采用logistic回归模型分析DR的关联因素。结果共纳入研究对象1531例,中位数年龄66岁、(65.6±7.4)岁,受试者中糖化血红蛋白水平为7.2%±1.3%,糖化血红蛋白达标率为56.0%(857/1531)。检出糖尿病视网膜病变DR 254例,DR患病率为16.6%(254/1531)。其中非增殖期糖尿病视网膜病变218例,增殖期糖尿病视网膜病变36例。DR组与非DR组相比,空腹血糖(Z=-3.74,P<0.001)、糖化血红蛋白(Z=-10.664,P<0.001)、尿微量白蛋白排泄率(Z=-7.767,P<0.001)、低密度脂蛋白胆固醇(Z=-2.589,P=0.01)、糖尿病病程(Z=-10.189,P<0.001)存在统计学差异。多因素回归分析表明糖尿病病程(OR=1.08,95%CI:1.06~1.10,P<0.001),糖化血红蛋白(OR=1.38,95%CI:1.23~1.55,P<0.001),空腹血浆葡萄糖(每升高1 mmol/L,OR=1.11,95%CI:1.03~1.19,P=0.008)是DR的相关因素。结论北京地区4个社区2型糖尿病人群DR患病率为16.6%。本研究进一步证实糖尿病病程、空腹血糖水平、糖化血红蛋白是2型糖尿病患者发生DR的相关因素。

2013至2018年北京地区1型糖尿病发病率性别差异及预测

目的分析2013年至2018年北京地区常住人口1型糖尿病(type 1 diabetes,T1DM)发病率的性别差异。方法2013年至2018年,北京市16个区153个中心(常住人口每年约2012万)共有新发T1DM患者4275例。采用泊松回归、Joinpoint等方法计算T1DM的年发病率,各年龄组、性别的年发病率,评估T1DM发病率趋势及其与年龄、性别的关系。使用灰色预测模型1,1[Gray Model 1,1,GM(1,1)],按性别预测未来10年T1DM的发病率。结果2013—2018年这6年内北京地区常住人口中T1DM的年发病率从3.10/(10万)[95%CI:3.10(2.90,3.30)]增加到3.60/(10万)[95%CI:3.60(3.56,3.86)]。男性和女性T1DM的发病率均增加,但女性增加的幅度更大[男性年发病率变化(annual percentage change,APC):3.96%,女性APC:4.4%(P<0.05)]。性别是影响T1DM发病率的危险因素。按这一趋势到2024年,北京T1DM年发病率男性将增加到4.96/(10万),女性将增加到5.10/(10万)。结论北京市的T1DM发病率相对较低,男性和女性的T1DM发病率均迅速增加,女性发病率升高更明显,迫切需要社会和政府的关注及进一步的监测和研究,以更好地了解可能的风险因素并制定预防策略。

不同性别糖尿病患者饮食质量评分与全因病死率的关系

目的横断面研究不同性别的糖尿病患者多种饮食模式对全因死亡的影响和差异。方法分析来自美国国家健康和营养检查调查(National Health and Nutrition Examination Survey,NHANES)数据库中20002名参与者(3737名糖尿病患者)。用COX比例风险回归模型分析饮食质量评分与不同性别糖尿病患者全因死亡的关系。分层分析评估其他因素是否与饮食模式评分有相互作用。结果在74个月的中位随访期内,有512例死亡记录,男性311例,女性201例。饮食评分较高的糖尿病患者组对比较低组调整风险比如下:饮食炎症指数[男性:风险比(hazard ratio,HR)=1.22,P=0.084;女性HR=1.00,P=0.818];地中海饮食评分(男性:HR=0.99,P=0.873;女性HR=0.79,P=0.027);健康饮食指数-2020(男性HR=1.00,P=0.956;女性HR=0.83,P=0.046)。饮食评分对糖尿病患者死亡风险的影响是独立的,未发现饮食评分与其他变量存在内在的相互作用。结论糖尿病人群中,地中海饮食和健康饮食指数-2020与女性较低的死亡风险相关,而在男性未发现明显的关联。

组织蛋白酶在糖尿病及糖尿病肾病作用机制中的研究进展

组织蛋白酶(cathepsin,CTS)是哺乳动物体内最重要的蛋白水解酶之一,在细胞内外均存在。其在体内参与多种生理、病理过程,如调节自噬、细胞凋亡、维持细胞外基质稳态、抗原提呈、病毒感染及炎症等。近年来其与代谢性疾病的关系受到了广泛关注,组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)、组织蛋白酶D(cathepsin D,CTSD)、组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)、组织蛋白酶S(cathepsin S,CTSS)被认为是代谢性疾病中的主要参与者,它们参与糖尿病(diabetes mellitus,DM)及糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的发病及进展过程,可能成为潜在的预测及治疗新靶点。本文主要对CTSB、CTSD、CTSL、CTSS在DM及DN中的作用及机制进行综述。

应用蛋白质组学探索2型糖尿病增殖期视网膜病变潜在生物标志物

目的利用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tag for relative and absolute quantification,iTRAQ)蛋白质组学技术,分析糖尿病增殖期视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)患者与糖尿病无视网膜病变患者(diabetes patients without retina diseases,NDR)之间蛋白表达的差异,寻找PDR的候选血清标志物。方法收集2016年至2017年首都医科大学附属北京同仁医院内分泌科住院的PDR患者21例,以及性别年龄匹配的NDR患者21例。患者血清样本混匀后提取蛋白,采用iTRAQ标记,并进行液相质谱-串联质谱检测(liquid chromatograph-mass spectrometer and mass spectrometer,LC-MS/MS)分析,筛选出差异蛋白行基因本体论(Gene Ontology,GO)数据库功能富集及京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genome,KEGG)通路显著性富集分析。对相对定量结果进行独立样本t检验,通过差异倍数(fold change,FC)和P值判定蛋白表达量变化。结果以差异倍数>1.2倍(上/下调),P值≤0.05为标准,筛选出差异蛋白29个,其中PDR组上调蛋白8个,下调蛋白21个。通过对差异蛋白的GO功能显著性富集分析,结果显示,差异基因的功能可分为生物过程、细胞组分和分子功能三个板块。差异表达基因功能涉及生物调节、细胞组成、细胞代谢过程、细胞结合和催化活性等方面。KEGG通路显著性分析显示,上调最为明显的血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)参与肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)、肾素分泌等通路,上调蛋白——胰岛素样生长因子I(insulin like growth factor I,IGF-1)参与HIF-1、FoxO、mTOR、PI3K-Akt和AMPK等多条与代谢相关的信号通路。下调显著的蛋白——肌球蛋白6(myosin-6)参与心肌细胞收缩和信号传导通路。结论采用iTRAQ蛋白质组学分析显示,PDR患者与NDR患者存在多种蛋白表达差异,ACE、IGF-1和Myosin-6有望作为糖尿病视网膜病变候选血清诊断标志物,未来可能为PDR的诊断和治疗提供新的靶点。

基于CRISPR/Cas9技术建立Lepr与eNos双基因敲除的糖尿病肾病小鼠模型

目的基于CRISPR/Cas9基因编辑技术建立瘦素受体基因(leptin receptor,Lepr)与血管内皮一氧化氮合酶基因(endothelial nitric oxide synthase,eNos)双基因敲除(double-knockout,DKO)小鼠模型,构建晚期糖尿病肾病小鼠模型。方法根据eNos基因制备对应的gRNA,将CRISPR-Cas9体系显微注射于C57BL/Ks(BKS)背景小鼠的受精卵内。将受精卵转移至有假孕状态雌性小鼠的输卵管内部。幼鼠出生后经聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定及测序分析分选出为eNos^(+/-)基因型的F0代阳性小鼠,获得BKS背景下的Lepr基因杂合小鼠,即基因型为Lepr^(db/m)的Lepr-F0代杂合子小鼠。将eNos-F0与Lepr-F0代小鼠杂交,获得eNos^(+/-)/Lepr^(db/m)双杂合F1代小鼠,将双杂合F1代小鼠进一步交配,筛选得到Lepr与eNos双基因敲除小鼠。采用PCR法鉴定小鼠基因型,按基因鉴定结果分为野生型(wild-type,WT)组与DKO组小鼠。监测各组小鼠体质量、血糖与饮水进食量;采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠尿白蛋白与尿肌酐水平,并计算尿白蛋白排泄率;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)与过碘酸六胺银(periodic acid-silver metheramine,PASM)染色检查各组小鼠肾组织病理改变。结果PCR检测结果显示,成功构建lepr^(db/db)/eNos^(-/-)DKO小鼠。与同窝对照组相比,DKO小鼠的体质量、血糖水平与饮水进食量均显著高于同窝对照小鼠。DKO小鼠的尿白蛋白与尿白蛋白排泄率显著高于WT小鼠。病理学结果显示,DKO小鼠的肾小球体积明显增大,系膜基质增生明显。结论基于CRISPR/Cas9基因编辑技术可成功构建lepr^(db/db)/eNos^(-/-)DKO小鼠,DKO小鼠可反映糖尿病肾病的典型表现,为深入研究糖尿病肾病的作用机制提供动物模型。

增殖期糖尿病视网膜病变的血清代谢组学研究

目的采用代谢组学检测技术,探索增殖期糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)的“代谢图谱”及其相关的发病机制。方法从1024名2型糖尿病患者中,按照性别、年龄组间匹配的原则,选择42例患者分为PDR组和糖尿病病程10年以上且眼底完全正常(non-diabetic retinopathy,NDR)的对照组,每组各21例。应用液相色谱-质谱技术,对受试者血清代谢物进行检测,获取代谢谱。应用单维、多维统计学方法分析PDR组与NDR组之间的差异代谢物以及相关的代谢通路。结果PDR组与NDR组患者血清样本中共鉴定出136个差异代谢物质,其中包括有机酸(78%)、有机氮化合物(4%)、脂类及类脂分子(3%)等。这些代谢差异物在30条KEGG通路中富集,其中3条通路显著富集(P<0.05),分别为硫代谢、鞘脂代谢以及半胱氨酸和蛋氨酸代谢。结论PDR组与NDR组患者相比具有独特的代谢特征,硫代谢、鞘脂代谢以及半胱氨酸和蛋氨酸代谢通路显著富集。这些特征的揭示可能有助于探索新的糖尿病视网膜病变的发病机制。

糖尿病肾病患者触珠蛋白基因多态性及血清触珠蛋白浓度分析

目的本研究旨在探讨触珠蛋白(haptoglobin,Hp)基因多态性及血清Hp浓度与糖尿病肾病(diabetes kidney disease,DKD)的关系。方法在首都医科大学附属北京同仁医院内分泌科自2018年6月至2019年2月住院的2型糖尿病患者中,取212例单纯糖尿病患者为对照组,249例DKD患者为病例组。通过丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)和BNⅡ蛋白分析仪,检测患者的Hp基因型和血清Hp浓度。比较两组间Hp基因型频率、等位基因频率、血清Hp浓度及其他生物学指标,使用PRISM统计软件进行统计分析。结果研究结果显示,Hp1-1、Hp2-1和Hp2-23种基因型的频率分布在两组患者间差异无统计学意义(P=0.711)。病例组的血清Hp浓度显著高于对照组(P<0.05)。不同基因型受试者之间的血清Hp浓度存在明显差异,在两组受试者中,Hp1-1亚型的血清Hp浓度均最高,而Hp2-2亚型的血清Hp浓度显著低于其他两种基因型(P<0.001)。相关性分析表明,血清Hp与血红蛋白浓度相关。结论DKD患者的血清Hp浓度显著升高,但未发现Hp基因型与DKD之间存在显著关联,然而Hp基因型会影响循环Hp的含量。

立医德之本,扬师者风范——记首都医科大学附属北京同仁医院内分泌科杨金奎教授

杨金奎教授,一级主任医师,博士研究生导师。享受国务院政府特殊津贴专家,2019年入选“北京学者”。首都医科大学附属北京同仁医院北京市糖尿病研究所首任所长。糖尿病防治研究北京市重点实验室主任,北京市糖尿病防治办公室主任,首都医科大学内分泌与代谢病学系主任,民盟中央委员。重点开展新药靶点发现与新药研发,疾病诊断与预测分子标志物研究;糖尿病微血管病变临床研究和胰岛功能基础研究。作为首席科学家承担国家重点研发项目1项,主持国家自然科学基金重点项目、国际合作及面上项目7项。获国家新药证书3项,省部级科技成果奖6项。在Diabetes Care(6篇)、Cell Discovery、Cell Reports、STTT、Nature Commmunications、eLife等发表SCI论文115篇,他引超过7000次。2006年发现冠状病毒ACE2受体对糖代谢的作用;2017年发现尿微量触珠蛋白预测糖尿病肾病新方法;2018年提出胰岛素分泌“双开关”控制理论;2021年发现黄连素降糖作用分子靶点;2021年发现CTSL为新型冠状病毒肺炎治疗新靶点。

Graves眼病患者糖皮质激素治疗前后血清细胞因子的变化

目的对活动期Graves眼病(Graves'ophthalmopathy,GO)患者糖皮质激素治疗前后的血清细胞因子进行检测,探讨其水平变化与治疗的相关性。方法选取活动期GO患者28例[临床活动性评分(clinical activity score,CAS)≥3分],入组患者均经过糖皮质激素周脉冲治疗,激素总剂量为4.5 g。检测治疗前后患者血清34项细胞因子浓度,同时收集所有研究对象的性别、年龄、肝肾功能、治疗前后的甲状腺功能及抗体等临床指标。结果活动期GO患者经过糖皮质激素治疗后血清细胞因子包括白细胞介素(interleukin,IL)(IL-1α、IL-1β、IL-1Rα、IL-2Rα、IL-6、IL-8、IL-18、IL-12p40及IL-16)浓度显著下调,细胞因子皮肤T细胞吸引趋化因子(cutaneous T cell attraction chemokines,CTACK)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、基质细胞衍生因子-1α(stromal cell-derived factor 1α,SDF-1α)、血浆碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrobast growth factor,basic-FGF)、粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)浓度显著下调,而IL-9显著上调,治疗前后两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖皮质激素治疗活动期GO患者后血清IL-1α、IL-1β、IL-1Rα、IL-2Rα、IL-6、IL-8、IL-18、IL-12p40及IL-16浓度显著下调,细胞因子CTACK、MCP-1、MIF、SDF-1α、basic-FGF、G-CSF、TNF-α及IFN-γ的浓度显著下调,提示这些细胞因子与糖皮质激素治疗GO的疗效有相关性。

在小肠上皮细胞中稳定过表达ACE2的AAV血清型确立

血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2),是血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)的同源物,可将血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)裂解成血管紧张素1-7(angiotensin1-7,Ang1-7),后者通过G蛋白偶联受体Mas发挥作用,作为肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)的调节轴,与经典级联信号ACE/AngII/AT1(AngII type 1 receptor)相拮抗[1]。ACE2/Ang1-7/Mas信号途径的激活对维持胰岛、肝脏、骨骼肌、脂肪组织的代谢稳定性至关重要[2]。

医学研究的凿光探秘者——杨金奎教授

杨金奎教授36年来一直工作在临床一线。带领学科相继建立首个北京地区糖尿病领域“北京市重点实验室”,创建了“北京市糖尿病研究所”。发现SARS病毒受体ACE2的新功能:调节糖代谢。发现调控胰岛素分泌的“双开关”离子通道。2019年入选“北京学者”。

单细胞转录组联合蛋白质组学分析肝细胞癌的发病机制

目的通过单细胞转录组联合蛋白质组学分析,结合体内外实验,探索调节肝细胞癌进展的新颖机制,为肝细胞癌治疗提供新策略。方法利用R语言对公开数据库中肝癌患者单细胞转录组及细胞模型蛋白质组数据进行重分析,筛选响应肝细胞癌微环境变化的关键细胞亚群,并结合小鼠皮下荷瘤模型及肿瘤细胞共培养,验证该细胞群体对肝细胞癌微环境的调控作用。结果通过生物信息学分析发现肝癌微环境中巨噬细胞与细胞外基质的相互作用与肿瘤进展密切相关;体内及体外实验证实肿瘤相关巨噬细胞相较于非肿瘤浸润的巨噬细胞,与细胞外基质的主要成分胶原蛋白存在更强的相互作用;在荷瘤小鼠模型中,利用BAPN药物解聚细胞外基质,肿瘤生长受限,表现为肿瘤僵硬度降低、血管生成受抑制、骨髓来源抑制性细胞浸润减少(P<0.05)。结论巨噬细胞-细胞外基质互作在调节肝癌微环境中发挥重要作用,靶向肿瘤细胞外基质重构或可成为肝细胞癌实体肿瘤治疗的新策略。

触珠蛋白对早期糖尿病肾病患者肾功能损害的预测作用

糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)是糖尿病的重要合并症,是造成终末期肾病的重要原因,寻找早期预测肾功能损害的生物标志物具有重要临床意义。目前临床使用的DKD诊断的指标主要是尿白蛋白、肌酐、尿素氮等,但由于其特异度和灵敏度尚不理想,还需要进一步寻找DKD的早期诊断指标。多个研究表明尿触珠蛋白(haptoglobin,Hp)在早期DKD中可预测肾功能的进展,本文就Hp对早期糖尿病肾病患者肾功能损害的预测作用及相关机制进行综述。

Kcnh6点突变单基因糖尿病家系的小鼠模型构建及表型分析

目的通过CRISPR/Cas9技术构建Kcnh6基因P235L位点基因敲入定点突变小鼠模型,并验证该突变能否成功复制人类糖尿病家系表型,为接下来研究Kcnh6基因在糖尿病发病中的作用提供更精确的实验工具。方法设计针对已知糖尿病家系点突变位点的sgRNA(small guide RNA,sgRNA),同时制作一个携带靶位点同源臂、突变位点序列的供体DNA敲入载体。将sgRNA、cas9 mRNA和敲入载体通过显微注射移入小鼠的受精卵,选取其中存活的受精卵将其移植入假孕小鼠子宫,繁育得到子代小鼠。采用聚合酶链反应和基因测序等方法检测子代小鼠Kcnh6基因碱基突变情况。监测基因敲入小鼠的体质量和并对小鼠做糖耐量和胰岛素分泌实验。结果成功构建Kcnh6-P235L位点基因敲入纯合子小鼠。在高脂饲料喂养条件下,与同窝野生型(wild type,WT)小鼠相比,Kcnh6基因插入(knock in,KI)点突变小鼠的体质量增加,糖耐量及胰岛素分泌功能受损。结论成功构建了Kcnh6基因点突变敲入小鼠模型,且此模型具有糖尿病相关表型。

Graves眼病患者血浆细胞因子浓度与临床活动度的相关性分析

目的Graves眼病(Graves ophthalmopathy,GO)是一种器官特异性自身免疫疾病,是成人最常见的眼眶疾病之一,其导致的眼部损害给患者带来了沉重的身心负担。GO的发病机制包括炎症细胞(淋巴细胞、浆细胞、肥大细胞和巨噬细胞)增多,分泌多种细胞因子导致炎症反应。在本研究中,测定活动期及非活动期GO患者血浆12种细胞因子的浓度,探讨其与疾病临床活动度的相关性。方法选取2021年1月-2023月1月在首都医科大学附属北京同仁医院内分泌科诊断为GO患者27例,并按照其临床活动性评分(Clinical Activity Score,CAS)将其划分为活动期组(CAS≥3)14例及非活动期组(CAS<3)13例。采用多重微球流式免疫荧光发光法检测血浆12项细胞因子[包括白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-12P70,干扰素(interferon,IFN)-α、IFN-γ、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α]浓度,同时收集所有研究对象的性别、年龄、肝肾功能、甲状腺功能及抗体等临床指标。结果与非活动期组相比,活动期GO患者的IL-1、IL-4、IL-5、IL-8、IL-10、IL-17、TNF-α及IFN-γ浓度明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示IL-1、IL-4、IL-5、IL-8、IL-10、IL-17、TNF-α及IFN-γ与CAS评分呈现显著正相关。单因素Logistic回归分析显示IL-1、IL-4、IL-5和IL-17升高会增加活动期风险。结论(1)活动期GO患者IL-1、IL-4、IL-5、IL-8、IL-10、IL-17、TNF-α及IFN-γ浓度明显高于非活动期组,提示这些细胞因子可能参与了GO的免疫反应。(2)单因素回归分析显示,IL-1、IL-4、IL-5和IL-17升高会增加活动期风险,推测这4种细胞因子有望作为评判GO病情活动性的指标。

人ether-α-go-go钾通道减少肝脏的内质网应激和凋亡

目的研究人ether-α-go-go(human ether-α-go-go related gene,h ERG)钾通道在肝细胞中与内质网应激和凋亡的关系。方法选取雄性20周龄h ERG基因敲除(knockout,KO)及同窝野生(wild type,WT)小鼠,测量体质量、摄食量;肝脏石蜡切片HE染色; Western blotting法检测糖异生关键酶葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6pase)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)在肝脏的表达水平; Western blotting和荧光定量PCR方法检测肝脏凋亡相关基因活化的半胱天冬酶半胱天冬酶3(cleaved-cysteine aspartyl protease 3,cleaved-caspase 3),B细胞淋巴瘤因子2(B-cell lymphoma 2,Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(Bcl2 associated X protein,Bax)表达水平;同时检测内质网应激相关基因磷酸化真核细胞翻译起始因子2(phosphorylated-eukaryotic translation initiation factor 2α,p-eIF2α)、激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)以及C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)等基因的表达。经尾静脉给KO小鼠注射hERG慢病毒(lentivirus,LV)后,Western blotting法检测胰岛及肝脏内质网应激和凋亡相关指标。结果与WT小鼠相比,KO小鼠体质量及摄食量差异无统计学意义,肝细胞轻度肿胀,肝脏糖代谢G6Pase表达水平无明显变化,而PEPCK表达上调提示hERG敲除引起肝脏糖代谢异常。KO小鼠肝脏的内质网应激及凋亡相关指标均上调,提示KO小鼠体内存在内质网应激和凋亡。KO小鼠体内过表达h ERG后,改善了小鼠的肝脏内质网应激及凋亡。结论 hERG钾通道可以通过减少肝脏内质网应激和凋亡改善肝细胞内糖代谢。

KCNH6基因肝脏特异性敲除小鼠的构建及其初步应用

目的构建KCNH6基因肝脏细胞特异性敲除小鼠,并监测其肝脏血脂变化。方法运用Cas9技术构建KCNH6 flox/flox转基因小鼠,将其与肝脏细胞特异性表达Cre重组酶工具鼠(Alb-cre)进行杂交,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法鉴定基因型。监测基因敲除小鼠和同窝对照小鼠的体质量和进食量。分别检测8周和20周雌雄各两组小鼠的三酰甘油、胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇。结果成功构建KCNH6基因肝脏细胞特异性敲除小鼠,其基因型为KCNH6 flox/flox/Cre T。与同窝对照组相比,基因敲除小鼠的体质量和进食量均无明显变化。8周雄性和雌性小鼠的血脂无明显变化。20周时雄性小鼠的胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇均有明显升高。结论成功构建了KCNH6基因肝脏细胞特异性敲除小鼠动物模型,成年雄性小鼠存在肝脏血脂代谢异常。动物模型的构建为探讨KCNH6基因在肝脏脂代谢中的作用提供重要研究平台。

针对建立高糖钳夹试验过程中的问题分析与改进

目的建立高糖钳夹试验及探讨试验过程中遇到的问题与改进措施。方法选取2019年10月至2020年1月首都医科大学附属北京同仁医院招募的健康成年男性志愿者17名,每人进行2次高糖钳夹试验,分析试验操作中出现的问题及相关对策。结果17名受试者共进行34次试验,共失败4次,成功30次,15名受试者试验成功。高糖钳夹试验开始前,受试者血浆葡萄糖基础水平为(4.94±0.07)mmol/L。试验开始后血糖在10 min左右达到目标水平并维持至试验结束的160 min内,血糖持续维持在高糖平台,平均为(11.95±0.16)mmol/L。胰岛素和C肽水平呈现典型的双相分泌,17名受试者的基础胰岛素水平为(5.2±0.3)IU/ml,第1时相峰值达(98.22±5.70)IU/ml,第2时相的峰值达(160.10±8.80)IU/ml。标本溶血可使胰岛素水平降低50.1%,严重影响试验结果。经改进后,样本溶血发生率由29.3%降至0.3%。受试者小便时间由(5.88±0.94)min降至(2.26±0.38)min,小便后会导致血糖及葡萄糖输注率显著波动,导致试验失败。结论总结成功建立高糖钳夹试验过程中可能遇到的问题及改进方案,为今后的研究提供经验。