冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗强制降解的稳定性研究

目的 通过强制降解试验观察冻干b型流感嗜血杆菌(Haemophilus in fluenzae type b, Hib)结合疫苗在高温、高湿、强光照射下的稳定性,为疫苗生产工艺、包装材料和贮存条件的确定提供科学依据.方法 分别采用40℃温度、(75±5)%相对湿度、(4 500±500)lx光照处理冻干Hib结合疫苗,取样,按中国药典2015年版三部的要求进行疫苗的全部项目检测.结果 冻干Hib疫苗经40℃处理10d,水分由2.0%上升至2.9%,多糖分子大小(分配系数<0.2的洗脱液回收率)由94%下降至85%,但两者仍分别符合≤3.0%和>60%的质量标准;而高分子结合物含量由87%降至75%,已不符合≥80%的质量标准.(75±5)%相对湿度和(4 500±500) lx光照处理10d对疫苗的影响不明显,疫苗质量指标仍符合规定.结论 高温是影响冻干Hib结合疫苗稳定性的主要因素.

单一内标定量核磁法测定肺炎链球菌多糖抗原中荚膜多糖、C-多糖和磷含量

肺炎糖疫苗在预防由肺炎链球菌引起的肺炎和脑膜炎等疾病中发挥关键作用。荚膜多糖、C-多糖和磷含量是疫苗研发和生产中多糖抗原质量控制的重要指标,研究发展了基于单一内标物六甲基磷酰三胺(hexamethylphosphoramide,HMPA)的定量1H NMR和31P NMR法,实现6A,6B,18C,19A,19F及23F型肺炎链球菌多糖抗原中荚膜多糖、C-多糖和磷含量的同步测定。利用内参物比较法,探究了多糖溶解性质对定量核磁测定的影响,发现定量1H NMR的测定结果受到多糖水溶液黏度和浓度的影响。发现高黏度多糖在3~15 mg/mL,低黏度多糖在5-25 mg/mL是最适检测液浓度范围。该“一内标三定量”NMR法具有良好的精密度、特异性和准确度,为肺炎链球菌疫苗的质量控制提供了一种有价值的新策略。

结构分析技术及其在重组疫苗质量研究中的应用

重组疫苗抗原结构以及生产工艺的复杂性,对重组疫苗的质量控制提出了更高的要求。重组疫苗抗原保持天然构象的程度直接决定其诱导免疫应答的程度,从而最终影响疫苗的有效性。对抗原开展多角度、多尺度、多方位的结构研究不仅能够完成抗原的结构确证,还有助于了解产品的关键质量属性,从而建立有效的质量控制体系。此文综述了三维结构测定、抗原表位鉴定及颗粒性分析等多种结构分析技术,以及结构分析在重组疫苗质量研究中的应用。

人呼吸道合胞体病毒疫苗的研究进展

人呼吸道合胞体病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是导致全球婴幼儿细支气管炎及肺炎的主要致病原,造成严重的社会负担。目前还无上市预防RSV感染的疫苗。随着科技的不断发展,研究者已研发了许多不同类型的RSV疫苗,包括弱毒活疫苗、嵌合体疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗及纳米颗粒疫苗。本文就RSV免疫逃逸机制及其疫苗的研究进展作一综述。

B群流行性脑脊髓膜炎疫苗的研究进展

流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)是一种由革兰阴性的奈瑟双球菌导致的呼吸道传染病,以急性脑膜炎和败血症为主要症状。根据脑膜炎奈瑟双球菌荚膜多糖的特征可将其菌株至少分为12个血清群,其中A、B、C、W135、Y血清群是主要的致病菌群,随着A、C、Y、W135血清群菌株多糖疫苗的广泛应用,有效控制了相应血清群脑膜炎的流行,B血清群成为流脑主要的流行菌群之一,因此研制有效的疫苗对于预防流脑流行至关重要。本文对B血清群流脑疫苗研究所用抗原成分的变异程度、作用机制和免疫原性作一综述,同时对两种已批准上市的B血清群流脑疫苗进行比较。

肺炎球菌多糖结合物原液中二甲基亚砜残留量检测方法的建立与验证

目的建立并验证肺炎球菌多糖结合物原液中二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)的检测方法。方法通过优化反相高效液相色谱法(reversed phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)中的流动相、柱温以及流速, 建立最优检测方法, 并对该方法的专属性、线性、准确度、精密度、稳定性等进行验证。结果以10%乙腈为流动相、流速为0.6 ml/min, 柱温35 ℃时, RP-HPLC检测方法最优。该方法检测干扰成分试验组和对照组中DMSO含量的相对误差在-2.6%~2.1%, 分离度均≥1.5;浓度与峰面积呈良好的线性关系, 回归决定系数>0.990 0;各浓度水平检测所得的偏倚值均在-5.31%~-0.89%, 95%的偏倚置信上限也低于8.0%;不同浓度精密度在0.70%~4.45%, 95%的精密度置信上限不超过8.0%;方法综合能力评价显示在4~50 μg/ml范围内方法总变异不超过7.0%, 95%/90%容忍区间和95%预测区间均在80%~120%范围内;检测供试品溶液在20 h内峰面积均值的相对标准偏差均≤2.0%。结论成功建立了肺炎球菌多糖结合物原液中DMSO的检测方法, 该方法的专属性、线性、准确度、精密度、稳定性良好, 综合评价能力高。

已上市人用预防疫苗佐剂的研究进展

疫苗免疫是预防各种传染病的最有效、最经济的方式。佐剂对于疫苗的研发具有十分重要的意义。目前已上市的疫苗佐剂包括铝盐佐剂、MF59、类病毒颗粒、AS04、AS03、AS01和CpG。本文对已上市人用预防疫苗佐剂的组成成分、作用机制、特点及安全性作一综述。

单纯疱疹病毒2型疫苗的研究进展

单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)属于疱疹病毒属α疱疹病毒科,是线性双链DNA病毒,主要通过性传播,是生殖器疱疹的主要病原体,HSV-2的感染还可增加HIV感染的风险。使用安全套和抗病毒治疗等措施虽可使HSV-2的传染降低约50%,但未能从根本上杜绝该病毒的传播。目前,对抗HSV-2最为有效和经济的方法是接种HSV-2疫苗,但尚未获得理想的该疫苗产品。本文结合HSV-2的感染机制,对HSV-2的灭活疫苗、减毒活疫苗、复制缺陷疫苗、亚单位疫苗、多肽疫苗、活载体疫苗及DNA疫苗的最新研究进展作一综述,并对HSV-2预防性及治疗性疫苗的研究方向进行讨论。

新冠灭活疫苗不同免疫针次和免疫间隔诱导抗体免疫反应的比较

目的比较新型冠状病毒灭活疫苗不同免疫程序免疫小鼠后诱导的抗体免疫反应,以期为后续新型冠状病毒灭活疫苗免疫策略的制定提供实验依据。方法将新型冠状病毒灭活疫苗按1μg/(只·次)的免疫剂量免疫BALB/c小鼠,免疫间隔14 d免疫3针,免疫间隔28 d免疫2针,每次免疫后14 d采血,分离血清,检测针对原型株新型冠状病毒诱导产生的免疫反应。结果新型冠状病毒灭活疫苗免疫间隔14 d 2针免疫后,针对原型株新型冠状病毒诱导产生的中和抗体滴度极显著低于3针免疫后(P<0.0001);免疫间隔28 d 2针免疫后14 d诱导产生的中和抗体几何平均滴度显著高于免疫间隔14 d 2针免疫后14 d(P<0.05);灭活疫苗免疫血清诱导产生的针对原型株新型冠状病毒的中和抗体滴度显著高于Beta和Delta新型冠状病毒变异株(P均<0.05)。结论新型冠状病毒灭活疫苗3针免疫能极大程度提高诱导产生的保护性抗体免疫反应,免疫间隔28 d诱导产生的免疫反应优于免疫间隔14 d;灭活疫苗免疫血清也能中和变异株新型冠状病毒。

新建人二倍体细胞株国内外研究概况

在病毒疫苗生产中，人二倍体细胞较原代细胞更具优势，可解决原代细胞易受外源污染、稳定性差、抗原性不一致的问题，并可用于建立细胞种子库系统，利于质量控制。目前常用作细胞基质的人二倍体细胞株包括MRC-5、2BS、KMB-17、WI-38以及SV-1等。此文综述了国内外法规对人二倍体细胞株的要求以及质量评价，以促进人二倍体细胞株的建立及广泛应用。

病毒样颗粒疫苗的研究现状

病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）是不含病毒核酸的空壳结构,是由某些病毒的部分结构蛋白过度表达[1]时在细胞内自行组装而成.VLPs与它的源病毒颗粒和亚病毒颗粒（SVPs）有着类似的抗原性,因此VLPs作为候选疫苗是很具潜力的.本文就VLPs作为新一代疫苗的发展现状以及应用潜力加以综述.

中国B群流脑菌株不同变异群H因子结合蛋白保护性抗原的筛选

目的筛选中国流行B群流脑菌株不同变异群的H因子结合蛋白(factor H binding protein,fHbp)的保护性抗原。方法根据中国流行病学数据选择6条中国流行B群流脑菌株不同变异群的fHbp抗原基因序列,优化合成后克隆构建原核表达质粒,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,表达fHbp蛋白,经镍柱亲和纯化后,免疫BALB/c小鼠,检测其诱导产生的结合抗体和杀菌抗体反应。结果成功构建6个fHbp基因的原核表达质粒,纯化后的fHbp蛋白纯度均超过85%。6个抗原均可诱导产生平均抗体滴度超过1∶40000的结合抗体免疫反应,其中fHbp V2.18、fHbp V3.31和fHbp V3.94抗原可诱导针对fHbp V3.94菌株的杀菌抗体反应,fHbp V2.16和fHbp V2.18抗原可诱导产生针对fHbp V2.16菌株的杀菌抗体反应;确证试验显示,fHbp V2.18和fHbp V3.94抗原均可诱导产生针对fHbp V2.16和f Hbp V3.94菌株的杀菌抗体反应,肌肉免疫诱导产生的杀菌抗体反应高于腹腔免疫,其中fHbp V2.18抗原肌肉免疫诱导的针对f Hbp V2.16和fHbp V3.94菌株的平均杀菌抗体滴度分别为1∶134.4和1∶56,fHbp V3.94抗原肌肉免疫诱导的针对f Hbp V2.16和fHbp V3.94菌株的平均杀菌抗体滴度分别为1∶200和1∶1280。结论通过抗原筛选获得了可诱导杀菌抗体的中国流行B群流脑菌株的fHbp V2和V3抗原各2个,可用于后续B群流脑疫苗的研究。

水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E ELISA的建立及部分验证

目的建立并部分验证水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E(glycoprotein E,gE)ELISA.方法用中国仓鼠卵巢细胞表达体系表达水痘-带状疱疹病毒的gE抗原,3步层析纯化后,混合弗氏佐剂免疫BALB/c小鼠和日本大耳白兔,制备抗gE特异性多克隆抗体.制备的抗体经Protein A亲和层析纯化后,用于建立双抗体夹心ELISA检测gE抗原.考察方法的线性范围、特异性、准确性、重复性和中间精密度等.结果表达的gE经3步层析纯化后,纯度达到99%以上.该方法在gE浓度2-2~25μg/ml范围内线性关系良好,决定系数大于0.99;该方法可特异性识别gE,与中国仓鼠卵巢细胞上清液或牛血清白蛋白溶液无交叉反应;高、中、低浓度gE内部参考品检测均值回收率分别为99.44%、94.35%、94.37%,变异系数分别为6.07%、4.28%、12.62%;重复性验证变异系数为8.24%,中间精密度验证变异系数为7.55%.结论建立的双抗体夹心ELISA可以用于水痘-带状疱疹病毒gE的定量检测及疫苗质量标准的建立.

不同人群感染单纯疱疹病毒2型的流行病学特点

此文概述了单纯疱疹病毒2型（herpes simplex virus 2，HSV‐2）感染的传播方式和机制，着重介绍了HSV‐2感染的流行病学特点。作者利用已经发表的国内外流行病学资料，从性别比例、年龄分布、文化程度等方面，对HSV‐2感染的人群进行分析。结果表明，全球范围内 HSV‐2的感染率逐渐增加，女性的感染率和发病率高于男性。在中国，从年龄分布上来看，以21～40岁年龄段感染人数最多；从文化程度上来看，初中学历者感染率最高。

肺炎球菌菌种复苏用无动物源性固体培养基的筛选

目的 筛选一种可复苏肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae,Spn)菌种的无动物源性物料的固体培养基。方法 首先选取19F血清型Spn对无动物源材料的9种配方培养基进行初步筛选,再对其他23个疫苗血清型Spn进行培养测试验证。通过对传代15代的培养物进行菌种检定与荚膜多糖抗原基因序列分析,判断筛选的配方培养基对各型菌种传代稳定性的影响。用此培养基复苏的菌种按生产程序进行发酵培养,分析培养情况及荚膜多糖抗原产量及质量,确定筛选培养基的生产适用性。结果 在筛选的配方固体培养基上,各型Spn培养11~15h时活菌数量较高,15代终末代次的菌种检定、抗原基因序列与对照(羊血固体培养基培养的菌种)相比无差异。用其复苏的菌种发酵培养后,菌体生长与荚膜多糖产量略有提高,且荚膜多糖相关检定指标均符合《中国药典》三部(2020版)标准。结论 筛选的无动物源性固体培养基具有良好的适用性,可取代血液来源培养基用于Spn疫苗生产菌种复苏。