基因工程人α心钠素发酵研究

本研究采用的基因工程菌为酵母Y33::YFD71-3,其基因型为α,his,leu,ade,suc,摇瓶培养时心钠素的表达水平为1—2mg/L。在含有葡萄糖、YNB以及不同量腺嘌呤、组氨酸和亮氨酸的YG培养基中作摇瓶培养,当细胞的生长由腺嘌呤限制时,蛋白的分泌有明显增加,在YG培养基中加入5g/L的CAA后腺嘌呤成为限制性基质,培养基中腺嘌呤、YNB和亮氨酸用量对心钠素的表达有很大影响。在5L反应器中进行补料分批培养,流加葡萄糖、YNB、CAA、腺嘌呤、组氨酸和亮氨酸,心钠素的最高浓度达到24.8mg/L。

一种快速的活菌计数新方法研究

四唑盐（MTT）比色法是一种检测动物细胞活细胞数的方法。通过改变比色反应温度、反应时间和比色波长,建立了一种快速、准确的活菌计数新方法并将其应用于细菌PBW1培养过程中活菌浓度的测定。结果表明,新方法与平板稀释法的测定结果一致,且具有快速、方便等优点。

搅拌生物反应器中杂交瘤细胞生长与破损的初步研究

采用连续悬浮培养技术，在３种培养基组成下实验考察了生物反应器中机械搅拌强度和气泡对细胞生长和破损或伤害的作用，发现杂交瘤细胞在无血清培养基中培养时，１２０ｒ／ｍｉｎ的机械搅拌强度对细胞产生了生理伤害作用，而造成细胞破损的主要是气泡。血清和ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８对细胞均有保护作用，它们的存在能保护细胞免受流体剪切的生理伤害作用，适应更高的机械搅拌强度，ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８能有效地防止气泡对细胞的破损作用。另外，对它的保护作用机理也作了讨论。

南极海洋细菌BSw10005生长特性研究

从极地海洋细菌中筛选获得菌株BSw10005,其胞外代谢物质对植物病原真菌有显著的抑制作用。用盐水代替常规的海水来培养极地细菌。在摇瓶中,考察了不同盐浓度、碳源对其生长的影响。利用5L生物反应器,通过改变温度、氧供给条件和控制发酵液pH值,对菌株BSw10005的生长特性作了系统的研究,确定了温度、氧和pH值对菌株生长的影响及菌株培养的最优化的条件。对发酵液中的代谢抑菌活性物质作了初步分离,获得到白色固体粗提物质。

桐花树化学成分研究

目的研究桐花树的化学成分。方法采用硅胶柱色谱法分离纯化，薄层色谱及波谱法进行结构鉴定。结果从桐花树树皮的乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位分得6个化合物，其结构鉴定为16α，28-dihydroxyl-3-oxo-12-oleanene（Ⅰ）、5-O-methylembelin（Ⅱ）、豆甾醇（Ⅲ）、α-菠甾醇（Ⅳ）、岩藻甾醇（Ⅴ）、棕榈酸（Ⅵ）。结论化合物Ⅰ为新三萜化合物，命名为桐花树素（aegicornin），Ⅲ～Ⅵ均为首次从该植物中分离得到。

青霉素菌丝球内氧浓度分布与生长模型的研究

在判别临界氧浓度的基础上，建立了青霉素菌丝球内氧浓度分布模型，指出了可能存在的三种不同类型的分布形式。进行了有效因子η的计算以及球状菌生长模型的仿真与研究。与文献中的分析方法相比，本方法具有精度较高，适用范围较广的优点。

苏芸金杆菌代谢特性研究

采用12L玻璃发酵罐,测定了苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis, B. t)发酵过程中的菌体浓度、总糖、还原糖、氨基氮、溶磷、溶氧、铵离子、核酸、ATP、pH、蛋白酶及粘度等参数。获得了B.t生长过程的代谢曲线,从中分析了各参数变化间的相互关系。这对于控制B.t发酵过程及提高发酵水平具有一定指导意义。

Pluronic和纤维素类对杂交瘤细胞保护特性的研究

利用鼠鼠杂交瘤2F7细胞(分泌IgG2a单抗)研究了Pluronic F-68、甲基纤维素、羧甲基纤维素及聚醚多元醇与杂交瘤细胞生物相容性及添加限制浓度;研究了添加浓度对葡萄糖的利用及氨的生成影响;在高速搅拌、高剪切力下考查添加剂的保护效果。结果表明,0.05—0.10％(W/V)Pluronic F-68、0.10—0.20％(W/V)甲基纤维素能较好地保护杂交瘤细胞;高浓度Pluronic F-68增加了葡萄糖的比消耗速率及氨的比生成速率;高浓度甲基纤维素增加了氨比生成速率;羧甲基纤维素添加浓度低于0.1％不影响细胞生长,也无保护作用,羧甲基纤维素不影响细胞对葡萄糖的比消耗速率,但增加了氨比生成速率;聚醚多元醇分解细胞。在1.5升GelliGen生物反应器中,培养基添加0.10％Pluronic F-68、搅拌转速70r/min下细胞正常生长。

半红树药用植物杨叶肖槿树皮化学成分的研究

目的:研究杨叶肖槿的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱法分离纯化,薄层色谱及波谱法进行结构鉴定。结果:从其树皮95%乙醇提取物中分得6个化合物,其结构分别鉴定为β-谷甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷-6′-棕榈酸酯(Ⅰ)、豆甾醇(Ⅱ)、熊果酸(Ⅲ)、白桦酸(Ⅳ)、木栓酮(Ⅴ)、棕榈酸(Ⅵ)。结论:以上各化合物均为首次从该植物中分得。

消除摇瓶与罐发酵工程参数差异的一种方法

以所测得的摇瓶内分压（ｐｆ）数据，及冷模实验求出的瓶口过滤层氧通速率，求出了啤酒酵母摇瓶发酵真实氧传递系数（Ｋ＿（Ｌａ））；以摇瓶周围大气压（Ｐ＿ａ）计算得出了表现氧传递系数（Ｋ＿（Ｌａ））＿（ａｐｐ），两者差异较大。此外，分析比较了考虑水分蒸发时求出的摇瓶内的菌体摄氧率（ＯＵＲ）、Ｋ＿（Ｌａ）与不计水分蒸发时所求的上述参数间差值的大小，得出：考虑水分蒸发并以摇瓶内分压数据来求算Ｋ＿（Ｌａ）和ＯＵＲ值，能有效地消除瓶与罐发酵的差异。

敞开式跑道池螺旋藻大规模培养过程中DO变化规律研究

用自行研制的溶氧(DO)、pH、温度(T)计算机在线检测系统研究敞开式跑道池大规模培养螺旋藻过程中DO三维分布特性和DO、pH、T等参数随时间、天气、搅拌等的变化规律,以期对螺旋藻大规模培养过程的操作条件与生长的关系做进一步地了解,从而为敞开式跑道池螺旋藻大规模培养工艺的综合优化提供实验与理论依据。

微酶电极和可用于发酵监控的流动注射分析系统的研究

利用铂化电极的大表面积吸附萄葡糖氧化酶,构建了一种具有很好操作性能的微酶电极,在0～10mmol/L 葡萄糖浓度范围内具有良好线性,相关系数为0.9998;响应时间<20s;重复性好C.V 为0.26%,利用该微酶电极形成三电极 FIA 系统,具有良好的线性。检测周期短,小于80s 的特点。室温下正常使用,其寿命为一个星期以上,可以用于发酵过程中葡萄糖浓度的在线检测。

转兔防御素基因小球藻异养培养的培养基优化研究

在氮源种类筛选的基础上,采用Plackett-Burman实验设计并结合单因素实验对转兔防御素基因小球藻异养培养的培养基进行了优化。实验结果表明,采用优化后的Knop异养培养基在250mL摇瓶中进行异养培养,藻细胞密度从优化前的1.5g/L提高到优化后的5.11g/L;摇瓶和5L生物反应器异养培养表明,Knop异养培养基中藻细胞浓度分别为优化前培养基的3.39倍和3.17倍,而兔防御素(NP-1)表达能力基本不变。

用静息细胞培养法研究L－谷氨酸氧化酶的生物合成

建立了静息细胞培养系统，并以此研究了Ｌ－谷氨酸氧化酶生物合成的影响因素。结果表明，发酵１６ｈ的菌体在有诱导物情况下有酶的合成，无诱导物则无酶的合成，发酵４０ｈ的菌体在有、无诱导物的条件下均有酶的合成。对发酵１６ｈ的菌体研究表明：β－丙氨酸（Ⅰ）、α－酮戊二酸（Ⅱ）、丙酮酸钠（Ⅲ）是酶合成的诱导物，谷氨酸（Ⅳ）则不是。而对发酵４０ｈ菌体而言：ＭｇＣｌ＿２，ＣａＣｌ＿２能促进酶的合成；Ⅰ不能作氮源利用；Ⅰ～Ⅳ均具有高浓度抑制产酶、低浓度促进产酶的双重作用。

影响重组工程菌发酵产率的因素

随着分子生物学对表达外源基因的重组工程菌的研究的不断深入以及重组DNA技术的发展,为我们更科学而不是经验地研究重组工程菌的发酵规律提供了理论基础。但有关微生物生理与质粒拷贝数、质粒稳定性和外源基因表达之间相互关系的研究还较少。本文重点综述了质粒拷贝数、质粒稳定性及外源基因表达水平等因素及环境条件对发酵过程中目标产物产率的影响,同时探讨了在工程菌发酵中以上因素的控制方法。

生产ATP液流循环式固定化细胞流化床反应器的参数研究

在液流循环式固定化细胞流床反应器中，将底物浓度为４０ｍｍｏｌ／Ｌ的腺苷转化为ＡＴＰ。本文对其整个反应过程中葡萄糖的浓度、ｐＨ、溶氧的变化进行了检测，考察了这三个参数与反应转化率的关系，结果表明，随着转化率的升高，葡萄糖及溶氧呈下降趋势，而ｐＨ则呈先下降后上升的趋势。

提高1,1’-二甲基二茂铁石墨糊谷氨酸电极寿命的研究

自从Cass1984年首先报道了二茂铁介铁电极以来,已有不少文献报道了这方面的研究工作。还原态的二茂铁不溶于水,而氧化态的二茂铁却溶于水。这样介体电极在使用过程中会因介体的逐渐丢失而失去作用。为了提高介体的稳定性,已报道了多种方法。 提高酶膜的稳定性是生物传感器研制中的一个重要方面。以前一般采用改进固定化方法与选择固定化载体来提高酶膜的稳定性。本文将报道用DEAE-葡聚糖提高DcFe介体电极稳定性的新方法与用DEAE-葡聚糖和乳糖混合物稳定自产的谷氨酸氧化酶的研究结果。

杂交瘤细胞培养保护剂的研究

利用鼠鼠杂交瘤２Ｆ＿７细胞（分泌ＩｇＧ＿２单抗），研究了普兰卢内克（Ｉ）、聚乙二醇（ＩＩ）、甲基纤维素（ＩＩＩ）、葡聚糖（ＩＶ）、聚醚多元醇（Ｖ）与杂交瘤细胞的生物相容性、添加限制浓度以及高速搅拌下添加剂对杂交瘤细胞的保护作用。实验结果表明，０．０５％～０．１％的Ｉ、０．０４％～０．２０％ＩＩ、０．１０％～０．２０％的ＩＩＩ能较好地保护杂交瘤细胞；ＩＶ会抑制细胞生长；ｖ会分解细胞。在１．５Ｌ生物反应器中培养，添加０．１０％Ｉ于培养基，搅拌转速为７０ｒ／ｍｉｎ时，细胞能正常生长。

影响葡萄糖氧化酶电极测定性能的若干因素的研究

本文包含三方面内容。1.通过改变酶膜的厚度及改变电极的制作方法,讨论分子氧对介体电极响应的影响;2.分析了介体泄漏与电极基线电流大小的关系,通过选择在液态石蜡中低溶解度介体与优化实验条件来提高电极的使用寿命。3.用Nafion膜去除电活性物质的干扰。

转兔防御素基因小球藻生物反应器异养培养工艺研究

根据5L生物反应器中转兔防御素(NP-1)基因小球藻培养过程特征,建立了基于在补糖、补KNO3、Ph和溶氧(DO)控制的5L生物反应器中进行转NP-1基因小球藻异养培养的工艺,同时将此培养工艺放大到15L生物反应器中.转NP-1基因小球藻在15L反应器中培养133h的细胞密度可达34.2g/L,平均生长速率为0.257g/(L·h),比5L生物反应器中培养131h的细胞密度27.8g/L和平均生长速率0.21g/(L·h)分别提高了23%和22%.研究结果证实了转NP-1基因小球藻放大培养的可行性,为实现高密度、高表达的大规模培养奠定了基础.