食用真菌空间诱变育种研究

本研究将香菇、平菇、黑木耳、金针菇、灵芝等食用菌材料进行了卫星或高空气球搭载,随之进行地面实验。结果表明,搭载材料在拮抗反应、菌丝生长速度、出菇形态等方面出现明显变异。RAPD分析的结果也证实一些搭载菌株在DNA水平上发生了变异。以上结果表明,空间诱变可能为食用菌的遗传育种提供新途径。

几种新型DNA分子标记及其在食用菌研究中的应用

综述了新型分子标记SCAR、ISSR、SRAP和TRAP的原理与特点,以及这些技术在食用菌研究中的应用现状和前景。

高等真菌基因工程研究进展

本文综述了高等真菌遗传转化所采用的选择标记和外源DNA导入受体真菌的几种方法,比较了高等真菌复制型转化与整合型转化的转化子的遗传稳定性,简述了高等真菌基因工程在工农业生产中的应用现状,展望了基因工程技术在食用蕈菌遗传育种中的应用前景。

丝状真菌基因工程研究进展

本文评述了丝状真菌基因工程的研究进展，内容涉及已被转化成功的９０余种丝状真菌种类及其所利用的选择标记，比较了几种外源ＤＮＡ进入丝状真菌受体的方法，并较为详细地评述了丝状真菌复制型与整合型转化及其转化子的有性生殖与无性生殖的遗传稳定性，最后，展望了丝状真菌基因工程在农业、工业和医药方面的应用。表明了丝状真菌基因工程具有广阔的应用前景。

群体分离分析法在食用菌遗传研究中的应用进展

群体分离分析法(bulked segregant analysis,BSA)是一种利用分离群体快速鉴定基因组特定区域遗传标记的方法。随着高通量测序技术的快速发展,再加上BSA简便、高效、低成本等优势,目前BSA已广泛应用于植物基因定位,但其在食用菌中的应用还处于起步阶段。综述了BSA及其在食用菌遗传研究中的应用现状,并展望其在食用菌遗传研究中的应用前景,为今后利用BSA开展食用菌遗传研究提供参考。

优质香菇(花菇)子实体生长模型的研究

利用灰色关联度分析法(Grey Relation Analysis,GRA)对花菇品质和9个环境因子进行关联分析,确定影响花菇品质的主要环境因素后,以花菇子实体4个形态特征指标(菌盖直径、菌盖厚度、菌柄直径和子实体高度)为因变量,以花菇棚内4个环境参数(温度、相对湿度、二氧化碳浓度和光照强度)为自变量进行线性回归分析,建立基于有效积温的花菇子实体生长模型。结果表明:花菇品质与棚内的湿差、温差、光照强度的关联度最大;菌盖直径、菌盖厚度、菌柄直径、子实体高度与有效积温间分别符合Gauss模型、Cubisc Ratio模型、韦布尔函数模型和逻辑斯蒂模型。这些模型的建立可为花菇的工厂化栽培管理提供理论数据,通过对花菇不同时期的表型特征进行预测,有助于提高产量并增加生产的稳定性。

茯苓基本生物学特性研究

以11个不同来源的茯苓菌株为材料,研究了茯苓菌丝体、子实体和担孢子的形态特征及适宜的生长、发育条件。结果表明,茯苓菌丝体为少分枝、有隔膜、无锁状联合的多核菌丝,茯苓担孢子核相以双核为主,双核孢子,单核孢子和无核孢子分别占87.2%,4.7%和8.1%。配对试验结果表明,同一菌株及不同菌株原生质体分离株间的配对均能融洽生长,同一菌株担孢子间的配对均产生拮抗线,但其中有少数配对在交接区形成扇形区域,拮抗线随后消失,而不同菌株担孢子间的配对则全部形成稳定的栅栏型菌落,暗示茯苓担孢子中的两个细胞核是具遗传互补性,能形成独立个体的异双核,茯苓可能是一种次级同宗结合菌。

OWE-SOJ技术及核迁移试验在香菇交配型因子鉴定中的应用

由于没有明确的形态差异 ,香菇的 3种不亲和交配反应即A =B =,A =B≠和A≠B =难以互相区别。本研究将OWE SOJ技术及核迁移试验用于香菇的交配型分析。结果表明 ,应用OWE SOJ技术 ,可以观察到 3种不同的菌落形态 :由A≠B≠配对形成的具锁状联合的绒毛状菌落 ,由A≠B =配对形成的无锁状联合的栅栏型菌落及由A =B =或A =B≠配对形成的无锁状联合的绒毛状菌落。通过一个附加的常规交配试验 ,A =B =和A=B≠反应易于互相区别开来。核迁移试验表明 ,核迁移出现于A =B≠反应中而不出现于A≠B =反应中。这一结果与OWE SOJ试验的结果是一致的。因此 ,在常规交配型分析的基础上 ,应用OWE SOJ技术及核迁移试验以准确地鉴定样本中所有单核体的交配型因子是可行的。

ISSR标记在侧耳属菌株分类学中的初步应用

基于重复序列（TATG），设计了7条引物P0-P6，对侧耳属的22个菌株和1株双孢蘑菇菌株的基因组DNA进行重复序列间区序列（ISSR）PCR扩增。引物P0、P1在23个菌株上扩增共得到120条带。聚类分析结果显示，在0．71水平将以上侧耳菌株分为5组：阿魏蘑、白阿魏蘑、杂交阿魏蘑位于第2组；凤尾831、16号秀珍菇位于第3组；鲍鱼菇位于第4组；其他供武菌株位于第1组。利用引物P1对17号日本秀珍菇扩增得到了1条约1．3kh片段，经克隆和测序分析，验证了重复序列（TATG）4的存在，并达到了微卫星基序的最低重复次数。

纤维素酶法提取香菇柄中呈味核苷酸工艺研究

研究了香菇柄中呈味核苷酸的纤维素酶法提取工艺。以香菇柄中呈味核苷酸的提取得率为指标,采用单因素法和正交设计法对纤维素酶法提取工艺条件进行优选。试验结果表明,影响纤维素酶法提取呈味核苷酸的因素次序为:加酶量>pH值>酶解温度>酶解时间,其最佳工艺条件为:加酶量为0.5%,pH值为6.0,酶解温度为50℃,酶解时间为2 h,所得香菇柄中呈味核苷酸的提取得率为3.28%。

茯苓交配型的初步研究

以茯苓栽培种"大泡引"为研究材料,茯苓菌丝为无锁状联合的多核菌丝,担孢子中双核孢子占75 3%、单核孢子2 4%、无核孢子22 3%。30个单孢株进行单孢配对结果为拮抗现象(不亲和)占总数的26 7%。茯苓菌株具有单孢结实现象,占单孢株总数的18%。由以上结果可初步得出茯苓菌为同宗结合真菌。

香菇SSR-PCR技术体系的优化及其在遗传多样性分析中的初步应用

为建立稳定的香菇SSR技术体系,采用L16(45)正交试验设计,对影响香菇SSR-PCR的主要因素进行了优化筛选,建立了最佳的反应体系。在20μl反应体系中,包含1.5mmol/LMg2+,75ng模板DNA,0.25mmol/L dNTPs,0.50μmol/L引物及1.5UTaq酶。梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度为62℃。以该体系为基础,应用5对引物扩增8个香菇菌株的基因组DNA,扩增条带清晰稳定,聚类分析结果能较好地反映供试菌株的地理来源关系。以0.5的相似性为分割点,8个菌株可分成2大类群。类群Ⅰ主要由北方菌株组成,类群Ⅱ由南方菌株组成。该研究为SSR标记技术在香菇分子生物学研究方面的应用奠定了基础。

ISSR标记在黑木耳单核体遗传分析中的应用

采用原生质体单核化和单孢分离法分别获得黑木耳Auricularia auricula栽培菌株新科5号两个亲本单核体(T1、T2)和33个F1代孢子单核体。从73条ISSR引物中筛选出13条可区分两个亲本单核体(T1、T2)的引物,对新科5号及F1代孢子单核体进行扩增,共扩增出70条带,其中63条在供试菌株间表现出多态性,多态位点百分率为90.0%。根据扩增结果采用软件NTsys2.10e计算菌株间的遗传相似系数并进行聚类分析,36个菌株间的遗传相似系数(GS值)的变化范围为0.2500～0.8382,其中T1和T2之间的GS值最小,遗传相似程度最低;F1代33个孢子单核体中24个与T1聚为一类,其余9个与T2聚为另一类,但并非严格按照交配型进行归类。试验表明黑木耳子实体上各个担子在减数分裂中染色体交换极具多样性,F1代孢子单核体表现出偏向其中一个亲本的现象,ISSR标记在黑木耳杂交育种中具有潜在的应用价值。

双孢蘑菇子实体采后褐变及相关生化变化研究

实验研究了双孢蘑菇子实体贮藏期间褐变与总酚含量、酶(PPO和POD)活性、还原糖含量、Vc含量等生化指标之间的关系。结果显示,贮藏期间双孢蘑菇子实体菌盖表面色度L值持续减小、褐变程度加重,总酚和还原糖含量均呈先上升后下降的趋势,Vc含量持续下降,PPO活性在前5 d逐渐增加而后下降,POD活性先增加然后随着褐变的发生逐渐下降,而后期大部分褐变发生时又有所增加。相关性分析显示褐变程度与色度L值之间呈显著负相关,以色度L值来反映褐变程度可行;Vc含量的变化与色度L值呈显著负相关。

木耳栽培菌株酯酶同工酶的酶谱多样性研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对木耳（Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａａｕｒｉｃｕｌａ（Ｈｏｏｋ）Ｕｎｄｅｒｗ）１０个栽培菌株酯酶同工酶的酶谱多样性进行了研究。１０个供试菌株的幼龄菌丝（７ｄ）中仅检测到２５条酶带，各个菌株分别具有２～３条酶带，１０个菌株仅有２种酶谱类型；老龄菌丝（７２ｄ）中共检测到４４条酶带，各个菌株分别具有３～６条酶带，１０菌株共有８种酶谱类型。研究表明，木耳双核体菌丝中某些酯酶同工酶基因位点在一定的发育时期才开始表达，老龄菌丝酯酶同工酶酶谱在木耳菌株鉴别和遗传育种研究中具有更大的应用价值。

金针菇担孢子核相及遗传属性的研究

以3个不同的金针菇菌株为材料,研究了其担孢子的核相及遗传属性。荧光染色观察显示,担孢子核相以双核为主,双核孢子、单核孢子和无核孢子分别占80.2%、7.5%和12.3%。源于单孢分离物的菌丝为有隔膜、无锁状联合的多核菌丝。在交配试验中,源于不同菌株单孢分离物的菌丝原生质体的配对形成具锁状联合的菌落,而源于同一单孢分离物的菌丝原生质体的配对则形成无锁状联合的菌落,暗示担孢子中的两个核具有相同的交配型。RAPD分析显示,源于同一单孢分离物的菌丝原生质体为10个随机引物所扩增的图谱彼此完全相同,印证了担孢子中的双核是同质的。此外,观察表明,一个担子上着生有4个担孢子。因此,金针菇是一种具4个含同质双核担孢子的四极性蕈菌。

采收期对双孢蘑菇采后耐贮性品质影响研究

以双孢蘑菇(Agaricus bisporus)为实验材料,考察在不同采收期(以菌盖直径计分30mm～40mm、40mm～50mm、50mm～60mm)采收的双孢蘑菇在贮藏过程中开伞率、褐变度、失重率、多酚氧化酶活力、呼吸强度、硬度和含水量等生理指标的变化。结果表明,当菌盖直径在50mm^60mm采收后贮藏,在贮藏期间内失重率始终较低,硬度始终维持在较高水平,白度保持较好,呼吸强度较低,开伞率在贮藏后期明显低于其它2组,体现了更好的耐贮特性。

阿魏侧耳酸提水溶性多糖的研究

从热水浸提过的阿魏侧耳 (Pleurotusferulae)子实体中用 3%的三氯乙酸提取出另一种水溶性粗多糖PFA ,将PFA经Sevage法脱蛋白、透析、CTAB络合去沉淀后得多糖PF3。苯酚硫酸法测得PF3糖含量为 94 1 % ;用光散射和GPC联机测得PF3重均分子量为 1 96 5× 1 0 6 ;用IR和GC分析了组成和结构 ,PF3由鼠李糖、木糖、葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成 ,含有α 糖苷键。同时研究了PF3对核糖核酸酶的抑制作用 ,表明在浓度 5mg mL时其抑制率可达4 4 4 %。