柑桔体细胞杂种的抗性研究

以４个柑桔体细胞杂种哈姆林甜橙＋飞龙炽（ＣｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｈａｍｌｉｎ＋ＰｏｎｃｉｒｕｓｔｒｉｆｏｌｉａｔａＲａｆ．ｃｖ．ＦｌｙｉｎｇＤｒａｇｏｎ）、哈姆林甜橙＋粗柠檬（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｈａｍｌｉｎ＋Ｃ．ｊａｍｈｉｒｉＬ．）、伏今夏橙＋宁波金柑（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｏｓｂ．ｃｖ．Ｖａｌｅｎｃｉａ十ＦｏｒｔｕｎｅｌｌａｃｒａｓｓｉｆｏｌｉａＳｗｉｎｇｌｅｃｖ．Ｍｅｉｗａ）、伏令夏橙＋宜昌橙（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｖａｌｅｎｃｉａ＋Ｃ．ｉｃｈａｎｇｅｎｓｉｓＳｗｉｎｇｌｅ）及其融合亲本为试材，对其抗寒性、耐热性和抗脚腐病性能进行了研究，并从叶片膜脂脂肪酸成分分析了体细胞杂种的抗寒性和耐热性。研究结果表明，哈姆林甜橙＋飞龙枳杂种表现抗脚腐病、抗寒（－１４℃）、耐热（５２℃）、矮化、半落叶、扦插易生根，是极有希望的新砧木类型；伏令夏橙＋宜昌橙杂种表现抗寒（－１２℃）；哈姆林甜橙＋粗柠檬杂种表现耐热（５３℃）。４个体细胞杂种的抗性较之抗性弱的亲本一方都有提高。

5个柑桔体细胞杂种的抗寒性研究

研究了 5个柑桔细胞杂种的抗寒性 ,其结果是伏令夏橙 +宜昌橙 (C .sinensisOsb .cv .Valencia +C .ichangensisSwingle)抗 - 11℃、伏令夏橙 +‘key’来檬 (C .sinensisOsb .cv .Valencia +C .aurantifoliacv .Keylime)抗- 7 5 9℃、伏令夏橙 +宁波金柑 (C .sinensisOsb .cv .Valencia +FortunellacrassifoliaSwinglecv .Meiwa)抗 - 9 5 4℃、哈姆林甜橙 +粗柠檬 (C .sinensisOsb .cv .Hamlin +C .jamhiriL .)抗 - 7 1℃ ,哈姆林甜橙 +飞龙枳 (CitrussinensisOsb .cv .Hamlin +PoncirustrifoliataRaf.cv .FlyingDragon)抗 - 12 89℃、并且证明了 5个体细胞杂种的抗寒性均介于两亲本之间。其中哈姆林甜橙 +飞龙枳杂种、伏令夏橙 +宜昌橙杂种的抗寒性均高于其它几个组合。

柑桔体细胞杂种对柑桔脚腐病的抗病性研究

本文采用叶片接种法和枝条接种法对２５个柑桔种类体细胞杂种或品种进行了抗脚腐病鉴定，结果表明：体细胞杂种中枳＋酸橙、枳＋甜橙为高抗类型；酸橙＋兰普来檬、枳＋印度酸桔；蚝壳刺＋哈姆甜橙、酸橙＋澳洲指桔为抗性；酸橙＋印度酸桔为中抗。建立了叶片接种法的抗病性分级标准。初步分析了柑桔体细胞杂种的抗性规律。

柑桔同源及异源四倍体花粉育性研究

对８个柑桔同源四倍体及通过原生质体融合得到的２个异源四倍体的花粉育性和花粉粒大小进行了测定。结果显示，同源四倍体柑桔花粉育性平均为３６％，约为二倍体（６２％）的６０％。‘伏今夏’甜橙由于是异质结合的染色体易位突变体，其同源四倍体花粉育性比二倍体（２３％）高出５０％。权（Ｐｏｎｃｉｒｕｓｔｒｉｆｏｌｉａｔａ）与甜橙（Ｃｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）属间以及来檬（Ｃ．ａｕｒａｎｔｉｆｏｌｉａ）与甜橙种间四倍体体细胞杂种花粉育性介于其双亲之间，花粉育性分别为各自高值亲本的９９％和７５％。同源及异源四倍体花粉粒体积平均为二倍体的２倍或双亲之和。本结果说明，柑桔体细胞杂种可作为杂交亲本进一步被利用。

用CEV直接感染柑桔愈伤组织的接种方法的研究

根据ＣＥＶ机械传染及高温诱导发病的特性，用三种方法直接接种柑桔愈伤组织，结合形态学观察、增殖率比较和电泳检测，结果表明，带毒切伤浸泡是ＣＥＶ离体感染柑桔愈伤组织的有效方法。３０℃培养条件下，感染ＣＥＶ的愈伤组织大约在８ｄ后发生明显褐变，并会逐渐加深，同时，感染后的愈伤组织的质地也趋坚硬，且表现出特殊的病理生长特性，前期（０—２０ｄ）显著地较健康对照生长快，后期（２０—４０ｄ）则明显减缓甚至停止生长。

柑桔体细胞杂种光合特性的初步研究

研究了 4个组合的柑桔体细胞杂种及其对应亲本的春梢叶片净光合速率 (Pn)及其与光照强度(PAR)及叶片温度 (tL)的关系。结果表明 ,柑桔体细胞杂种的光合速率低于对应亲本。体细胞杂种的光合速率最大值 (Pmax)和光合速率日均值均较亲本小 ;体细胞杂种的光饱和点较亲本低 ,光补偿点高于亲本。田间自然生态条件下 ,体细胞杂种的光合最适温介于双亲之间 ,光合最适温对应的最大光合速率小于双亲。染色体倍性增加没有导致体细胞杂种叶片光合能力的增加。

丛枝菌根真菌培养方法研究进展

文章结合最新研究成果着重从十个不同的层面对丛枝菌根真菌(AM真菌)的培养方法研究做了较为系统的介绍与评述。认为活体宿主植物盆栽培养法是最简单、最容易、也是最可靠的AM真菌培养方法,玻璃珠分室培养可方便地将培养基质与AM真菌分开,能获得纯净的AM真菌菌体,具有其它方法不可替代的作用,AM真菌单孢无菌的分室Ri T-DNA转型胡萝卜根双重离体培养是获得AM真菌纯净菌体和研究AM真菌遗传、生理、生化等特性的理想方法,以此方法为基础,在根室中补充碳源、在菌丝生长室置换培养基、多次收获菌体的转型根改良双重培养法是提高某些AM真菌孢子产量的力荐方法。

中国柚类生态分布多样性研究

利用分子标记AFLP技术分析了我国柚类生态分布遗传多样性,根据我国自然形成的西南及长江流域、东南沿海、华南柚产区等3个分布带,其中种群内平均预期杂合度为0.210 4,种群间平均预期杂合度为0.006 8,群体内遗传分化程度Fst为0.031 1,即种群内的遗传多样性所占的比例为96.87%,种群间变异占总变异的3.13%,3个中心产区间基因流Nm为7.79。以西南及长江流域遗传多样性最高,其次为东南沿海,华南柚产区遗传多样性最小。按照内陆性与海洋性两大系统进行柚类遗传多样性分析,所有位点总的预期杂合度为0.224 7,其中种群内平均预期杂合度为0.219 1,种群间平均预期杂合度为0.005 7,群体内遗传分化程度Fst为0.025 1,即种群内的遗传多样性所占的比例为97.51%,种群间变异占总变异的2.5%,2个系统间基因流Nm为9.7。预期杂合度内陆性系统(0.229)高于海洋性系统(0.209)。

AM真菌种间差异对枳壳生长及耐热性效应的研究

用地表球囊霉、莫西球囊霉、珠状巨孢球囊霉及其混合菌剂接种无菌根枳壳幼苗进行盆栽试验,25℃培养4个月,观察对枳壳菌根形成和营养生长的影响,在40℃高温胁迫30d,调查分析菌根枳壳的耐热性。试验结果表明:接种AM真菌的根系形成了20%～80%的菌根侵染率;菌根枳壳的苗高、苗质量、节间长、茎基粗、须根数量和须根长度等营养生长显著增加;叶片中的SOD,POD活性和根系活力显著增强,可溶性蛋白、可溶性糖含量显著升高,叶片中的MDA含量降低,膜透性显著变小,枳壳苗的耐热性显著提高;但是,AM真菌在促进枳壳苗菌根化、营养生长和提高耐热性方面存在着种间差异,地表球囊霉、莫西球囊霉、珠状巨孢球囊霉、混合菌剂与枳壳根系形成丛枝菌根的侵染率依次为20.4%±1.2%、61.8%±3.4%、85.7%±2.7%、83.3%±2.2%,促进枳壳苗营养生长提高枳壳苗耐热能力的AM真菌依次为:地表球囊霉<莫西球囊霉<珠状巨孢球囊霉<混合菌剂,认为珠状巨孢球囊霉和莫西球囊霉是枳壳耐高温胁迫菌根化育苗的重要优良菌种。

低温锻炼期间柑桔原生质体SOD和CAT酶活性的变化

3种抗寒性不同的柑桔胚性愈伤组织原生质体经低温锻炼后 ,原生质体抗寒力得到增强 ,并在第 1 2d达到最大。柑桔原生质体SOD、CAT酶活性变化同步提高 ,而细胞膜脂过氧化水平随低温锻炼进程逐步下降 ,至第 1 2d回升。结果表明 :柑桔原生质体SOD、CAT酶活性与抗寒性正相关 ,而MDA的含量则与抗寒性成负相关 ,可以利用柑桔原生质体SOD。

不同调控序列控制下的gus基因在柑桔原生质体中的瞬间表达

通过ＰＥＧ法及转化脂介导法将不同调控序列控制下的ｇｕｓ基因导入柑桔原生质体中，研究了ｇｕｓ基因在柑桔原生质体中的瞬间表达情况，结果表明，在柑桔原生质体中，控制ｇｕｓ基因表达水平的能力由大至小依次为ＣａＭＶ３５Ｓ启动子、ＡｄｈＩ启动子及ｒｂｃｓ启动子，内含子的存在可以提高ｇｕｓ基因在柑桔原生质体中的表达水平。

柑桔RAPD技术体系建立与体细胞杂种鉴定

通过优化反应条件，建立起柑桔ＲＡＰＤ分析技术体系，并成功地应用于体细胞杂种鉴定。柑桔ＲＡＰＤ以Ｍｇ２＋为１．５ｍｍｏｌ／Ｌ、〔ｄＮＴＰｓ〕为１００μｍｏｌ／Ｌ时扩增稳定，效果良好。用１６个引物扩增〔哈姆林甜橙（＋）粗柠檬〕融合植株，体细胞杂种表现为双亲谱带之和。结合染色体计数，可将〔Ｐａｇｅ桔柚（＋）粗柠檬〕融合再生的体细胞杂种（异源四倍体）、叶肉亲本类型及同源融合植株区别开来。

3种不同柑桔中间砧在树体矿质营养含量上的双重效应——Ⅰ不同中间砧对纽荷尔脐橙叶片矿质营养含量年变化的影响

以纽荷尔脐橙/3种不同中间砧/枳为试材进行田间试验研究不同中间砧对接穗叶片矿质营养含量的影响。结果表明,3种中间砧对接穗叶 片N、P、Ca、Fe和Zn含量年变化趋势的基本特征无明显影响;而对叶片K、Mg和Mn含量的年变化趋势特征在一定变化阶段上有明显影响。在年周期的不同时期里,叶片K和Mn含量在3种不同中间砧之间存在显著或极显著差异;而其余矿质营养含量在3种不同中间砧之间只在部分时期里存在显著或极显著差异;而在各矿质营养含量存在显著或极显著差异的不同时期间,该矿质营养含量在3种不同中间砧之间的相对高低差异趋势不全相同。

柚果实粒化、裂瓣成因及防治研究

综述了近10年来柚果实粒化、裂瓣的成因及防治技术研究,提出了其可能机理及今后研究方向。

两类柑桔杂种砧木对脐橙(Citrus sinensis Osbeck)幼树生长和叶片糖营养含量年变化的影响

以体细胞杂种红桔+枳和红桔+粗柠檬、有性杂种Troyer枳橙和Swingle枳柚作砧木的耐湿脐橙(CitrussinensisOsbeck)2年生嫁接苗为试材,通过盆栽试验研究了砧木对苗木生长和叶片糖营养含量年变化动态的影响。结果表明:红桔+枳的生长势和花量明显地强于和大于其它砧木,红桔+粗柠檬的生长和花量表现介于2种有性杂种之间。叶绿素a/b和类胡萝卜素含量在不同砧木间无显著差异,而不同砧木显著或极显著地影响叶绿素含量各指标。砧木影响叶片可溶性糖和淀粉含量年变化动态的基本特征。在休眠期,红桔+枳的可溶性糖和淀粉含量都高于2种有性杂种砧木,而红桔+粗柠檬则反之;在生长期,红桔+粗柠檬的可溶性糖和淀粉含量表现出高于有性杂种砧木的趋势,而红桔+枳则介于2种有性杂种砧木之间。同时还重点讨论了2种体细胞杂种砧木的利用价值。

柑桔SOD对冷冻条件的反应

4种经低温锻炼的柑桔愈伤组织在系列冰冻温度下，抗寒性较强的山金柑愈伤组织SOD活性上升后回落到对照水平以下，其余3种（抗寒力较弱）则无峰值出现。CAT活性亦以山金树变化最为显著。细胞MDA含量的累积与品种抗冻力（半致死温度，LT50）发展同步。经SOD抑制剂（DDC，二已基二硫代氨基甲酸钠）和外源自由基清除剂（SBN，苯甲酸钠）的初步试验表明：SOD与柑桔的抗寒性密切相关。

长寿沙田柚Ri T-DNA转型根优化培养体系研究

设计了长寿沙田柚不同外植体在光、暗条件下进行发根农杆菌遗传转化试验,建立了长寿沙田柚RiT-DNA转型根优化培养体系,该体系为:用对数期的发根农杆菌A4菌株感染活化胚中单片子叶的创伤腹面,25℃±2℃暗培养25～30d,多数子叶上发出转型根(毛状根),遗传转化率达(83±11)%。继代脱菌5代后获得无菌转型根。外植体活化采用MT培养基,继代脱菌培养采用MS培养基。采用这个体系获得了大量激素自主的长寿沙田柚RiT-DNA转型根。获得的新鲜转型根白色,长1.14±0.07cm,粗0.73±0.04mm,负向地性生长。

柑桔接穗对砧木生长及若干生理生化特性的影响

以体细胞杂种红桔+枳、红桔+粗柠檬和有性杂种Troyer枳橙、Swingle枳柚以及枳作砧木的“国庆4号”温州蜜柑、脐橙(无枳砧)和不嫁接的砧木幼树为试材,通过两年盆栽试验研究接穗对砧木生长、根系活力和根系抗氧化酶活性的影响。结果表明,Swingle枳柚和红桔+粗柠檬的砧粗易受接穗影响,接穗显著地影响砧木根系体积。在一般情况下,同一种砧木嫁接后砧木根系活力、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性低于未嫁接砧木,或与其差异不显著;同时存在接穗促进根系过氧化氢酶(CAT)活性升高的现象。